UNIVERSIDAD FEMENINA DEL SAGRADO CORAZÓN

Facultad de Nutrición y Alimentación

Escuela Profesional de Nutrición y Dietética

Práctica de laboratorio N°4 : HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LA LIPASA

PANCREATICA

Asignatura :  Bioquímica General

Alumnas : Barrios Porras Gisella

Cárdenas Mendoza Catherine Annie
Sánchez Vilcatoma Erika Ellis

Docente : Mirtha Marieta Yarleque Chocas

Ciclo : III

Lima –2023
 Laboratorio Nro. 4

HIDRÓLISIS ENZIMÁTICA DE LA LIPASA PANCREÀTICA

I. OBJETIVOS :

 Determinar la cantidad de ácidos grasos liberados por la acción hidrolítica de la

lipasa pancreática.
 Reconocer la importancia de las sales biliares en la digestión de las grasas.

II. MARCO TEÒRICO

Las principales lipasas pancreáticas son el triacilglicerol hidrolasa, el colesterol éster

hidrolasa y fosfolipasa A2. Las lipasas son enzimas muy lábiles al calor, al pH ácido y
su acción se lleva a cabo por medio de la hidrólisis de los enlaces éster, entre el
glicerol y los ácidos grasos. Estas enzimas actúan mejor en pH entre 7 a 9,
temperaturas entre 37 a 39º C y su actividad depende de la hidrólisis de las partículas
micelares.

Las lipasas se definen como enzimas que hidrolizan preferentemente los ésteres de
glicerol de los ácidos grasos de cadena larga en las uniones de carbono 1 y 3,
produciendo 2 ácidos grasos y un 2- monoglicérido por triglicérido. Tras isomerización,
el tercer ácido graso puede ser desdoblado a una velocidad más lenta.

La lipólisis se incrementa en proporción con el área de superficie de las gotitas de

grasa, y la presencia de sales biliares que son emulsificantes de las grasas dejando
pequeñas gotas llamadas micelas.

La presencia de colipasa y sales biliares es necesaria para la actividad catalítica

completa y la máxima especificidad de la lipasa pancreática. Desde el punto de vista
metabólico dan origen a ácidos grasos libres y glicéridos parciales, necesarias para el
transporte de los ácidos grasos a través de la membrana celular.

Las lipasas hidrolizan los triglicéridos según las fases siguientes:

Las lipasas comprenden las enzimas de la mucosa lingual y gástrica, pero estas
digieren un porcentaje menor de grasas.

Las enzimas más importantes son las pancreáticas que están en la luz del intestino
para

digerir triglicéridos, ésteres del colesterol y fosfolípidos.

Fases de la digestión y absorción de las grasas

Las lipasas son enzimas que hidrolizan los ésteres de glicerol de los ácidos grasos de
cadena larga en las uniones de carbono 1 y 3, produciendo 2 ácidos grasos y 2-
monoglicérido por cada triglicérido. Tras isomerización por una Isomerasa el tercer
ácido graso puede ser desdoblado a una velocidad más lenta. La lipólisis se
incrementa en proporción con el área de superficie de las gotitas de grasa, y la
presencia de sales biliares emulsificantes para las grasas dejando pequeñas gotas
llamadas micelas.

La presencia de colipasa y sales biliares es necesaria para la actividad catalítica

completa y la máxima especificidad de la lipasa pancreática. Desde el punto de vista
metabólico dan

origen a ácidos grasos libres y glicéridos parciales, necesarias para el transporte de

los ácidos grasos a través de la membrana celular del enterocito.

La separación mecánica de los lípidos de los demás nutrientes comienza en el

estómago por efecto de los movimientos peristálticos. Dicha acción continúa en el
duodeno a donde llega una grosera emulsión de grasa que se irá hidrolizando gracias
a la acción combinada de las lipasas pancreáticas y de las sales biliares. El tamaño de
las partículas de grasa se reduce hasta los 500-1000 Ǻ (10−10 m). La acción
detergente de las sales biliares es previa a la acción de la lipasa pues deja las
partículas grasas con mayor superficie por unidad de volumen con lo que facilita la
acción de las enzimas pancreáticas.

