QUIMICA AREA BIOTECNOLOGIA

Materia: Química Analítica

Profesora: María Yesenia Sánchez Zepeda

Práctica # 4 (Extracción de ADN)

Integrantes:
Enciso García Josué Osvaldo
Valencia Pérez María Fernanda

Cuatrimestre: Septiembre–diciembre 2021

OBJETIVO:
El alumno será capaz de extraer el Ácido Desoxirribonucleico (ADN) de un tejido animal;
así como confirmar su estructura fibrilar y el repliegue del núcleo.

INTRODUCCIÓN
El ADN está formado por un polímero de nucleótidos. Cada nucleótido contiene
una base nitrogenada que consiste en una purina (adenina o guanina) o una
pirimidina (citosina o timina). Las bases se unen mediante enlaces covalentes a la
desoxirribosa (azúcar de 5 carbonos). La cadena polimérica está unida mediante
grupos fosfato, que unen al carbono 5’ de la desoxirribosa de un nucleótido con el
carbono 3’ de la desoxirribosa del nucleótido adyacente. Cada molécula de ADN
está compuesta por dos cadenas de polinucleótidos, que forman una estructura de
doble hélice. Las dos cadenas se extienden en dirección opuesta, de manera que
en cada extremó de la molécula del ADN, una cadena expone un carbono 5’
desoxirribosa y la otra cadena expone un carbono 3’ desoxirribosa. Por lo tanto,
las cadenas son antiparalelas entre sí.

MARCO TEÓRICO
La existencia de material genético capaz de replicación, almacenaje, expresión y
mutación se deduce de los patrones de herencia observados en los organismos.
Tanto las proteínas como los ácidos nucleicos se consideraron, inicialmente,
candidatos posibles para el material genético. Las proteínas son más diversa que
los ácidos nucleicos, un requerimiento del material genético, y se vieron
favorecidas debido a los avances en la química de proteínas que se hicieron esa
época.
En 1952, estudios y experimentos de transformación hechos en bacterias
infectadas por bacteriófagos sugirieron firmemente que el AND es el material
genético en bacterias y en la mayoría de los virus. Inicialmente, solo evidencias
circunstanciales apoyaban la idea de que el ADN controlaba la herencia en
eucariotas. Éstas incluían la distribución del ADN en la célula, análisis
cuantitativos de ADN, y estudios de mutagénesis inducida por UV. Las recientes
técnicas de ADN recombinante, así como experimentos con ratones transgénicos,
han proporcionado pruebas experimentales directas de que el ADN es el material
genético en eucariotas. El establecimiento del ADN. Como material genético
preparó el terreno para la expansión de la investigación en genética molecular, y
ha servido de piedra angular para importantes investigaciones durante medio
siglo.
MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO
 Un hígado de pollo
 Una varilla de vidrio
 Un mortero
 Vasos de precipitado de 250 ml
 Pipeta graduada de 10 ml
 Probeta de 50 ml
 Alcohol 96°
 Cloruro de Sódico al 2 M
 SDS ó Jabón líquido
 Arena de mar
METODOLOGÍA
 Triturar medio hígado de pollo en un mortero.
Añadir arena o las perlas de vidrio, para que al triturar
se puedan romper las membranas y queden los núcleos
sueltos.
Añadir al triturado, 50 ml de agua corriente.

Remover hasta hacer una especie de papilla o puré.

Remover hasta hacer una especie de papilla o
puré.
Medir el volumen del filtrado con la probeta.

Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico al 2 M

(esto para seguir produciendo el estallido de los núcleos para
que queden libres las fibras de cromatina.

A continuación, añadir 2 ml de SDS ó jabón líquido

(se recomienda DAWN) (la acción de este
detergente es formar un complejo con las
proteínas y separar las del ADN. Así quedará libre
de las proteínas que tiene asociadas.

Añadir mediante una pipeta 50 ml de alcohol del 96°. (se debe

hacer de tal forma que el alcohol resbale por las paredes del
vaso y se formen dos capas. Es decir adiconar lentamente el
alcohol. No agitar. En la interfase, precipita el ADN.
Introducir una varilla de vidrio e ir
moviendo en la misma dirección

Nota ;
 La practica se puede completar por tincion

Se debe tomar una muestra de las fibras que se van depositando

sobre la varilla de vidrio y depositarlas sobre un portaobjetos y
cubrirlas con un cubreobjetos.

Teñir durante unos minutos con un colorante básico

Observar al microscopio
RESULTADOS Y ANÁLISIS
Al finalizar de ver el video, y a partir de las distintas preguntas planteadas, mis
compañeros manifestaron comprender por qué se usa cada compuesto en la extracción
de ADN. Además, fueron capaces de elaborar entre todos y ejecutar individualmente
un protocolo para extraer ADN de su propia saliva, utilizando los materiales cotidianos
que incluso todos en casa tenemos a nuestro alcance.

En el caso de práctica se investigó y encontramos algunas fotos del procesamiento de

una proteína como se muestra a continuación.

