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Universidad de los Lago

Departamento
Ciencias y Tecnologa Alimentos

MICROBIOLOGA INDUSTRIAL

CAPITULO 3:
MICROORGANISMOS DE
INTERES INDUSTRIAL

Profesor:
Hctor Mancilla Chvez

Osorno- 2007

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

CAPITULO 3 MICROORGANISMOS DE INTERS


INDUSTRIAL
1.
2.
3.
4.

Microorganismos utilizados a nivel industrial.


Actividades y caractersticas de inters. Principales tipos.
Fisiologa del crecimiento
Metabolismo microbiano.

___________________________________________________________________
1

Microorganismos utilizados a nivel industrial

No todos los microorganismos tienen un uso industrial. Mientras que


los microorganismos aislados de la naturaleza muestran el
crecimiento celular como su principal propiedad fisiolgica, los
microorganismos industriales son organismos que se han
seleccionado cuidadosamente para que produzcan uno o ms
productos especficos. Incluso cuando el microorganismo industrial es
uno que se ha aislado por las tcnicas tradicionales, se convierte en
un organismo altamente "modificado" antes de entrar en las
industrias a gran escala. En gran parte, los microorganismos
industriales son especialistas metablicos capaces de producir
especficamente determinados metabolitos y con gran rendimiento.
Con el fin de lograr esta elevada especializacin, las cepas
industriales estn alteradas genticamente, por mutacin o por
recombinacin. Habitualmente se reprimen o se eliminan las vas
metablicas menores y frecuentemente existe en ellas un
desequilibrio metablico. Los microorganismos industriales pueden
presentar muchas propiedades celulares y bioqumicas alteradas.
Aunque las cepas industriales pueden crecer satisfactoriamente bajo
las condiciones altamente especializadas de un fermentador, pueden
mostrar un crecimiento pobre en ambientes naturales competitivos.
1.1

Origen de las cepas industriales


La fuente ltima de todas las cepas de microorganismos industriales
es el ambiente natural. Pero a travs de los aos, a medida que los
procesos microbianos a gran escala se han ido perfeccionando, un
cierto nmero de cepas industriales se han ido depositando en las

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

colecciones de cultivos. Cuando se patenta un nuevo proceso


industrial, al solicitante de la patente se le requiere para que
deposite una cepa capaz de llevar a cabo el proceso, en una coleccin
de cultivos reconocida. Hay varias colecciones de cultivos que actan
de depositarias y suministradoras de cultivos microbianos. Aunque
estas colecciones pueden ser una fuente rpida y fcil de cultivos, es
comprensible que la mayora de las compaas industriales se sientan
poco dispuestas a depositar sus mejores cultivos en las colecciones
de cultivos. Adems de cultivos de microorganismos, muchas
colecciones de cultivos tienen tambin colecciones de varios
plsmidos, de genes clonados y de vectores para su uso en ingeniera
gentica, de lneas celulares animales para el cultivo de virus
animales, y de hibridomas para producir anticuerpos monoclonales.

ORIGEN DE LOS MICROORGANISMOS INDUSTRIALES


1. Alimentos fermentados
a) Seleccin involuntaria segn las caractersticas del
proceso
b) Seleccin in vitro de aquellas cepas que presentaran
unas caractersticas ms interesantes
2. Produccin de aditivos y enzimas de uso alimentario
a) Seleccin a partir de cualquier fuente natural
b) Colecciones de cultivo pblicas y privadas

1.2

Mejora de cepas
Corno hemos indicado, la fuente inicial de un microorganismo
industrial es el ambiente natural, pero el aislamiento original se
modifica en gran medida en el laboratorio. Como resultado de esta
modificacin, es posible anticipar una mejora progresiva en el
rendimiento de un producto. El ejemplo ms espectacular de tal
mejora progresiva es el de la penicilina, el antibitico producido por
el hongo Penicillium chrysogenum. Cuando se produjo por primera
vez la penicilina a gran escala, se obtuvieron rendimientos de 1- 10
g/ml. A lo largo de los aos, como resultado de la mejora de las
cepas acoplada a cambios en el medio y en las condiciones de
cultivo, el rendimiento de penicilina aument hasta 50.000 g/ml. Es
interesante decir que todo este incremento de 50.000 veces el
rendimiento, se obtuvo por mutacin y seleccin; no estuvo
implicada ninguna manipulacin gentica. La introduccin de nuevas

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tcnicas genticas ha conducido a posteriores, aunque mucho ms


modestos, incrementos del rendimiento.
2

Actividades y caractersticas de inters. Principales tipos.

2.1

Propiedades de un microorganismo industrial


Un microorganismo adecuado para su utilizacin industrial debe
producir la sustancia de inters, pero hay muchos otros aspectos a
considerar. Es preciso disponer del organismo en cultivo axnico
(puro), debe ser genticamente estable, y debe crecer en cultivo a
gran escala. Adems, debe ser posible mantener cultivos del
organismo durante un perodo de tiempo largo en el laboratorio y en
la planta industrial. El cultivo debe producir preferentemente esporas
o alguna otra forma celular reproductora, para que los organismos se
puedan inocular fcilmente en los grandes fermentadores. Una
caracterstica importante es que el organismo. industrial crezca
rpidamente y produzca el compuesto deseado en un perodo de
tiempo relativamente corto.
El organismo, adems, debe ser capaz de crecer en un medio de
cultivo lquido y relativamente barato, que se pueda obtener en
grandes cantidades. Muchos procesos microbiolgicos industriales
utilizan fuentes carbonadas de desecho de otras industrias, como
principal ingrediente o como suplemento para los medios de cultivo a
escala industrial. Algunas de estas fuentes son, por ejemplo, el licor
de maceracin de maz (un producto rico en nitrgeno y factores de
crecimiento), el suero (un producto lquido de desecho de la industria
lechera, que contiene lactosa y sales minerales) y otros materiales de
desecho industriales, que tienen elevado contenido de carbono
orgnico. (La utilizacin de estos materiales carbonados de desecho
ayuda tambin a resolver los problemas de eliminacin de residuos,
creados por la elevada demanda biolgica de oxgeno (BOD) de los
residuos orgnicos de desecho). Adems, un microorganismo
industrial debera no ser daino para las personas ni para los
animales y plantas econmicamente importantes. Debido al gran
tamao de la poblacin dentro del fermentador y a la imposibilidad
prctica de evitar la contaminacin del ambiente fuera del
fermentador, un patgeno podra plantear problemas potenciales
desastrosos.
Otro requisito importante de un microorganismo industrial es que
sea posible eliminar las clulas microbianas del medio de cultivo con
relativa facilidad. En el laboratorio, las clulas se retiran
principalmente por centrifugacin, pero la centrifugacin a gran
escala puede ser difcil o cara. Los organismos industriales ms
favorables son aquellos que tienen un tamao de clula grande,

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porque las clulas ms grandes se depositan rpidamente en un


cultivo o pueden filtrarse fcilmente con materiales de filtro
relativamente baratos. Los preferidos son los hongos, las levaduras y
las bacterias filamentosas. Las bacterias unicelulares, debido a su
pequeo tamao, son difciles de separar del fluido de cultivo.
Finalmente, un microorganismo industrial debera ser susceptible de
manipulacin gentica. En microbiologa industrial, el incremento del
rendimiento se ha obtenido primordialmente por medio de la
mutacin y seleccin. Tambin es deseable que el organismo
industrial sea capaz de sufrir recombinacin gentica, bien por un
proceso sexual o por algn tipo de proceso parasexual1. La
recombinacin gentica permite incorporar en un solo genoma,
caractersticas genticas de ms de un organismo.
Sin embargo, muchas cepas industriales se han mejorado
enormemente por mutacin y seleccin, sin el uso de la
recombinacin gentica.
REQUISITOS DE LAS CEPAS INDUSTRIALES
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9
9

Posibilidad de obtener cultivos puros


Genticamente estables
Fcil de mantener por largos perodos de tiempo
Tasa rpida de produccin de formas de propagacin
Tasa rpida de crecimiento en preinculo y en fermentador
Ausencia de problemas tecnolgicos durante el escalado
Nutricionalmente poco exigentes
Autoproteccin (bajada de pH, temperatura ptima extrema,
produccin de agentes antagonistas, etc).
Produccin rpida de los metabolitos de inters
Fcil separacin entre el producto y el microorganismo
Produccin mayoritaria del metabolito de inters
Falta de produccin de sustancias txicas
Susceptible de mejora gentica

Existen una serie de caractersticas que comparten todos los


microorganismos y que suponen ciertas ventajas para su uso en la
industria. la ms fundamental, el pequeo tamao de la clula
1

Ciclo que implica cambios en el nmero cromosmico, pero que difiere en lugar y tiempo del
ciclo sexual; tiene lugar en los hongos cuyo ciclo normal est suprimido o aparentemente
ausente. Cuando es Homocaritico los ncleos presentes en una hifa son del mismo tipo
gentico. Para el caso Heterocaritico dos o ms ncleos son genticamente distintos. En la
Heterocariosis se produce la fusin de micelios genticamente distintos, el par formado sufre
mitosis o, puede suceder en la mutacin de un micelio Homocaritico.
La Parasexualidad consiste en los siguientes procesos: Heterocariosis, cariogamia,
recombinacin, segregacin mediante entrecruzamiento mittico y haploidizacin. Los procesos
parasexuales se asemejan a la reproduccin sexual, pero estos pueden tener lugar cuando el
micelio est en desarrollo, mientras que la fase sexual (s la hay) depende de las condiciones
nutritivas y del hbitat

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

microbiana y su correspondiente alta relacin de superficie a


volumen. Esto facilita el rpido transporte de nutrientes al interior de
la clula y permite, por consiguiente, una elevada tasa metablica.
As, la tasa de produccin de protena en las levaduras es varios
rdenes de magnitud superior que en la planta de soja, que, a su
vez, es 10 veces ms alta que en el ganado. Esta velocidad de
biosntesis microbiana extremadamente alta permite que algunos
microorganismos se reproduzcan en tan solo 20 minutos (Escherichia
coli). Los ambientes capaces de albergar vida microbiana son muy
variados. Se han encontrado especies que viven a temperaturas
comprendidas entre el punto de congelacin del agua y el punto de
ebullicin, en agua salada y dulce, en presencia y en ausencia de
aire. Algunos han desarrollado ciclos de vida que incluyen una fase
de latencia en respuesta a la falta de nutrientes: en forma de esporas
permanecen inactivos durante aos hasta que el medio ambiente,
ms favorable, permita el desarrollo de las clulas. Los
microorganismos se hallan capacitados para acometer una extensa
gama de reacciones metablicas y adaptarse as a muchas fuentes de
nutricin. Versatilidad que hace posible el que las fermentaciones
industriales se basen en nutrientes baratos.

Un microorganismo de uso industrial debe producir la sustancia de inters; debe


estar disponible en cultivo puro; debe ser genticamente estable y debe crecer en
cultivos a gran escala. Otra caracterstica importante es que el microorganismo
industrial crezca rpidamente y produzca el producto deseado en un corto
perodo de tiempo. El microorganismo debe tambin crecer en un relativamente
barato medio de cultivo disponible en grandes cantidades. Adems, un
microorganismo industrial no debe ser patgeno para el hombre o para los
animales o plantas. Otro requisito importante es la facilidad de separar las
clulas microbianas del medio de cultivo; la centrifugacin es dificultosa o cara
a gran escala. Los microorganismos industriales ms favorables para esto son
aquellos de mayor tamao celular (hongos filamentosos, levaduras y bacterias
filamentosas) ya que estas clulas sedimentan ms fcilmente que las bacterias
unicelulares e incluso son ms fciles de filtrar.
2.2

Diferentes tipos de microorganismos industriales

Los microorganismos que sintetizan productos tiles para el hombre


representan, como mximo, unos pocos centenares de especies de
entre las ms de 100000 descritas en la Naturaleza. Los pocos que se
han encontrado con utilidad industrial son apreciados por elaborar
alguna sustancia que no se puede obtener de manera fcil o barata
por otros mtodos.

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2.2.1

Levaduras

Las levaduras se vienen utilizando desde hace miles de aos para la


fabricacin de pan y bebidas alcohlicas. La levadura que sin duda
fue la primera y an hoy en da sigue siendo la ms utilizada por el
hombre es Saccharomyces cerevisiae de la que se emplean
diferentes cepas para la fabricacin de cerveza, vino, sake, pan y
alcoholes industriales. Kluyveromyces fragilis es una especie
fermentadora de la lactosa que se explota en pequea escala para la
produccin de alcohol a partir del suero de la leche. Yarrowia
lipolytica es una fuente industrial de cido ctrico. Trichosporum
cutaneum desempea un importante papel en los sistemas de
digestin aerbica de aguas residuales debido a su enorme capacidad
de oxidacin de compuestos orgnicos, includos algunos que son
txicos para otras levaduras y hongos, como los derivados fenlicos.

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

2.2.2

Hongos filamentosos

Los hongos tienen una gran importancia econmica, no tan slo por
su utilidad, sino tambin por el dao que pueden causar. Los hongos
son responsables de la degradacin de gran parte de la materia
orgnica de la Tierra, una actividad enormemente beneficiosa ya que
permite el reciclaje de la materia viva. Por otro lado, los hongos
causan gran cantidad de enfermedades en plantas y animales y
pueden destruir alimentos y materiales de los que depende el
hombre.
Los efectos perjudiciales de los hongos estn contrarrestados por su
utilizacin industrial. Los hongos son la base de muchas
fermentaciones como la combinacin de soja, habichuelas, arroz y
cebada que dan lugar a los alimentos orientales miso, shoyu y
tempeh. Los hongos son tambin la fuente de muchos enzimas
comerciales (amilasas, proteasas, pectinasas), cidos orgnicos
(ctrico, lctico), antibiticos (penicilina), quesos especiales
(Camembert, Roquefort) y, evidentemente, de las setas.

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

2.2.3

Bacterias

Entre las especies bacterianas de inters industrial estn las


bacterias del cido actico, Gluconobacter y Acetobacter que pueden
convertir el etanol en cido actico. El gnero Bacillus es productor
de antibiticos (gramicidina, bacitracina, polimixina), proteasas e
insecticidas. Del gnero Clostridium cabe destacar Clostridium
acetobutylicum que puede fermentar los azcares originando acetona
y butanol. Las bacterias del cido lctico incluyen, entre otras, las
especies de los gneros Streptococcus y Lactobacillus que producen
yogur. Corynebacterium glutamicum es una importante fuente
industrial de lisina. El olor caracterstico a tierra mojada se debe a
compuestos voltiles (geosmina) producidos por Streptomyces
aunque su principal importancia radica en la produccin de
antibiticos
como
anfotericina
B,
kanamicina,
neomicina,
estreptomicina, tetraciclina, etc

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Fisiologa del crecimiento


Se suele definir el crecimiento de cualquier sistema biolgico como el
incremento ordenado de todos los elementos componentes de ese
sistema, lo cual implica un aumento de la masa celular que
eventualmente conduce a la multiplicacin celular. En organismos
pluricelulares dicha multiplicacin se traduce en un aumento del
tamao del individuo, mientras que en unicelulares lo que ocurre es
un aumento de la poblacin. El crecimiento bacteriano podemos
estudiarlo desde dos puntos de vista:

A escala individual
A escala poblacional

Los eventos de crecimiento en el mbito individual hacen referencia


al ciclo celular, y dentro de ste podemos abordar los siguientes
temas:
inicio y transcurso de la replicacin cromosmica y de
plsmidos);
segregacin de cromosoma y plsmidos a las clulas
hijas;
sntesis de nuevos materiales de las envueltas, sobre
todo de pared celular
seales que coordinan la replicacin genmica con la
divisin celular.

