EXTRAE UNA MUESTRA DE ADN A PARTIR DE CÉLULAS

EPITELIALES.
(Practica de Laboratorio N°2)

 Sara Wilches
 Valentina Mora
 Camila Conde
 Javier Méndez
 Santiago Polanco
 María Paula Ojeda

COLEGIO LA SALLE
SAN JOSÉ DE CÚCUTA, NORTE DE SANTANDER
2018
OBJETIVOS

 Identificar la importancia del ADN en la estructura humana.

 Observar la estructura fibrilar del ADN.

 Establecer la relación entre el proceso de extracción y las propiedades

fisicoquímicas del ADN.

HIPOTESIS

En esta práctica se espera hallar la muestra de ADN en forma de hilos y

observarla más de cerca, detallar las características que se permita ver sin el uso
de un microscopio. Adicionalmente, se desea ampliar el conocimiento respecto a
este ácido nucleico tan trascendental para la vida de cada individuo, determinando
su composición biológica mediante la unión de bases nitrogenadas, grupo fosfato
y un monómero de azúcar a través de puentes de hidrógeno.
INTRODUCCIÓN
Iniciemos recordando el concepto básico de ADN, el ácido desoxirribonucleico se
encarga de guardar la información, es decir, contiene las instrucciones que
determinan la forma y características de un organismo y sus funciones. La
información que nos ofrece el ácido desoxirribonucleico o ADN es aquella que se
vincula directamente con la conformación de cualquier tipo de células en un ser
vivo. El ADN se compone de dos cadenas, cada una formada por nucleótidos.
Cada nucleótido, a su vez, está compuesto por un azúcar, un grupo fosfato y una
base nitrogenada. Las bases nitrogenadas son cuatro: adenina (A), timina (T),
citosina (C), y guanina (G), y siempre una A se enlaza a una T y una C se enlaza a
una G en la doble cadena.

En esta práctica de laboratorio nos enfocaremos en obtener hilos de ADN a partir

de una mezcla y saliva de un compañero. Pero para comprender mejor esta
práctica tenemos que tener presente que existe una ciencia llamada ingeniería
genética que se encarga de la manipulación directa del genoma de un ser vivo,
por medio de un conjunto de técnicas que aíslan, multiplican y modifican los genes
del individuo con el fin de su estudio y beneficio. Lo que se quiere expresar es que
se anhela hacer un procedimiento más sencillo al que se acostumbra a realizar en
el campo de la ingeniería genética, solamente se quiere extraer una muestra de
ADN para su estudio. Sin embargo, esto se realizará de manera elemental, es
decir, mediante la mera observación de las hebras de ADN que se desprenderán
de la saliva de nuestro compañero, esto gracias a que las células epiteliales que
se encuentran en sus mejillas y que al entrar en contacto con la solución buffer,
desprenden su membrana celular y nuclear, liberando en el recipiente las hebras
de ADN y junto a ellas, parte del citoplasma. De esta manera se hacen visibles las
hebras y se procederá a analizar detalladamente el resultado obtenido.
MATERIALES
 Varilla de vidrio
 3 vasos de precipitado
 Pipeta de 10 ml
 Tubos de ensayo
 Agua destilada (500 ml)
 Alcohol al 96% muy frio (500 ml)
 Sal común
 Hielo
 Jabón líquido para loza
 Etiquetas adhesivas o cinta
 Bata de laboratorio
 Gafas de seguridad Materiales esenciales para la práctica.

PROCEDIMIENTO
1. Rotula cuatro etiquetas adhesivas con tu nombre y la siguiente información:
 Etiqueta 1: solución buffer
 Etiqueta 2: alcohol
 Etiqueta 3: agua
 Etiqueta 4: ADN

2. Pega las tres primeras en los vasos de precipitado y la última en el tubo de

ensayo.

Adhesión de la cinta marcada con

los respectivos nombres.
3. Prepara una mezcla que contenga 20 ml de agua destila, dos pizcas de sal
común y 5 gotas de jabón líquido en el vaso de precipitado marcado como
solución buffer.

Extracción de agua destilada y del jabón líquido de loza, agregación de la

sal común al vaso de precipitado para la mezcla de la solución buffer.

4. Vierte 20 ml de alcohol etílico al 96% en el vaso con la marca alcohol.

Introducción del alcohol etílico al 96% en el vaso de

precipitado
5. Coloca el vaso con la marca alcohol y su contenido, a enfriar el mayor
tiempo posible mientras realizas los siguientes pasos. Para esto puedes
colocarlo sobre agua con mucho hielo.

Colocación del vaso con

alcohol en el hielo.
6. Adiciona 20 ml de agua en un vaso de precipitado y con ella enjuágate la
boca durante aproximadamente medio minuto. Asegúrate, previamente, que
el vaso esté completamente limpio.

Enjuagando la boca con el agua

destilada del vaso de precipitado.

7. Expulsa cuidadosamente el contenido de la boca de tu compañero en el

tubo de ensayo, de esta manera conseguirás las células que necesitas.

Extracción de la saliva con el agua

destilada

8. Agrega al tubo de ensayo con la muestra de 10 ml de la solución buffer.

Espera durante 10 minutos, mientras revuelves suavemente y de manera
 ocasional, evitando la formación de espuma. Así lograrás romper las
membranas de las células y liberar el ADN del núcleo.

Agregación de la solución buffer al tubo de ensayo y reacción de

esta en él.

