COMPUESTOS FENÓLICOS

Harlen Torres Castañeda, D. Cs.

Profesor Asociado D.E.
Grupo de Bioprospección y Evaluación de Productos
Naturales
Departamento de Ciencias Básicas, Facultad de Ingeniería
y Administración, Universidad Nacional de Colombia
sede Palmira
 1. INTRODUCCIÓN
1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?
 1. INTRODUCCIÓN
1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

COMPUESTOS ORGÁNICOS

COMPUESTOS PRODUCTOS
SINTÉTICOS NATURALES
(plásticos, drogas,
pesticidas)
 1. INTRODUCCIÓN
¿Qué son los productos naturales? 1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

Organismos vivos

Metabolismo Ácidos
Proteínas
primario nucleicos Necesarios
para vivir

Lípidos Carbohidratos

Metabolismo
Terpenos Fenoles
secundario Necesarios
Esteroides Saponinas para sobrevivir
Cumarinas Alcaloides
 1. INTRODUCCIÓN
Metabolitos secundarios: Defensores del 1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

organismo
 1. INTRODUCCIÓN
Especies reactivas de oxígeno 1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

Radiación Polución Tabaco

Metabolismo
UV Mal
celular
nutrición

ROS

Estrés oxidativo

Envejecimiento Enfermedades
cardiovasculares
Enfermedades Desordenes
respiratorias Cáncer degenerativos
 1. INTRODUCCIÓN
Especies reactivas de oxígeno 1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

Radiación Polución Tabaco

Metabolismo
UV Mal
celular
nutrición

ROS
+
ANTIOXIDANTES

Sistema en
equilibrio
 1. INTRODUCCIÓN
1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?
Antioxidantes naturales

Enzimáticos No enzimáticos
Superóxido
dismutasa, Catalasa

Exógenos Endógenos
Vitamina A y D, Ácido
úrico, Glutationa

Vitaminas Minerales Carotenos Fenoles

Vitamina C y E Zn, Se -Caroteno,
Licopeno
 1. INTRODUCCIÓN
OH 1.1. ¿Qué son los compuestos
fenólicos?

Fenol
Todos aquellos compuestos derivados del fenol son
llamados compuestos fenólicos
 1. INTRODUCCIÓN

1.2. Proyecto de investigación

 1. INTRODUCCIÓN
1.2. Proyecto de investigación

PROYECTO:

IMPLEMENTACIÓN DE
METODOLOGÍAS
ESPECTROFOTOMÉTRICAS PARA
LA CUANTIFICACIÓN DE
COMPUESTOS FENÓLICOS
 1. INTRODUCCIÓN
Flavonoides 1.2. Proyecto de investigación

flavanonas (1), flavanoles (2), flavan-

3,4-dioles (3), catequinas (4), flavonas
(5), flavonoles (6), antocianidinas (7),
proantocianidinas (8), isoflavonas (9),
chalconas (10) y auronas (11)
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología 1.2. Proyecto de investigación

1. Ensayos a microescala
(Pruebas químicas espectrofotométricas
para la determinación del CTF, CTFl, CTC,
CTA y CTP)

2. Preparación de extractos
(Ensayos para obtener extractos ricos en
compuestos fenólicos)
3. Determinación de fenoles en
extractos vegetales
(Plantas medicinales, especies vegetales
de la Reserva de Yotoco y frutos
comerciales)
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología: Ensayos a microescala 1.2. Proyecto de investigación

(semillero 1)
Cálculos para la
reducción a microescala

CTF (Folin-Ciocalteu) CTFl

Ensayos
CTC (Vainillina) CTP CTA

Curva de calibración

Cuantificación y
optimización del ensayo
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología: Montaje de pruebas químicas 1.2. Proyecto de investigación

(semillero 1)

Microplate reader
(Lector de microplacas)
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología: Preparación de extractos 1.2. Proyecto de investigación

(semillero 2)

Obtención de
extractos crudos

Purificación

Determinación del
CTF

Determinación del
CTFl, CTC, CTP y CTA
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología: Preparación de extractos 1.2. Proyecto de investigación

(semillero 2)
CHCl3 MeOH:H2O
(2) (1:1) Sacar la fase acuosa
con una pipeta

Centrifuga 10.000
rpm por 10 min.
Hojas secas

50-200 mg de material seco en 2 mL de la

mescla CHCl3:MeOH:H2O (1:0.5;0.5 mL)
Anadir 6 perlas de acero de inox. y someter
a vortex por 10 min.
 1. INTRODUCCIÓN
Metodología: Determinación de fenoles en 1.2. Proyecto de investigación

especies de la Reserva (semillero 3)

Especificación y consecución
de las especies comerciales a
trabajar

Especificación y colección de
especies en la Reserva de Yotoco

Preparación de
extractos

Determinación
de fenoles
 1. INTRODUCCIÓN
Cronograma de actividades 1.2. Proyecto de investigación
 1. INTRODUCCIÓN
Resultados 1.2. Proyecto de investigación

Cada semillero debe comprometerse a la presentación de un

informe que incluya los resultados del proceso.