El estudio del crecimiento a nivel de poblaciones incluye los


siguientes tpicos:
cintica del crecimiento;
factores que afectan al tiempo de generacin (g);
factores ambientales que limitan el crecimiento.
3.1

Ciclo celular
Los ciclos celulares se describen generalmente atendiendo a una
serie de eventos identificables que se van produciendo en una
secuencia fija, de modo que para que se produzca cada uno de
ellos hace falta que se complete el anterior.

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Ciclo eucaritico
Los eventos clave son la fase S, de sntesis de ADN, y la fase M
(mitosis y divisin celular). Las fases S y G2 son relativamente
constantes en sus proporciones. Cuando se altera la duracin
del ciclo total (por modificacin de la velocidad de crecimiento),
lo que cambia es el tiempo de la fase G1 y, en menor medida,
de la fase M.
Ciclo eucaritico
Los eventos clave son la fase S, de sntesis de ADN, y la fase M
(mitosis y divisin celular). Las fases S y G2 son relativamente
constantes en sus proporciones. Cuando se altera la duracin del
ciclo total (por modificacin de la velocidad de crecimiento), lo que
cambia es el tiempo de la fase G1 y, en menor medida, de la fase M.

Los eventos clave son la fase S, de sntesis de ADN, y la fase M


(mitosis y divisin celular). Las fases S y G2 son relativamente
constantes en sus proporciones. Cuando se altera la duracin del
ciclo total (por modificacin de la velocidad de crecimiento), lo que
cambia es el tiempo de la fase G1 y, en menor medida, de la fase M.
Ciclo procaritico
Hasta hace unos 20 aos se pensaba que los ciclos bacterianos
carecan de eventos clave. Ello se deba a que en bacterias no existe
mitosis y porque en los medios de cultivo ricos empleados entonces
la sntesis de ADN pareca continua durante todo el ciclo.
Pero hoy sabemos que s existen fenmenos clave, que se pueden
poner mejor de manifiesto cuando el crecimiento se estudia en
medios menos ricos que permiten slo crecimientos lentos. Los
periodos del ciclo procaritico son:

Ciclo procaritico
Hasta hace unos 20 aos se pensaba que los ciclos bacterianos
carecan de eventos clave. Ello se deba a que en bacterias no existe
mitosis y porque en los medios de cultivo ricos empleados entonces
la sntesis de ADN pareca continua durante todo el ciclo.
Pero hoy sabemos que s existen fenmenos clave, que se pueden
poner mejor de manifiesto cuando el crecimiento se estudia en

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

medios menos ricos que permiten slo crecimientos lentos. Los


periodos del ciclo procaritico son:
fase C (equivalente a la S eucaritica): replicacin del
ADN cromosmico;
fase D (equivalente a G2 + M): se distingue porque su
terminacin coincide con el final de divisin celular;
fase D (equivalente a G2 + M): se distingue porque su
terminacin coincide con el final de divisin celular;
Lo caracterstico del ciclo es que las fases C y D son relativamente
constantes, y por lo tanto, cuando disminuye el tiempo de
generacin (g), lo hace a expensas de la fase "G1". Por ejemplo, en
Escherichia coli, C = unos 40 min, y D = unos 20 min.

3.1.1

Ciclo celular en funcin del tiempo de generacin


Vamos a estudiar con el ejemplo de E. coli qu ocurre con el ciclo
celular a distintos tiempos de generacin.

Cuando g>C+D

existe fase "G1" (intervalo que precede a la replicacin). En


estas condiciones podemos observar ntidamente periodos
diferenciados entre s (de sntesis de ADN y de divisin
celular).

Cuando g=C+D

ya no existe G1, y cada ronda de replicacin comienza


inmediatamente tras la precedente divisin celular (es decir,
cada clula hija recin nacida se embarca inmediatamente
en replicar el cromosoma, y una vez que ha terminado de
replicarlo, la clula inicia la divisin celular).

Cuando g<C+D

las rondas de replicacin de un ciclo se inician antes de que


haya terminado la divisin celular del anterior
(superposicin parcial entre fases C y D).

Cuando g<C

ya no se puede detectar fase D como tal. La sntesis de ADN


es continua durante todo el ciclo. Se inician rondas de
replicacin cromosmica antes de que haya terminado la
anterior. Esto se traduce en que los cromosomas muestran
un tpico patrn de replicacin dicotmica y en que dichos
cromosomas pasan a cada clula hija ya embarcados en una
nueva ronda de replicacin.

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Una caracterstica del ciclo es que, cuanto ms rico es un


medio, y por lo tanto menor es el tiempo de generacin (g),
mayor es el tamao medio de las clulas. Es decir, los
individuos de una cepa bacteriana que est en un medio rico
son ms grandes que los individuos de esa misma cepa
creciendo en un medio pobre.
3.1.2

Control de la replicacin del ADN2 cromsomico

De lo anterior se deduce que debe de existir algn tipo de


acoplamiento entre las ondas de replicacin y la divisin
celular.
Nosotros, sobre el esquema que hemos comentado, podemos
inferir cundo se debe de iniciar una nueva ronda siempre que
sepamos los valores de g, C y D:
Contamos C+D minutos a partir de g, y entonces podemos
prever que la ronda de replicacin tendr lugar g--(C+D)
minutos antes de la prxima divisin celular (o bien, G1-g
minutos si existe periodo G1).
Pero, por supuesto, la clula no es tan "lista" (no sabe contar
hacia atrs en el tiempo) ni tiene el don de la prediccin (los
humanos tampoco, para la mayor parte de las cosas
importantes). La bacteria tampoco sabe "contar hacia
adelante", ya que el tiempo de inicio de una ronda de
replicacin no guarda una relacin sencilla con la divisin
celular previa.
Entonces, cmo se acoplan divisin celular y replicacin
cromosmica? Una clave hacia la respuesta a esta pregunta es
que la razn (proporcin) entre orgenes de replicacin y masa
celular en el inicio (inmediatamente antes de la replicacin) es
igual para todas las tasas de crecimiento. H aqu un modelo
hipottico sobre el mecanismo de coordinacin entre ambos
eventos del ciclo celular:
ADN es la abreviatura del cido desoxirribonucleico (en ingls, DNA: Deoxyribonucleic
Acid). Constituye el principal componente del material gentico de la inmensa mayora de los
organismos, junto con el ARN. Es el componente qumico primario de los cromosomas y el
material en el que los genes estn codificados. En las bacterias, el ADN se encuentra en el
citoplasma mientras que en organismos ms complejos, tales como plantas, animales y otros
organismos multicelulares, la mayora del ADN reside en el ncleo celular. Se conoce desde hace
ms de cien aos. El ADN fue identificado inicialmente en 1868 por Friedrich Miescher, bilogo
suizo, en los ncleos de las clulas del pus obtenidas de los vendajes quirrgicos desechados y
en el esperma del salmn. l llam a la sustancia nuclena, aunque no fue reconocida hasta
1943 gracias al experimento realizado por Oswald Avery.
2

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

El sistema de coordinacin detecta la concentracin de orgenes


de replicacin; conforme la bacteria crece, esta concentracin
va descendiendo, hasta que se alcanza un valor umbral crtico
que desencadena una nueva onda de replicacin. Ello hace que
se doble el nmero de orgenes. Una ulterior ronda no se pone
en marcha hasta que el crecimiento haga de nuevo descender
la concentracin de orgenes.
Se tratara, pues, de una especie de reloj biolgico y
"oscilador" que usara como medida del tiempo el
pararmetro de masa celular, volumen, u otro equivalente, de
tal modo que la concentracin crtica de un factor
iniciador o la dilucin de un represor serviran para
disparar la replicacin a una concentracin determinada.
3.1.3

Relaciones entre velocidad de crecimiento y tamao celular


Es fcil comprobar en los cultivos bacterianos que cuanto ms rico es
un medio, y por lo tanto menor es el tiempo de generacin (g),
mayor es el tamao medio de las clulas.
1.
2.

a. bacterias
i
creciendo en un medio relativamente
o (supongamos que en este medio g=60 min,
pobre
.
C+D=g);
si transplantamos una clula recin
dividida procedente del cultivo anterior a un medio
ms rico (por ejemplo, que permite un tiempo de
generacin g=35 min) podemos observar que:
a. la primera divisin ocurre C+D (60 minutos)
despus; es decir, con un tiempo idntico al
que tena en el medio anterior;
b. pero como en este medio g=35 min, la
iniciacin de una nueva ronda de replicacin
ocurre antes de dicha replicacin celular (es
decir, C y D se superponen);
c.
se observa que se alcanza un nuevo equilibrio,
con un tamao celular mayor que en el medio
pobre, y una masa de inicio (tras la divisin
celular) mayor, alterndose igualmente el
tiempo de inic

15

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

3.1.4

Segregacin de cromosomas y plsmidos


Existe un mecanismo eficiente que asegura la segregacin de los
cromosomas bacterianos a las clulas hijas. Como se recordar, el
cromosoma se encuentra unido a la membrana citoplsmica, al
parecer a travs de un mesosoma. Existen indicios de que durante la
replicacin, el vrtice de la horquilla de replicacin va pasando por
ese punto de anclaje.
La replicacin cromosmica se inicia en una regin especial
denominada oriC, a partir de la cual se efecta una replicacin
bidireccional, hasta que ambas horquillas se encuentran en un punto
situado a 180o respecto de oriC. Cuando el mesosoma llega a ese
trmino de replicacin se escinde en dos mesosomas, cada uno de
los cuales constituye el punto de anclaje de cada copia del
cromosoma. Cuando se forme el septo transversal, cada mesosoma
va a parar a cada clula hija, de modo que las copias de los
cromosomas quedan segregadas. Parece ser que algunos plsmidos
se segregan por este mismo mecanismo.
As pues, el mesosoma parece actuar como un anlogo primitivo del
aparato mittico.

3.1.5

Productos anmalos de la divisin celular


Existen diversos tipos de mutantes cuyos fenotipos implican serias
alteraciones del proceso de divisin celular y de replicacin o
segregacin del material gentico a las clulas hijas. Algunos de
estos mutantes han encontrado tiles aplicaciones en estudios
genticos y moleculares.
Clulas sin cuerpos nucleares (= maxiclulas)
Determinados mutantes termosensibles son incapaces de iniciar la
replicacin a temperaturas elevadas, de modo que siguen creciendo
en tamao y se dividen mucho despus de que se haya completado
la ltima replicacin cromosmica (iniciada a una temperatura ms
baja, permisiva). El resultado de la divisin celular a la temperatura
no permisiva es que se producen clulas de tamao normal, pero
sin cromosoma, aunque poseen los dems componentes celulares,
incluyendo copias de plsmidos.
Por estos mutantes se puede deducir que no existe una relacin
directa entre la septacin (o sea, la fase D de divisin celular) y la
replicacin cromosmica anterior (fase C).

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Miniclulas
Se producen en ciertos mutantes que forman septos anmalos
acntricos (asimtricos, cerca de un extremo y no en el centro). En
las miniclulas tampoco se segrega cromosoma, pero pueden
"heredar" copias de plsmidos.
De estos mutantes se deduce otro rasgo del ciclo celular: el lugar
habitual donde se produce la septacin est programado
genticamente, y esta programacin se puede alterar por
mutaciones.
Uso de maxiclulas y miniclulas en estudios moleculares y
genticos:
Un empleo habitual de estas "clulas" anmalas en el laboratorio se
deriva del hecho de que durante cierto tiempo pueden sintetizar
protenas codificadas por los nicos genes que poseen: los del
plsmido o plsmidos que alberguen. Por marcaje radiactivo y
electroforesis en gel de protenas, se detectan unas pocas bandas,
correspondientes slo a las protenas de los pocos genes existentes,
con la ventaja de que no hay interferencia de los cientos o miles de
protenas de la clula normal.

3.2

Mtodos para el estudio y medicin del crecimiento a escala


individual

3.2.1

Por microscopa
Se basan en la observacin microscpica de microcultivos a
temperatura constante.
seguimiento
de
clulas
individuales
por
microfotografa secuencial
por inmunofluorescencia: se observa en microscopio
de fluorescencia la incorporacin de materiales de P.C. o
de
membrana
marcados
con
algn
colorante
fluorescente.

3.2.2 Por obtencin de cultivos sincrnicos


Como veremos en el prximo captulo, en un cultivo bacteriano
habitual, las distintas clulas se encuentran en fases distintas del
ciclo celular, es decir, no estn sincronizadas. Por lo tanto, del

17

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

estudio de la poblacin no es posible sacar conclusiones sobre


eventos del ciclo celular. Sin embargo, por una serie de
procedimientos, es factible producir cultivos sincrnicos, en los
que durante cierto tiempo (casi) todas las clulas estn en la misma
fase, de modo que tienen la misma edad, el mismo tamao, y se
dividen y replican el cromosoma al mismo tiempo. Entonces, el
comportamiento de la poblacin (ms fcil de estudiar que el de un
solo individuo) es una "imagen ampliada" del individual.
Los principales mtodos de obtencin de cultivos sincrnicos se
basan en seleccionar, a partir de un cultivo estndar no sincrnico,
aquellas clulas que o bien son del mismo tamao, o bien son de la
misma edad. Las tcnicas principales son:
seleccin por tamaos: se suele recurrir a
gradientes de densidad, sobre todo los formados por
mezclas de agua normal y agua deuterada (H2O/D2O).
seleccin por edades: el mtodo ms empleado es la
seleccin por filtracin (tcnica de HelmstetterCummings), aunque slo se puede aplicar a ciertas
cepas (en E. coli funciona con la cepa B/r, pero no con la
K12).

Procedimiento
9
Se filtra un cultivo asincrnico que est en fase exponencial
a travs de una membrana de nitrocelulosa: las clulas se
adhieren al filtro.
9
Se invierte el filtro.
9
Se va pasando medio fresco (=nuevo) precalentado. Cada
clula unida al filtro se nutre y crece, y finalmente se divide:
una de las clulas hijas queda unida al filtro y la otra pasa al
eluato, que se recoge. En cada momento concreto de esta
operacin, las clulas hijas eluidas y recogidas corresponden a
clulas "recin nacidas". Las clulas eluidas en cada momento
concreto (y por lo tanto, de la misma edad) sirven como
"fundadoras" de un cultivo sincrnico.

