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ORGANIZACIÓN,

REPLICACIÓN Y
REPARACIÓN DEL
DNA
• Castellanos Tejada Melissa
• Gonzalez Delgado Aldebaran
• Lara Sánchez Marelyn
• Lopez Vargas Ana Daniela
• Torres Arteaga Brian
IMPORTANCIA BIOQUIMICA
La información genética en el DNA de un cromosoma puede ser transmitida por replicación exacta o puede ser
intercambiada por una serie de procesos.

Las mutaciones se deben a un cambio en la secuencia de bases del DNA y pueden ser resultados tanto de la
replicación defectuosa, como de la transposición o la reparación del DNA. Las mutaciones se producen
aproximadamente en una de cada 106 divisiones celulares.
LA CROMATINA ES EL MATERIAL CROMOSÓMICO EN LOS
NÚCLEOS CELULARES DE LOS ORGANISMOS EUCARIOTAS
La cromatina consiste en moléculas de DNA de hebras dobles muy largas, de masa casi igual a la de pequeñas proteínas
básicas denominadas histonas.

La hélice de dsDNA en cada cromosoma tiene una longitud que es miles de veces el diámetro del núcleo de la célula. Un
objetivo de las moléculas que componen la cromatina es condensar el DNA y es importante tener en cuenta que las histonas
también participan en la regulación de genes.

Los nucleosomas tienen aproximadamente 10 nm de diámetro y están conectadas por filamentos de DNA.
Las histonas son las proteínas más abundantes en la cromatina
Las histonas son una pequeña familia de proteínas básicas relacionadas.

Los nucleosomas contienen cuatro tipos principales de histonas: H2A, H2B, H3 y H4. La secuencia y estructuras de las
cuatro histonas, H2A, H2B, H3 y H4, las llamadas histonas nucleares que forman el nucleosoma, han sido conservadas
entre las especies, aunque cada una de las variantes de las histonas existen y se usan con fines especializados.
El nucleosoma contiene histona y DNA
En el nucleosoma, el DNA está superenrollado en una hélice siniestra sobre la superficie del octámero de histona en forma de
disco. La mayoría de las proteínas de histona del núcleo interactúan con el DNA en el interior de la superhélice sin sobresalir.

En la cromatina, las partículas del núcleo están separadas por una región de DNA de aproximadamente 30 pb llamada
"enlazador". La mayoría del DNA da a la cromatina una apariencia repetitiva de "collar de cuentas" cuando es examinada por
microscopía electrónica.

In vivo, el grupo de nucleosomas está mediado por uno de los varios factores de ensamblaje de la cromatina nuclear que son
facilitados por chaperonas de histona, un grupo de proteínas que exhiben una alta afinidad para unir histonas.
ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR MANTIENEN
COMPACTADA LA CROMATINA
La microscopía electrónica de la cromatina revela dos órdenes superiores de estructura: la fibrilla de 10 nm y la fibra de
cromatina de 30 nm, más allá de la del propio nucleosoma.

Los nucleosomas pueden formar una variedad de estructuras empaquetadas. Para formar un cromosoma mitótico, la fibra
de 30 nm debe compactarse otras cien veces más. En los cromosomas en interfase, las fibras de cromatina parecen
organizarse en asas o dominios de 30 000 a 100 000 bp anclados en un andamiaje, o matriz de apoyo dentro del núcleo, la
llamada matriz nuclear.
ALGUNAS REGIONES DE LA CROMATINA SON "ACTIVAS" Y
OTRAS, "INACTIVAS"
El DNA en la cromatina activa tiene grandes regiones que son más sensibles a la digestión por una nucleasa tal como
DNasa I. Debido a su baja especificidad de secuencia, la DNasa I produce cortes de una sola hebra casi en cualquier
segmento de DNA.

En las grandes regiones de cromatina activa existen tramos más cortos, de 100 a 300 nucleótidos, que exhiben una
sensibilidad aún mayor a DNasa I. Estas regiones se localizan inmediatamente corriente arriba del gen activo y son la
ubicación de la estructura nucleosómica interrumpida causada por unión de proteína de factor de transcripción reguladoras
no histona.

La cromatina transcripcionalmente activa se tiñe con menos densidad y se le denomina eucromatina.


