Paula Movilla - 202012800

Laura Sanabria – 201923142

Paula Suárez -202022200
José Gómez - 201812408
QUIZ BONO
Elija la respuesta correcta y justifique brevemente cada respuesta.

Usted quiere clonar los siguientes tres genes (responda para cada uno de los tres) en el
siguiente plásmido para expresión de la proteína:

KanR Xho l
f1 Not l
ri O Hind lll
O T7 terminator
Sal l
22

ri
Sac l
R3

Blp l His tag EcoR l

pB

BamH l
T7 tag

M
Nde l

CS
Thrombin Nhe l
pET-28a(+) His tag
RBS Nco l
5.4 kb lac O Xba l
T7 promoter
Bgl ll

l
c
La

Basados en la secuencia y en las enzimas de restricción que se mencionan para cada gen,
determine el resultado en las opciones siguientes:

1. Gen 1
GCTAGATCTATGACAAATAACCCTCTGATTCCACAAAGCAAACTTCCACAACTTGGCACCACTATTTTCACCCAG
ATGAGCGCGCTGGCGCAGCAACACCAGGCGATTAACCTGTCGCAAGGCTTTCCTGATTTTGATGGTCCGCGCTA
TTTACAGGAGCGGCTGGCGCACCACGTTGCACAGGGGGCAAACCAATACGCGCCCATGACCGGCGTGCAGGCCTT
GCGCGAGGCGATTGCTCAGAAAACGGAACGTTTGTATGGCTATCAACCAGATGCCGATAGCGATATCACCGTAAC
GGCAGGGGCGACGGAAGCGTTATACGCGGCGATTACCGCACTGGTGCGCAATGGCGATGAAGTGATTTGTTTTGA
TCCCAGCTATGACAGTTACGCCCCCGCCATCGCGCTTTCTGGGGGAATAGTGAAGCGTATGGCACTGCAACCACC
GCATTTTCGCGTTGACTGGCAGGAATTTGCCGCATTATTAAGCGAGCGCACCAGACTGGTGATCCTCAACACTCC
GCATAACCCCAGTGCAACTGTCTGGCAGCAGGCTGATTTCGCCGCTTTGTGGCAGGCGATCGCCGGGCACGAGAT
TTTTGTCATTAGCGATGAAGTCTACGAGCACATCAACTTTTCACAACAGGGCCATGCCAGTGTGCTGGCGCATCC
GCAGCTGCGTGAGCGGGCAGTGGCGGTTTCTTCATTTGGCAAGACCTATCATATGACCGGCTGGAAAGTGGGTTA
TTGTGTTGCGCCAGCGCCCATCAGCGCCGAAATTCGCAAGGTACATCAGTATCTGACCTTTTCGGTGAATACCCC
GGCACAGCTGGCGCTTGCTGATATGCTACGTGCAGAACCTGAGCATTATCTTGCGTTACCGGACTTTTATCGCCA
GAAGCGCGATATTCTGGTGAATGCTTTAAATGAAAGCCGGCTGGAGATTTTACCGTGTGAAGGTACATACTTTTT
GCTGGTGGATTACAGCGCGGTTTCTACCCTGGATGATGTTGAGTTTTGCCAGTGGCTGACGCAGGAGCACGGCGT
AGCGGCGATTCCGCTGTCGGTGTTTTGCGCCGATCCCTTCCCACATAAACTGATTCGTCTCTGTTTTGCCAAGAA
GGAATCGACGTTGCTGGCAGCAGCTGAACGCCTGCGCCAGCTTTAGGAATTCGCGT

Usted emplea las enzimas de restricción: BglII y EcoRI para clonar el siguiente gen de interés
en el plásmido pET28a. ¿Qué resultado obtendría?
a. Se clonaría el gen y este se expresaría
b. No se llevaría a cabo el proceso de clonación
c. Se clonaría el gen, pero este no expresaría
d. No se clonaría la secuencia funcional

Se clonaría el gen, pero no se expresaría ya que una de las enzimas se encuentra en el MCS,
por lo que está entre el t7 promoter y t7 terminator, en cambio, BglII está por fuera de los t7.
El sistema promotor/ ARN polimerasa t7 describe la expresión de genes colocándolos bajo el
control de la ARN polimerasa del bacteriófago T7. Por lo se la clonación sucedería más no la
expresión de genes.

