NDICE

PGINA

1.-TINCIN SIMPLE.3
1.2.-TINCIN NEGATIVA3
2.-TINCIONES DIFERENCIALES..4
2.1. TINCIN DE GRAM..4
2.2.-TINCIONES DE ZHIEL-NEELSEN.5
2-3. TINCIN CIDO ALCOHOL RESISTENCIA5
3..-TINCIONES ESPECIALES.6
3.1.-TINCIN DE AURAMINA-RODAMINA..6
3.2.- TINCIN DE NARANJO DE ACRIDINA...6
4.-TINCIONES BACTERIANAS...6
4.1.- TINCIN DE ENDOSPORAS (ESPORAS6
4.2.-TINCIN PARA FLAGELOS....7
5.-MEDIOS DE CULTIVOS....8
5.1.-MEDIOS ESPECIALES O ENRIQUECIDOS..8
5.2.-MEDIOS DEFINIDOS..8
5.3.-MEDIOS COMPLEJOS..8
5.4.- MEDIOS SELECTIVOS.9
5.5.- MEDIOS DIFERENCIALES..9
5.6.-MEDIOS SELECTIVOS-DIFERENCIALES.9
5.7.- MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO..9
5.8.- MEDIOS SINTTICOS...9
5.9.-MEDIOS DESHIDRATADOS.10
6.0.- -CULTIVOS EN FILTROS DE MEMBRANA..10
6.1.-MEDIOS DE ENSAYO.10
BIBLIOGRAFA.11

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1..-TINCIN SIMPLE
Esta es una tincin directa que utiliza solo un colorante, el cual debe ser bsico
para que la clula bacteriana se tia. Permite demostrar la morfologa general
de una clula de manera rpida; al emplearse un nico colorante, todas las
clulas se observarn del color del colorante empleado. Los ms empleados
son cristal violeta, azul de metileno y fucsina fenicada, estos colorantes difieren
en la velocidad, toma de 30 a 60 segundos para teir una preparacin
microbiana. El cristal violeta es ms reactivo y usualmente requiere solo 10
segundos. La fucsina fenicada es un colorante an ms rpido, generalmente
requiere solo 5 segundos.
Su reactividad es tan grande que con frecuencia sobretie, especialmente en
preparaciones que contienen grandes cantidades de materia orgnica y
detritos. Un ejemplo de la aplicacin de una tincin simple es la evaluacin de
Helicobacter en biopsias gstricas al utilizar cristal violeta, pues la forma
caracterstica de la bacteria permite identificarla. (Rodrguez et al., 2005, pp.
55)
1.2.- TINCIN NEGATIVA
Es el reverso del procedimiento de tincin usual: las clulas se dejan sin teir
pero se colorea un cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es
el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un
material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que
simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin
de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble
en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste
de las clulas en microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la
presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas.
Esta tcnica se aplica en el laboratorio clnico en la bsqueda de bacterias con
cpsula como Streptococcus pneumoniae, Klebsiella o de hongos como
Cryptococcus neoformans. En este caso la muestra, que puede ser pus,
exudado de un rgano, esputo o lquido celafalorraqudeo, se mezcla con tinta
china, se coloca entre porta y cubre objetos y se analiza al microscopio (400x).
Se buscan micoorganismos suspendido en la tinta china y una vez que se ha
secado se somete a tincin simple. (Rodrguez et al., 2005)

