GENETICA MICROBIANA

Gentica,

define y analiza a la herencia, o la constancia y el cambio en la vasta riqueza de funciones fisiolgicas que constituyen las propiedades de los organismos. Gen, es la unidad de la herencia, un segmento del DNA que lleva la informacin en su secuencia de nucletidos para una propiedad bioqumica o fisiolgica especfica.

 El

enfoque tradicional dela herencia ha sido identificar a los genes con base a su contribucion al fenotipo, es decir, las propiedades estructurales y fisiologicas colectivas de una celula o de un organismo (ya sea el color de ojos en el humano o la resistencia a los antibioticos en una bacteria). La base quimica para la variacion de en el fenotipo es un cambio en el genotipo; es decir la alteracion en la secuencia del DNA dentro de un gen o en la organizacion de los genes.

ESTRUCTURA Y FUNCIN DEL GENOMA

BACTERIANO

El material gentico de las bacterias se encuentra en el citoplasma, se le denomina como nucleoide, cuerpo nuclear, regin nuclear. Esta compuesto de alrededor de 80% de DNA, 10% de RNA y 10% de protenas (RNA polimerasa).

En 1963 se logro aislar y extender el cromosoma de E. coli, determinado que tiene una longitud de 1 mm. Es una tira circular doble y que se encuentra super enrollado. El termino genoma se refiere al conjunto completo de elementos genticos (genes) dentro de la clula.

Los procesos genticos requieren tres tipos de polmeros: Acido Desoxirribonucleico (DNA). Acido Ribonucleico (RNA) Protenas.

DNA: El cromosoma bacteriano nico contiene dos tiras complementarias de DNA que estn enrolladas alrededor una de la otra en patrn helicoidal, con los extremos unidos para formar una molcula circular.

Las molculas de DNA son de doble cadena con bases complementarias. Esta caracterstica le permite a una de las cadenas proporcionar la informacin para el copiado de la informacin en la otra cadena. Cada par de bases esta compuesto por una purina y una pirimidina.

Las purinas de una cadena forman puentes de hidrogeno con las pirimidinas. El par A-T con 2 uniones puente de H. El par G-C con tres uniones. Cada una de las cuatro bases esta unida a una fosfo-2-dexosirribosa para formar un nucletido.

La longitud de una molecula de DNA se expresa en miles de pares de bases o en kilobases (kb). El cromosoma de una bacteria, E. coli, es una molcula circular nica que contiene alrededor de 4,500,000 pares de bases o 4500 kb. Con una longitud aproximada de 1 mm.

RNA: Existen 3 diferencias entre la qumica del DNA y la del RNA: Las macromolculas del RNA contienen el azcar ribosa en lugar de desoxirribosa. El RNA tiene la base uracilo en lugar de timina. El RNA no es una molcula de tira doble

1.

2. 3.

Las bacterias contienen 3 tipos de RNA:

RNAm: (mensajero), su funcin es copiar el cdigo gentico del gen (DNA cromosmico) y llevar este mensaje al sitio de sntesis de protenas (Ribosomas).

1.

2.

RNAt (transferencia), traduccin del mensaje de RNA en una secuencia especifica de aminocidos.
RNA (ribosomal) sntesis de protenas.

3.

ENZIMAS
1.

2.
3.

Toposisomerasa II: promueve el superenrollarmiento (DNA girasa) Toposisomerasa I: controla el desenrrollamiento. RNA polimerasa: hace que las dos tiras de DNA se desenrollen de modo que se pueda transcribir la informacin.

4.

DNA ligasa: une los fragmentos sintetizados. Primasa: inicia la sntesis de un fragmento roto.

5.

RECOMBINACION GENETICA

Es el proceso por el que los elementos genticos contenidos en dos genomas separados se juntan en una unidad. Trae como consecuencia un cambio. Se transfieren genes completos, grupos de genes o cromosomas completos.

FORMAS DE RECOMBINACIN
Transformacin: el DNA libre se incorpora a una clula. Transduccin: La transferencia del DNA donador esta mediada por un virus. Conjugacin: la transferencia de DNA implica contacto clula clula y la presencia de un plasmido y de una estructura llamada pili.

TRANSFORMACION
Este descubrimiento fue uno de los hechos mas relevantes, pues condujo a experimentos que probaron que el DNA es el material gentico. Fred Grifth (1920). Trabajos con Streptococcus pneumoniae.

No todas las bacterias tienen esta capacidad, sino clulas competentes que son capaces de tomar una molcula de DNA y lo integran a su cromosoma.

Intervienen protenas especiales en el trasporte e incorporacin del DNA.

TRANSFORMACION: ETAPAS
1.

Unin del DNA: protena asociada a la membrana: autolisina y nucleasas. Incorporacion del DNA: primero se fija reversiblemente, luego se vuelve irreversible. Integracion del DNA :protena de unin, en el cromosoma protena RecA

2.

3.

Cuando una clula es capaz de tomar una molcula o un fragmento de DNA y transformarse se denomina clula competente. Solo algunas cepas poseen esta caracterstica, parece ser una propiedad hereditaria.