Existen dos tipos de heterocromatina: la constitutiva y la facultativa.
● La heterocromatina constitutiva siempre está condensada y es inactiva.
● La heterocromatina facultativa a veces se condensa, pero otras veces se transcribe activamente, no se encuentra
condensada y aparece bajo la forma de eucromatina.

Punto de vista transcripcional, las regiones activas de estos cromosomas de politeno están descondensadas en
"abultamientos" que pueden mostrar que contienen las enzimas responsables de la transcripción y son los sitios de
síntesis de RNA.
El DNA se organiza en cromosomas

En la metafase, los cromosomas de mamíferos poseen


una doble simetría, con las cromátidas hermanas idénticas
duplicadas conectadas en un centrómero, cuya posición
relativa es característica para cada cromosoma dado.
Las regiones codificadoras a menudo están interrumpidas por
secuencias interpuestas

Las regiones codificadoras de proteína del DNA, cuyas transcripciones aparecen en el citoplasma
como moléculas de mRNA únicas, por lo general están interrumpidas en el genoma eucariótico por
grandes secuencias interpuestas de DNA que no codifica para proteína.
TODAVÍA NO ES BIEN COMPRENDIDO EL
FUNCIONAMIENTO EXACTO DEL GENOMA DE MUCHOS
MAMÍFEROS

● El genoma haploide de cada célula humana consta de 3.3 × 109 pb de DNA subdividido en 23
cromosomas.
● Los primeros estudios sobre las tasas de mutación y las complejidades de los genomas de los organismos
superiores sugirieron que los humanos tienen significativamente menos de 100 000 proteínas codificadas
por el ~1% del genoma humano que está compuesto de DNA exónico.
Más de la mitad del DNA de los organismos eucariotas se
encuentra en secuencias únicas o no repetitivas

Se usaron técnicas similares para determinar el


número de genes que codifican proteínas.
● En la levadura de cerveza, se expresan
aproximadamente dos tercios de sus 6 200
genes.
● En tejidos típicos de eucariotas mayores (p.
ej.; del hígado y del riñón de mamíferos), se
expresan activamente entre 10 000 y 15 000
genes
En el DNA humano, al menos 30% del genoma consiste en
secuencias repetitivas

El DNA de secuencia repetitiva se puede clasificar como moderadamente repetitivo o como altamente
repetitivo. Las secuencias altamente repetitivas constan de tramos de 5 a 500 pares de bases repetidas
muchas veces en tándem. Estas secuencias a menudo se agrupan en centrómeros y telómeros del
cromosoma y algunas están presentes en aproximadamente 1 a 10 millones de copias por genoma
haploide. La mayoría de estas secuencias son transcripcionalmente inactivas; sin embargo, algunas
desempeñan un papel estructural en el cromosoma.
Secuencias repetidas de microsatélite

Una categoría de secuencias repetidas existe como


disposiciones en tándem tanto dispersas como agrupadas. Las
secuencias consisten de 2 a 6 pb repetido hasta 50 veces.
Estas secuencias de microsatélites se encuentran más
comúnmente como repeticiones de dinucleótidos de AC en
una hebra y TG en la hebra opuesta; pero existen otras formas,
incluyendo CG, AT y CA.
EL UNO POR CIENTO DE DNA CELULAR SE ENCUENTRA EN
LAS MITOCONDRIAS
La mayoría de los polipéptidos en las mitocondrias
(alrededor de 54 de 67) están codificados por genes
nucleares, mientras que el resto está codificado por los
genes que se encuentran en el DNA mitocondrial (mt)

Por tanto, en enfermedades que son resultado


de mutaciones de mtDNA, en teoría una madre afectada
transmitiría la enfermedad a todos sus hijos; pero sólo
sus hijas transmitirían el rasgo. Sin embargo, en algunos
casos, las deleciones se producen en el mtDNA durante
la ovogénesis y, por tanto, no se heredan de la madre.
EL MATERIAL GENÉTICO PUEDE SER ALTERADO Y
REORDENADO
La recombinación cromosómica es una Una alteración en la secuencia de las
manera de reordenar el material bases de purina y pirimidina en un gen
genético: debido a un cambio –una eliminación o una
La información genética se puede intercambiar inserción– de una o más bases, puede dar
entre cromosomas similares u homólogos. El como resultado un producto génico
intercambio, o evento de recombinación, ocurre alterado o la alteración de la expresión
principalmente durante la meiosis en las células génica si está involucrado DNA que no
de mamíferos y requiere de la alineación de los codifica proteína.
cromosomas metafásicos homólogos,
La integración cromosómica se produce con algunos virus