Obsrvese la cintica de un cultivo "sincrnico" expresada como


nmero de individuos en funcin del tiempo:

durante unas pocas generaciones el cultivo es ms o menos


sincrnico;
las mesetas indican las fases en que el nmero de clulas
no vara, porque todas estn creciendo en tamao antes de
dividirse;

18

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

las subidas bruscas (casi verticales) en el nmero de


individuos nos indican que todas las clulas del cultivo se
estn dividiendo a (casi) el mismo tiempo.

Pero la sincrona se va perdiendo paulatinamente, de modo que al


cabo de unas generaciones la grfica se convierte en una recta con
pendiente. La explicacin estriba en que el tiempo exacto de divisin,
o ms concretamente C y D no duran exactamente lo mismo en los
distintos individuos. Estas pequeas variaciones estadsticas se van
acumulando, generando desfases cada vez mayores entre clulas,
hasta que la sincrona se pierde irreversiblemente.
3.3

Medida del crecimiento


El crecimiento de una poblacin bacteriana puede ser entendido
desde diferentes perspectivas y de acuerdo a stas se puede llegar a
determinar
la
medida
del
crecimiento
mediante
diversas
metodologas.
Para algunos, el crecimiento es la capacidad para multiplicarse que
tienen las clulas individuales, sto es iniciar y completar una divisin
celular. De esta forma, se considera a los microorganismos como
partculas discretas y el crecimiento es entendido como un aumento
en el nmero total de partculas bacterianas. Existen dos formas para
determinar el nmero total de microorganismos en una muestra:

Recuento microscpico de partculas


Recuento electrnico de partculas

Para otros, el crecimiento implica el aumento de los microorganismos


capaces de formar colonias debido a que slo se tiene en cuenta el
nmero de microorganismos viables, esto es capaces de crecer
indefinidamente. Las determinaciones que se utilizan son:

Recuento de colonias
Mtodo del nmero ms probable

Para los fisilogos bacterianos, bioqumicos y bilogos moleculares


una medida del crecimiento es el incremento de biomasa. Para ellos,
la sntesis macromolecular y un incremento en la capacidad para la
sntesis de los componentes celulares es una medida del crecimiento.
Para este grupo la divisin celular es un proceso esencial pero menor
que rara vez limita el crecimiento, ya que lo que limita el crecimiento
es la capacidad del sistema enzimtico para utilizar los recursos del
medio y formar biomasa.

19

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Determinacin
Determinacin
Determinacin
Determinacin

de peso hmedo
de peso seco
de nitrgeno total
qumica de un cido nucleico

Un ltimo grupo entiende al crecimiento sobre la base de la influencia que


ejercen los microorganismos en los cambios qumicos de su entorno como
consecuencia del incremento de la biomasa.
Recuentos Directos
Recuento microscopico: Es una tcnica comn, rpida y barata
que utiliza un equipamiento fcilmente disponible en un laboratorio
de microbiologa. Para estos recuentos se utilizan generalmente
cmaras de recuentos, aunque tambin pueden realizarse a partir de
muestras filtradas en membranas y transparentizadas o teidas con
colorantes fluorescentes (Naranja de acridina).
La mayor dificultad del recuento en cmara es obtener
reproductibilidad en el llenado de la cmara con lquido. Otra
dificultad es la adsorcin de las clulas en las superficies del vidrio,
incluyendo pipetas. Esta adsorcin es crtica en el proceso de dilucin
de la muestra y se minimiza al realizar las diluciones en medios de
alta fuerza inica (solucin fisiolgica o medios mnimos sin fuente de
carbono).
Las cmaras ms utilizadas son las de Hawksley y la de PetroffHausser. La primera tiene la ventaja que puede ser utilizada con
objetivos de inmersin, aunque la mayora de los recuentos se
realizan con objetivos secos. Una de las mayores ventajas del
recuento microscpico es brindar informacin adicional sobre el
tamao y la morfologa de los objetos contados.

Camara de recuento de Petroff-Hausser

20

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Tipo de cuadro

Area
[cm2]

Volumen
[ml]

Factor
[1/Volumen]

Cuadrado total

1.00 x 10-2

2.00 x 10-5

5.00 x 104

Cuadrado grande

4.00 x 10-4

8.00 x 10-7

1.25 x 106

Cuadrado pequeo

2.50 x 10-5

5.00 x 10-8

2.00 x 107

1/Dilucin: Inversa de la dilucin utilizada para llenar la


cmara de recuento.
Nmero de cuadrados contados: Cantidad de cuadrados de
la cmara que se utilizaron para contar un el nmero de
bacterias.
Volumen del cuadrado: Volumen de cada cuadrado de la
cmara. Depende del tipo de cuadrado en donde se realiz el
recuento. Por ejemplo, cada cuadrado pequeo tiene un
volumen de 5 x 10-8 ml (50 m x 50 m x 20 m = 5 x 104
m3 = 5 x 10-8 ml).

Recuento electronico: Los contadores electrnicos permiten


realizar recuentos de bacterias, levaduras no filamentosas y
protozoarios, pero no de hongos y microorganismos filamentosos o
miceliares.
Estos instrumentos constan bsicamente de dos compartimientos
comunicados a travs de un pequeo conducto. En ambos
compartimientos hay electrodos que miden la resistencia elctrica del
sistema, y como el orificio del conducto es muy pequeo y su
resistencia es muy alta, la resistencia elctrica de cada
compartimiento es independiente. El principio de funcionamiento de
estos instrumentos es el que se explica a continuacin. Un volumen
fijo de una suspensin bacteriana es forzada a pasar desde un
compartimiento al otro a travs del pequeo conducto, en un muy
breve intervalo de tiempo. Cuando un microorganismo pasa al nuevo
compartimiento, la resistencia de ste se incrementa debido a que la
conductividad de la clula es menor que la del medio. Estos cambios
en la resistencia son convertidos en pulsos o voltaje y contados.
Este tipo de recuento presenta algunos inconvenientes. Ciertas
bacterias muy pequeas producen cambios en la resistencia que son

21

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

comparables al "ruido" generado por la turbulencia que se desarrolla


al pasar el fluido por el orificio. No pueden medirse clulas que
formen filamentos o agregados o soluciones muy concentradas de
microorganismos, debido a que el pasaje de ms de una clula en un
breve perodo de tiempo va a ser tomado como una clula ms
grande. Es comn la obstruccin del orificio por microorganismos
muy grandes.
Medida de la Biomasa
La medida de la masa de los constituyentes de la clula bacteriana es
utilizada frecuentemente como base para la medida de una actividad
metablica, o de un constituyente metablico o qumico.
Algunos de los mtodos para cuantificar la biomasa son obvios y
confiables, pero pueden volverse complicados si se busca la
exactitud.
Peso hmedo: Se obtiene a partir de una muestra en suspensin
que es pesada luego de la separacin de las clulas por filtracin o
centrifugacin. Es una tcnica til para grandes volmenes de
muestra.
La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el
espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. La cantidad
de lquido retenida puede ser importante, por ejemplo, un pellet de
clulas bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio
intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la
forma y deformacin celular. Para corregir el peso hmedo se
determina la cantidad de lquido que queda retenida en el espacio
intercelular luego de una centrifugacin, para ello se utilizan
soluciones de polmeros no inicos (como el Dextran) que pueden
ingresar en el espacio intercelular pero no pueden atravesar las
paredes bacterianas.
Peso seco: El peso seco (contenido de slidos) de las clulas
bacterianas que se encuentran en una suspensin se obtiene por el
secado de un volumen en un horno a 105C hasta peso constante.
Esta tcnica es til para grandes volmenes de muestra, debido a
que diferencias del orden de los miligramos representan el peso de
un gran nmero de bacterias.
La desventaja de este mtodo es que componentes voltiles de la
clula pueden perderse por el secado y puede existir alguna
degradacin. Tambin la muestra seca puede recobrar humedad
durante el pesado, principalmente si el ambiente tiene una humedad
relativa alta.

22

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Determinacin de acidos nucleicos: Es una tcnica que permite


determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana. Se
determina la cantidad existente de un determinado cido nucleico
(generalmente DNA) y a partir de este dato se estima la masa de la
poblacin.
Determinacion de nitrgeno: Es una tcnica que permite
determinar indirectamente la masa de una poblacin bacteriana.
Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno
que contiene una muestra en relacin al compuesto que se quiera
determinar. Puede analizarse el nitrgeno no proteico mediante el
NO2-, NO3-, NH4+, el nitrgeno proteico mediante absorcin en UV,
Reaccin de Biuret, Reaccin de Lowry, o el nitrgeno total mediante
la Digestin de Kjeldahl.
Incorporacin de precursores radiactivos: Es una tcnica que
permite determinar indirectamente la masa de una poblacin
bacteriana. En esta tcnica se adiciona al medio un compuesto
marcado radiactivamente que puede ser incorporado a la clula, y
luego se determina la cantidad de marca incorporada por toda la
poblacin.
Dispersin de la Luz
Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partcula en
suspensin, parte de la luz es reflejada, parte es diseminada, parte
es absorbida y parte es transmitida. La nefelometra mide la luz
dispersada por una solucin de partculas. La turbidimetra mide la
luz dispersada como un decrecimiento de la luz transmitida a travs
de la solucin. En relacin a la longitud de onda y al tamao de la
partcula pueden existir tres tipos de dispersin.
Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms utilizadas
para monitorear el crecimiento de los cultivos bacterianos. Son muy
tiles y poderosos pero pueden llevar a resultados errneos.
Principalmente, dan informacin sobre el peso seco (contenido
macromolecular).
Turbidimetra: La turbidimetra mide la reduccin de la transmisin
de luz debido a partculas de una suspensin y cuantifica la luz
residual transmitida.
Estudios tericos y experimentales han mostrado que soluciones
diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del
tamao celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de
concentracin de peso seco. Esto quiere decir que, en soluciones
diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al peso seco,
independientemente del tamao celular del microorganismo. Sin
embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partcula o

23

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

por UFC (Unidad Formadora de Colonia) cuando los tamaos de las


clulas bacterianas son diferentes. Por esta razn, para estimar el
nmero de microorganismos totales o el nmero de microorganismos
viables de una suspensin bacteriana debe realizarse una "curva de
calibracin" con cada tipo de microorganismo, slo de esta forma es
posible relacionar Absorbancia (Densidad Optica) con el nmero de
microorganismos totales o con UFC.

Absorbancia en funcin del Peso Seco


Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que vara con la longitud de onda utilizada y representa


la inversa del peso seco del microorganismo que produce un aumento
de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0).
Peso seco: Concentracin celular bacteriana expresada en unidades
de peso seco (g/ml-mg/ml).
La relacin directa entre la absorbancia y el peso seco slo se aplica
para suspensiones diluidas de bacterias. Estas suspensiones no
deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores mayores
producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el
inconveniente de utilizar suspensiones diluidas puede involucrar un
mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el bajo nivel de
absorcin.

24

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Absorbancia en funcin del Peso Seco

Absorbancia en funcin del Nmero de Microorganismos Totales

En estos grficos se puede apreciar que suspensiones diluidas de dos


microorganismos diferentes con igual peso seco tienen la misma
absorbancia,
mientras
que
para
el
mismo
nmero
de
microorganismos totales la absorbancia de cada suspensin es
distinta.
Lectura complementaria Anexo 1

25

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Metabolismo microbiano.

4.1

Introduccin al metabolismo.
El metabolismo es el conjunto de reacciones bioqumicas que
permiten el crecimiento de un organismo (por lo tanto, en bacterias,
que conduce a la creacin de nuevas clulas). El metabolismo de la
clula comprende dos grandes tipos de reacciones:
1)

reacciones de mantenimiento, que suministran


a)

energa

b)

poder reductor

c)

precursores metablicos

2)
reacciones del anabolismo (biosntesis), que usan energa y
poder reductor procedente de las reacciones de mantenimiento.
El trmino metabolismo se utiliza cuando nos referimos a todos los
procesos qumicos que tienen lugar dentro de una clula. Los
elementos qumicos bsicos que utiliza una clula provienen del
medio ambiente y estos elementos qumicos son transformados por
la clula en los constituyentes caractersticos que componen dicha
clula. Estos compuestos qumicos se llaman nutrientes y el proceso
por el cual una clula transforma estos nutrientes en sus
componentes celulares se denomina anabolismo o biosntesis. La
biosntesis es un proceso que requiere energa. Esta energa se
obtiene del medio ambiente. Las clulas pueden utilizar 3 tipos
distintos de fuente de energa: luz, compuestos orgnicos y
compuestos inorgnicos. Aunque algunos organismos obtienen su
energa de la luz, la mayor parte lo hacen a travs de compuestos
qumicos. Cuando estos compuestos qumicos se rompen originando
compuestos ms simples se libera energa. Este proceso se denomina
catabolismo. Las clulas tambin necesitan energa para otras
funciones celulares como es la motilidad (movimiento celular) y
transporte de nutrientes. Como hemos visto existen dos procesos
bsicos de transformaciones qumicas en las clulas: anabolismo y
catabolismo. El resultado colectivo de las reacciones anablicas y
catablicas es el metabolismo.

26

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

CLASIFICACION DE LOS ORGANISMOS SEGUN SU FUENTE DE CARBONO Y


ENERGIA
FUENTE DE ENERGIA
FOTOTROFOS
QUIMIOTROFOS
AUTOTROFOS
HETEROTROFOS

FUENTE DE CARBONO

LUZ
QUIMICA
CO2
COMPUESTOS ORGANICOS

FOTOAUTOTROFOS
FOTOHETEROTROFOS
QUIMIOAUTOTROFOS
QUIMIOHETEROTROFOS

FUENTE DE ENERGIA

FUENTE DE CARBONO

LUZ
LUZ
QUIMICA
QUIMICA

CO2
COMPUESTOS ORGANICOS
CO2
COMPUESTOS ORGANICOS

Fotoautotrofos:Vegetales, algas, bacterias fotosintticas.


