UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA

PRACTICA N°3
TINCION GRAM
RESUMEN
1. OBJETIVOS
1.1. Conocer técnicas de reconocimiento de bacterias.
1.2. Reconocer las bacterias gram positivas y gram negativas.
2. TEORIA
2.1. Bacterias Gram positivas
2.2. Bacterias Gram negativas
2.3. Tinción de Gram
2.4. Tinción simple y compuesta

3. PARTE EXPERIMENTAL
3.1. Materiales y Equipos

TINCION GRAM
3.1.1. Asa de Siembra
3.1.2. Microscopio
3.1.3. Portaobjetos
3.1.4. cubreobjetos
3.1.5. Gotero
3.1.6. Piceta

3.2. Sustancias y reactivos

3.2.1. Agua Destilada

3.2.2. Muestra Bacteriana
3.2.3. Violeta de metilo
3.2.4. Safranina
3.2.5. Lugol
3.3. Procedimiento
3.3.1. Microscopia
3.3.1.1. Comprobar que los lentes estén limpios.
3.3.1.2. Enfoque siempre primero con el objetivo de menor aumento luego 4x, 10x,
40x.
3.3.1.3. Enfoque
3.3.1.3.1. Acerque al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando para
ello el macrométrico.
3.3.1.3.2. Enfoque con el micrométrico observando por el ocular hasta obtener un
enfoque nítido.
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3.3.2. Tinción Gram

PARTE A: FIJACIÓN
3.3.2.1. Lavar meticulosamente con agua y jabón un portaobjetos. Aplicar
alcohol y secar
3.3.2.2. Esterilizar el asa bacteriana en la llama de un mechero hasta que la
punta se torne incandescente
3.3.2.3. En la mitad del portaobjetos, colocar una pequeña gota de agua
destilada. Con el asa fría transferir una pequeña cantidad de muestra
al portaobjetos y mezclar con el agua, extenderla bien de manera que
se forma una película delgada sobre la superficie disponible
Nota: Cuando se toma la muestra a partir de un cultivo líquido no es
necesario poner la gota de agua en el portaobjetos
3.3.2.4. Secar la preparación al mechero con movimientos horizontales leves
3.3.2.5. Proceder a la tinción

PARTE B: TINCIÓN
3.3.2.6. Agregar a la muestra bacteriana una gota de violeta de metilo
(colorante) durante 30 segundos.
3.3.2.7. Enjuagar con agua destilada.
3.3.2.8. Agregar una gota de lugol (mordiente) por 30 segundos.
3.3.2.9. Decolorar con Alcohol etílico (decolorante)
3.3.2.10. Enjuagar con agua destilada
3.3.2.11. Agregar una gota de Safranina (colorante de contraste)
3.3.2.12. Secar suavemente.
3.3.2.13. Colocar una gota de acite de inmersión.
3.3.2.14. Llevar la muestra para enfocar en el microscopio.

4. OBSERVACIONES
Tabla 4.1-1
Datos de tinción gram

Procedimiento Observación

5. DISCUSION
6. CONCLUSIONES(mínimo 3)
7. ANEXOS
7.1. Reporte de bacterias observadas en tinción Gram
8. CUESTIONARIO
8.1. ¿Qué sustancias usamos en tinción Gram?
8.2. ¿Por qué las bacterias gram negativas no se tiñen de color morado?
8.3. ¿Qué tipos de bacteria según su morfología hay?
8.4. Cuál es la diferencia de tinción simple y tinción compuesta
8.5. ¿Cuál es el propósito de fijación?
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