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2.-TINCIONES DIFERENCIALES
2.1. Tincin de Gram
La tincin de este tipo ms extensamente utilizada es la tincin de Gram,
denominada as por el bacterilogo dans Hans Christian Gram en 1884, quien
la desarrollo. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas.
Debido a su importancia en taxonoma bacteriana y a que indica diferencias
fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu
con cierto detalle la tincin de Gram. Las clulas fijadas al calor sobre un
portaobjetos se tien primero con una solucin de cristal violeta (otros
colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el
exceso de colorante. En este estado todas las clulas, tanto las gramnegativas
como las grampositivas, estn teidas de moradas. Algunos organismos
(grampositivos) no se decoloran mientras que otros (gramnegativos) lo hacen.
La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est, por lo tanto, en la
resistencia a la decoloracin. Despus de la decoloracin las clulas
grampositivas son todava moradas, pero las gramnegativas son incoloras.
Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de
contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la
fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas
gramnegativas son rojas mientras que las grampositivas permanecen azules.
Finalmente, el carcter de grampositivo no es siempre un fenmeno del todo o
nada. Algunos organismos son ms grampositivos que otros y algunos son
gramvariables, es decir, unas veces grampositivos y otras gramnegativos. La
tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el
laboratorio bacteriolgico. (Rodrguez et al., 2005, pp. 63)
Existen variaciones de esta tcnica, pero en trminos generales, la tincin de
Gram involucra varios pasos:
1. Tincin inicial. Las clulas se tien con cristal violeta, el cual es el
colorante primario. En este paso las clulas se tien de morado.
2. Mordente. Se adiciona yoduro (lugol) que reacciona con el cristal violeta
y forma un complejo cristal violeta-yoduro. En este punto todas las
clulas continan de color morado.
3. Decoloracin. Se adiciona un solvente no polar, el cual acta lavando el
complejo cristal violeta-yoduro de las clulas Gram negativas. De esta
manera las bacterias Gram positiva continan moradas y las Gram
negativas quedan incoloras. Este es el paso critico de esta estacin,
pues si se exagera, decolora la Gram positivas y si se hace muy dbil no
decolora a las Gram negativas.
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4. Contratincin. Se vuelve a teir con safranina o fucsina, de manera que

las bacterias Gram negativas, que haban sido decoloradas, se tien de
rosado a fucsia segn el colorante empleado; en tanto, las bacterias
Gram positivas no se afectan con la contratincin y permanecen
moradas debido a lo intenso de esta coloracin. (Rodrguez et al., 2005,
pp. 63)
2.2.-TINCIONES DE ZHIEL-NEELSEN
Existen determinados grupos bacterianos que contienen en su pared una gran
cantidad de componentes lipoideos y creos, de tal forma que este tipo de
bacterias presentarn grandes dificultades a la hora de teirse con los
colorantes convencionales que no pueden penetrar en el interior de estas
bacterias. De ah que se necesiten, para este tipo de tinciones, colorantes
altamente concentrados as como la presencia de calor que facilite su
penetracin al interior de dichas bacterias han quedado teidas, su
decoloracin posterior no es posible, resistiendo incluso a decoloraciones
cidas. As pues, utilizando esta propiedad, podemos diferenciar este tipo de
bacterias, como es el caso del Gnero Mycobacterium, del resto que no
presentan esta propiedad.
Dicha tencin se emplea principalmente para el diagnstico y estudio de
enfermedades producidas por bacterias cido resistentes, como son la
tuberculosis y la lepra. (Rodrguez et al., 2005, pp. 68)
2-3. TINCIN CIDO ALCOHOL RESISTENCIA
Esta tincin sirve principalmente para clasificar micobacterias y actinomicetos,
que tienen un alto contenido en lpidos y en cidos miclicos y que no pueden
ser calificadas por la tincin de Gram. Para empezar se hecha sobre el
portaobjetos una mezcla de fucsina fenol, en la que la fucsina hace de
colorante rosa y el fenol de mordiente. Las clulas se tien de rosa, tanto las
cido alcohol sensibles como las resistentes. Despus se usa un decolorante
orgnico que hace que las bacterias cido alcohol sensibles se decoloren
mientras que las cido alcohol resistentes se quedan rosa. Como en la tincin
de Gram se utiliza un colorante de contraste que en este caso es el azul de
metileno que tie las clulas cido alcohol sensibles de color azul quedando
las clulas cido alcohol resistentes de color rosa. (Rodrguez et al., 2005,
pp. 68)