Fotoheterotrofos: Bacterias
Quimioautotrofos: Bacterias.
Quimioheterotrofos: Animales, Protozoos, bacterias. NUTRICION
MICROBIANA
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS


II.- NUTRIENTES
1.- MACRONUTRIENTES
2.- MICRONUTRIENTES
3.- VITAMINAS Y HORMONAS
4.- ELEMENTOS TRAZA
III.- PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE

I.- NUTRICION DE LOS MICROORGANISMOS


La gran meta que tiene un microorganismo es crecer y dividirse; para ello necesita duplicar
el material que posee. Las clulas utilizan elementos qumicos que provienen del medio

27

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

ambiente para transformarlos en los constituyentes caractersticos que componen dicha


clula. Estos compuestos qumicos se llaman nutrientes y el proceso por el cual una clula
transforma estos nutrientes en sus componentes celulares se denomina anabolismo o
biosntesis. La biosntesis es un proceso que requiere energa. Esta energa se obtiene del
medio ambiente. Las clulas pueden utilizar tres tipos distintos de fuentes de energa: luz,
compuestos orgnicos o compuestos inorgnicos. Aunque algunos organismos obtienen su
energa de la luz, la mayor parte lo hacen a travs de compuestos qumicos. Cuando estos
compuestos qumicos se rompen originando compuestos ms simples se libera energa y a
este proceso se le denomina catabolismo. El resultado colectivo de las reacciones
anablicas y catablicas es el metabolismo.
Cuando los microorganismos se separan de su hbitat (donde adquieren los nutrientes) y se
cultivan en laboratorios o industrias se deben usar medios de cultivo que contengan los
elementos qumicos necesarios para su crecimiento.

II.- NUTRIENTES
Los nutrientes que requiere una clula para su crecimiento se pueden clasificar en los
siguientes grupos:
1.- Macronutrientes: carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno.
2.- Micronutrientes: fsforo, potasio, azufre, magnesio.
3.- Vitaminas y hormonas
4.- Elementos traza: zinc, cobre, manganeso, molibdeno, cobalto.

1.- MACRONUTRIENTES
Carbono. Todos los organismos necesitan carbono en alguna de sus formas. El carbono
forma el esqueleto de los tres ms importantes nutrientes (carbohidratos, lpidos y
protenas) que se utilizan para la obtencin de energa as como material celular. Los
microorganismos que utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono se llaman
heterotrofos y aquellos que utilizan el CO2 como fuente de carbono se llaman autotrofos.
Hidrgeno y Oxgeno. El hidrgeno y oxgeno forman parte de muchos compuestos
orgnicos. Se encuentran en el H2O, como componentes de nutrientes y en la atmsfera.
Adems el O2 se utiliza en la respiracin aerbica como aceptor terminal de electrones.
Nitrgeno. Todos los organismos requieren nitrgeno. El nitrgeno es metabolizado y
entra a formar parte de las protenas, cidos nucleicos y polmeros de la pared celular. Las
fuentes de nitrgeno que pueden ser utilizadas por diferentes organismos incluyen el N2
atmosfrico en algunos procariotas, otros utilizan compuestos inorgnicos como nitratos,
nitritos o sales de amonio, mientras que otros requieren compuestos nitrogenados orgnicos
como son los aminocidos o pptidos.

28

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

2.- MICRONUTRIENTES (c.a. 0,2 g / l)


Fsforo. El fsforo es esencial para la sntesis de cidos nucleicos y ATP; tambin forma
parte de los fosfolpidos y polmeros de la pared celular. El fsforo se suministra
normalmente como fosfato inorgnico; alternativamente se puede utilizar fosfato orgnico
como son los glicerofosfatos y fosfolpidos.
Potasio. El in potasio acta como coenzima y probablemente como catin en la estructura
de RNA y otras estructuras aninicas celulares.
Azufre. El azufre es necesario para la biosntesis de los aminocidos cisteina, cistina y
metionina. Tambin forma parte de coenzimas como biotina, coenzima A y ferredoxina. El
azufre se suministra en forma inorgnica como sulfato u orgnica como cistina, cisteina y
metionina.
Magnesio. Se utiliza como cofactor de reacciones enzimticas donde acta el ATP.

3.- VITAMINAS Y HORMONAS


Las vitaminas se clasifican en dos grupos, hidrosolubles y liposolubles. Dentro de stas
ltimas la vitamina A, D y E no son necesarias para el crecimiento de las bacterias. Todas
las vitaminas hidrosolubles, excepto el cido ascrbico, son necesarias para el crecimiento
de bacterias. La mayor parte de las vitaminas hidrosolubles son componentes de coenzimas.
En los medios indefinidos se utiliza como fuente de vitaminas el extracto de levaduras.

4.- ELEMENTOS TRAZA (c.a. 25 mg / l)


En general los requerimientos de elementos traza se conocen slo cualitativamente ya que
es difcil demostrar su requerimiento debido a que las cantidades necesarias se suelen
encontrar a menudo como contaminantes en otros constituyentes del medio. Son necesarios
para activar algunos enzimas; por ejemplo, el Mo6+ se necesita en la nitrogenasa que es el
enzima que cataliza la conversin del nitrgeno atmosfrico en amonaco en la fijacin
biolgica de nitrgeno.
III.- PERMEABILIDAD Y TRANSPORTE
La membrana citoplsmica controla el paso de los nutrientes dentro de la clula, as como
hacia fuera de la clula. Existen 4 mecanismos que regulan el transporte de nutrientes:
1.- DIFUSION PASIVA

29

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Las molculas de H2O y algunos nutrientes liposolubles pasan libremente a travs de la


membrana hasta equilibrar concentraciones. No hay consumo de energa.
2.- DIFUSION FACILITADA
Los nutrientes se unen a una protena transportadora para atravesar la membrana pasando
de mayor a menor concentracin. No hay consumo de energa.
3.- TRANSPORTE ACTIVO
La mayor parte de los nutrientes son transportados mediante este mecanismo. Este proceso
permite concentrar altos niveles de nutrientes necesarios para las actividades metablicas
dentro de la clula. Hay consumo de energa. El ATP distorsiona el sitio de unin de la
protena transportadora dificultando a la molcula salir de la clula.
4.- TRANSPORTE POR TRANSLOCACION DE GRUPO
En este tipo la protena transportadora es un enzima que aade un grupo fosfato del cido
fosfoenolpirvico al nutriente durante el transporte. Este nutriente alterado ya no es capaz
de unirse a la protena transportadora por lo que se acumula dentro de la clula.

La energa y el poder reductor en el metabolismo microbiano:


papel del ATP y de los piridin nucleotidos
La energa qumica es la energa liberada cuando un compuesto
orgnico o inorgnico es oxidado. En biologa las unidades de energa
ms usadas son la kilocalora (Kcal) y el kilojulio (KJ). 1 Kcal = 4.184
KJ. La utilizacin de energa qumica en los organismos vivos est
implicada con las reacciones de oxidacin-reduccin, llamadas
REDOX ya que por cada oxidacin que ocurre tiene que haber una
reduccin. Una oxidacin se define como la eliminacin de electrones
de una sustancia y una reduccin se define como la adicin de
electrones a una sustancia. En bioqumica, las oxidaciones y
reducciones frecuentemente conllevan no slo la transferencia de
electrones, sino de tomos enteros de hidrgeno.
La energa liberada como resultado de las reacciones redox debe de
conservarse para ser utilizada por la clula. En los organismos vivos,
la energa qumica liberada en las reacciones redox se transfiere
normalmente a una variedad de compuestos fosfato en la forma de
enlaces fosfato de alta energa. El compuesto ms importante en los
organismos vivos que contiene enlaces fosfato de alta energa es el
adenosn trifosfato (ATP). El ATP contiene 2 enlaces fosfato de alta

30

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

energa. Se puede considerar que el ATP tiene por objeto "atrapar"


una parte de la energa libre que queda disponible en las reacciones
catablicas e impulsar reacciones biosintticas al activar ciertos
metabolitos intermediarios de la biosntesis.
Adems del ATP, existen otros compuestos de alta energa que
activan intermediarios metablicos y as impulsan ciertas reacciones
de biosntesis:
Compuestos de alta energa
Guanina, Uridina
Citidina
Desoxitimidina
Acetil coenzima A

Causa activacin en la biosntesis de:


Protenas, Peptidoglicano, Glucgeno
Fosfolpidos
Lipopolisacridos
Acidos grasos

Ya hemos dicho que cuando ocurre una oxidacin tiene que haber
una reduccin, es decir una sustancia que acepte los electrones
eliminados. En la mayor parte de los casos, cada etapa de oxidacin
de un metabolito implica la eliminacin de dos electrones y, por ello,
la prdida simultnea de dos protones; esto equivale a la eliminacin
de dos tomos de hidrgeno y se denomina deshidrogenacin.
Inversamente, la reduccin de un metabolito implica la adiccin de
dos electrones y de dos protones y se considera una hidrogenacin.
Los compuestos que con ms frecuencia llevan a cabo oxidaciones y
reducciones biolgicas (es decir, que sirven como aceptores de
tomos de hidrgeno liberados en las reacciones de deshidrogenacin
y como donadores de tomos de hidrgeno requeridos para las
reacciones de hidrogenacin) son dos piridn nucletidos:
nicotinamida adenn dinucletido (NAD) y nicotinamida adenn
dinucletido fosfato (NADP). Estos dos piridn nucletidos pueden
fcilmente sufrir oxidaciones y reducciones reversibles en el grupo
nicotinamida. La oxidacin-reduccin reversible del NAD y del NADP
puede simbolizarse as:
NAD+ + 2H -----> NADH + H+
oxidado
reducido
NADP+ + 2H -----> NADPH + H+

Mecanismos de obtencion de ATP

31

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

En el metabolismo, el ATP se genera por dos mecanismos


bioqumicos fundamentalmente diferentes: Fosforilacin a nivel de
sustrato y fosforilacin oxidativa.
1.- Fosforilacin a nivel de sustrato: Mediante la fosforilacin a
nivel de sustrato, el ATP se forma a partir de ADP por transferencia
de un grupo fosfato de alta energa de un intermediario de una ruta
catablica. La siguiente reaccin sirve de ejemplo:

Acido 2 fosfoglicrico -----> Acido fosfoenolpirvico + ADP -----> Acido


pirvico
+
ATP
Como consecuencia de la prdida de una molcula de H2O, el enlace
ster de baja energa del fosfato del cido 2-fosfoglicrico se
convierte en un enlace enlico de alta energa en el cido
fosfoenolpirvico. Este fosfato de alta energa puede luego ser
transferido al ADP con lo que se produce una molcula de ATP.
2.- Fosforilacin oxidativa (Transporte de electrones): En los
diferentes modos de metabolismo microbiano, incluyendo la
respiracin y la fotosntesis, el ATP se genera por transporte de
electrones a travs de una cadena de molculas transportadoras que
tienen una orientacin fijada en la membrana celular. Los
componentes de la cadena son molculas transportadoras capaces de
sufrir oxidaciones y reducciones de modo reversible de tal manera
que cada miembro de la cadena es capaz de ser reducido por la
molcula transportadora que le precede y oxidado por la que le
sigue.
En la cadena de transporte de electrones algunos miembros
transportan tomos de hidrgeno (un electrn ms un protn),
mientras que otros transportan slamente un electrn. La orientacin
de los transportadores en la membrana celular es tal que los
transportadores de tomos de hidrgeno realizan el transporte hacia
fuera de la clula y los transportadores de electrones lo realizan
hacia el interior con lo que en cada confluencia se transporta fuera de
la clula un protn. La membrana celular es impermeable a los
protones; como resultado, el transporte de electrones retiene una
porcin de energa qumica liberada por la reaccin global de la
cadena (oxidacin del donador primario de electrones por el aceptor
terminal de electrones). Esta energa se utiliza en los sistemas de
permeasas, movilidad celular por flagelos y en la sntesis de ATP a
partir de ADP y fosfato inorgnico. Esta sntesis de ATP est
catalizada por un enzima complejo unido a la membrana la ATP
fosfohidrolasa (ATPasa). La fosforilacin oxidativa se puede explicar

32

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

aplicando el smil de la generacin de energa elctrica a travs de


agua embalsada. La membrana acta como una presa que retiene el
agua (en este caso los protones que se transportan fuera de la clula
a travs de la cadena transportadora de electrones); en el momento
que se abren las compuertas (ATPasa) este agua liberada (protones)
mueve la turbina (ATPasa) que genera energa elctrica (sntesis de
ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico).

4.2

Metabolismo primario
Suma de los procesos esenciales para las funciones bsicas de
la clula, como la gluclisis.
Un proceso microbiano tpico, en el que el producto se forma durante
la fase primaria del crecimiento, es el alcohol (etanol) obtenido por
fermentacin3. El etanol es un producto del metabolismo anxico de
la levadura y de algunas bacterias y se forma como parte del
metabolismo de la energa. Debido a que el crecimiento slo puede
tener lugar si puede producirse energa, la formacin de etanol tiene
lugar en paralelo con el crecimiento. En la imagen inferior, se
muestra una tpica fermentacin alcohlica indicando la formacin de
clulas, de etanol, y la utilizacin del azcar.

Sustrato de crecimiento

Clulas

Metabolito
Primario

Las clulas y el metabolito se producen


ms o menos simultneamente

En microbiologa industrial, el trmino fermentacin se refiere a cualquier proceso microbiano a


gran escala, sea o no sea bioqumicamente una fermentacin. De hecho, la mayora de las
fermentaciones industriales son aerbicas. El tanque en el cual se lleva a cabo la fermentacin
industrial se denomina fermentador y el microorganismo implicado es el agente de la
fermentacin
3

33

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

34

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

4.3

Metabolismo secundario
Suma de los procesos no esenciales para las funciones
metablicas bsicas de la clula. Estos procesos estn
asociados a ciertas ventajas adaptativas, como los
mecanismos de defensa (antibiticos, toxinas, etc.).

Un tipo ms complejo de productos industriales es aquel en el que el producto


deseado no se produce durante la fase primaria del crecimiento sino durante la
fase estacionaria. Los metabolitos producidos durante la fase estacionaria se
denominan metabolitos secundarios y son algunos de los metabolitos ms
comunes y ms importantes de inters industrial. Los ms conocidos y ms
ampliamente estudiados son los antibiticos y en la imagen inferior puede
verse la cintica del proceso de obtencin de la penicilina. Mientras que el
metabolismo primario es generalmente similar en todas las clulas, el
metabolismo secundario presenta claras diferencias entre un organismo y otro.
Las caractersticas reconocidas del metabolismo secundario son:
1. Cada metabolito secundario slo lo forman relativamente pocos
organismos.
2. Los metabolitos secundarios, aparentemente no son esenciales para el
crecimiento y la reproduccin.
3. La formacin de metabolitos secundarios es extremadamente dependiente
de las condiciones de crecimiento, especialmente de la composicin del medio.
Con frecuencia, se produce la represin de la formacin del metabolito
secundario.
4. Con frecuencia, los metabolitos secundarios se producen como un grupo
de estructuras estrechamente relacionadas. Por ejemplo, se ha visto que una
sola cepa de una especia del Streptomyces produce 32 antibiticos distintos
pero relacionados, del tipo antraciclina.
5. Con frecuencia es posible obtener una espectacular superproduccin de
metabolitos secundarios, en tanto que los metabolitos primarios, ligados como
estn al metabolismo primario, usualmente no se pueden superproducir de una
manera tan espectacular.
Trofofase e idiofase. En el metabolismo secundario, las dos fases distintas
del metabolismo se denominan trofofase e idiofase. La trofofase es la fase de
crecimiento (el prefijo trofos, significa "crecimiento" ) mientras que la fase de
produccin de metabolitos es la idiofase. Si estamos tratando con un
metabolito secundario debemos asegurar que durante la trofofase se
proporcionen las condiciones apropiadas para un excelente crecimiento y que

35

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

las condiciones se alteren adecuadamente y en el momento oportuno para que


la formacin del producto sea excelente. En el metabolismo secundario, la
produccin en cuestin puede no derivarse del sustrato primario del
crecimiento, sino a partir de un producto que l mismo form a partir del
sustrato primario del crecimiento. Por tanto, el metabolito secundario se
produce, generalmente, a partir de varios productos intermedios que se
acumulan, bien en el medio de cultivo o bien en las clulas, durante el
metabolismo primario. Una caracterstica de los metabolitos secundarios es
que las enzimas implicadas en la produccin del metabolito secundario estn
regulados separadamente de las enzimas del metabolismo primario. En
algunos casos se han identificado inductores especficos de la produccin de
metabolitos secundarios. Por ejemplo, se ha identificado un inductor especfico
de la produccin de estreptomicina, un compuesto denominado Factor A.

