Biotecnología vegetal: producción

de compuestos de interés
farmaceútico en cultivos in vitro

Curso Maestría en Biotecnología 2019

FFyB. UBA
 Reino Vegetal

• Fuente de:

- Biomasa
- Metabolitos primarios
- Metabolitos secundarios
- Enzimas
Plantas: Fuente de
• Alimentos
• Medicinas
• Sabores
• Fragrancias
• Maderas
• Gomas
• Celulosa
• Caucho
• Biocidas
Potencial biotecnológico de las plantas

• Las plantas como fuente de metabolitos

secundarios.

• Las plantas como fuentes de genes o enzimas

de interés biotecnológico

• Las plantas como plataformas de expresión de

proteínas heterólogas.
• Fuente de energía renovable
- Biodiesel
- Alcohol

• Agentes de remediación de contaminantes

ambientales
Impacto de la Biotecnología Vegetal
• Agricultura
– Transgénicos
– Biofertilizantes
– Biocidas
– Industria Farmacéutica
– Fuente de drogas medicinales
– Agentes de biotransformacion (biocatálisis)
– Sistema (Plataforma) para la expresión de proteínas
terapeúticas.
• Medio Ambiente
– Fitorremediación
Producción de aceites esenciales
Producción de hierbas medicinales
Producción de colorantes
Biotecnología vegetal: producción
de compuestos de interés
farmaceútico en cultivos in vitro
 Productos farmacéuticos o
precursores derivados de plantas
Productos farmaceuticos o precursores derivados de plantas
mercado 2010
(Adaptado de Raskin et al 2002)
Nome Type Source Therapeutic use
Alkaloids: Projected l 2010: 4045 millons US$
Hyoscyamine, Tropane alkaloid Solanaceas Anticholinergic
scopolamine
Camptothecin Indol alkaloids Camptotheca Antineoplastic
acuminata
Capsaicin Phenylalkyl-amine Capsicum spp. Topic analgesic
alkaloids
Codeine, morphine Opium alkaloid Papaver somniferum Analgesic,antitussive
Colchicine Isoquinoline alkaloid Colchicum autumnale Antigout
Galanthamine Isoquinoline alkaloid Leucojum aestivum Choliesterase inhibitor
Pilocarpine Imidazole alkaloid Pilocarpus jaborandi Cholinergic
Nicotine Pyrrolidine alkaloid Nicotiana spp. Smoking cessation therapy
Quinine Quinoline alkaloid Cinchona spp. Antimalarial
Quinidine Quinoline alkaloid Cinchona spp. Cardiac depressant
Reserpine Indole alkaloid Rauwfolia serpentina Antihypertensive, psycotropic
Vinblastine, Bis-indole alkaloid Catharanthus roseus Antineoplastic
vincristine
Yohimbine Indole alkaloid Apocynaceae, Aphrodisiac
Rubiaceae
Terpenes & steroids: Projected 2010 sales : 12400 millones US$
Artemisinin Sesquiterpene lactone Artemisia annua L. Antimalarial
Diosgenin Steroids Dioscorea spp. Oral contraceptives and hormonal
drugs
Taxol and other Diterpenes Taxus brevifolia Nutt. Antineoplastic
taxoids
Glycosides: Projected 2010 sales of US$ 9230 million
Digoxin, digitoxin Steroidal gliycosides Digitalis spp. Cardiotonic
Sennosides A y B Hydroxy-anthracene Cassia angustifolia Laxative
glycosides Vahl.
Others and mixtures: Projected 2010 sales of US$ 5014 million
Ipecac Mixture of ipecac Cephaelis Emetic
alkaloids and other ipecacuanha
components
Podophyllotoxin Lignan Podophyllum peltatum Antineoplastic
 Cultivo in vitro

• Los tejidos vegetales pueden cultivarse in

vitro por la célula vegetal es totipotente
Impacto de la Biotecnología Vegetal

– Industria Farmacéutica
• Fuente de drogas medicinales
• Agentes de biotransformacion (biocatálisis)
• Sistema (Plataforma) para la expresión de proteínas
terapeúticas.
FUENTE DE DROGAS MEDICINALES