La hidrólisis de los triglicéridos aun así no es total, sino que se forman unas micelas de
monoglicéridos, ácidos grasos y ácidos biliares que poseen grupos polares que se
orientan hacia el exterior en contacto con la fase acuosa, mientras que los grupos no
polares forman la parte central lipídica de la micela. Las micelas producidas en la luz
del duodeno tienen un diámetro de 50-100 Ǻ y transportan los lípidos hasta las células
de la mucosa intestinal donde son posteriormente absorbidas.

Fundamento:

La actividad de la lipasa pancreática se evalúa por la liberación de los ácidos grasos

del triacilglicerol. La concentración de ácidos grasos libres se determina mediante la

valoración con NaOH 0,5N. En consecuencia, mayor acidez, mayor actividad y

mayor gasto del titulante.

La acción de la lipasa se ve potenciada por las sales biliares que al emulsificar la

grasa la transforma en micelas.
 III. METODOLOGÌA

III.1. Materiales

 Aceite neutralizado- 100 ml de aceite se le agrega 3 gotas de, luego se añade

NaOH

0,5 N gota a gota hasta obtener un color rosa pálido persistente.

 Sales biliares 1% en buffer fosfato

 Enzima lipasa pancreática 1% en buffer fosfato 0,1 M pH 8.
 Buffer fosfato: En 300 ml de agua destilada agregar 0,95 g de KH2PO4 + 7,5 g
de K2HPO4 disolver y medir el pH llevándolo hasta 8, luego completar hasta
500 mlcon agua destilada.

III.2. Parte experimental

Procedimientos:

1. preparar la siguiente batería de tubos

ACEITE NEUTRALIZADO:
BUFFER FOSFATO 0,1M pH8:

SALES BILIARES:

AGUA DESTILADA:
SOLUCION DE LIPASA PANCREATICA:

2. Incubar los tubos por 45 min a 37 °C, agitando cada 7 minutos

3. Titular cada tubo con NaOH 0.05 N hasta observar color rosa pálido persistente
anotar el gasto en mL. Comenzar con el tubo blanco y corregir la titulación con el
blanco.
4. Expresar la acidez de los ácidos grasos liberados en términos de miliequivalentes

Fórmulas para calcular el miliequivalente de Ácidos grasos en cada tubo: Ejemplo:

V1 (ácidos grasos). N1 (ácidos grasos) = V2 (NaOH). N 2(NaOH)

m-eq ácidos grasos = V( mL) NaOH x N (concentración)NaOH

20 GOTAS ES 1 ml

20gotas-------------1ml

1 gota--------------X

X=0,05ml

Tubo 1= 0,05mL x 0,05 N

Tubo 1= 0,0025 m-eq ácidos grasos

Tubo 2= 0 m-eq ácidos grasos

Tubo 3= 0 m-eq ácidos grasos

IV. RESULTADOS
 V. DISCUSIONES

VI. CONCLUSIONES

Al comprobar el pH del tubo que no cambia de color en el medio acido, va a

significar que hay una mala digestión por lo tanto no generara ácidos
grasos.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué son los triacilgliceroles?

Los triacilgliceroles son glicéridos con 3 moléculas de ácidos grasos, y

los glicéridos con uno o dos grupos de ácidos grasos, denominados
monoacilgliceroles y diacilgliceroles, así mismo, son medios metabólicos. Suelen
ser en pequeñas cantidades. Es necesarios que los triacilgliceroles no están
cargados (los grupos carboxilo de cada ácido graso está junto
a covalentemente al glicerol), a veces se les llama grasas neutras. La mayor parte
de las moléculas de triacilglicerol tienen ácidos grasos de varias longitudes, que
logran ser insaturados, saturados o se pueden unir ambos. Las mezclas
de triacilgliceroles se nombran grasas o aceites según su composición en ácidos
grasos

2. ¿Qué enzimas participan en la degradación de los triacilgliceroles?

Lipasa lingual, lipasa pancreática, lipasa gástrica.

