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EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS

Instrucciones
1. Vierte una taza de agua fría (200 ml), junto con ½ taza del ADN elegido
y sal.
2. Licua todo eso a máxima velocidad durante 15 segundos.
3. Filtra la mezcla resultante con un colador de casa.
4. Ahora debes echarle el detergente a ese líquido que has obtenido de la
licuadora. El detergente debe ser un 1/6 de la cantidad del líquido.
5. Déjalo reposar 10 minutos.
6. Pásalo a un tubo de ensayo de vidrio hasta 1/3 de su capacidad.
7. Añadir una pizca de enzima al tubo de ensayo.
8. Agitar suavemente para no romper el ADN (qué frágil el muchacho).
9. Agregar alcohol hasta llenar la mitad del tubo de ensayo.
10. El ADN se elevará hasta la internase y con un palito por fin podrás
extraerlo.

Curiosidades y otras cosas

El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, biólogo suizo, en
los núcleos de las células del pus obtenidas de los vendajes quirúrgicos desechados y en
el esperma del salmón. Él llamó a la sustancia nucleína, aunque no fue reconocida hasta
1943 gracias al experimento realizado por Oswald Avery

La estructura del ADN es una pareja de largas cadenas de nucleótidos. La estructura de


doble hélice del ADN fue descubierta en 1953 por James Watson y Francis Crick. Una
larga hebra de ácido nucleico está enrollada alrededor de otra hebra formando un par
entrelazado. Dicha hélice mide 3,4 nm de paso de rosca y 2,37 nm de diámetro, y está
formada, en cada vuelta, por 10,4 pares de nucleótidos enfrentados entre sí por sus bases
nitrogenadas.

Sólo tenemos un 30% más de genes que un diminuto gusano, el cual tiene solo un
milímetro de longitud y posee 959 células, en tanto que nosotros alrededor de 100
billones. Y mientras que los seres humanos poseemos aproximadamente 100.000
millones de neuronas, el diminuto gusano cuenta únicamente con 302.

METODOLOGÍA

Vamos a realizar la preparación de una solución amortiguadora, para ello necesitamos


una serie de materiales e instrumentos como:
 1 Balanza
 100 ml Alcohol etílico 70% frio
 1 Papel filtro
 1 Probeta de 100 ml
 1 Vaso de precipitado 100 ml
 1 Vaso de precipitados 200ml
 3 Tubos de ensayo grandes
 1 Gradilla
 2 Fresas
 1 Banano
 Sal de cocina

A continuación procedemos, tomamos 6 ml de detergente y los vertimos en un vaso de


precipitados de 10 ml.

Se vertieron 44 ml de agua destilada, sobre el detergente. Luego agregamos 5 g de sal a


la misma solución y agitamos vigorosamente.

Matriz de extracción

Fresas y banano

Tomamos una bolsa ziploc, depositamos dos fresas o banano y los maceramos hasta
obtener una consistencia blanda.

Se procedió a verter el contenido en un vaso de precipitados, para adicionar 50 ml de la


solución amortiguadora y así mezclar. Dejamos reposar por 10 minutos.

Se marcó un tubo de ensayo a 3 cm y 6 cm. Añadimos el líquido filtrado hasta la marca


de los 3 ml y el alcohol etílico (70-96 %) frío hasta la marca de los 6 ml por la pared
del tubo de ensayo para evitar que se mezclen.

Sin mezclar, se colocó el tubo de ensayo en una gradilla y se dejó en reposo hasta que
se observara una mancha blanca.

Luego se adicionó colorante para verificar la existencia del ácido nucleico.

RESULTADOS Y ANÁLISIS

Al realizar la práctica debidamente obtuvimos un precipitado de ADN


o ácido desoxirribonucleico de un color blanco que el en caso del banano fue abundante
y evidente mientras que en el caso de la fresa fue un precipitado escaso, fue necesario
utilizar una solución amortiguadora debido a que el ADN es soluble en agua la solución
amortiguadora por su contenido de sal evita su dilución, el alcohol etílico es utilizado
para retener el ADN sin causar su dilución.
Figura 1. Aglomeraciones de ADN (banano)

Figura 2. Muestra de ADN de una fresa.