Elaboración de al menos una práctica académica relacionada con

la determinación de compuestos fenólicos.
 1. INTRODUCCIÓN
Semilleros 1.2. Proyecto de investigación

Semillero 1: Luis Miguel Bolaños

Edwin Alexander Ceballos
Sebastián Mora
Semillero 2: Ana Carolina Hurtado
Carlos Ferreira
?
Semillero 3: Steven Rodríguez
Karen Nicole Acosta
Hernán Alonso Bustamante
 1. INTRODUCCIÓN
Referencias 1.2. Proyecto de investigación
 1. INTRODUCCIÓN
Referencias 1.2. Proyecto de investigación
 2. CUANTIFICACIÓN DE
COMPUESTOS FENÓLICOS

2.1. Técnicas espectrofotométricas

 2. CUANTIFICACIÓN DE
¿Qué es la espectroscopía? COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

Espectroscopía: Es el estudio de la estructura y

dinámica molecular mediante la absorción,
emission y dispersion de la luz

Luz: Campo electromagnético que se caracteriza

por una longitude de onda y una frecuencia () o
energía (E), relacionadas mediante la expression
E = h = hc/, donde c es la velocidad de la luz
 2. CUANTIFICACIÓN DE
El espectro electromagnético COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Tipos de técnicas espectroscópicas COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

Técnica Efecto sobre la Información obtenida

estructura
Rayos X Ionización Estructura total de la molécula incluida la
estereoquímica
UV-Vis Transiciones Existencia de cromóforos y/o conjugación de la
electrónicas molécula
Infrarrojo Deformación de Grupos funcionales
enlaces
RMN Transiciones de Grupos funcionales, subestructura, conectividad,
spin electrónico estereoquímica
o nuclear
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Radiación UV-Vis COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

ULTRAVIOLETA LEJANO
10 - 200 nm

ULTRAVIOLETA PRÓXIMO
RADIACIÓN UV-V 200 - 400 nm

VISIBLE
400 - 800 nm
Efectos

EXCITACIÓN ELECTRÓNICA
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Radiación UV-Vis COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

Transiciones electrónicas posibles entre orbitales

n: orbital que contiene par de electrones no compartidos (ej en O, N, Cl)

En UV- Vis la
energía solo
alcanza para
las
transiciones
n→* y →*
 2. CUANTIFICACIÓN DE
El espectro de UV-Vis COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

Solo van a absorber enlaces π conjugados y heteroátomos con pares de

electrones no compartidos (O, N)

Grupos que absorben luz = CROMÓFOROS

 2. CUANTIFICACIÓN DE
El espectro de UV-Vis COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas
 2. CUANTIFICACIÓN DE
El espectrofotómetro COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas
 2. CUANTIFICACIÓN DE
El espectrofotómetro COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Análisis cualitativo COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas
Complejo con
AlCl3
OH
OH
HCl
HO O
Ionización con
Rompimiento del
AcONa
OH complejo
OH O
Complejo con
Complejo con AlCl3
AlCl3
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Análisis cuantitativo COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

T = I/Io = 10-lc
-logT = -log(10-lc) = lc

Ley de Beer-Lambert
A = lc

A: Absorbancia
ε: coeficiente de extinción
(característico de cada sustancia)
l: largo del paso de la cuba (cm)
c: concentración (moles/l)
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Análisis cuantitativo COMPUESTOS FENÓLICOS
2.1. Técnicas
espectrofotométricas

PASOS A SEGUIR EN UN ANÁLISIS ESPECTROFOTOMÉTRICO

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Sustancias coloreadas Orgánicas u Inorgánicas

Sustancias Incoloras

Reactivo selectivo
Condiciones Optimas ( pH, disolvente, R], t, Estabilidad, T, )
 elevada

SELECCIÓN DE LA  ANALÍTICA

PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRADO

MEDIDA DE LA MUESTRA Y CÁLCULOS

 2. CUANTIFICACIÓN DE
COMPUESTOS FENÓLICOS

2.2. Contenido de fenoles totales (CFT)

 2. CUANTIFICACIÓN DE
Método de Folin-Ciocalteu COMPUESTOS FENÓLICOS
2.2. Contenido de fenoles
totales

Na2WO4.H2O
+

?
Na2MoO4.2H2O
+
H2 0
+
HCl No se conoce con
+ exactitud la química
H3PO4 de esta mezcla
+
Li2SO4.H2O Reactivo de Folin-
Ciocalteu (RFC)
 2. CUANTIFICACIÓN DE
Método de Folin-Ciocalteu COMPUESTOS FENÓLICOS
2.2. Contenido de fenoles
totales

Estructura del ácido gálico, un compuesto

fenólico usado como estándar en el
método de Folin-Ciocalteu

Medición de
absorbancia

RFC sin estándar RFC con estándar La absorbancia es

pH  3,0 pH  10,0 proporcional a la
concentración del
estándar