3. ¿En qué condiciones actúa la lipasa pancreática?

La lipasa, o acil-éster-hidrolasa, es una enzima lipolítica que se sintetiza y secreta

Células acinares en el páncreas. Trabajan en el proceso de hidrólisis. Triglicéridos
que requieren cofactores, hormonas y sales biliares, Función. Son estéreos
específicos, lo que significa que pueden cada enlace de éster de ácido graso se
separa e hidroliza específicamente con glicerina.

4. ¿Qué importancia tiene la colipasa en la digestión de los lípidos?

 La digestión de lípidos inicia con la lipasa gástrica en el estómago, que representa
el 10% de la digestión total de lípidos. En el proceso de insuficiencia pancreática, la
lipasa gástrica puede llegar al 90%. La lipasa gástrica funciona de manera óptima a
pH 4-5,5, no requiere cofactores y es resistente a la pepsina. La hidrólisis de
colipasa y triglicéridos produce ácidos grasos y monoglicéridos como producto de la
digestión de lípidos.

5 ¿Qué importancia tiene la bilis en la digestión de los triacilgliceroles?

La importancia de la bilis en la digestión de triacilgliceroles es que parte emulcifica los

ácidos grasos, es decir los parte en partículas pequeñas, en micelas para su mejor
digestión.
 5. Calcular el miliequivalente de Ácidos grasos en cada tubo.

20gotas-------------1ml

1 gota--------------X

X=0,05ml

Tubo 1= 0,05mL x 0,05 N

Tubo 1= 0,0025 m-eq ácidos grasos

Tubo 2= 0 m-eq ácidos grasos

Tubo 3= 0 m-eq ácidos grasos

6. Interpretar los resultados obtenidos con los gastos de NaOH que

aparecen en el cuadro

GASTO TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3

MESA 1 6 gotas 1 gota -
0,3ml 0,05ml
MESA 2 1 gota 0 -
MESA 3 13 gotas -
0,65 ml

7. ¿Con qué patologías se le relaciona la falta de digestión de los triglicéridos?

Las enfermedades que perjudican a la secreción biliar, como la obstrucción

biliar o los trastornos de hígado, las enfermedades que afectan a la secreción
pancreática de las enzimas con actividad de lipasa, como la fibrosis cística
 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Voet, D., Voet, J., Pratt, C. (2016). Fundamentos de Bioquímica.

Barcelona,España. Editorial Médica Panamericana.Nelson, D. (2018).
Principios de bioquímica. Barcelona España: Omega.Simulación Lipasa
https://www.youtube.com/watch?
v=3GEy1H7vfXM&t=128s&ab_channel=LuisEmilioCarranzaQuispe

2. Rudy McKee JRM. Triacilgliceroles. En: Lípidos y membranas [Internet]. [citado

el 28 de abril de 2023]. p. 11. Disponible en:
http://biblio3.url.edu.gt/Publi/Libros/2013/Bioquimica/12-O.p

3. Merino Pérez J, José M, Borge N. VIAS METABÓLICAS DE DEGRADACIÓN

[Internet]. universodad de cantabria; 2011 [citado el 28 de abril de 2023].
Disponible en:
https://ocw.unican.es/pluginfile.php/715/course/section/397/Tema%25204B-
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4. MARÍA ANGÉLICA CASTILLO CELIS BRIGGYTH KATHERINE ROJAS

CLAVIJO. INHIBIDORES DE LA LIPASA PANCREÁTICA [Internet].
[BOGOTÁ]: COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA; 2018 [citado el 28 de
abril de 2023]. Disponible
en:https://repositorio.unicolmayor.edu.co/bitstream/handle/unicolmayor/3768/
ENTREGA%20FINAL%20FINAL%20LIPASA..pdf?sequence=1&isAllowed=y

5. García Luna PP, López Gallardo y. G. Evaluación de la absorción y

metabolismo intestinal [Internet]. Isciii.es. 2007 [citado el 28 de abril de 2023].
Disponible en: https://scielo.isciii.es/pdf/nh/v22s2/fisiologia1.pdf

6.