BIOLOGIA CELULAR

POSGRADO CIENCIAS BIOMEDICAS

TALLER DE TRANSCRIPCIÓN Y PROCESAMIENTO DEL mRNA y REGULACIÓN GENICA

PREGUNTAS

1. Señalar la analogía y diferencia existente entre DNA-polimerasa y RNA-polimerasa en

cuanto a la formación concreta del primer enlace fosfodiéster de la nueva cadena sintetizada
(DNA y RNA, respectivamente)

2. La hebra molde de un DNA sufre el proceso de la transcripción para dar un transcrito de

RNA. Por ello, dicha hebra recibe también el nombre de cadena no-codificante, no-informativa,
antisentido o cadena (-). ¿Es esto correcto?.

3. La alfa-amanitina es una toxina que inhibe fuertemente la RNApol-II. ¿Cuál es el significado

de esta inhibición?. ¿Cómo responden las otras RNA-polimerasas?.

4. Todos los promotores utilizados por las RNApol-I, RNApol-II y RNApol-III en la transcripción
de eucariotas, son idénticos y están situados en la misma posición de la hebra molde de DNA.
¿Es esto correcto?. Comentar.

5. Las secuencias promotoras (en su sentido más amplio, también llamadas elementos cis)
existentes en eucariotas se pueden clasificar en 3 tipos. Comente cuáles son y qué caracteriza
cada uno de ellos en cuanto a su ubicación y función.

6. Un fragmento de DNA tiene esta secuencia en una de sus hebras:

5'-GTAGCCTACCCATAGG-3'
Si se transcribe un mRNA a partir de este DNA, usando como molde la hebra complementaria
a la mostrada, ¿cuál será la secuencia de dicho mRNA?

7. Comentar: ¿qué tipo de cebador necesita la RNApol-I para comenzar la transcripción de una
cadena de DNA?
oligorribonucleótido
oligodesoxirribonucleótido
casquete o caperuza de guanosina
sonda de cDNA

8. La actinomicina D es un antibiótico que actúa intercalándose en la doble hélice del DNA.

Predecir razonadamente si afectará a los siguientes procesos:
replicación
transcripción por la RNApol de procariotas
transcripción por la RNApol I de eucariotas
transcripción por la RNApol II de eucariotas
transcripción por la RNApol III de eucariotas
transcripción por la RNApol mitocondrial de eucariotas

9. La región estructural de un gen eucariótico contiene:

(a) secuencias internas no codificantes (llamadas ...............................).
(b) secuencias internas codificantes (llamadas ...............................).
(c) secuencias terminales no codificantes (sin un nombre específico).
10.Indicar a continuación cuál de las siguientes afirmaciones es correcta.
Las secuencias (a) desaparecen en la transcripción del gen.
Las secuencias (b) desaparecen en la maduración postranscripcional del transcrito primario.
Las secuencias (c) desaparecen en la traducción del mRNA.
Las secuencias (c) desaparecen durante la maduración postraduccional de las proteínas.

11. Indique la terminología empleada en la transcripción para:

a) Distinguir entre la hebra de DNA que se transcribe y la que no se transcribe.
b) Identificar la posición (orientación) de los nucleótidos en la hebra que se transcribe con
referencia al nucleótido +1 considerado como origen de la transcripción.

12. Indique, concretamente, la composición en subunidades de las RNA polimerasas de

procariotas y eucariotas. ¿Cuál es la característica, distinta en procariotas y eucariotas, que
determina la transición de la fase de inicio a la fase de elongación de la transcripción?

13. Los trabajos llevados a cabo por Stalder et al, (1980), demostraron la sensibilidad de
secuencia del DNA de B-globina a la DNAasa I en el núcleo de eritoblastos. Tome como base
la información suministrada en la Figura 1 (a y B) para responder las siguientes preguntas:

DNA de DNA de DNA

Eritoblasto DNA eritoblasto de
(a) de 14 días de (b) de 14 días MSB
MSB DNase

Dnase(g/ml) 0 .01 .05 .1 .5 .1 .1.5 1.5 (g/ml) 0. .01 .05 .1 .5 1.5 1.5

20kb

46kb

(a) 46 kb 46 kb 20 kb

Globin Globin Oval

Células de DNA de MSB eritoblasto de

14 días 14 días
Bam HZ Bam HZ

(B)

La figura A muestra el resultado de un ensayo de sensibilidad a DNAasa I de células

eritoblásticas y MSB; en la Figura B se compara con el resultado del gene de ovoalbumina en
las mismas condiciones.
¿Qué diferencias observa usted en la cromatina de B-globina en los dos tipos de células?
Explíquelas y consígnelas en las gráficas inferiores anexas (A). ¿Qué diferencias detecta usted
en la cromatina del gene de ovoalbumina en los dos tipos de células al igual que (a)
consígnelas en la Figura inferior (B).