Sustrato de crecimiento

Clulas

Metabolito
Primario

Metabolito
Secundario
Despus de producidas las clulas y el
metabolito primario, las clulas
convierten el metabolito primario en uno
secundario

36

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Sustrato de crecimiento

Clulas

Metabolito
Primario

Metabolito
Secundario
Despus de producidas las clulas el
sustrato se convierte en un metabolito
secundario durante un posterior
crecimiento
Caractersticas de los metabolitos secundarios

Especficos de un grupo de organismos


No esenciales para el crecimiento
Dependiente de las condiciones de crecimiento
Producidos como grupo de estructuras relacionadas:
Una cepa de Streptomyces produce 32 antibiticos
distintos del tipo antraciclina
Puede obtenerse una superproduccin espectacular

Relacin entre el metabolismo primario y el secundario. La


mayora de los metabolitos secundarios son molculas orgnicas
complejas que para su formacin requieren un gran nmero de
reacciones enzimticas especficas. Se sabe, por ejemplo, que en la
sntesis del antibitico tetraciclina estn implicados al menos 72
pasos enzimticos separados y ms de 25 en la sntesis de la
eritromicina, y que ninguna de estas reacciones tiene lugar durante
el metabolismo primario. Sin embargo, las vas metablicas de estos
metabolitos secundarios arrancan del metabolismo primario porque
los materiales de partida para el metabolismo secundario vienen de
las vas biosintticas principales.
Muchos metabolitos secundarios estructuralmente complejos, se
originan a partir de precursores estructuralmente muy similares.

37

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

4.4

Mecanismos de obtencin de energa por microorganismos


quimioheterotrofos
Como ya hemos dicho, los organismos quimioheterotrofos son
aquellos que utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono
y energa. Estos organismos son los animales, protozoos, hongos y
casi todas las bacterias. Las vas utilizadas por los quimioheterotrofos
para la oxidacin de compuestos orgnicos y la conservacin de la
energa en ATP se pueden dividir en dos grupos:
1.- Fermentacin: cuando las reacciones redox ocurren en ausencia
de cualquier aceptor terminal de electrones.
2.- Respiracin: cuando se utiliza el oxgeno molecular o algn otro
agente oxidante como aceptor terminal de electrones. Aerbica:
oxgeno; Anaerbica: Nitrato, Sulfato, Fumarato, Oxido de
Trimetilamina.

Fermentacin
Existen muchos tipos de fermentaciones pero en todas ellas slo
ocurre una oxidacin parcial de los tomos de carbono del compuesto
orgnico y por lo tanto slo se produce una pequea parte de la
energa disponible.
La oxidacin en una fermentacin est acoplada a la reduccin de un
compuesto orgnico generado a partir del catabolismo del sustrato
inicial, por lo que no son necesarios aceptores externos de
electrones. El ATP en la fermentacin se produce a partir de la
fosforilacin a nivel de sustrato. Como consecuencia de la no
participacin de un aceptor externo de electrones, el sustrato
orgnico experimenta una serie de reacciones oxidativas y reductoras
equilibradas; los piridn nucletidos reducidos en un paso del proceso
son oxidados en otro. Este principio general se ilustra en dos
fermentaciones: la fermentacin alcohlica (tpica del metabolismo
anaerbico de la glucosa por levaduras) y la fermentacin
homolctica (tpica del metabolismo de algunas bacterias lcticas).
Ambos procesos fermentativos utilizan la ruta Embden-Meyerhof: las
dos molculas de NAD reducidas por esta ruta se reoxidan en
reacciones que implican un ulterior metabolismo del piruvato. En el
caso de la fermentacin homolctica, esta oxidacin ocurre como
consecuencia directa de la reduccin del cido pirvico a cido

38

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

lctico. En el caso de la fermentacin alcohlica, el cido pirvico se


descarboxila primero para formar acetaldehdo y la reoxidacin del
NADH ocurre en paralelo con la reduccin del acetaldehdo para
formar etanol.
Las bacterias pueden producir productos fermentativos finales
distintos al cido lctico y al etanol debido a las diferencias en el
metabolismo del cido pirvico. Estos productos finales pueden ser
cido frmico, 2,3 butanodiol, isopropanol, cido butrico, butanol. La
mayor parte de las fermentaciones bacterianas pueden originar
varios productos finales, pero ninguna fermentacin da lugar a todos
los productos finales.
Resultados de la fermentacin de la glucosa. El resultado final
de la glicolisis es el consumo de glucosa, la sntesis de 2 ATP y la
produccin de productos de fermentacin. Para el organismo el
producto ms importante es el ATP y los productos de la
fermentacin son productos de desecho. Sin embargo, estos
productos son muy importantes para el cervecero, panadero,
quesero. La fermentacin anaerbica de glucosa por levaduras
produce etanol que es el producto principal de las bebidas
alcohlicas, y la produccin de cido lctico es el paso inicial en la
produccin de productos lcteos fermentados incluyendo el queso.
Para los panaderos, la produccin de CO2 por la fermentacin de
levaduras es el paso esencial en el esponjamiento del pan.
El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de
realizar metabolismo fermentador y respiracin aerobia (anaerobios
facultativos). En presencia de O2 utilizan la respiracin aerbica,
pero pueden emplear la fermentacin si no hay O2 libre en su medio
ambiente. Pasteur fu el primero en observar que el azcar es
convertido en alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que
en presencia de aire se forma muy poco o nada de alcohol, siendo el
CO2 el principal producto final de esta reaccin aerbica. Este efecto
indica el mayor rendimiento energtico de la respiracin sobre la
fermentacin.
Respiracin aerbica (Rutas de utilizacin del piruvato por
aerobios)
La glucosa, tanto en el metabolismo respiratorio como en el
fermentativo, se transforma en cido pirvico por una de las
siguientes rutas:
Embden-Meyerhof (eucariotas y procariotas)

39

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Pentosa fosfato (eucariotas y procariotas)


Entner Doudoroff (slo en ciertos procariotas
como alternativa a la ruta Embden-Meyerhof)

Embden-Meyerhof

40

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Entner Doudoroff

41

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

En la mayor parte de los aerobios, el piruvato sufre una


descarboxilacin oxidativa catalizada por un sistema enzimtico
llamado complejo piruvato deshidrogenasa que produce acetilcoenzima A (acetil-CoA). El acetil-CoA es un metabolito precursor
que puede entrar en rutas biosintticas; alternativamente, puede ser
oxidado completamente a CO2 a travs de una ruta conocida como
ciclo de Krebs o ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA). Este ciclo es
la principal va de generacin de ATP en los heterotrofos aerbicos
(por paso de electrones a travs de una cadena transportadora de
electrones desde los piridn nucletidos reducidos). El ciclo TCA
genera adems tres metabolitos precursores, a-cetoglutarato,
succinil-CoA y oxalacetato. El ciclo TCA efecta la oxidacin completa
de una molcula de cido actico a CO2, produce tres molculas de
piridn nucletidos reducidos, una molcula de ATP y una molcula de
FAD reducido (flavoprotena que cede electrones a una cadena de
transporte independiente de piridn nucletidos).
Reacciones anaplerticas. El ciclo TCA, adems de oxidar el acetil
CoA (dentro del ciclo) genera metabolitos precursores que son
utilizados en la biosntesis (fuera del ciclo), por lo que requiere un
aporte de cido oxalactico que reponga el utilizado en la sntesis de
los metabolitos precursores. Estas reacciones de sntesis de
oxalactico se denominan anaplerticas y fundamentalmente
consisten en reacciones que carboxilan el piruvato o el
fosfoenolpiruvato para obtener oxalacetato. Como resultado, el
carbono procedente del piruvato entra en el ciclo por dos rutas: va
acetil-CoA y va piruvato o fosfoenolpiruvato.
Ciclo del glioxilato. Durante la oxidacin de cido actico o cidos
grasos que se convierten en acetil-CoA sin la formacin intermedia
de piruvato, ocurre una modificacin especial del ciclo TCA conocida
como ciclo del glioxilato. Bajo estas circunstancias no puede
generarse oxalacetato a partir de piruvato o fosfoenolpiruvato
(anaplerticas) ya que en los microorganismos aerbicos no existe un
mecanismo que sintetice piruvato a partir de acetato. El oxalacetato
requerido para la oxidacin del acetato se repone mediante la
oxidacin de succinato y malato, que se produce por una secuencia
de dos reacciones. En la primera reaccin el isocitrato, que es un
intermediario normal del ciclo TCA, se rompe para dar succinato y
glioxilato. En la segunda reaccin el acetil-CoA se condensa con el
glioxilato para formar malato, el precursor inmediato del oxalacetato.
As, el ciclo del glioxilato acta como una secuencia anaplertica que
permite el funcionamiento normal del ciclo TCA.
Balance energtico de la respiracin aerbica. El TCA produce la

42

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

completa oxidacin del cido pirvico en 3 molculas de CO2 con la


produccin de 4 molculas de NADH y una molcula de FADH. El
NADH y FADH pueden ser reoxidados a travs del sistema de
transporte de electrones originando 3 molculas de ATP por NADH y
2 molculas de ATP por FADH. Tambin se produce una molcula de
ATP por fosforilacin a nivel de sustrato en la oxidacin de acetoglutarato a succinato. En total suman 15 molculas de ATP por
ciclo. Como por cada molcula de glucosa se originan 2 molculas de
cido pirvico, en total seran 30 molculas de ATP. A estos hay que
aadir las 2 molculas de ATP formadas en la glicolisis y los 2 NADH
que en presencia de O2 pueden ser reoxidados en el transporte de
electrones originando 6 molculas de ATP. En total son 38 ATP por
cada molcula de glucosa que contrastan con los 2 ATP producidos en
la fermentacin.
4.5

Mecanismos de obtencin de energa por microorganismos


auttrofos
A diferencia de lo que ocurre en los heterotrofos las reacciones de
mantenimiento de los autotrofos, que obtienen su carbono celular del
CO2, tienen lugar en dos fases bioqumicas distintas:
1.- Sntesis de metabolitos precursores
2.- Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos

Sntesis de metabolitos precursores: Ciclo de Calvin-Benson


Este ciclo es compartido por la mayora de los fotoautotrofos y los
quimioautotrofos. La mayor parte de los autotrofos (aunque hay
excepciones) fijan el CO2 mediante una reaccin catalizada por el
enzima ribulosa difosfato carboxilasa que convierte la ribulosa 1,5difosfato en cido 3-fosfoglicrico, a partir del cual se sintetizan
todos los metabolitos precursores. Sin embargo, la fijacin de CO2
depende de la disponibilidad de ribulosa difosfato. Por consiguiente,
parte del cido fosfoglicrico debe de utilizarse para regenerar este
aceptor de CO2 (Ribulosa difosfato). El ciclo de Calvin-Benson puede
dividirse en 3 fases:
1.- Fijacin de CO2
2.- Reduccin del CO2 fijado
3.- Regeneracin del aceptor de CO2
El ciclo de Calvin-Benson, en lugar de producir ATP y reducir piridn

43

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

nucletidos, los consume. En los autotrofos tales compuestos se


sintetizan por otros mecanismos.
Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos
A.- Quimioautotrofos
Los quimioautotrofos obtienen ATP y poder reductor mediante la
oxidacin de compuestos inorgnicos. Los substratos que pueden
servir como fuente de energa son H2, CO, H3N, NO2-, Fe2+ y
compuestos reducidos de azufre (H2S, S, S2O3-). En este tipo de
metabolismo respiratorio, los electrones de estos compuestos pasan
a travs de una cadena de transporte de electrones que genera ATP
por el modo que opera en los heterotrofos (fosforilacin oxidativa). El
aceptor terminal de electrones de la cadena de los quimioautotrofos
es normalmente el O2. Algunos de estos substratos inorgnicos (H2 y
CO) son agentes reductores suficientemente potentes como para
reducir directamente a los piridn nucletidos, pero otros no lo son.
Estos agentes reductores dbiles (NO2- y Fe2+) reducen los piridn
nucletidos por un proceso llamado transporte inverso de
electrones; en el cual parte de la fuerza motora de protones
generada en el funcionamiento de la cadena normal de transporte de
electrones se utiliza para impulsar electrones en una direccin
inversa, que de otro modo sera termodinmicamente desfavorable, a
travs de otra cadena que une el sustrato inorgnico con los piridn
nucletidos oxidados que resultan por ello reducidos.
B.- Fotoautotrofos
Los fotoautotrofos obtienen ATP y poder reductor mediante la
fotofosforilacin, proceso por el que los organismos fototrofos
convierten la energa radiante de la luz en energa metablica y
poder reductor. Existen dos tipos de fotosntesis, la oxignica y la
anoxignica.
Fotosntesis oxignica: La generacin de ATP y poder reductor se
lleva a cabo en dos centros de reaccin fotoqumica diferentes
llamados fotosistema I (PSI) y fotosistema II (PSII), los cuales
contienen clorofila y se localizan en las membranas de los tilacoides.
Estos dos fotosistemas actan de una manera conjunta en
cianobacterias, algas y plantas. i) Cuando la luz es absorbida por las
molculas de clorofila existentes en el PSI, stas molculas de
clorofila se fotoactivan lo que les permite oxidarse. Los electrones
eliminados de las molculas de clorofila del PSI son aceptados por el
NADP reducindose a NADPH2. Todo esto deja a las molculas de
clorofila del PSI temporalmente deficientes en electrones lo que les
confiere una carga positiva. ii) De la misma manera, la luz absorbida