Metabolitos Secundarios
 Metabolitos secundarios

Las plantas producen una variedad de

biomoléculas las cuales no están directamente
relacionados con el crecimiento y desarrollo
sino que intervienen en las interacciones de la
planta con su medio ambiente.
Metabolismo Metabolismo
Primario Secundario

Crecimiento y Rol Interacción con el

desarrollo ambiente y otros
organismos

Universal Características Unico

Uniforme Variado
Conservado

Esencial Supervivencia en el Esencial

sistema ecológico
 Metabolitos secundarios

La biosíntesis de metabolitos secundarios de

una planta depende de su genotipo y de
factores bióticos y abióticos que modulan la
respuesta
 Metabolitos secundarios
• Porque se forman?

• Como se forman?

• En que parte del vegetal se localizan?

• Fuentes de obtención
 Funciones de los metabolitos secundarios:

Defensa:
• contra herbívoros ( insectos, moluscos, vertebrados)
• contra microorganismos
Ecológica:
• dispersión de semillas
• atracción para polinización
• protección UV
Metabólicas:
• protección contra especies reactivas de oxígeno
• mediadores nutricionales
 Flavonoides: Funciones
Flavonoles glicosilados: - Pigmentación
- protección UV
- fertilidad

Antocianinas: - Pigmentación
- Atracción polinizadora
Flavonas: - Nodulación
- Defensa

Proantocianidinas: - Defensa
- Pigmentación

3-deoxyantocianidinas: - Pigmentación
- Defensa

Isoflavonoides - Defensa
- Nodulación
 Características del Metabolismo
Secundario
• Diversidad de estructuras químicas y gran número de
compuestos

• Los compuestos o grupos de compuestos son

taxonomicamente restringido. La síntesis de la mayoría
de los metabolitos secundarios no tienen aparente
significancia para las células productoras, pero si son
importantes para la planta entera

• Los metabolitos secundarios pueden ser productos

finales o intermediarios, los cuales pueden ser
continuamente transformados.
• La biosíntesis y acumulación de la mayoría de
metabolitos secundarios está restringida células
especializadas y a diferentes fases del desarrollo del
organismo productor .

• Los genes que codifican las enzimas involucradas en la

biosíntesis de metabolitos secundarios de plantas están
localizados en el genoma.

• Las enzimas, precursores, intermediarios y productos

finales involucrados en la biosíntesis, almacenamiento y
degradación son estrictamente compartimentalizados.
• La formación de metabolitos secundarios esta asociada
con la síntesis de las enzimas involucradas(control del
nivel de transcripción o transducción) o la regulación de
la actividad enzimática (activación de proenzimes,
accesibilidad de precursores o acumulación de
productos).

• La biosíntesis, almacenamiento y transformación/

degradación of metabolitos secundarios puede ocurrir
simultáneamente en diferentes compartimentos de la
célula o durante diferentes fases del desarrollo celular.
Las enzimas que catalizan estos procesos aparecen
separadamente en tiempo y espacio.
Características de los metabolitos secundarios
- No son esenciales para el crecimiento y desarrollo
celular, pero sí para la planta entera.

- Pueden ser productos finales o intermedios de una ruta

metabólica.

- Diversidad de estructuras químicas.

- Los genes que los codifican son de localización

cromosómica.

- La biosíntesis, degradación y almacenamiento es llevada

a cabo por células especializadas y puede ocurrir
simultáneamente en diferentes compartimentos y/o
fases de crecimiento.
 Biosíntesis de alcaloides del tropano
Arginine
Ornithine ADC

ODC
Agmatine

Cinnamylputrescine Putrescine Espermidine Espermine

PMT

Cinnamic acid
N-methylputrescine

MPO
PAL

N-methylpyrrolinium

Acetoacetyl-CoA
Phenylalanine
Hygrine Cuscohygrine

Phenylpyruvic acid TR II
Tropinone Pseudotropine Aliphatic esters of
TR I Pseudotropine
Phenyllactic acid
Aliphatic esters of tropine
Tropine
Aromatic esters of tropine
Tropic acid Calystegins
L-Hyoscyamine
H6H

(L)-6-hydroxyhyoscyamine
H6H

Scopolamine
Características de los metabolitos secundarios

- No son esenciales para el crecimiento y desarrollo

celular, pero sí para la planta entera.