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3..-TINCIONES ESPECIALES
3.1.-TINCIN DE AURAMINA-RODAMINA
Se utiliza sobre todo para teir microbacterias y especialmente en aquellos
laboratorios donde se procese un gran nmero de muestras ya que su
utilizacin es ms rpida y cmoda que la de Ziehl-Neelsen.
Consiste en la fijacin selectiva de la auramina sobre los cidos miclicos
caractersticos de la pared bacteriana de los microorganismos del Gnero
Mycobacterium. La auromina es un colorante fluorescente de tal forma que al
incidir luz ultravioleta (UV) sobre la muestra, dicha sustancia emitir luz visible
caracterstica (fluorescencia). Adems se utilizar un colorante de contraste no
fluorescente (permangonato de potsio) que crear un campo oscuro y por lo
tanto de contraste sobre la auramina. (Granados y Villaverde, 2003, pp. 244245).
3.2.- TINCIN DE NARANJO DE ACRIDINA.
Esta tcnica es especialmente til cuando en la muestra existen pocos
microorganismos, por ejemplo LCR, hemocultivo, etc., o cuando otros
elementos como restos celulares interfieren la visualizacin.
Consiste bsicamente en la unin selectiva del naranja de acridina
(fluorocromo) al ADN bacteriano tomando una coloracin naranja brillante.
(Granados y Villaverde, 2003, pp. 245).

4.-TINCIONES BACTERIANAS
4.1.- Tincin de endosporas (esporas)
Las esporas no es un mecanismo de multiplicacin en bacterias, pues
usualmente por cada clula se produce solo una endospora. En algunos casos
excepcionales se puede producir ms de una espora. Las endosporas son
formas de resistencia, altamente deshidratadas y con una serie de cubiertas
muy poco permeables, esto hace que sean difciles de teir, excepto si se
calienta la preparacin para permeabilizarlas; sin embargo, pueden
evidenciarse en preparaciones a fresco o con diversas tinciones, pues la
esporas apararecen como estructuras refringentes no coloreadas. Las esporas
son producidas por Bacillus, Clostridium, Sporosarcina, Sporolactobacillus y
Desulfotomaculum, gneros de bacterias Gram positivas; aunque
recientemente han sido descritas en algunas bacterias Gram negativas. Las
endosporas son ms resistentes a condiciones adversas, entre ellas calor,
radiaciones, desinfectantes y otras, que las clulas vegetativas y las exosporas.
Se producen en condiciones nutricionales que favorecen el proceso de
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esporulacin. La endospora ocupa una posicin caractersticas dentro de la

clula, puede ser terminal, subterminal o central. Las endosporas bacterianas
son muy resistentes a los procedimientos tintoriales usuales. Finalmente se usa
la safranina para obtener bacterias de color rosa mientras que las endosporas
continan con su color verde de verde malaquita. (Rodrguez et al., 2005)
4.2.-Tincin para flagelos
Los flagelos bacterianos son estructuras de locomocin y en algunos casos
tambin para adhesin, como ocurre en Campylobacter. Tiene su origen en un
corpsculo asociado a una serie de anillos (dos en bacterias Gram positivas y
cuatro en Gram negativas) localizados a nivel de membrana citoplasmtica y
pared, que en conjunto constituye un motor protnico que hace girar al
flagelo.
Los flagelos son demasiado pequeos para ser vistas con un microscopio
ptico sin tincin. Hay un procedimiento tedioso y delicado que se basa en el
empleo de un mordiente y el colorante carbolfucsina para aumentar los
dimetros de los flagelos hasta que se tornen visibles con el microscopio
ptico. Como ayudas diagnsticas adicionales los microbilogos utilizan la
cantidad y la disposicin de los flagelos. (Rodrguez et al., 2005)