44

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

por las molculas de clorofila existentes en el PSII provoca que un


electrn sea eliminado de cada molcula. Estos electrones pasan a
travs de un sistema transportador de electrones hasta que llegan al
PSI donde son aceptados por las molculas de clorofila deficientes en
electrones que se reducen. Este sistema transportador de electrones
es parecido al descrito en la fosforilacin oxidativa, utilizndose la
energa liberada para la sntesis de ATP. La diferencia radica en que
el donador primario de electrones es la clorofila del PSII y el aceptor
terminal de electrones es la clorofila del PSI (NADH2 y O2
respectivamente en la fosforilacin oxidativa). iii) En este punto la
clorofila del PSII es deficiente en electrones. Sin embargo, esta
clorofila es un fuerte agente oxidante que obtiene los electrones
necesarios para reducirse de las molculas de H2O. Esta oxidacin
del H2O genera oxgeno gaseoso. Las cianobacterias, algas y plantas
son organismos que generan oxgeno mediante la fotosntesis
oxignica, siendo los responsables de la produccin mayoritaria del
oxgeno que existe en la atmsfera terrestre. La atmsfera de la
primitiva Tierra no contena oxgeno hasta que se desarrollaron las
cianobacterias hace entre 1000 y 3000 millones de aos. El
desarrollo de los organismos aerobios slo fu posible despus de
que se acumularan en la atmsfera apreciables cantidades de O2
(generado mediante la fotosntesis oxignica de las cianobacterias).
Fotosntesis anoxignica: Los fototrofos anoxignicos convierten la
energa de la luz en energa qumica necesaria para el crecimiento;
sin embargo, y al contrario que las plantas, algas y cianobacterias en
este proceso de transformacin de la energa no se produce oxgeno
y por ello se le llama fotosntesis anoxignica. Otra diferencia es que
los fototrofos anoxignicos contienen un tipo de clrofila,
bacterioclorofila, diferente a la clorofila de las plantas. Estas bacterias
contienen adems carotenoides, pigmentos encargados de la
absorcin de la energa de la luz y posterior transmisin a la
bacterioclorofila. El color de estos pigmentos son los que le dan el
nombre a estas bacterias: bacterias rojas y bacterias verdes. En las
cianobacterias estos pigmentos captadores de luz son las ficobilinas,
de ah su nombre: bacterias azules (cianobacterias). En las bacterias
rojas y bacterias verdes slo existe un fotosistema, de tal manera
que la energa absorbida de la luz se utiliza para transportar un
electrn desde la clorofila a la cadena de transporte de electrones
que finalmente cede el electrn a la misma clorofila. En esta cadena
de transporte de electrones se genera la energa necesaria para
sintetizar ATP. Sin embargo, el transporte de electrones es cclico (el
donador primario de electrones y el aceptor terminal de electrones es
la misma clorofila) no existiendo por lo tanto reduccin de NADP a
NADPH. Esta reduccin se lleva a cabo mediante transporte inverso
de electrones gracias a los electrones donados por el hidrgeno

45

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

gaseoso (H2) o el sulfuro de hidrgeno (H2S). En cualquier caso


nunca se produce O2.

4.6

Biosntesis
La clula es una excelente "industria qumica" encargada de
ensamblar las intrincadas molculas de la vida. Muchas de estas
sustancias qumicas "fabricadas" por las clulas son tan complejas
que todava no han podido ser sintetizadas artificialmente por los
qumicos en el laboratorio. Sin embargo, las bacterias pueden
sintetizarlas a partir de los nutrientes y a temperatura ambiente.
Estas sustancias son:
1.- Sustancias nitrogenadas, incluyendo protenas (como son los
enzimas) y cidos nucleicos (DNA y RNA).
2.- Carbohidratos, donde se incluyen polisacridos complejos como
es la parte correspondiente del peptidoglucano de la pared celular.
3.- Fosfolpidos, los cuales son componentes importantes de la
membrana citoplsmica.

4.6.1

Sustancias nitrogenadas
A.-

Protenas

El cido glutmico es el aminocido ms importante a partir del cual


las bacterias sintetizan otros aminocidos. En Escherichia coli el cido
glutmico se obtiene por reduccin aminada del cido acetoglutrico. Este cido glutmico se puede transformar en otros
aminocidos por dos mecanismos:

Transaminacin: el grupo amino del cido glutmico se intercambia


por un tomo de oxgeno de diversos cidos orgnicos
convirtindolos en aminocidos. Por ejemplo, la sntesis de alanina a
partir de la transaminacin del cido pirvico:

Acido glutmico (-NH2) + Acido pirvico (=O) --------> Acido a-cetoglutrico

46

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

(=O) + Alanina (-NH2)

Alteracin de la estructura molecular: la otra va por la cual el


cido glutmico se utiliza para sintetizar otros aminocidos es
alterando su estructura molecular. Estos cambios estructurales
requieren energa en forma de ATP. Un ejemplo es la sntesis de
prolina:

Acido glutmico + ATP + NADH2 --------> Semialdehido del cido glutmico +


ADP + P + NAD --------> H2O + Pirrolina-5-cido carboxlico + NADPH2 -------> Prolina + NAD
Una vez sintetizados, estos aminocidos deben activarse para as
poder ser utilizados en la sntesis de protenas. Las clulas activan los
aminocidos usando la energa del ATP de la siguiente manera:

Aminocido + ATP --------> Aminocido-AMP + Pirofosfato

La

sntesis

de

protenas

se

ver

en

captulos

posteriores.

B.- Acidos nucleicos


Los aminocidos son utilizados tambin por las clulas para sintetizar
nucletidos (bloques constituyentes de los cidos nucleicos). Existen
dos tipos de nucletidos segn el azcar que contengan:

Ribonucletidos: ribosa; sntesis de RNA


Deoxiribonucletidos: deoxiribosa; sntesis de
DNA
Estos nucletidos tambin se clasifican en dos grupos segn la base
nitrogenada que contengan:
Purinas: adenina o guanina
Pirimidinas: citosina, timina o uracilo
En la biosntesis de las purinas se requieren los aminocidos glicina,
asprtico y glutamina adems de energa en forma de ATP y GTP
(guanosina trifosfato). En la biosntesis de las pirimidinas se
requieren los aminocidos glutamina y cido asprtico as como

47

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

energa en forma de ATP. En ambos casos la ribosa fosfato se obtiene


a partir de glucosa.
Una vez que se han sintetizado los nucletidos, stos se activan por
ATP. En este proceso el nucletido, que ya contiene un grupo fosfato,
adquiere otros dos grupos fosfato. Por ejemplo, la guanosina
monofosfato se activa a guanosina trifosfato:

GMP + 2 ATP --------> GTP + 2 ADP


El ATP, adems de ser una molcula que intercambia energa, es la
forma activa de un nucletido, la adenosina monofosfato (AMP), que
se utiliza para sintetizar cidos nucleicos.

La biosntesis de DNA y RNA a partir de los nucletidos activados la


veremos en captulos posteriores
Carbohidratos
Los microorganismos sintetizan carbohidratos mediante diferentes
mecanismos segn sean autotrofos (CO2) o heterotrofos
(compuestos orgnicos como la glucosa) a partir de los cuales
obtienen los diferentes monosacridos. Estos monosacridos deben
ser activados para poder ser ensamblados en los polisacridos
correspondientes. Por ejemplo, la forma activada de la glucosa es
uridin difosfato glucosa (UDP-Glucosa) y la fuente de energa usada
es ATP y UTP:

Glucosa + ATP + UTP --------> UDP-Glucosa + ADP + Pirofosfato


Biosntesis del peptidoglucano de la pared celular: La sntesis
de los polisacridos bacterianos se puede ilustrar mediante la
biosntesis del peptidoglucano. Si bien este peptidoglucano est
localizado en la pared celular, la mayora de la energa utilizada en
este proceso biosinttico se consume dentro de la clula. Los
distintos pasos involucrados en este proceso se sumarizan en:
(i)

A partir de glucosa y utilizando ATP y UTP se obtiene Nacetilglucosamina-UDP (NAG-UDP).

(ii)

Algunas de estas molculas de NAG-UDP se utilizan para


obtener N-acetilmurmico-UDP (NAM-UDP). La energa
requerida en este paso se obtiene a partir del
fosfoenolpirvico.

48

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

(iii)

A cada molcula de NAM-UDP se le unen 5 aminocidos


para formar una cadena pentapeptdica. La adicin de cada
aminocido requiere energa en forma de ATP.

(iv)

El grupo UDP del NAM-pentapptido-UDP se reemplaza por


un lpido llamado lpido transportador.

(v)

A este NAM-pentapptido-lpido transportador se le une una


molcula de NAG-UDP para formar una unidad completa
activada que se insertar en la cadena de peptidoglucano.

(vi)

Esta unidad completa activada se transporta, con la ayuda


del lpido transportador, a travs de la membrana hacia la
pared celular.

(vii)

Una vez en la pared celular, esta unidad completa activada


se une a una cadena de peptidoglucano alargndose esta
cadena en una unidad.

(viii)

El ltimo paso es la unin de esta cadena a otras cadenas


para formar la malla del peptidoglucano que constituye la
estructura de la pared celular. Esta unin se inicia con la
eliminacin del quinto aminocido de la cadena
pentapeptdica, reaccin catalizada por el enzima
transpeptidasa. La rotura de este enlace libera energa que
es utilizada por la transpeptidasa para unir los
tetrapptidos de dos cadenas distintas (el tercer
aminocido de una con el cuarto aminocido de otra).

Lpidos
Los lpidos ms importantes de las clulas bacterianas son los
fosfolpidos que, junto con las protenas, forman la estructura de la
membrana citoplsmica. La va general por la cual los
microorganismos sintetizan fosfolpidos comienza a partir de
glucosa (6C) que a travs de la glucolisis se oxida originando dos
molculas de cido pirvico (3C) que a su vez se descarboxila a
acetil-CoA (2C); este acetil-CoA puede carboxilarse para formar
malonil-CoA (3C). Esta ltima reaccin consume energa en forma
de ATP:

Acetil-CoA + CO2 + ATP --------> Malonil-CoA + ADP + P


El acetil-CoA y malonil-CoA son las formas activas del cido actico y
malnico respectivamente las cuales se utilizan para sintetizar cidos
grasos de cadena larga:

49

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

(2C) Acetil-CoA + (3C) Malonil-CoA --------> Acetil-protena + Malonilprotena --------> (4C) Butiril-protena + CO2 --------> + Malonil-protena -------> (6C)-protena + CO2 --------> + Malonil-protena --------> --------> --------> -------> --------> (16C 18C)-protena + CO2

Una vez formados los cidos grasos de cadena larga, stos se utilizan
para sintetizar los fosfolpidos. Para ello se necesita adems glicerol
fosfato, compuesto que se obtiene por reduccin de la
dihidroxiacetona fosfato que es un intermediario en la glucolisis. A
cada molcula de glicerol fosfato se le unen dos molculas de cidos
grasos de cadena larga para formar una molcula de cido fosfatdico
que es un fosfolpido sencillo a partir del cual se sintetizan otros
fosfolpidos mediante la unin de otros grupos qumicos al grupo
fosfato. Por ejemplo, el aminocido serina se puede adiccionar al
cido fosfatdico para formar fosfatidilserina. La energa que se
requiere en esta reaccin se obtiene a partir de la citidina trifosfato
(CTP):

Acido fosfatdico + CTP + Serina --------> Fosfatidilserina + CMP + Pirofosfato

4.7

Mecanismos de obtencin de energa por microorganismos


quimioheterotrofos
Como ya hemos dicho, los organismos quimioheterotrofos son
aquellos que utilizan compuestos orgnicos como fuente de carbono
y energa. Estos organismos son los animales, protozoos, hongos y
casi todas las bacterias. Las vas utilizadas por los quimioheterotrofos
para la oxidacin de compuestos orgnicos y la conservacin de la
energa en ATP se pueden dividir en dos grupos:

1.- Fermentacin: cuando las reacciones redox ocurren en ausencia


de cualquier aceptor terminal de electrones.
2.- Respiracin: cuando se utiliza el oxgeno molecular o algn otro
agente oxidante como aceptor terminal de electrones. Aerbica:

50

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

oxgeno; Anaerbica:
Trimetilamina.

Nitrato,

Sulfato,

Fumarato,

Oxido

de

Fermentacin
Existen muchos tipos de fermentaciones pero en todas ellas slo
ocurre una oxidacin parcial de los tomos de carbono del compuesto
orgnico y por lo tanto slo se produce una pequea parte de la
energa
disponible.
La oxidacin en una fermentacin est acoplada a la reduccin de un
compuesto orgnico generado a partir del catabolismo del sustrato
inicial, por lo que no son necesarios aceptores externos de
electrones. El ATP en la fermentacin se produce a partir de la
fosforilacin a nivel de sustrato. Como consecuencia de la no
participacin de un aceptor externo de electrones, el sustrato
orgnico experimenta una serie de reacciones oxidativas y reductoras
equilibradas; los piridn nucletidos reducidos en un paso del proceso
son oxidados en otro. Este principio general se ilustra en dos
fermentaciones: la fermentacin alcohlica (tpica del metabolismo
anaerbico de la glucosa por levaduras) y la fermentacin
homolctica (tpica del metabolismo de algunas bacterias lcticas).
Ambos procesos fermentativos utilizan la ruta Embden-Meyerhof: las
dos molculas de NAD reducidas por esta ruta se reoxidan en
reacciones que implican un ulterior metabolismo del piruvato. En el
caso de la fermentacin homolctica, esta oxidacin ocurre como
consecuencia directa de la reduccin del cido pirvico a cido
lctico. En el caso de la fermentacin alcohlica, el cido pirvico se
descarboxila primero para formar acetaldehdo y la reoxidacin del
NADH ocurre en paralelo con la reduccin del acetaldehdo para
formar etanol.
Las bacterias pueden producir productos fermentativos finales
distintos al cido lctico y al etanol debido a las diferencias en el
metabolismo del cido pirvico. Estos productos finales pueden ser
cido frmico, 2,3 butanodiol, isopropanol, cido butrico, butanol. La
mayor parte de las fermentaciones bacterianas pueden originar
varios productos finales, pero ninguna fermentacin da lugar a todos
los productos finales.
Resultados de la fermentacin de la glucosa. El resultado final
de la glicolisis es el consumo de glucosa, la sntesis de 2 ATP y la
produccin de productos de fermentacin. Para el organismo el
producto ms importante es el ATP y los productos de la
fermentacin son productos de desecho. Sin embargo, estos
productos son muy importantes para el cervecero, panadero,
quesero. La fermentacin anaerbica de glucosa por levaduras

51

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

produce etanol que es el producto principal de las bebidas


alcohlicas, y la produccin de cido lctico es el paso inicial en la
produccin de productos lcteos fermentados incluyendo el queso.
Para los panaderos, la produccin de CO2 por la fermentacin de
levaduras es el paso esencial en el esponjamiento del pan.
El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de
realizar metabolismo fermentador y respiracin aerobia (anaerobios
facultativos). En presencia de O2 utilizan la respiracin aerbica,
pero pueden emplear la fermentacin si no hay O2 libre en su medio
ambiente. Pasteur fu el primero en observar que el azcar es
convertido en alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que
en presencia de aire se forma muy poco o nada de alcohol, siendo el
CO2 el principal producto final de esta reaccin aerbica. Este efecto
indica el mayor rendimiento energtico de la respiracin sobre la
fermentacin.