- Pueden ser productos finales o intermedios de una ruta

metabólica.

- Diversidad de estructuras químicas.

- Los genes que los codifican son de localización

cromosómica.

- La biosíntesis, degradación y almacenamiento es llevada

a cabo por células especializadas y puede ocurrir
simultáneamente en diferentes compartimentos y/o
fases de crecimiento.
 Estructura química de los metabolitos secundarios

Síntesis química

Vainillina Phloroglucinol

Fuentes naturales
O

A B C

R R
O

Vincristina y Vinblastina Taxol Antraquinonas

 Metabolitos secundarios

• Compuestos alifáticos
• Terpenoides y esteroides
• Compuestos fenólicos
– Fenoles y ácidos fenólicos
– Flavonoides
– Quinonas
– Taninos
• Alcaloides
• Glicósidos cianogenéticos
 Características de los metabolitos
secundarios

- No son esenciales para el crecimiento y desarrollo celular, pero sí para

la planta entera.

- Pueden ser productos finales o intermedios de una ruta metabólica.

- Diversidad de estructuras químicas.

- Los genes que los codifican son de localización cromosómica.

- La biosíntesis, degradación y almacenamiento es llevada a cabo por

células especializadas y puede ocurrir simultáneamente ó no en
diferentes compartimentos celulares y/o fases de crecimiento.
Compartimentalización en la ruta biosintética de los
alcaloides indol terpénicos.

From Dr. Verpoorte Lab

Compartimentalización de la dos rutas de biosíntesis de las
antraquinonas.
VIA DE LOS TERPENOS
VIA DEL MEP VIA DEL SHIKIMATO

Fosfoenol Eritrosa
Gliceraldehído Piruvato Piruvato 4- fosfate
3-fosfato

CLOROPLASTO
+TPP CO2 Ácido Shikimico
1-Deoxi-D-xilulosa 6-fosfato
Ácido Corismico
2-C-Metil-D-eritritol
4-fosfato
HOOC
OH COOH
O
4-(ctidine 5´-difosfo)- O COOH +
2-C- Metil-D-eritritol
COOH

2-fosfo-4-(citidine 5´-
Ácido Isocorismico Ácido α-cetoglutarico
Difosfo)-2-C-Metil-D-eritritol
+TPP
Co2,PEP
2-C-Metil-D-eritritol
COOH COOH
2,4-ciclodifosfato

Hidroxi Metil butil

O
4-difosfato
OSB
OH O

COOH COOH
SCoA
A B
P P P P P P
+
IPP DMAPP IPP O
OH

DHNA CoA ester de OSB

A B C

R R
O

ANTRAQUINONAS
 Compartimentalización de rutas biosintéticas

Ejemplo: alcaloides indólicos

En la planta entera

• genes “tempranos” en epidermis de tallos, hojas, yemas

florales y meristema apical de raíces.

• genes “tardíos” en lactíferos e idioblastos de hojas, tallos y

yemas florales.
 Metabolismo secundario en plantas:
compartimentos de almacenamiento

-Vacuolas : mayoría de los metabolitos secundarios

-Cloroplastos : carotenoides

-Glándulas : terpenos (aceites esenciales)

 Localización de metabolitos secundarios en
plantas
Glicoalcaloides Frutos inmaduros S. elegnifolium
esteroidales

Glicoalcaloides Hojas y brotes S. lorentzii

esteroidales

Artemisinina Brotes florales A. annua

Tiofeno Raíces Tagetes
Hioscianina Raíces Datura
Escopolamina Hojas Hyoscyamus nijus

Taxol Corteza Taxus

Ginsenoides Raíces Ginseng
Metabolitos secundarios almacenados en vacuolas
de cultivos celulares
Fenolicos
Flavone malonyl glucosides Petroselinum hortense
Isoflavone malonyl glucosides Cicer arietinum
O-Coumaric acid glucoside Melitus alba
Anthocyanins Daucus carota
Alcaloides
Indol alcaloides Catharanthus roseus
S-Reticulinae Fumaria capreolata
S-Scoulerine
Nicotine Nicotina tabacum
Lupanine Lupinus polyphyllus
Esteroides
 Fuentes de metabolitos secundarios:
Plantas silvestres

Explotación

Riesgo de extinción

Pérdida de biodiversidad Destrucción de ecosistemas

Estrategias sostenibles
 Estrategias sostenibles

- Domesticación de plantas silvestres con

mantenimiento de la capacidad productiva.