Algunos virus bacterianos (bacteriófagos) son


capaces de recombinarse con el DNA de un
huésped bacteriano de tal manera que la
información genética del bacteriófago se incorpora
de forma lineal en la información genética del
huésped
La transposición puede producir
genes procesados:
En las células eucariotas, pequeños elementos
de DNA que claramente no son virus son
capaces de transponerse por sí mismos
adentro y afuera del genoma huésped en
formas que afectan la función de las
La conversión de genes produce
secuencias de DNA vecinas. Reordenamientos:
Además del cruce desigual y la transposición, un
Es decir, la región 5' no traducida, la región de tercer mecanismo puede efectuar cambios rápidos en
codificación sin representación de intrón y la el material genético. Secuencias
cola 3' poli (A) están todas presentes similares de cromosomas homólogos o no
de forma contigua. Este particular homólogos pueden aparearse ocasionalmente y
ordenamiento de la secuencia de DNA debe eliminar cualquier secuencia que implique
haber sido resultado de la transcripción inversa algún grado de desacople entre ellos.
de una molécula de ARN mensajero
apropiadamente procesada, de la cual se
habían eliminado las regiones del intrón y a la
cual se había añadido la cola de poli (A)
El intercambio de cromatides hermanas
En organismos eucarióticos diploides como el humano,
después de que las células rebasan la fase S el contenido
del DNA es (se vuelve) tetraploide. Esto se expresa en
forma de cromátidas hermanas de los pares de
cromosomas Cada una de las cromátidas hermanas
contiene idéntica información genética ya que cada una de
estas cromátidas es un producto de la replicación
semiconservativa de la molécula de DNA madre de ese
cromosoma. Puede ocurrir el cruzamiento entre estas
cromátidas hermanas genéticamente idénticas. Por
supuesto, estos intercambios de cromátidas hermanas no
tienen ninguna consecuencia genética siempre que el
intercambio sea el resultado de un cruzamiento igual
SÍNTESIS Y REPLICACIÓN DE DNA

● La función principal de la replicación del


DNA es proveer a la descendencia con la
información genética de los progenitores
● la replicación del DNA debe ser completa y
llevarse a cabo de tal manera que se mantenga
la estabilidad genética dentro del organismo y
la especie
● Proceso complejo e involucra muchas
funciones celulares y varios procedimientos
de verificación que aseguran la fidelidad en la
replicación
El origen de las replicaciones

Hay una asociación de


proteínas de unión a dSDNA
especificas para secuencias, con
una serie de secuencias de DNA
repetidas directas.
Formacion de la horquilla de replicacion
La interacción de proteínas con ori
define el sitio de inicio de la
replicación y proporciona una región
corta de ssDNA esencial para el
inicio de la síntesis de la hebra de
DNA naciente. Este proceso requiere
la formación de varias interacciones
proteína-proteína y proteína-DNA. Un
paso esencial, el desenrollamiento
progresivo del DNA, es posible por la
acción de una helicasa de DNA, y
más específicamente, por un
complejo de dnaB helicasa y proteína
dnaC que es estabilizado por las
proteínas de unión a DNA de una
sola hebra
El complejo dna polimerasa
Varias moléculas de DNA polimerasa diferentes
se encargan de la replicación de DNA.
Compartir 3 propiedades importantes:
A) Elongacion de cadena
ºExplica el índice (en nucleótidos/segundo,
ntd/s) al cual ocurre la polimerización
B. Procesividad
• Expresión del # de ntd añadidos a la cadena
naciente antes de que la polimerasa se separe
del molde
C. Corrección de pruebas :
Identifica errores de copiado y corrige
Iniciacion y elongacion de la sintesis de dna