14. En un reconocido laboratorio farmacéutico un investigador ha aislado una nueva droga que
tiene su efecto solamente en le metabolismo del RNA celular. Esta droga inhibe
completamente el procesamiento del pre-rRNA a rRNA y se sospecha que actúa en algún paso
de la maduración de mRNAs constitutivos de la célula. Usted sostiene la hipótesis de que la
droga inhibe el splicing de los hnRNA. Después de tratar un cultivo celular con esta droga el
investigador adicionó 3H-Uridina durante dos minutos y después permitió el crecimiento de la
célula en presencia de la droga en un medio no radiactivo durante 4 horas extrayendo en este
tiempo el RNA y separándolo mediante centrifugación en gradientes de sacarosa.
Construya las gráficas de las curvas que se obtuvieron en absorbancia en función de la
radiactividad medida en las diferentes fracciones del gradiente.
Utilizando los mismos ejes determine el perfil de radiactividad del RNA que se esperaría
después de 48 horas después de haber incubado las células con 3H-Uridina pero sin la droga.
Usted adiciona actinomicina D en mezcla con la droga en cuestión y mide la síntesis de pre-
mRNA de -actina. Que resultados esperaría obtener. Discútalos.
Efectúa el experimento del literal C cambiando la actinomicina D por -amanitina y
observa que la síntesis de -actina se reduce en 95%. Explique ¿Por qué sucede esto?

15. La maduración de un transcrito primario precursor de mRNA afecta, entre otras

modificaciones, al extremo 5’ PPP del transcrito. ¿Podría explicar esquemáticamente la
guanosilación de dicho extremo?. (Nota: la guanosilación ocurre en dos reacciones; es
necesaria para las metilaciones que conducen a la formación del casquete 5’ o caperuza).

16. ¿Qué es un intrón? ¿Dónde se encuentra? ¿Conoces otro nombre equivalente? Para cada
una de las siguientes afirmaciones, indicar si son verdaderas o falsas. En caso de ser falsas,
justificarlo brevemente.
a. El proceso de eliminación de intrones se llama también proceso de corte y empalme tiene
lugar en el citoplasma
b. La especificidad del corte se debe a secuencias palindrómicas situadas en los extremos de
los exones
c. Se produce por una endonucleasa que corta el intrón en sus dos extremos y una ligasa que
une los dos exones, con consumo de ATP
d. Se produce por dos reacciones de transfosforilación que no consumen ATP
Señale la respuesta correcta, comentándola:

17. El extremo libre 5’ del transcrito primario, antes de sufrir el procesamiento

postranscripcional, está formado por:
(a) Un fosfato perteneciente a un nucleósido-trifosfato, normalmente ATP
(b) Dos fosfatos consecutivos, pertenecientes a un nucleósido-difosfato, normalmente ADP
(c) Tres fosfatos consecutivos, pertenecientes a un nucleósido-trifosfato, normalmente ATP
(d) Tres fosfatos consecutivos, pertenecientes a un nucleósido-trifosfato cualquiera

18. En la metilación del capuchón 5’ (estructura 5’-guanosina-trifosfato), el grupo donador de

metilos es la S-adenosilmetionina. ¿Cuál es la estructura de ambos compuestos?

19. Observe el mecanismo de la reacción de “corte de intrones” y “empalme de exones”.

¿Dónde ocurre esta reacción? ¿Cuál es la estructura macromolecular responsable?. Describa
la ubicación y características de las tres secuencias indicadas. Comente el esquema, en
especial el significado de los pasos 1 y 2 así como el tipo de enlace presente en el intrón en
forma de lazo.
20. Señale la respuesta correcta: El transporte del RNA mensajero desde el núcleo al
citoplasma...
(a) Es catalizado por una enzima llamada ribozima
(b) Ocurre a través de receptores proteicos en la superficie interna de la membrana nuclear
(c) Es un proceso ligado a la existencia de poros en la membrana nuclear
(d) Es el proceso que ocurre inmediatamente antes de la maduración del transcrito primario

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POSGRADO CIENCIAS BIOMEDICAS

TALLER DE SÍNTESIS DE PROTEÍNAS

1. La especificidad de las aminoacil-tRNA sintetasas, que catalizan el proceso de activación de

un aminoácido (a aminoacil-tRNA), se ejerce en la primera de las etapas del proceso, la
formación del aminoacil-AMP. ¿Es esto correcto? Comentarlo.