Figura 3. Muestra de ADN de banano con azul de metileno.

El protocolo de extracción de ADN usa el alcohol frío para hacer precipitar el material.
Esto se realiza al final del proceso donde uno quiere concentrar el material que venimos
limpiando con otras sustancias.

La solución amortiguadora se utiliza en la extracción de ADN para permitir lisar a las


células, es decir, romperlas para liberar su contenido: proteínas, ácidos nucleicos y
diferentes metabolitos.

La lisis celular es el proceso de ruptura de la membrana celular que produce la salida del
material intracelular. Todas las células tienen una membrana hecha de fosfolípidos que
separan el contenido celular del ambiente extra celular. Los fosfolípidos son anfipáticos
y tienen embebidas las proteínas de membrana.

La naturaleza de los lípidos y las proteínas varía dependiendo del tipo de célula.
En la célula animal la membrana es la única barrera, pero en plantas y bacterias la
membrana se encuentra rodeada por una pared celular.
La pared celular bacteriana está compuesta por peptidoglicanos. Estos tipos de barrera
extracelular confieren forma y rigidez a las células.

El azul de metileno en la extracción de ADN se utiliza para la tinción de ácidos


nucleicos y hacer visible su presencia.

Las moléculas de ADN, cuando están separadas, son largas y fibrosas. Cada célula de tu
cuerpo contiene seis pies de ADN, pero el mismo tiene sólo una millonésima de pulgada
de ancho. Para poder meter todo este ADN dentro de tus células debe estar empacado
eficientemente. Para resolver este problema, el ADN se enrolla de manera muy apretada
formando grumos dentro de las células. Aun cuando extraes el ADN de las células, éste
se agrupa en grumos pero no tan ajustados como los que estarían dentro de la célula.

CONCLUSIONES

La fresa por su consistencia suave, facilita el manejo de la misma, tiene un olor


agradable, lo cual hace cómodo el trabajo con ella además es un organismo octaploide,
es decir, que contiene ocho juegos idénticos de cromosomas, lo cual facilita la
extracción del material genético para fines prácticos.

Se creo una solución, para luego juntarla con una muestra de la fruta. Al juntar la
solución amortiguadora con la muestra se produjo una reacción química, la cual
descompuso la célula de la fruta y desprendió el ADN de la misma.

RECOMENDACIONES
 Realizar este experimento dentro de un laboratorio con todos los debidos
instrumentos.
 Utilizar bata.
 Seguir debidamente las normas del laboratorio.
 Seguir al pie de la letra los procedimientos para realizarlo.
 Medir con exactitud los componentes.
 Tomar los tiempos de reposo.

Para la separación de moléculas biológicas también se utiliza la Electroforesis.

Electroforesis

La electroforesis en gel es una técnica sencilla empleada de forma rutinaria en


laboratorio para separar moléculas biológicas especialmente ADN, ARN y proteínas. La
electroforesis también es una técnica habitual en el laboratorio clínico. Permite separar
especies químicas (ácidos nucleicos o proteínas) a lo largo de un campo eléctrico en
función de su tamaño y de su carga eléctrica. Los ácidos nucleicos, ADN y ARN, tienen
por naturaleza carga negativa.

Si ponemos fragmentos del ADN extraído de una muestra biológica sobre un soporte
poroso (gel de agarosa) y aplicamos un campo eléctrico, se producirá la migración
diferencial de los fragmentos a través de los poros de la matriz. La tinción del gel con
bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molécula de
ADN, y la exposición con luz ultravioleta, permite observar el resultado de ésta
migración.

La electroforesis de ADN es útil para comparar patrones de bandas de diferentes


muestras biológicas. Así por ejemplo se puede usar para comparar muestras de
individuo sano frente a individuo enfermo, para la identificación de ácidos nucleicos de
agentes infecciosos o para la obtención de un fragmento determinado de ADN que, una
vez localizado en el gel, puede ser extraído para análisis posteriores.

ANEXOS

Muestra de fresa.
Muestra de banano.

Muestra de banano con alcohol.


Muestra de fresa con alcohol.

Adición de alcohol a las muestras.