2. Gen 2
GCTGGATTC
ATGACAAATAACCCTCTGATTCCACAAAGCAAACTTCCACAACTTGGCACCACTATTTTCACCCAG
ATGAGCGCGCTGGCGCAGCAACACCAGGCGATTAACCTGTCGCAAGGCTTTCCTGATTTTGATGGTCCGCGCTA
TTTACAGGAGCGGCTGGCGCACCACGTTGCACAGGGGGCAAACCAATACGCGCCCATGACCGGCGTGCAGGCCTT
GCGCGAGGCGATTGCTCAGAAAACGGAACGTTTGTATGGCTATCAACCAGATGCCGATAGCGATATCACCGTAAC
GGCAGGGGCGACGGAAGCGTTATACGCGGCGATTACCGCACTGGTGCGCAATGGCGATGAAGTGATTTGTTTTGA
TCCCAGCTATGACAGTTACGCCCCCGCCATCGCGCTTTCTGGGGGAATAGTGAAGCGTATGGCACTGCAACCACC
GCATTTTCGCGTTGACTGGCAGGAATTTGCCGCATTATTAAGCGAGCGCACCAGACTGGTGATCCTCAACACTCC
GCATAACCCCAGTGCAACTGTCTGGCAGCAGGCTGATTTCGCCGCTTTGTGGCAGGCGATCGCCGGGCACGAGAT
TTTTGTCATTAGCGATGAAGTCTACGAGCACATCAACTTTTCACAACAGGGCCATGCCAGTGTGCTGGCGCATCC
GCAGCTGCGTGAGCGGGCAGTGGCGGTTTCTTCATTTGGCAAGACCTATCATATGACCGGCTGGAAAGTGGGTTA
TTGTGTTGCGCCAGCGCCCATCAGCGCCGAAATTCGCAAGGTACATCAGTATCTGACCTTTTCGGTGAATACCCC
GGCACAGCTGGCGCTTGCTGATATGCTACGTGCAGAACCTGAGCATTATCTTGCGTTACCGGACTTTTATCGCCA
GAAGCGCGATATTCTGGTGAATGCTTTAAATGAAAGCCGGCTGGAGATTTTACCGTGTGAAGGTACATACTTTTT
GCTGGTGGATTACAGCGCGGTTTCTACCCTGGATGATGTTGAGTTTTGCCAGTGGCTGACGCAGGAGCACGGCGT
AGCGGCGATTCCGCTGTCGGTGTTTTGCGCCGATCCCTTCCCACATAAACTGATTCGTCTCTGTTTTGCCAAGAA
GGAATCGACGTTGCTGGCAGCAGCTGAACGCCTGCGCCAGCTTTAG
CTCGAGGCGT

Usted emplea las enzimas de restricción: BamHI y XhoI para clonar el siguiente gen de interés
en el plásmido pET28a. ¿Qué resultado obtendría?
4. Se clonaría el gen y este se expresaría
 5. No se llevaría a cabo el proceso de clonación
6. Se clonaría el gen, pero este no expresaría
7. No se clonaría la secuencia funcional

Los cortes realizados por las enzimas seleccionadas generan el corte permitiendo que se lleve
a cabo la ligación del gen de interés. Además, estas se encuentran dentro del T7, por lo que
tanto, tanto el promotor como el terminador se expresan correctamente dentro del gen. De este
modo, se lleva a cabo la ligación en sentido correcto y una lectura correcta.