● Requiere preparación por un


tramo corto de RNA ( 10 a 200 ntd
de largo)
● DNA Pol α sintetiza RNA
iniciadores
● Preparación incluye ataque
nucleofílico
● Entre cada segmento de
fragmentos de Okazaki hay RNA
iniciador, se eliminan y se sellan
los espacios con DNA ligasas
La replicación exhibe polaridad
La enzima única réplica una hebra (“hebra adelantada”) de manera casi continua en dirección de 5´ a 3´ y replica
la otra hebra ("hebra rezagada") de forma discontinua
La formación de las burbujas de replicación
La separación de las hebras de DNA es promovida por una proteína denominada
proteína de replicación A (RPA, replication protein A)
Tiene que haber un desenrollamiento de la molécula (una vez cada 10 pares de
nucleótidos) para permitir la separación de la hebra.
Complejo proteico hexamerico MCM
Hay enzimas que introducen cortes en una hebra de la doble hélice desenrollada para permitir que este
proceso avance.
Luego los cortes se cierran rápidamente sin requerir entrada de energía, debido a que se establece un enlace
covalente fuerte entre el esqueleto del fosfodiéster cortado y la enzima de sellado del corte.
Las enzimas que sellan el corte se llaman DNA-topoisomerasas
La síntesis de DNA se produce
durante
la fase S del ciclo celular La replicación del genoma de DNA ocurre
durante la vida de la célula sólo en un
momento específico. Este periodo se
conoce como fase sintética o S y
generalmente está separado de forma
temporal de la fase mitótica o fase M, por
periodos no sintéticos llamados fases gap 1
(G1) y gap 2 (G2), que ocurren antes y
después de la fase S, respectivamente
CICLINAS
El complejo ciclina-CDK es ahora una proteína cinasa serina-treonina activa. Un sustrato para
esta cinasa es la proteína retinoblastoma . Rb es un regulador del ciclo celular porque se une e
inactiva un factor de transcripción (E2F) necesario para la transcripción de ciertos genes (genes
de histonas, proteínas de replicación del DNA, etc.) necesarios para la progresión de la fase G1
a la fase S.
La fosforilación de Rb por CDK4 o CDK6 da como resultado la liberación de E2F a partir de la
represión de la transcripción mediada por Rb, por tanto, se produce la activación de la
transcripción génica y tiene lugar la progresión del ciclo celular
Una vez que la cromatina ha sido replicada, es marcado para evitar su posterior replicación hasta que pasa
nuevamente a través de la mitosis. Este proceso se denomina licencia de replicación.
En células humanas los mecanismos moleculares para este fenómeno implican la disociación y/o fosforilación de
ciclina-CDK y la posterior degradación de varias proteínas de unión que desempeñan papeles esenciales en la
formación del complejo de replicación
Todos los organismos contienen complejos mecanismos
conservados evolutivamente para reparar DNA dañado
Los mecanismos de reparación del DNA incluyen:
● reparación por escisión de nucleótidos (NER, nucleotide excision repair)
● errores de emparejamiento (MMR, mismatch repair)
● Reparación por escisión de base (BER, base excision repair)
● Recombinación homóloga (HR, homologous recombination)
● vías de reparación de unión final no homóloga (NHEJ, non-homologous end-joining
Uno de los mecanismos de reparación del DNA más intensamente
estudiados es el mecanismo utilizado para reparar las roturas de
doble hebra del DNA (DSBs, double strand breaks)
Hay dos vías, HR y NHEJ, que las células eucariotas utilizan para
eliminar DSB
Durante las fases G0 /G1 del ciclo celular, los DSB son corregidos
por la vía NHEJ, mientras que durante las fases S, G2 y M del
ciclo celular se utiliza HR.
Los resultados incluyen el retraso del ciclo celular para permitir
la reparación del DNA, la detención del ciclo celular, y la
apoptosis o senescencia
La integridad del DNA y de los cromosomas se monitorea de
principio a fin del ciclo celular
Las cuatro etapas específicas en las cuales este monitoreo se desarrolla han sido llamadas etapas de regulaciones
del punto de control. Si se detectan problemas en algunos de estos puntos de control, es interrumpida la
progresión del ciclo celular o el tránsito a través de él hasta que el daño ha sido reparado
El supresor tumoral p53 es un factor de transcripción de unión a DNA, un factor de una familia de proteínas
relacionadas. Tiene la capacidad de estabilizar la transcripción cuando hay algún daño en el DNA.
p53 induce la activación de un grupo de genes que inducen apoptosis.
80% de los cánceres humanos tienen mutaciones por atrofia/pérdida de la funcionalidad de p53

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