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5.-MEDIOS DE CULTIVOS
Las distintas mezclas de sustancias nutritivas empleadas en el laboratorio para
cultivo de microbios se denominan genricamente medios de cultivo. El medio
de cultivo sirve de terreno sobre el que se siembra con fines de estudio.
Las bacterias, los hongos, los microbios tipo pleuroneumona y muchos
protozoarios pueden desarrollarse en medios de cultivo inertes, como el caldo
de carne (infusin). (Ingraham y Prentiss, 1998)
5.1.-Medios especiales o enriquecidos.
Ejemplos de medios especiales o enriquecidos son los que se hacen con suero
sanguneo coagulado (como el medio de suero de Loeffer para bacilos
diftricos), o mezclas coaguladas de glicerina y huevo (medio de LowensteinJensen para bacilos de tuberculosis), o carne cocida o sustancia cerebral
(caldo de cerebro glucosado) y los que se preparan enriqueciendo caldo o agar
simples con la adicin de carbohidratos, sangre, suero sanguneo, casena
digerida, extracto de levadura u otras sustancias nutritivas especiales. Las
bacterias anaerobias se cultivan casi siempre en un medio lquido o semislido
que contiene tioglicolato de sodio, sustancia qumica con marcada afinidad.
(Burdon y Williams, 1982, pp. 84)
5.2.-Medios definidos.
Un medio definido es aquel del cual conocemos su composicin qumica
exacta, porque ha sido preparado a partir de compuestos qumicos puros.
Escherichia Coli es capaz de crecer en un medio qumicamente definido, de
composicin bastante sencilla. Este microorganismo requiere una fuente de
carbono orgnica (por ejemplo glucosa), pero puede obtener el resto de los
nutrientes esenciales a partir de sales minerales. Los medios definidos se usan
generalmente para realizar estudios genticos, pero sus inconvenientes a
menudo sobrepasan sus ventajas. As, se requiere un tiempo considerable para
preparar un medio definido y las bacterias crecen ms despacio en ellos.
(Ingraham y Prentiss, 1998, pp.68).
5.3.-Medios complejos.
Se desconoce la composicin qumica exacta de un medio complejo. Estos
medios se preparan a partir de extractos de productos naturales tales como
carne, sangre, casena (la protena de la leche), levaduras o soja. Un medio de
complejo se denomina caldo. Uno de estos medios es el caldo nutritivo,
probablemente el medio complejo que ms se utiliza. (Ingraham y Prentiss,
1998, pp.70).

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5.4.- Medios selectivos.

Un medio selectivo favorece el crecimiento de ciertos microorganismos,
mientras suprime el crecimiento de otros. Los medios selectivos se utilizan para
aislar especies particulares a partir de una mezcla compleja: Por ejemplo, se
utiliza un medio selectivo para aislar Salmonella typhi, casual de la fiebre
tifoidea, a partir de heces donde existen cientos de microorganismos diferente.
Algunos medios son selectivos porque contienen un producto quimico, como la
azida sdica, el telurio potsico o el cristal violeta. (Ingraham y Prentiss, 1998,
pp. 69).
5.5.- Medios diferenciales.
Se utiliza un medio diferencial para identificar las colonias de un determinado
microorganismo. Por ejemplo, para identificar Streptococcus pyogenes, la
bacteria que causa la escarlatina, se utiliza el medio de agar de sangre, que es
un agar que contiene hemates. Las colonias de esta bacteria muestran a su
alrededor una zona tranparente debido a que producen hemolisis (muerte y lisis
de los hematies). (Ingraham y Prentiss, 1998, pp.69)
5.6.-Medios selectivos-diferenciales.
Algunos medios son selectivos y diferenciales al mismo tiempo. El agar
MacConkey es un ejemplo de medios selectivo-diferencial, utilizando, utilizado
para detectar cepas de Salmonella y Shigella, bacterias entricas (del intestino)
que causa disenteras. (Ingraham y Prentiss, 1998, pp.70)
5.7.- Medios de enriquecimiento
Un medio de enriquecimiento se utiliza para aislar un tipo particular de
microorganismo a partir de una poblacin mixta de gran tamao. Por ejemplo
las bacterias formadoras de endosporas pueden aislarse hirviendo una muestra
de suelo y cultivando los supervivientes. Solamente las endosporas resistirn
tratamiento y podrn crecer. (Ingraham y Prentiss, 1998, pp.70).
5.8.- Medios sintticos.
Para hacer estudios precisos de nutricin y metabolismo microbianos se
utilizan soluciones nutritivas, repetibles, a partir de una mezcla de sustancias
qumicas de composicin conocida, planeada cuidadosamente. Otro empleo
importante de los medios sintticos est en la preparacin de ciertos productos
biolgicos, especialmente toxina diftrica y tuberculina. (Burdon y Williams,
1982, pp.86)

