PRÁCTICA GENÉTICA

EXTRACCIÓN DE MATERIAL GENÉTICO EN CÉLULAS

I. INTRODUCCION.

El ADN se denomina ácido

desoxirribonucleico, es un polímero formado
por dos hebras complementarias de
desoxirribonucleótidos, que se unen
antiparalelamente. Los ácidos nucléicos
contienen la información que determina la
secuencia de aminoácidos de las proteínas e
intervienen en su síntesis.

El ácido desoxirribonucleico o DNA es el centro

de almacenamiento que contiene toda la
información requerida para construir las células y los tejidos de un organismo.
La duplicación exacta de esta información asegura la continuidad genética de las
especies.
La estructura primaria del ADN está determinada por la secuencia de bases
ordenadas sobre la "columna" formada por los nucleósidos.

En organismos procariotas, se encuentra en forma libre a nivel citosólico, y en

eucariotas puede encontrarse en el núcleo y en otros organelos como mitocondrias y
cloroplastos.

Existen diferentes variedades de ARN o ácido ribonucleico: mensajero,

ribosómico, de transferencia, ARN nucleares y citosólicos pequeños. La
estructura química del ARN se conforma por polímeros de ribonucleótidos, con
funciones específicas que van desde la transmisión de la información genética
hasta la catálisis de reacciones.
 Las células poseen los dos tipos de ácidos nucleicos, mientras que los virus, por no
ser células, únicamente poseen uno u otro de ellos.

I. OBJETIVOS

Al finalizar el laboratorio el estudiante estará en la capacidad de:

1. Extraer ADN de las células a través de medios físicos y químicos.

2. Identificar la presencia de ADN en diferentes tejidos.

3. Explicar el procedimiento de extracción de ADN y su utilidad.

II. MATERIALES

APORTADOS POR GRUPO DE APORTADOS POR LA UNIDAD

ESTUDIANTES DIDÁCTICA
 ½ taza de hígado (res o pollo)  10 ml de alcohol
 ½ taza de fresas isopropílico o etílico frío
 1 colador pequeño  3 pipetas Pasteur de 3ml
 1 bolsa de hielo  varilla de vidrio
 beakers de 200 ml
 10 ml de solución tampón
refrigerada a 4°C
 2 tubos de ensayo
 Guantes descartables
 1 licuadora
* Cada grupo deberá seleccionar uno de los tejidos señalados.

III. PROCEDIMIENTO

A. Preparación del material biológico

El grupo de estudiantes debe preparar el material biológico seleccionado,

licuándolo con 30 ml de agua fría, durante 30 segundos a velocidad máxima. Debe
mantenerlo en refrigeración hasta utilizarlo en la práctica.
B. Preparación de la solución tampon
Esta solución es elaborada por el personal de la sala de preparación por el
laboratorista y/o docente de la siguiente manera:

Se mezclan 240 ml de agua mineral, 3 gramos de

sal, 10 gramos de bicarbonato y 10 ml de jabón
líquido, y se dejan reposar en refrigeración a 4°C por 3
horas.

C. Extracción del material genético.

 i. Triturar la muestra con un poco de agua en una batidora accionando las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células y
otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
ii. Mezclar en un recipiente limpio 5ml de triturado celular con 10 ml del tampón
frío y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los
restos vegetales más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un
colador lo más fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad por 5
minutos y después pipetear el sobrenadante.
iii. Retirar 5ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con una pipeta
10ml de alcohol isopropílico o etílico enfriado a 0 C. Se debe dejar escurrir
lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente, teniendo éste
inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el tampón.
iv. Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la
separación entre el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y
hacia atrás y poco a poco se irán enrollando los fragmentos de mayor tamaño
de ADN. Pasado un minuto retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con
lo cual el ADN quedará adherido a su extremo con el aspecto de un copo de
algodón mojado.
v. El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que
entremezclado con él hay fragmentos de ARN. Una extracción más
especializada se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de
ARN e impiden que se unan al ADN.