Universidad abierta y a distancia de México

Carrera: Biotecnología
Asignatura: Biología molecular II
Unidad: Unidad 1: Biología molecular de ácidos nucleicos
Título del trabajo: Evidencia de aprendizaje: Análisis de ácidos nucleicos
Nombre del asesor académico: Francisco Cuellar Pérez
Nombre del alumno: Rodolfo Samuel Quintanilla Castillo
Matricula:  ES1911000430
Fecha de entrega: 10/02/2023
Captura de pantalla de mi resultado en la simulación.
Explica:
¿En qué consiste la técnica de secuenciación de ácidos nucleicos tipo Sanger?
Fue el primer método de secuenciación y fue propuesto por el bioquímico británico
Frederik Sanger en 1975, esta técnica consiste en hacer muchas copias de una región
blanco de DNA, además esta técnica está basada en dos métodos, la PCR y
electroforesis. Como hemos visto anteriormente en la PCR se explota la capacidad de
la polimerasa para enlazar los nucleótidos por medio de un enlace fosfodiéster entre el
grupo OH del extremo 3’ de la desoxirribosa de un nucleótido y el grupo fosfato del
carbono 5’ del nucleótido siguiente. En el método de Sanger se emplean nucleótidos
modificados, un nucleótido dideoxi, que tiene los mismos componentes de un
nucleótido normal, pero cuenta con una modificación en el sustituyente del carbono 3’
de la desoxirribosa y solo cuenta con un hidrógeno, esto impide que se forme el enlace
fosfodiéster con el siguiente nucleótido, deteniendo la PCR.
Para secuenciar un gen con este método se prepara un PCR normal en cuatro tubos
Eppendorf, en cada uno se adiciona un segmento de DNA a secuenciar, cebadores,
polimerasa, ATP, nucleótidos normales y uno modificado (Adenina dideoxi en el tubo
uno, timina dideoxi en el dos, citocina dideoxi en el tres y guanina dideoxi en el cuatro).
Como podemos ver esta técnica de secuenciación consiste en llevar a cabo la reacción
de polimerización como en el caso de la PCR, pero en el punto donde se adicione uno
de los nucleótidos modificados la reacción se detendrá.
¿Qué es un nucleótido didesoxi? ¿En qué son diferente o un nucleótido desoxi?
Agrega un esquema a tu explicación.
Un nucleótido didesoxi (ddNTP) son nucleótidos que carecen de un grupo 3’-hidroxilo (-
OH) en la desoxirribosa, la falta de este grupo hidroxilo implica la imposibilidad de
formar un enlace fosfodiéster con otros nucleótidos. En esto son diferentes a un
nucleótido desoxi ya que este cuenta con el grupo hidroxilo 3’ y este actúa como un
gancho para permitir que un nuevo nucleótido se añada a una cadena existente.

Por ello los nucleótidos didesoxi son útiles en procesos de secuenciación del DNA,
como en el método de Sanger ya que se puede detener el enlace fosfodiéster y con ello
detener por completo la secuenciación.
¿Por qué es necesario utilizar nucleótidos didesoxi para la secuenciación de ADN
tipo Sanger?
Porque estos nucleótidos no cuentan con el grupo hidroxilo en el carbono 3’, lo cual
hace imposible que se pueda formar un enlace fosfodiéster con otros nucleótidos, como
hemos visto la secuenciación de ADN tipo Sanger lleva a cabo la reacción de
polimerización como en el caso de la PCR, pero busca añadir alguno de los nucleótidos
modificados para que la reacción se detenga.

¿Con qué componente indispensable para la secuenciación están asociados los

nucleótidos didesoxi?
Una modificación en el grupo unido al carbón 3’ de la ribosa.
¿En qué consiste la electroforesis capilar, utilizada en la técnica de
secuenciación de ADN tipo Sanger?
La electroforesis capilar es una herramienta de separación de biomoléculas, presenta
la versatilidad de poder separar aminoácidos, ácidos orgánicos, iones inorgánicos,
carbohidratos, esteroides, tioles, contaminantes alimenticios, material genético y
algunos fármacos utilizados en las diferentes ramas del área de salud.
La secuenciación por el método de Sanger emplea la electroforesis capilar, este
proceso implica una previa fragmentación del ADN a secuenciar, seguido de la
amplificación de estos fragmentos mediante la reacción en cadena de la polimerasa
(PCR). A continuación, se adopta el método Sanger: cada fragmento acabado en
didesoxinucleótido está marcado fluorescentemente, de manera que cada
didesoxinucleótido (ddATP, ddCTP, ddGTP, ddTTP) implica un color de fluoróforo
diferente. De este modo, se produce una "escalera" de ADN de fragmentos que difieren
en una base de longitud.
Posteriormente, cada fragmento marcado se separará por tamaño por electroforesis
capilar, con detección automatizada de los fragmentos de ADN marcados
fluorescentemente, proporcionando la secuencia ordenada de los fragmentos en
cromatogramas.
Fuentes de referencia.
Biología molecular II. (s. f.). UNADM. Recuperado 1 de febrero de 2023, de
https://dmd.unadmexico.mx/contenidos/DCSBA/BLOQUE1/BI/06/BBM2/unidad_01/
descargables/BBM2_U1_Contenido.pdf
Universitat Politècnica de València - UPV. (2015, 23 febrero). Electroforesis en gel de
agarosa |  | UPV. YouTube. https://www.youtube.com/watch?v=U1g2qt3juZw
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Garrigues, F. (2023, 23 enero). Secuenciación de Sanger. Genotipia.
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SciELO - Scientific Electronic Library Online. (s. f.). https://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext
Colaboradores de Wikipedia. (2022, 15 diciembre). Método de Sanger. Wikipedia, la
enciclopedia libre. https://es.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9todo_de_Sanger