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5.9.-Medios deshidratados.
La mayora de los tipos de medios comnmente utilizados se encuentran en el
comercio en forma de polvos secos. Estos productos deshidratados se
transforman fcilmente en medios de cultivo por adicin al agua y esterilizacin.
Es probable que los lotes de medios preparados por los diferentes laboratorios
en fechas diferentes sean unidos, por lo menos se economiza tiempo y
esfuerzo si se utilizan productos deshidratados. (Burdon y Williams, 1982,
pp.86).
6.0.- -Cultivos en filtros de membrana.
En los ltimos aos, los microbilogos han encontrado muchas aplicaciones en
los filtros de membrana de venta en el comercio. La membrana filtrante es un
disco muy delgado de acetato de celulosa, o colodin, con poros de 0.5 micro.
Ejemplos de sustancias que se pueden someter a la filtracin de membrana
son: el agua potable, los cultivos de caldo diluido, las muestras de sangre, las
heces diluidas y los esputos predigeridos.
Cuando el lquido se extrae, por aspiracin a travs del filtro, las partculas
microscpicas, como bacterias u hongos, son retenidas por la accin
tamizadora de la membrana y depositadas en superficie. Podemos estimular el
crecimiento de estos grmenes, llevando aspticamente la membrana a una
caja del Petri, colocndola encima de papel de filtro saturado del caldo estril.
(Burdon y Williams, 1982, pp.86)

6.1.-Medios de ensayo.
Con el fin de identificar y clasificar los microorganismos se utiliza gran variedad
de medios de cultivo, o productos especficos ideados para ensayar los
microorganismos segn sus actividades metablicas particulares. Por ejemplo
agar Salmonella-Shigella (S.S) y el agar verde brillante son ejemplos de medios
que, a la vez, son diferenciales y agar frrico con azcar triple en tubo
inclinado, para identificar grmenes patgenos entricos Gramnegativos.
(Burdon y Williams, 1982, pp.85)

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BIBLIOGRAFA
Rodrguez, E; Gamboa, M; Hernndez, F; Garca, J. (2005). Bacteriologa
general: Principios y Prcticas de Laboratorio. Editorial Universidad de Costa
Rica.
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Cristine L. Case. (2007). Introduccin a la
Microbiologa. 9 Edicin. Buenos Aires, Argentina. Editorial Panamericana.
Granados, R; Villaverde, M. (2003). Microbiologa: Bacteriologa,
Caractersticas y clasificacin bacteriana. Caractersticas y tcnicas
bioqumicas. 1 Edicin. Madrid, Espaa. Editorial Paraninfo.
Burdon, K; Williams, R. (1982). Microbiologa. 6ta reimpresin, Mxico, D.F.
Editorial publicaciones cultural, S.A.
Ingraham, J; Ingraham, C; Prentiss, H. (1998). Introduccin a la Microbiologa.
Editorial Reverte, S.A. Barcelona, Espaa.

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