Respiracion aerobica (Rutas de utilizacin del piruvato por


aerobios)
La glucosa, tanto en el metabolismo respiratorio como en el
fermentativo, se transforma en cido pirvico por una de las
siguientes rutas:

a) Embden-Meyerhof (eucariotas y procariotas)


b) Pentosa fosfato (eucariotas y procariotas)
c) Entner Doudoroff (slo en ciertos procariotas como alternativa a la ruta
Embden-Meyerhof)

En la mayor parte de los aerobios, el piruvato sufre una


descarboxilacin oxidativa catalizada por un sistema enzimtico
llamado complejo piruvato deshidrogenasa que produce acetilcoenzima A (acetil-CoA). El acetil-CoA es un metabolito precursor
que puede entrar en rutas biosintticas; alternativamente, puede ser
oxidado completamente a CO2 a travs de una ruta conocida como
ciclo de Krebs o ciclo de los cidos tricarboxlicos (TCA). Este ciclo es
la principal va de generacin de ATP en los heterotrofos aerbicos
(por paso de electrones a travs de una cadena transportadora de
electrones desde los piridn nucletidos reducidos). El ciclo TCA
genera adems tres metabolitos precursores, a-cetoglutarato,
succinil-CoA y oxalacetato. El ciclo TCA efecta la oxidacin completa
de una molcula de cido actico a CO2, produce tres molculas de
piridn nucletidos reducidos, una molcula de ATP y una molcula de

52

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

FAD reducido (flavoprotena que cede electrones a una cadena de


transporte independiente de piridn nucletidos).
Reacciones anaplerticas. El ciclo TCA, adems de oxidar el acetil
CoA (dentro del ciclo) genera metabolitos precursores que son
utilizados en la biosntesis (fuera del ciclo), por lo que requiere un
aporte de cido oxalactico que reponga el utilizado en la sntesis de
los metabolitos precursores. Estas reacciones de sntesis de
oxalactico se denominan anaplerticas y fundamentalmente
consisten en reacciones que carboxilan el piruvato o el
fosfoenolpiruvato para obtener oxalacetato. Como resultado, el
carbono procedente del piruvato entra en el ciclo por dos rutas: va
acetil-CoA y va piruvato o fosfoenolpiruvato.
Ciclo del glioxilato. Durante la oxidacin de cido actico o cidos
grasos que se convierten en acetil-CoA sin la formacin intermedia
de piruvato, ocurre una modificacin especial del ciclo TCA conocida
como ciclo del glioxilato. Bajo estas circunstancias no puede
generarse oxalacetato a partir de piruvato o fosfoenolpiruvato
(anaplerticas) ya que en los microorganismos aerbicos no existe un
mecanismo que sintetice piruvato a partir de acetato. El oxalacetato
requerido para la oxidacin del acetato se repone mediante la
oxidacin de succinato y malato, que se produce por una secuencia
de dos reacciones. En la primera reaccin el isocitrato, que es un
intermediario normal del ciclo TCA, se rompe para dar succinato y
glioxilato. En la segunda reaccin el acetil-CoA se condensa con el
glioxilato para formar malato, el precursor inmediato del oxalacetato.
As, el ciclo del glioxilato acta como una secuencia anaplertica que
permite el funcionamiento normal del ciclo TCA.
Balance energtico de la respiracin aerbica. El TCA produce la
completa oxidacin del cido pirvico en 3 molculas de CO2 con la
produccin de 4 molculas de NADH y una molcula de FADH. El
NADH y FADH pueden ser reoxidados a travs del sistema de
transporte de electrones originando 3 molculas de ATP por NADH y
2 molculas de ATP por FADH. Tambin se produce una molcula de
ATP por fosforilacin a nivel de sustrato en la oxidacin de acetoglutarato a succinato. En total suman 15 molculas de ATP por
ciclo. Como por cada molcula de glucosa se originan 2 molculas de
cido pirvico, en total seran 30 molculas de ATP. A estos hay que
aadir las 2 molculas de ATP formadas en la glicolisis y los 2 NADH
que en presencia de O2 pueden ser reoxidados en el transporte de
electrones originando 6 molculas de ATP. En total son 38 ATP por
cada molcula de glucosa que contrastan con los 2 ATP producidos en
la fermentacin

53

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

4.8

Mecanismos de obtencion de energia por microorganismos


autotrofos
A diferencia de lo que ocurre en los heterotrofos las reacciones de
mantenimiento de los autotrofos, que obtienen su carbono celular del
CO2, tienen lugar en dos fases bioqumicas distintas:
1.- Sntesis de metabolitos precursores
2.- Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos

Sntesis de metabolitos precursores: Ciclo de Calvin-Benson


Este ciclo es compartido por la mayora de los fotoautotrofos y los
quimioautotrofos. La mayor parte de los autotrofos (aunque hay
excepciones) fijan el CO2 mediante una reaccin catalizada por el
enzima ribulosa difosfato carboxilasa que convierte la ribulosa 1,5difosfato en cido 3-fosfoglicrico, a partir del cual se sintetizan
todos los metabolitos precursores. Sin embargo, la fijacin de CO2
depende de la disponibilidad de ribulosa difosfato. Por consiguiente,
parte del cido fosfoglicrico debe de utilizarse para regenerar este
aceptor de CO2 (Ribulosa difosfato). El ciclo de Calvin-Benson puede
dividirse en 3 fases:
1.- Fijacin de CO2
2.- Reduccin del CO2 fijado
3.- Regeneracin del aceptor de CO2

El ciclo de Calvin-Benson, en lugar de producir ATP y reducir piridn


nucletidos, los consume. En los autotrofos tales compuestos se
sintetizan por otros mecanismos.

Sntesis de ATP y piridn nucletidos reducidos


Los quimioautotrofos obtienen ATP y poder reductor mediante la
oxidacin de compuestos inorgnicos. Los substratos que pueden
servir como fuente de energa son H2, CO, H3N, NO2-, Fe2+ y
compuestos reducidos de azufre (H2S, S, S2O3-). En este tipo de
metabolismo respiratorio, los electrones de estos compuestos pasan
a travs de una cadena de transporte de electrones que genera ATP
por el modo que opera en los heterotrofos (fosforilacin oxidativa). El

54

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

aceptor terminal de electrones de la cadena de los quimioautotrofos


es normalmente el O2. Algunos de estos substratos inorgnicos (H2 y
CO) son agentes reductores suficientemente potentes como para
reducir directamente a los piridn nucletidos, pero otros no lo son.
Estos agentes reductores dbiles (NO2- y Fe2+) reducen los piridn
nucletidos por un proceso llamado transporte inverso de electrones;
en el cual parte de la fuerza motora de protones generada en el
funcionamiento de la cadena normal de transporte de electrones se
utiliza para impulsar electrones en una direccin inversa, que de otro
modo sera termodinmicamente desfavorable, a travs de otra
cadena que une el sustrato inorgnico con los piridn nucletidos
oxidados que resultan por ello reducidos.

4.9

Relaciones de las bacterias con el oxgeno


Dependen en buena medida de la disponibilidad de las enzimas
eliminadoras de perxidos y superxidos, que acabamos de estudiar.
Veamos los tipos de bacterias segn sus relaciones con el oxgeno:
Bacterias aerobias: Necesitan O2 para crecer, ya que lo usan (al
menos en algunas ocasiones) como aceptor final de electrones para
la captacin de energa qumica.
Algunos aerobios requieren para crecer tensiones de oxgeno
inferiores a la atmosfrica (del 2 al 10% de O2, en lugar del 20%). A
estas bacterias se las califica como microaerfilas.
Algunas microaerfilas lo son permanentemente
(microaerfilas estrictas).
Otras se comportan como microaerfilas slo cuando

crecen usando determinadas fuentes de energa qumica o


de nitrgeno (microaerfilas condicionales).
Bacterias anaerobias: Son aquellas que pueden crecer en ausencia

de oxgeno, debido a que pueden usar aceptores finales distintos del


oxgeno, o porque poseen metabolismo estrictamente fermentativo.

Anaerobias estrictas: El oxgeno les resulta txico ya que carecen


de catalasa, peroxidasa y SOD, y por lo tanto, no pueden eliminar los
productos nocivos resultantes del oxgeno.(Por ejemplo, las especies
de Clostridium, y las arqueobacterias metanognicas).
Anaerobias aerotolerantes (= aerodricas): Al igual que las
anteriores, presentan un metabolismo energtico anaerobio, pero
soportan el oxgeno debido a que poseen enzimas detoxificadores.
Ejemplos tpicos son las bacterias del cido lctico, como

55

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Streptococcus, Leuconostoc, Lactobacillus). Tambin se les llama


anaerobios indiferentes.
Lectura completara
Anexo 1

CRECIMIENTO MICROBIANO
Dr. Pedro F. Mateos
Departamento de Microbiologa y Gentica. Facultad de Farmacia. Universidad de
Salamanca

I.- TIEMPO DE GENERACION


II.- CURVA DE CRECIMIENTO
III.- CRECIMIENTO SINCRONICO
IV.- CULTIVO CONTINUO
V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO
VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO

Temperatura
pH
Agua
Oxgeno

I.- TIEMPO DE GENERACION


Las principales reacciones de la sntesis celular son reacciones de polimerizacin, proceso
por el cual los polmeros (macromolculas) se sintetizan a partir de monmeros: sntesis de
DNA, RNA y protenas; que una vez sintetizadas se ensamblan formando las estructuras
celulares tales como la envuelta celular, flagelos, ribosomas, cuerpos de inclusin, etc. En
la mayor parte de los microorganismos este crecimiento contina hasta que las clulas se
dividen en dos nuevas clulas. El tiempo que requiere una clula para completar su ciclo es
muy variable y depende de factores nutricionales y genticos. El intervalo que transcurre en
la formacin de dos clulas a partir de una clula se llama generacin y el tiempo requerido
para esto es el tiempo de generacin.

56

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Clculo del tiempo de generacin


Tiempo de generacin (G) es el tiempo requerido para que una clula se divida o una
poblacin se duplique.
t
G = ----n

Si partimos de una clula al cabo de una generacin habr duplicado su nmero y as


sucesivamente en cada generacin. Como se puede comprobar el crecimiento se produce en
progresin geomtrica:
1 generacin -------------> 2 clulas = 21
2 generaciones -------------> 4 clulas = 22
3 generaciones -------------> 8 clulas = 23
4 generaciones -------------> 16 clulas = 24
5 generaciones -------------> 32 clulas = 25
Si partimos de N clulas (en microbiologa los estudios se realizan con poblaciones), a un
tiempo determinado (Ta) tenemos un nmero de clulas determinadas (Na). En la primera
generacin se duplicar el nmero de clulas (2Na) y as sucesivamente de tal manera que
al cabo de un tiempo determinado Tb el nmero de clulas determinadas ser Nb (Nb = 2n
Na) donde n es el nmero de generaciones transcurridas desde Ta hasta Tb. En esta frmula
(Nb = 2n Na) conocemos todos los parmetros excepto el nmero n de generaciones
transcurridas por lo que aplicando logaritmos ser posible calcularlo. Una vez obtenido el
nmero de generaciones n transcurridas en un tiempo t podremos calcular el tiempo de
generacin G para ese microorganismo.
Ta -------------> Na
1 generacin -------------> 2Na = 21 Na
2 generaciones -------------> 4Na = 22 Na
3 generaciones -------------> 8Na = 23 Na
4 generaciones -------------> 16Na = 24 Na
5 generaciones -------------> 32Na = 25 Na
n generaciones (Tb) -------------> Nb = 2n Na

Nb = 2n Na

lg Nb = n lg 2 + lg Na
lg Nb - lg Na
n = -----------------------lg 2
lg Nb / Na
n = ----------------

57

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

lg 2
Nb
n = 3,3 lg -------Na
t
G = -------------------3,3 lg Nb / Na

El tiempo de generacin de la levadura Saccharomyces cerevisiae es de 90 minutos y el de


la bacteria Escherichia coli es 20 minutos. Esta bacteria tiene un crecimiento muy rpido de
tal manera que a partir de una sla clula se obtienen al cabo de 8 horas (8 x 60 = 480
minutos; 480 : 20 = 24 generaciones; 224 = 2 x 106 clulas) 2 millones de clulas. Esta
misma bacteria al cabo de dos das se habra multiplicado hasta 2,2 x 1043 clulas. Una
bacteria pesa aproximadamente 10-15 - 10-11 gramos por lo que el peso de todas estas
clulas es de aproximadamente 2,2 x 1030 gramos que equivalen a 8 veces el peso de la
Tierra.

II.- CURVA DE CRECIMIENTO


Es la representacin grfica del logaritmo del nmero de clulas frente al tiempo. La curva
terica sera una recta pues los microorganismos estaran creciendo constantemente pero en
la prctica la curva presenta distintas fases:

Fase de latencia: perodo de adaptacin de un microorganismo a un nuevo medio


de cultivo.
Fase exponencial o logartmica: aumento regular de la poblacin que se duplica a
intervalos regulares de tiempo (G).
Fase estacionaria: cese del crecimiento por agotamiento de nutrientes, por
acumulacin de productos txicos, etc.
Fase de declinacin o muerte: el nmero de clulas que mueren es mayor que el
nmero de clulas que se dividen.

Las propiedades de un microorganismo dependern de la fase de la curva en que se


encuentren (la produccin de antibiticos se lleva a cabo en la fase estacionaria).

III.- CRECIMIENTO SINCRONICO


Hasta ahora se ha descrito el modelo de crecimiento de poblaciones bacterianas. Estos
estudios no permiten concluir nada sobre el tipo de crecimiento de las distintas clulas ya
que en la mayora de los cultivos bacterianos el tamao celular est distribuido al azar. Para

58

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

obtener informacin sobre el tipo de crecimiento de las distintas bacterias debe recurrirse a
los cultivos sincrnicos, es decir, cultivos en los que todos los individuos de una poblacin
estn en la misma etapa del ciclo celular. Esto se puede conseguir por diversas tcnicas:
Induccin: cambios repetitivos de temperatura o suministrando nutrientes.
Seleccin: filtracin o centrifugacin diferencial.
Una curva de crecimiento sincrnico es del siguiente tipo: el nmero de clulas del cultivo
permanece aproximadamente constante durante el tiempo en el que las clulas recin
formadas aumentan de tamao; luego, el nmero de clulas se duplica de manera brusca.