EXPERIMENTO DE GRIFFITH

Neumococo vivo capsulado. (S) Neumococo muerto por calor Neumococo vivo rugoso (R) no capsulado Neumococo (R) vivo + Neumococo muerto

Ratn muerto Se aslan cepas lisas Ratn vivo.

Ratn vivo. Ratn muerto: se aslan cepas S

TRANSDUCCION
El DNA se transfiere de una clula a otra por medio de un virus: bacterifago.

TRANSDUCCION

TRANSDUCCIN
Cuando un fago infecta a una bacteria, capta fragmentos del genoma de la clula hospedadora. Al infectar a otra bacteria el fago transductor puede transferir sus propios genes y tambin los de la clula hospedadora de la cual procede.

TRANSDUCCIN
Puede ocurrir de 2 formas: 1. Transduccin generalizada: Cualquier porcin del genoma bacteriano pasa a formar parte del genoma de la partcula vrica.

TRANSDUCCIN
2.

Transduccion especializada: El DNA de una regin especifica del cromosoma del hospedador se integra directamente en el genoma del virus. No todos los fagos pueden transducir, ni todas las bacterias son transducibles.

TRANSDUCCIN
El mecanismo de transduccin fue descubierto por Zinder y Lederberg (1952). Estudiando la recombinacin gentica entre diferentes cepas de Salmonella typhimurium.

CONJUGACION
Implica el contacto clula clula. El material gentico transferido puede ser un plasmido (elemento gentico que se replica independientemente del cromosoma), o una porcin del cromosoma. Una clula donadora trasmite la informacin gentica a otra clula, la receptora. La clula donadora posee el pili o pelo sexual.

CONJUGACION La capacidad de la clulas para actuar como donantes se debe a la presencia de factor f o factor de fertilidad. Las clulas que carecen de factor f, son receptoras.

PLASMIDOS
Son elementos genticos que se replican independientemente del cromosoma. Se encuentran dentro de la clula. Existen varios tipos de plasmidos. En E coli, se han aislado mas de 300

TIPOS DE PLASMIDOS
P. C (conjugativos): codifican pili sexuales y protenas necesarias para la transferencia de DNA. P. R (resistencia a los antibiticos, mercurio). P. P (produccin de bacteriocinas y antibiticos).

TIPOS DE PLASMIDOS
Plasmidos de funciones fisiolgicas: Utilizacin de urea, Fermentacin de carbohidratos. Produccin de pigmentos. Plasmidos de virulencia: produccin de toxinas, enzimas, tumores.

E coli, posee un plasmido conjugativo llamado Factor F: - Capacidad para sintetizar pili. - Movilizacin del DNA para su transferencia. - Alteracin de receptores de la superficie de la clula.

Los transposones son elementos genticos que pueden contener varios kbp de DNA, incluida la informacin necesaria para su migracin de un lugar gentico a otro; creando mutaciones por insercin, tales elementos acarrean solamente

genes codificadores de las enzimas necesarias

para promover su propia transposicin. Casi todas las bacterias acarrean elementos de insercin, as cada especie alberga y conserva sus propias caractersticas.

TERAPIA
GENICA

MUTACION
Es un cambio hereditario en la secuencia de bases del acido nucleico que constituye el genoma de un organismo. Fenotipo: las caractersticas observables de un organismo. Genotipo: constitucin gnica precisa de un organismo. (conjunto de genes)

MUTACIONES

Cepa silvestre: cepa aislada de la naturaleza. Se pueden obtener mutantes de una cepa silvestre o de una derivada de esta. Pueden ocurrir cambios perjudiciales, neutros o beneficiosos.

MUTACIONES
M. Espontneas. Ocurren en la naturaleza, sin ser provocadas. Ej: efectos de la radiacin natural, que alteran la estructura de las bases de DNA. Errores en el apareamiento de bases. Tipos de mutantes: No capsulado, inmvil, fermentacin de azucares.

MUTACION
Mutaciones inducidas por mutgenos, sustancias que inducen a mutaciones. Mutgenos qumicos: reaccionan directamente con el DNA, ocasionando cambios qumicos, en las bases. Acido nitroso, bromuro de etidio etc. Mutgenos fsicos: rayos UV, rayos X.

TRANSCRIPCION

la informacin gentica contenida en el ADN se mantiene mediante su capacidad de replicacin. La informacin contenida en el ADN se expresa dando lugar a protenas, mediante los procesos de transcripcin, paso por el que la informacin se transfiere a una molcula de RNA mensajero (RNAm) y, mediante el proceso de la traduccin el mensaje transportado por el RNA-m se traduce a protena.

La transcripcin consiste en la sntesis de ARN tomando como molde ADN y significa el paso de la informacin contenida en el ADN hacia el ARN. La transferencia de la informacin del ADN hacia el ARN se realiza siguiendo las reglas de complementaridad de las bases nitrogenadas y es semejante al proceso de transcripcin de textos, motivo por el que ha recibido este nombre. El ARN producto de la transcripcin recibe el nombre de transcrito. En las bacterias la transcripcin y la traduccin tienen lugar en el citoplasma bacteriano y al mismo tiempo, son simultneas. Sin embargo, en eucariontes la transcripcin tiene lugar en el ncleo y la traduccin en el citoplasma.