Laboratorio: Aislamiento de ADN

INTRODUCCIÓN

El ADN (Acido Desoxirribonicleico) es el material

hereditario presente en todas las células vegetales,
animales, bacterias y algunos virus. Existen diversas
técnicas para obtenerlo, aislarlo y trabajar con él en
distintos ámbitos de Biología Molecular y Biotecnología.

Una sencilla técnica se aplicará en la presente actividad

práctica para visualizar en forma microscópica la
estructura fibrilar del ADN.

 MATERIALES

 1 par de guantes quirúrgicos

 1 procesadora de alimentos (licuadora o similar)
 300 grs. De una muestra biológica vegetal, lavada y cortada en trozos
 500 ml. De agua destilada
 3ml. De alcohol absoluto (etanol) o alcohol isopropílico
 2 grs. De NaCl
 1 ml. De detergente liquido
 2 ml. De proteasa (papaína de piña o papaya)
 2 tubos de ensayo
 1 vaso de precipitado de 1000 ml.
 1 probeta de 50 ó 100 ml.
 Pipetas de 5 ml. Y de 10 ml.
 2 vasos o frascos de vidrio de 50 ml.
 2 pipetas de Pasteur
 1 paleta de plástico
 Gasa y papel filtro

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ACTIVIDAD PRACTICA

 Lavar, cortar y poner en la procesadora toda la muestra vegetal. Agregar 500ml. De

agua destilada, tapar y procesar hasta obtener un preparado cremoso. El objetivo es la
ruptura o lisis del tejido.

 En un vaso de 50 ml. , separe 30 ml. De la muestra ya procesada.

 Prepare en un tubo de ensayo, solución tampón salina con : 2grs. De NaCl, 1 ml de

detergente, 5ml. De agua destilada.

 Agregue el tampón a su muestra. Mezcle con la paleta plástica, sin hacer espuma.
El tampón provoca la rotura de las membrana citoplasmatica y nuclear, por acción
conjunta de sal y detergente, que rompen las células y liberan sus componentes y al ADN y
proteínas asociadas (por ejemplo las histonas).

 Agregue 2ml. De proteasa. Mezcle bien, cuidando de no producir exceso de

espuma. Así destruye las proteina asociadas al ADN.

 En un vaso o frasco de vidrio limpio, filtre la muestra con grasa o papel filtro.

 Pipetee 10 ml. Del filtrado y póngalo en un tubo de ensayo limpio.

 Incline un poco este tubo de ensayo y con una pipeta limpia, deje deslizar
suavemente 5 ml. De alcohol sobre el filtrado. Observe la formación de una interfase
entre el filtrado y el alcohol. El ADN migra hacia el alcohol, aislandose de los otros
componentes celulares, que permanecen en la fase acuosa.

 Con una pipeta Pasteur, revuelva suavemente a nivel de interfase. Observe la

reacción. Describa lo obtenido en relación a su estructura y color.

 Anote el resultado final ¿Cuál es su conclusión respecto a la estructura del ADN ?

 Describa 5 etapas en la obtención del ADN y el rol del equipo y reactivos usados en
esta actividad práctica.