9. Vierte muy lentamente el alcohol que habías enfriado por la pared del tubo
inclinado. Esto hará que el ADN se concentre y precipite.

Agregación de alcohol por la

pared del tubo inclinado

10. Deja que la muestra en reposo dos minutos y obsérvala. En este punto, el
ADN se ha concentrado y es visible como hilos largos de color blanco.
 Despues de unos minutos la mota de ADN formada ascenderá a la
superficie del alcohol.

Reacción final en la que son

notables los hilos de ADN.

11. Introduce la punta de la varilla en el tubo de ensayo y transfiere los hilos

formados a un recipiente pequeño que contenga alcohol, para conservar la
muestra. Tápalo para evitar contaminación.
RESULTADOS
1. Realiza el cálculo del porcentaje de éxito en la extracción de ADN en el
laboratorio. Para ello, utiliza la siguiente fórmula:

75% = 3 grupos x100 = 300

4 grupos 4

75% = 75

Responde las siguientes preguntas:

a) ¿A partir de qué tipo de células se obtuvo el ADN en esta actividad?
- Se obtuvo a partir de las células epiteliales que se encuentran en
la piel, la orina y los vasos sanguíneos.
b) ¿Qué tipo de elementos esperarías encontrar en la solución buffer
una vez se rompe la membrana celular?
- Es posible que se encuentren rastros de muestras de ARN, así
como parte del citoplasma celular, y dado el caso, algunos
orgánulos de la célula.
c) ¿Por qué el ADN se disuelve en soluciones con iones de sales?
- Las sales tienen una alta concentración que en un medio
hipertónico provoca el estallido de las células y los núcleos.
d) ¿Crees que la muestra de ADN que has conseguido es pura o esta
mezclada con alguna otra sustancia? Explica.
- El producto obtenido no es ADN puro, ya que se encuentran
fragmentos de ARN entremezclados con él.

2. Supón que a partir de la muestra de ADN obtenida, deseas aislar el gen de

la insulina humana y con este generar un plásmido recombinante. Para ello
cuentas con las siguientes herramientas:
 ADN humano con el gen de interés
 Enzimas de restricción
  ADN ligasa
 Plásmido
 Bacterias
Propón la secuencia de pasos necesarios para construir el plásmido
recombinante y con esta completa la tabla.
No. Procedimiento que se debe seguir Herramienta utilizada
Se escoge un gen blanco de ADN humano
que contenga la información relacionada a ADN humano con el gen
1 la producción de insulina, a su vez se de interés y bacterias.
escoge la bacteria en la que se planea
hacer el cultivo del plásmido recombinante.
Mediante el uso de enzimas de restricción,
2 se corta la secuencia de información Enzimas de restricción y
genética tanto del plásmido de la bacteria, plásmido.
como del gen blanco de ADN humano.
Por último, al estar cortadas las secuencias
de información genética, se unen las bases
nitrogenadas complementarias del plásmido
con las del gen. Luego, se utiliza el ADN
ligasa para unir completamente la
3 secuencia de ADN, y se obtiene como ADN ligasa.
resultado un plásmido recombinante con la
información genética del gen de la
producción de insulina listo para su cultivo,
ya que este transmitirá la información del
gen a su descendencia.
CONCLUSIONES
1. Analizamos de esta práctica experimental que cada uno de los materiales
empleados como la sal, el alcohol etílico, el agua destilada y el jabón de
loza cumplen una función especial y crucial en ella. Ya que con la solución
buffer podemos destruir las membranas de la célula y liberar el ADN
necesario para el experimento.

2. Observamos que a partir de las muestras de saliva tomadas pudo extraerse

el ADN, con esto podemos deducir que la saliva es una fuente abundante
para el aislamiento del ADN genómico, ya que contiene células, que a su
vez contienen grandes cantidades de ADN en sus núcleos.

3. Concluimos que gracias a la experimentación basada en la ingeniería

genética, podemos analizar la composición biológica de nuestro ADN
mediante una práctica elemental y de bajo coste.

OPINIÓN PERSONAL
Como grupo, consideramos que esta práctica fue realmente satisfactoria, ya que
por primera vez pudimos aplicar una temática tan compleja como lo es la genética
a algo tan sencillo como la observación de objetos físicos, recordando por
supuesto que el ADN no es visible a simple vista, sino que es necesario de
herramientas más sofisticadas tal como el microscopio para su observación.

Finalmente decir que a través de esta experiencia logramos complementar

nuestros conocimientos no solo prácticos si no teóricos de la materia. Esto gracias
a que se dieron a conocer nuevas técnicas o instrumentos como la utilización de
sustancias amortiguadoras o soluciones buffer, así como el uso de agua destilada
o alcohol a una concentración de 96%, cada uno de estos con una funcionalidad
específica, creando una cadena de reacciones químicas y biológicas en nuestras
células extraídas del tejido epitelial.
BIBLIOGRAFIA

Bellet, Antonio “El ADN, los genes y el código genético | ChileBio” [En línea].
ChileBio. Actualizada: Mayo de 2015. Disponible en: http://www.chilebio.cl/el-adn-
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Bembibre, Cecilia “ADN” [En línea]. Definición ABC. Actualizada: 08 de Agosto de

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17 de marzo de 2018]

López, Susana “OBTENCIÓN ADN MUCOSA BUCAL” [En línea]. Prácticas de

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http://ww.iesmanilva.es/attachments/article/681/OBTENCI%C3%93N%20ADN%20
%20MUCOSA%20BUCAL.pdf. [Consulta: 17 de marzo de 2018].