PRÁCTICA 7.

EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE DNA

Introducción
El DNA o ácido desoxirribonucleico es un polímero de nucleótidos, se trata de una “enorme”
molécula en forma de fibra o hebra que en algunas células eucariotas, como las humanas,
puede alcanzar una longitud cercana a los 2 metros. En las células eucariotas íntegras, el
DNA permanece aislado, enrollado y empaquetado dentro del núcleo celular, cuyas
dimensiones oscilan entre 2 y 25 micras.

En otros ejercicios hemos observado células en interfase en cuyo interior destaca el núcleo,
que bajo efecto de algún colorante básico específico se observa lleno de una sustancia
difusa, en la que si acaso en posible diferenciar algunos gránulos de diámetro variable, como
el o los nucléolos; sin embargo, cuando este contenido es liberado se desenreda y es posible
observar su estructura como una larga fibra que se tiñe con el mismo tipo de colorantes
que se utilizan para la observación del núcleo.

El aislamiento del DNA es el principio de muchos métodos usados en ingeniería genética

como la transformación, la secuenciación y el mapeo físico y en biología molecular como el
PCR, entre otros; su extracción supone la destrucción de la célula por algún método físico o
químico.

Este ejercicio práctico tiene por objeto llevar a cabo la extracción de este ácido nucleico,
mediante el rompimiento de las envolturas celular y nuclear por la acción de un agente
surfactante y la posterior separación de las fibras de DNA, para su observación.

Objetivos
• Extraer DNA a partir de varios tejidos, mediante la ruptura de las células por acción
térmica y mecánica.

Materiales
Agitadores de vidrio Solución de detergente y
NaCl
Embudo Espátula Etanol frío
Cuchillo Gasa Kiwi, plátano, chícharo
Gradilla Pipetas beral de 3 mL Agua destilada
Tubos de ensayo Vasos desechables No. 0 Gatorade
Mortero y pistilo Vaso de precipitados de 100
mL

Parte1. Extracción de DNA vegetal

1. Enfriar el alcohol en el congelador con 24 horas de anticipación
2. Machacar las muestras por separado en morteros, en caso de ser necesario,
dependiendo del tipo de muestra, agregar agua destilada hasta obtener un puré fino,
y filtrar con gasa sobre un vaso de precipitados pequeño.
3. Duplica el volumen agregando solución de detergente y NaCl sobre el puré y deja el
preparado durante 15 minutos, moviendo suave y ocasionalmente.
4. Vacía el preparado en un tubo de ensayo, procurando no sobrepasar la mitad del
mismo.
5. Con mucho cuidado deje escurrir por las paredes del tubo 3 ml de etanol sobre el
filtrado.
6. Deje reposar unos minutos y observe lo que sucede en la interfase entre el alcohol y el
filtrado. Anota tus observaciones.
7. Recoge el DNA con ayuda del agitador y colócalo en frasco con tapa.

Parte 2. Extracción de DNA de células de epitelio bucal humano

1. En el recipiente de plástico vierte 20 ml de Gatorade.
2. Mantén esta solución en tu boca y agítala un poco por 20-30 segundo; recuerda
frotar tus carrillos (interior de la mejilla) con tu lengua para obtener más células.
3. Regresa la solución al recipiente de plástico.
4. Vacía el contenido en un tubo de ensayo, sin sobrepasar la mitad del tubo (el
volumen depende del tamaño).
5. Añade 10 gotas de solución de detergente al tubo y muévelo suavemente de un lado
a otro sin que se formen burbujas.
6. Inclina el tubo y vierte dejando caer sobre la pared del tubo 5 ml de alcohol frío.
7. Deje reposar unos minutos y observe lo que sucede en la interfase entre el alcohol
y el filtrado. Anota tus observaciones.
8. Recoge el DNA con ayuda del agitador y colócalo en el frasco con tapa.

Resultados
Si se siguieron correctamente los pasos anteriores, se logrará observar las hebras de DNA
dentro del tubo de ensayo.
Cuestionario
1. ¿Con qué finalidad se procesa el material biológico (kiwi, plátano, chícharo) en un
mortero?
2. ¿Para qué se utiliza el detergente? ¿Para qué se utiliza el etanol?
3. ¿Cuál es la importancia biológica del DNA? ¿A partir de qué otros tejidos podrías
extraer DNA?
4. Si quisieran utilizar este DNA para conocer su secuencia, ¿qué tratamiento
añadirías? ¿Se trata de DNA puro?

Bibliografía
Citen sus fuentes de información, las que utilicen para la reconstrucción de la práctica o
reporte. De acuerdo con el anexo 2.