3. Gen 3
GCTAGATCTATGTCTCAGCCAATTACGCGTGAAAACTTTGATGAATGGATGATACCTGTTTACGCTCCGGCACCG
TTTATACCGGTACGTGGCGAAGGTTCGCGCTTGTGGGATCAGCAGGGGAAAGAGTATATCGACTTCGCGGGTGGC
ATTGCGGTGAACGCGCTGGGCCATGCGCATCCGGAACTGCGTGAGGCGCTGAACGAACAGGCGAGTAAGTTCTGG
CATACCGGCAACGGTTACACCAACGAGTCGGTACTGCGACTGGCGAAAAAATTGATCGACGCCACGTTTGCCGAT
CGCGTTTTCTTTTGTAACTCCGGTGCGGAAGCCAACGAAGCGGCGCTAAAACTGGCGCGTAAATTCGCTCACGAC
CGCTACGGCAGCCATAAGAGCGGTATCGTGGCGTTTAAAAATGCGTTTCATGGTCGCACGCTGTTTACTGTTAGT
GCGGGTGGGCAGCCAGCCTATTCACAGGATTTTGCGCCACTGCCACCAGATATCCGTCATGCTGCATATAACGAT
ATTAACTCTGCCAGCGCGCTGATTGACGACTCTACCTGTGCGGTGATTGTCGAACCCATCCAGGGTGAAGGCGGT
GTGGTGCCAGCCAGCAACGCATTTTTACAAGGTCTGCGTGAATTGTGTGATCGCCACAATGCGCTGTTGATTTTT
GATGAAGTACAAACCGGCGTCGGGCGTACCGGGGAACTGTATGCCTATATGCACTACGGCGTGACGCCTGATCTG
TTAACTACCGCCAAAGCTCTGGGCGGCGGTTTCCCGGTCGGTGCGTTGTTAGCAACCGAAGAGTGCGCCAGCGTG
ATGACCGTTGGCACTCATGGCACCACCTATGGCGGCAATCCGCTGGCCTCGGCGGTGGCAGGCAAAGTGCTGGAG
CTCATCAATACGCCAGAGATGCTTAACGGGGTTAAGCAACGTCACGACTGGTTTGTTGAGCGTCTTAATATTATT
AATCACCGCTATGGTTTGTTCAATGAAGTTCGCGGCTTAGGTTTGCTGATTGGCTGTGTACTGAATGCCGATTAC
GCCGGGCAAGCGAAACAGATCTCTCAGGAAGCGGCGAAAGCAGGCGTGATGGTACTGATTGCGGGTGGCAACGTG
GTGCGTTTTGCGCCTGCGCTCAATGTCAGCGAAGAAGAGGTGACGACCGGACTGGATCGCTTTGCAGTTGCTTGC
GAACACTTTGTTAGCCGAGGTTCATCATGA
GAATTCGCGT

Usted emplea las enzimas de restricción: BglII y EcoRI para clonar el siguiente gen de interés
en el plásmido pET28a. ¿Qué resultado obtendría?
b) Se clonaría el gen y este se expresaría
c) No se llevaría a cabo el proceso de clonación
d) Se clonaría el gen, pero este no expresaría
e) No se clonaría la secuencia funcional
La clonación se lleva a cabo ya que las enzimas de restricción seleccionadas cortan el ADN,
aislando el gen y permitiendo su funcionalidad. Además, el plásmido se cliva de tal manera
que, al realizar la ligación, el gen se inserte en la dirección correcta para llevar a cabo su
replicación. A pesar de esto, la enzima Bg1II está cortando antes del promotor, así que este se
pierde y no permite que se dé la transcripción. En ese sentido, teniendo el origen de
replicación conservado, pero perdiendo el promotor, el gen se puede clonar, pero no se
expresaría.

4. Después de realizar una ligación de un gen de 3 Kb (barra a la derecha de la imagen) en un

plásmido (pMOL) de 10 Kb, ud desea saber si este quedó en la orientación correcta. Por lo
cual ud realiza un mapeo de restricción. La mejor o mejores enzimas a usar para determinar
dicha orientación serían:
Opciones de respuesta:
o BamHI
o HindIII
o EcoRI+BamHI
o EcoRI
o EcoRI+HindIII

Se utilizarían las enzimas EcoRI+HindIII: EcoRI cortaría el ADN para poder hacer la ligación
después, por su lado HindIII verifica la direccionalidad correcta de la inserción. Así pues, si el
fragmento quedó ligado exitosamente en la dirección correcta, se deberían observar dos
fragmentos de 10kb y 3kb, pero si no fue ligado en la dirección correcta, se observarían dos
fragmentos de 12kb y kb.

5. Que fragmentos obtendría de digerir pHP13 (ver imagen) con PvuI y HphI?
 a) 121 bp y 3648 bp
b) 1252 bp y 3648 bp
c) 121 bp, 1131 bp y 3769 bp
d)121 bp y 3769 bp
Para hallar los fragmentos correspondientes a cada corte, hacemos:
- Primer fragmento:
4900 bps – 3769 bps + 121 bps = 1252 bps
Donde:
4900 bps corresponde al tamaño del plásmido.
3769 bps es el fragmento que hay en EcoRI, por lo que se debe restar para hallar el fragmento
resultante.
121 bps es el fragmento que hay desde EcoRI hasta PvuI, por lo que se debe sumar para
eliminarlo del fragmento hallado anteriormente.
- Segundo fragmento:
4900 bps – 1252 bps = 3648 bps
Para hallar este fragmento solo es restarle al tamaño original del plásmido (4900 bps) el
tamaño del fragmento obtenido anteriormente (1252 bps).