Tomar una muestra del tejido (5 gr Aprox) y homogenízalo, es decir muelelo con el
mortero,

Digestión
Coloca tu muestra molida (1 gr aprox), en un tubo de eppendorf de 1 ml y agrégale
el Buffer de extracción (Tris- HCL 0.05 M, EDTA, 0,02 M, NaCl 0.35 M, Urea 7 M) 
a temperatura de cuarto (500 ul aprox).
Cuando hayas agregado el Buffer de extracción a tu muestra, agítala e incúbala
por 10minutos con agitación esporádica.
 Separación de Proteínas, Carbohidratos y Lípidos

A la mezcla que tienes en tu tubo de ensayo agrégale 500 ul. de

Fenol/Cloroformo/Isopropanol frio usa guantes y no inhales los vapores.
Agita vigorosamente en Vortex, cuidando que no se tire el contenido del tubo, deja
reposar a temperatura ambiente por 5 min.
Extrae la fase acuosa (500 ul.) con una micropipeta, si no se separan las fases
centrifuga a 3000 rpm por 10 min, ten cuidado de equilibrar la centrifuga.
Extrae la fase acuosa superior una vez centrifugada
Precipitación de Ácidos nucleicos DNA y RNA

A la fase acuosa que extrae (500 ul), colocar en un tubo de eppendorf limpio
y agrégale 400 ul de etanol (100 %) frio y 75 ul de NaCl 3 M. Mezcla por  inversión,
suave y observa como se precipita el DNA.

Recuperación de la pastilla.
Centrifuga tu tubo por 5 min a 3000 rpm, recoge la pastilla del fondo del tubo.
Resuspensión.
Resuspende tu pastilla de DNA en 5 ml de agua destilada estéril.
CONCLUSIÓN
La extracción de ADN es un proceso simple, para obtener el material genético se
requiere de una serie de etapas básicas. En primer lugar, debemos conseguir
romper la pared celular y/o la membrana plasmática para poder acceder al núcleo
de la célula dónde se encuentra alojado el ADN. A continuación, debe romperse
de igual forma la membrana nuclear para dejarlo libre. Una vez liberado, hay que
proteger el ADN de enzimas y otros componentes celulares que puedan dañarlo. Y
finalmente, se debe precipitar en un medio estable. Como se observa en el video
se observa cómo se separan el ADN dentro del medio después de a ver dejado
reposar, observando también unas pequeñas burbujas.

En la imagen se muestra el ADN una vez extraído

CUESTIONARIO
1. ¿Cómo defines al DNA?
Es un ácido desoxirribonucleico está situada en los núcleos de las células, que
componen la carrocería. Por lo tanto, la DNA se puede considerar como uno de
los bloques huecos de la carrocería.
2. Menciona el fundamento del uso del alcohol en esta práctica y el porqué de
la concentración del mismo.
El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse, de ahí la facilidad para
retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol, ya que el ADN
es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol precipita. Por este
motivo, nuestras hebras de ADN comienzan a hacerse visibles en la interfase
entre la mezcla y el alcohol.Además de permitirnos distinguirlo, el alcohol separa
el ADN de otros componentes celulares, los cuales quedan en la solución acuosa.
La concentración del alcohol es al 96%
3. ¿Qué otros compuestos estarías esperando encontrar dentro de la muestra
aparte del DNA?

4. Plantee una actividad biotecnológica donde aplique esta práctica.

Principalmente una actividad biotecnológica en la cual se puede aplicar esta
practica seria en la extracción del ADN de algunas frutas ya que con el avance
de los alimentos transgénicos se podría implementar para la mejora de dichos
alimentos.

REFERENCIAS

1.- GARDNER E. (1985) Principios De Genética. Limusa. México

2.- BARAHONA A. Y DANIEL PIÑERO (1994). Genética: Continuidad De La Vida.
SEP-CONACYT-FCE. México (La Ciencia Desde México).
3.- SMITH-KEARY (1979). Genética. Estructura Y Función.Publicaciones
Cultural.México
4. Ville C.A., Solomon E. , Davis P.W. 1987 “El Fascinante Mundo De La
Biología”. Vol. 3. Primera Edición, Ed. Nueva Editorial Interamericana S.A. De C.V.
México, D.F. Pág. 252-260. 472-475
5. Klug, W.S. & Cummings, M. R. (1999). Conceptos de Genética, 5ª ed. Prentice
Hall, Madrid.
6. Informe de un experimento (extracción de ADN), monografías.com. [online]
Avaible at: http://www.monografias.com/trabajos91/informe-experimento-
extraccion-adn/informe-experimento-extraccion-adn.shtml#ixzz5AYieakdL
7. EXTRACCIÓN CASERA DE ADN, feria-ciencias-elvis.blogspot.com.es. [online]
Avaible at: http://feria-ciencias-elvis.blogspot.com.es/2015/07/extraccion-casera-
de-adn.html