- Cultivos in vitro con capacidad productiva.

 Fuentes de drogas medicinales

 Plantas silvestres
 Cultivos agronómicos
 Síntesis química
 Procesos biotecnológicos
 Técnicas combinadas
N a tu ra l S o u rc e s
C H 3
O H

N
V in c r is tin e a n d v in b la s tin e ( a n ti- tu m o r a
H C O O C H 3

N
e x tra c te d fro m le a v e s o f C a th a ra n th u
H

C H 3
ro s e u s )
N O C O C H 3
H 3 C O O H
R C O O C H 3

C H 3 - C - O O
O H

O O 3 H C
C H 3
T a x o l ( a n ti- tu m o r a l, e x tr a c te d fr o m
C - N H - C H - C H - C - O
O
b a r k o f T a x u s b r e v ifo lia )
O H H
O H O - C -C H 3
C O O
O
 Chemical synthesis
CHO

Vanillin (raw material for

pharmaceuticals, such as methyldopa
CH3 O
and Trimethoprim, flavouring found in
OH plants)

OH Phloroglucinol (raw material for

pharmaceuticals, such as Buflomedil
Antihipertensive, growth stimulator of
fruit trees. Early fructification. Found in
OH
HO
plants as part of flavonoids molecules.
 Bio t e c h n o lo g ic a l p ro c e s s e s

OH O OH

Sh iko n in (a n ti-in fla m m a to ry, p ig m e n t

OH O o b ta in e d by fe rm e n ta tio n of
Lith o sp e rm u m e ry th ro rh izo n c e lls)

O
Be rb e rin e (a n tim ic ro b ia l, a n ti-
OCH3
in fla m m a to ry, p ig m e n t o b ta in e d by
OCH3
fe rm e n ta tio n o f C o p tis ja p o n ic a a nd
Th a lic tru m m in u s)

O-Glc-Glc
OH

G in se n o sid e s (stim u la n t of th e
n e rvo u s syste m o b ta in e d fro m h a iry
Glc-Glc-O
ro o ts o f Pa n a x g in se n g )
C o m b in e d T e c h n iq u e s
R 2O O R 1

7
D o c e ta x o l o r T a x o te r e ( A s e m is y n th e tic
R 3O c o m p o u n d - p r e p a r e d fr o m 1 0 - d ia c e th y l- b a c c a tin e
1
O
H III, e x tra c te d fro m T a x u s b a c c a ta .
O H O Ac

O CO Ph

1 T axol R 1= O H (? ); R 2= A c ; R 3= O Ph O

2 1 0 - d e a c e t y l- t a x o l: R 1= O H (? ); R 2= H ; R 3=
3 7 - E p i- t a x o l R 1= O H (? ); R 2= A c ; R 3= Ph N

4 7 - E p i- 1 0 - d e a c e t y l- t a x o l: R 1= O H (? ); R 2= H ; R 3= H H
OH

O Ph O

5 C e p h a lo m a n n ie : R 1= O H (? ); R 2= A c ; R 3=
N
6 1 0 - d e a c e t y l- c e p h a lo m a n n ie : R 1 = O H ( ? ) ; R 2 = H ; R 3 =
OH
H
O Ph O

7 T a x o te re : R 1= O H (? ); R 2= H ; R 3=
O N

OH
8 B a c c a t in I I I : R 1= O H (? ); R 2= A c ; R 3= H H

9 B a c c a t in V : R 1= O H (? ); R 2= A c ; R 3= H
1 0 1 0 - d e a c e t y l- b a c c a t in I I I : R 1= O H (? ); R 2= H ; R 3= H