2. La secuencia Kozak (en el mRNA de eucariotas) actúa como señal iniciadora de traducción.
Se aparea por tres de sus nucleótidos con el anticodón de primer aminoacil-tRNA (Met-tRNA),
en presencia de eIF-2 y GTP. ¿Es esto correcto? Comentarlo.

3. Con referencia al péptido citado en el apartado (a) de la pregunta (2) del tema 13: durante su
síntesis, para que se forme el enlace peptídico con el grupo amino de la alanina, ¿en qué
aminoacil-tRNA se debe romper un enlace y cuál es ese enlace? ¿Qué le ocurre entonces al
tRNAAla?. (NOTA: para contestar, considérese con detenimiento el mecanismo de la
elongación, aunque no es obligatorio describirlo)

4. En el proceso de traducción, ¿a qué se llama activación de un aminoácido? ¿Para qué

aminoácidos es necesaria? (No poner reacciones)

5. Con la ayuda del esquema, explicar cuál es la función de cada uno de los factores de
iniciación de la traducción eucarióticos (eIF, representados en el esquema por números dentro
de un círculo).
6. Indique la respuesta correcta:
La “activación de los aminoácidos” ocurre en la fase previa al inicio de la síntesis proteica...
(a) Al unirse el aminoácido al AMP, en la reacción catalizada por la aminoacil-tRNA-sintetasa.
(b) Al unirse el aminoácido al tRNA, en la reacción catalizada por la aminoacil-tRNA-sintetasa.
(c) Al incorporarse el aminoacil-tRNA a su codón correspondiente en el mRNA.
(d) Al unirse cada aminoácido entre sí mediante enlace peptídico.

7. El primer paso en la etapa de elongación de la síntesis proteica es la ubicación del

aminoacil-tRNA entrante en un codón vecinal al codón que lleva unido el peptidil-tRNA en
crecimiento. Hacer un esquema sencillo de la posición (en P o en A) de ambas moléculas.

8. Señale la respuesta correcta: En relación con el rendimiento energético de la síntesis de

proteínas...
(a) Es un proceso totalmente exergónico.
(b) Se requiere el gasto de un enlace energético en la aminoacilación del tRNA inicial.
(c) Todos los aminoacil-tRNA intervienen en la fase de iniciación sin gasto alguno de ATP.
(d) En la fase de terminación no existe gasto alguno de ATP.

9. ¿Conoce los aminoácidos que están más degenerados?. Describa la causa.

10. Un fragmento de DNA tiene esta secuencia en una de sus hebras:

5'-GTAGCCTACCCATAGG-3'

A partir de este DNA se transcribe un mRNA, usando como molde la hebra complementaria a
la mostrada
(a) ¿Qué péptido se obtendrá al traducir ese mRNA? (Suponer que no se requiere codón de
iniciación y se empieza exactamente en el extremo 5').
(b) En función de los posibles marcos de lectura, ¿cuántos péptidos diferentes están
codificados en este mRNA? Indicarlos.

11. Explicar en qué consiste la "hipótesis del balanceo". ¿Qué consecuencias tiene sobre el
código genético?

12. Se está estudiando una proteína de levadura, cuyo extremo C-terminal tiene la secuencia
-Asn-Met-Asn-Gly-Lys-COOH

Al someter las levaduras a radiación ultravioleta se obtuvieron dos cepas particulares que
sintetizan variantes de esta proteína, cuyas secuencias C-terminales son:

cepa A: -Asn-Met-Lys-Gly-Lys-COOH

cepa B: -Asn-Met-Asn-Gly-Lys-Trp-COOH

Deducir razonadamente qué mutaciones presenta el DNA de dichas cepas A y B, que sean
responsables de la síntesis de estas proteínas variantes.

13. ¿Por qué razón los grupos de 4 codones para un aminoácido (situados en una misma
cuadrícula del código) requieren dos tRNAs para codificar dicho aminoácido?

14. ¿Cuántos aminoacil-tRNAs distintos intervienen en la síntesis proteica en eucariotas?.