IV.- CULTIVO CONTINUO


Consiste en mantener la poblacin microbiana en fase exponencial de crecimiento. Se
utiliza en fermentaciones industriales que requieren actividad metablica mxima. Los
sistemas de cultivo contnuo pueden hacerse funcionar como quimiostatos o como
turbidostatos. En un quimiostato la velocidad de flujo de entrada y salida de nutrientes se
mantiene a un valor determinado de tal manera que la velocidad de crecimiento del cultivo
queda ajustada a esa velocidad de flujo. En un turbidostato el sistema incluye un dispositivo
ptico que regula la turbidez controlando la velocidad de flujo.

V.- DETERMINACION DEL CRECIMIENTO MICROBIANO


El clculo del nmero de clulas que existen en una suspensin se puede llevar a cabo
mediante el recuento celular (microscopa, nmero de colonias), masa celular (peso seco,
medida del nitrgeno celular, turbidimetra) o actividad celular (grado de actividad
bioqumica en relacin al tamao de la poblacin). Todos estos mtodos se clasifican en
dos apartados: mtodos directos y mtodos indirectos.

Mtodos directos:
o
o
o
o

Recuento del nmero de clulas en una cmara Thoma


Peso seco celular
Determinacin de nitrgeno o de protenas totales
Determinacin de DNA

Mtodos indirectos:
o
o
o
o
o

Recuento de colonias en placa


Recuento sobre filtro de membrana
Consumo de oxgeno
Liberacin de dixido de carbono
Concentracin de un enzima constitutivo

59

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

o
o
o

Decoloracin de un colorante
Incorporacin de precursores radiactivos
Medida de la turbidez

VI.- EFECTO DE LOS FACTORES AMBIENTALES SOBRE EL CRECIMIENTO


No todos los microorganismos responden de la misma manera a los factores ambientales, lo
que para unos puede ser beneficioso para otros es perjudicial.
Temperatura
Es de los factores ambientales que ms influye en el crecimiento de los microorganismos.
Al aumentar la temperatura aumenta la velocidad de las reacciones enzimticas hasta una
cierta temperatura a la cual las protenas, DNA y otras macromolculas son sensibles y se
desnaturalizan. Cada microorganismo tiene una temperatura mnima, ptima y mxima de
crecimiento. La temperatura ptima siempre est ms cerca de la temperatura mxima que
de la mnima.
Psicrfilos: temperatura ptima baja (Pseudomonas, Flavobacterium, Alcaligenes)
Mesfilos: temperatura ptima normal (la mayor parte de los organismos)
Termfilos: temperatura ptima alta (microorganismos aislados de reas
volcnicas)
Termfilos extremos: temperatura ptima muy alta (Thermococcus celer 103 C)
pH
Debido a que los microorganismos cambian el pH del medio cuando crecen se debe aadir
un tampn en el medio para mantener el pH constante. Estos tampones funcionan en un
rango de pH por lo que se deben utilizar diferentes tampones dependiendo del pH que se
quiera en el medio. Para pH neutros se utiliza el tampn fosfato. Los ambientes naturales
tienen un rango de pH que oscila entre 5 y 9. Los microorganismos que crecen a pH
inferiores a 5 se denominan acidfilos (Thiobacillus pH: 0,5). Los microorganismos que
crecen a pH superiores a 9 se denominan alcalinfilos (Bacillus pH: 11).
Agua
Todos los organismos requieren H2O para vivir. Las sustancias absorben en mayor o menor
medida molculas de H2O que no estn disponibles para los organismos. Esta
disponibilidad del H2O es lo que se llama potencial de agua (aw) cuyos valores van de 0 a
1. El aw del H2O pura es 1; el aw de los frutos secos es 0,7; el aw de los campos de cultivo
se sita entre 0,9 y 1,0.
Halfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de sales.
Osmfilos: microorganismos que viven en altas concentraciones de azcares.

60

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Xerfilos: microorganismos que viven en ambientes secos.


Oxgeno

Aerobios
o
o

Obligados Requieren O2 para crecer (21 %)


Facultativos No requieren pero crecen mejor en presencia de O2

Micraerfilos Requieren pero a niveles ms bajos que los atmosfricos (1 - 15 %)

Anaerobios
o
o

Aerotolerantes No requieren y crecen peor cuando el O2 est presente


Obligados La presencia de O2 es letal

61

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

La importancia de ser pequeo

Relacin superficie/volumen favorece a clulas de menor radio


Permite a los procariotas alcanzar mayores tamaos poblacionales en la
mayora de los habitats microbianos, debido a mayor tasa de
crecimiento
La mayor tasa de crecimiento y el mayor tamao poblacional permites a
estos m.o. causar importantes cambios en los parmetros fsicoqumicos de un ecosistema en un tiempo relativamente corto

62

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Anexo 1

Metabolismo microbiano

Llamamos metabolismo al conjunto de reacciones de un organismo.


Para los microorganismos con los que vamos a trabajar,
normalmente quimiohetero-(organo)-trofos, podemos hacer el
siguiente esquema general del metabolismo:

Los microorganismos son sistemas que necesitan una gran cantidad


de energa para mantenerse ordenados. Esta energa se obtiene de la
oxidacin de compuestos orgnicos reducidos. Los nutrientes
proporcionan esos compuestos reducidos y, en el curso de la
oxidacin, se libera energa (que se acumula en forma de molculas
almacenadoras de energa, especialmente el ATP) y se producen
elementos estructurales que servirn para la construccin de nuevas
clulas (crecimiento y diferenciacin).
Al proceso por el que se obtiene energa y elementos estructurales
bsicos a partir de nutrientes se le denomina catabolismo y al que
utiliza la energa obtenida en el catabolismo para sintetizar nuevos
componentes celulares se le denomina anabolismo. Es importante
tener en cuenta que aunque se estudie de forma separada el
anabolismo y el catabolismo, ambos tipos de procesos ocurren
simultneamente de forma que conforme se van produciendo
elementos estructurales y energa en el catabolismo, esos elementos
se usan para formar nuevos componentes celulares en procesos
anablicos.
A los productos metablicos generados durante el catabolismo y el
anabolismo que tiene lugar durante el crecimiento (trofofase) se les

63

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

denomina metabolitos primarios y su produccin es paralela al


crecimiento celular. Por el contrario, los productos metablicos que
se acumulan cuando no hay crecimiento sino diferenciacin celular
(idiofase), se les denomina metabolitos secundarios. En general,
puede decirse que los metabolitos secundarios se producen despus
de que se han producido los primarios; aunque en ciertas condiciones
(como en cultivo continuo) se pueden producir simultneamente.
Es conveniente considerar el metabolismo como un flujo de materia
reducida que puede oxidarse para la produccin de energa o
utilizarse para la biosntesis de nuevos elementos estructurales. No
todo el carbono presente en los nutrientes va a oxidarse
completamente ya que parte se utilizar para sintetizar nueva
biomasa. Por otra parte, no todo el carbono de los nutrientes se
utiliza para la produccin de biomasa y, por consiguiente, el
rendimiento (medido tal y como se describi en otro apartado de
estas notas >>>) es siempre inferior a la unidad (en torno al 50% en
muchos casos).
La oxidacin de los nutrientes consiste en la capitacin de electrones
de un compuesto reducido por parte de un agente oxidante que
llamaremos aceptor final de electrones. Este aceptor final puede ser
inorgnico: oxgeno (con DG0`= -237 kJ) o NO3- con DG0`= -163 kJ;
o compuestos orgnicos tales como el fumarato con DG0`= -86 kJ.
Cuanto ms negativo sea el valor de DG0`, mayor cantidad de
energa se podr obtener de la oxidacin y ms eficiente ser el
proceso. Por esto, puede verse que la oxidacin en la que el aceptor
final de electrones es el O2 es la que ms rendimiento de produccin
de energa permite.
En las pginas siguientes vamos a seguir el proceso de oxidacin
biolgica de una molcula reducida sealando los pasos en los que se
produce la liberacin de energa. El esquema general del
metabolismo se construye en torno al proceso de oxidacin de la
glucosa. La ecuacin general de oxidacin de la glucosa es la
siguiente:
C6H12O6 + 6 O2 6 CO2 + 6 H2O

DG0`= -1330 kJ/mol

En el proceso de oxidacin biolgica de la glucosa, los productos


finales (CO2, H2O y la energa) se producen en sitios diferentes en la
clula: el CO2 se produce en reacciones de descarboxilacin, mientras
que el H2O y la energa se producen principamente en la membrana
celualr como resultado de la cadena transportadora de electrones y
de la actividad de la ATPasa de membrana.
2.- Catabolismo de la glucosa (glucolisis)

64

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

El catabolismo de la glucosa (compuesto de seis carbonos al que nos


referiremos como C6) puede ocurrir por cuatro vas diferentes:
(1) Ruta de Embden-Meyerhof (EM). Es la ms comn en todo tipo de
organisos incluyendo hongos filamentosos, levaduras y muchos tipos de
bacterias. Esta ruta puede funcionar tanto en condiciones aerobias como en
anaerobias y se lleva a cabo por una serie de 10 enzimas citoplsmicas. La
mayora de los pasos de la ruta son reversibles, aunque hay tres (los
catalizados por las enzimas hexoquinasa, fosfofructoquinasa y piruvato
quinasa) que son irreversibles. En los procesos anablicos hay unos desvos
metablicos para evitar estos pasos irreversibles. El resultado de la ruta EM es
el siguiente:
Glucosa (C6) + 2ADP + 2NAD+ 2 piruvato (C3) + 2ATP + 2NADH + 2H+
Como resultado de esta ruta se obtiene una pequea cantidad de energa (dos
moles de ATP por mol de glucosa) por procesos de fosforilacin a nivel de
substrato, se obtienen dos moles de NAD reducido (NADH+ H+) y se ha
logrado una oxidacin parcial del carbono de la glucosa para producir como
metabolito final dos moles de piruvato por mol de glucosa catabolizada.
(2) Ruta de las Pentosas Fosfato (PF). Esta ruta est presente en muchas
bacterias y en la mayora de los eucariontes. En muchos casos se lleva a cabo
simultneamente a la tura EM descrita antes. Por ejemplo: en levaduras, entre
el 10 y el 20% de la glucosa se metaboliza porla ruta PF (el porcentaje puede
ser an mayor en condiciones de crecimiento rpido) y el resto por la EM. La
ruta PF funciona en condiciones aerobias y anaerobias y tiene importancia en
procesos catablicos y en anablicos tales como en la sntesis de nucletidos y
de aminocidos aromticos. La ecuacin general de la ruta PF es la siguiente:
3 Glucosa-6-fosfato (C6) + 6NADP+ + 3H2O 2 fructosa-6-fosfato (C6) +
gliceraldehido-3-fosfato (C3) + 3CO2 + 6NADPH + 6H+
Como resultado, no se produce energa, aunque s ocurre una
descarboxilacin.La fructosa-6-fosfato y el gliceraldehido-3-fosfato son
intermediarios comunes de las rutas EM y PF. Por ltimo, los seis moles de
NADPH+ H+ producidos en la ecuacin se usan como "poder reductor" en
procesos anablicos.
(3) Ruta de Etner-Doudoroff (ED). Es una ruta usada por un nmero reducido
de microorganismos carentes de la ruta EM. La mayora son bacterias Gramnegativas tales como Pseudomonas, Rhizobium, Xhantomonas, Azotobacter y
Zymomonas. La ruta ED es muy rara en hongos. El resultado general de la
ruta ED es el siguiente:
Glucosa (C6) + ADP + NAD+ + NADP+ 2 piruvato (C3) + ATP + NADH +
NADPH + 2H+

65

Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

Como puede verse, el rendimiento energtico es menor que en la ruta EM.


(4) Ruta de la Fosfocetolasa o de Warburg-Dickens (WD).Es la ruta que siguen
ciertas bacterias lcticas (especialmente Lactobacillus y Leuconostoc). Se
puede considerar una variante de la ruta de las PF puesto que se forma un
azucar C5 y, por consiguiente, tiene lugar una descarboxilacin. sin emabrgo,
en la ruta WD, la enzima fosfocetolasa rompe el azucar C5 y da lugar a dos
ramas que condicen a la formacin de lactato y etanol en un proceso de
feremntacin heterolctica.
El metabolito final ms relevante de esta primera fase del catabolismo de la
glucosa es el cido pirvico (piruvato) que se forma en las rutas EM, ED y PF
(en esta ruta, tal y como se ha descrito, se forman intermediarios que pueden
conducir a la formacin de piruvato). El metabolismo central contina, pues,
con el catabolismo del piruvato

Procesos metablicos fermentativos I

1.- Concepto de fermentacin


La palabra fermentacin es confusa en Microbiologa porque con ella se hace
referencia a cuatro tipos de procesos diferentes: el metabolismo microbiano en
ausencia de oxgeno, la produccin de metabolitos secundarios, la modificacin
de compuestos qumicos por microorganismos en crecimiento y el crecimiento
bacteriano en s cuando el inters del cultivo es la produccin de biomasa.
El sentido en que vamos a utilizarla en la clase de hoy es el primero:
fermentacin es el proceso por el que las clulas pueden obtener energa sin
llevar a cabo un proceso de fosforilacin oxidativa. Esto es: en la fermentacin,
la energa se obtiene mediante un proceso qumico de fosforilacin a nivel de
substrato sin que se produzca una variacin neta del poder reductor de la
clula.
Los primeros estudios cientficos serios sobre procesos de fermentacin se
llevaron a cabo por Pasteur en el anlisis de los procesos de produccin y
alteracin del alcohol durante la fabricacin del vino.
Los procesos de fermentacin son universales; esto es: se encuentran en todo
tipo de organismos y, por consiguiente, probablemente represente una de las
formas ms antiguas de conservacin de la energa.
1.1.- Diferencias entre fermentacin y respiracin: en los procesos de
fermentacin la energa qumica tambin deriva de la oxidacin de compuestos
reducidos. En cualquier proceso de oxidacin se produce una transferencia de
electrones desde el compuesto reducido que se oxida hasta el compuesto
oxidado que se reduce, y en esa transferencia de electrones se produce la

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

liberacin de energa. En los procesos oxidativos el aceptor final de los


electrones de la oxidacin es el oxgeno o, de una manera ms general,
cualquier compuesto inorgnico oxidado. Sin embargo, en los procesos
fermentativos, la transferencia de electrones se produce hasta llegar a un
aceptor final que es un compuesto orgnico oxidado. Por consiguiente, en un
proceso de fermentacin tanto el donador de electrones como el aceptor son
compuestos orgnicos, mientras que en un proceso de respiracin el donador
de los electrones es orgnico y el aceptor inorgnico.
Otra manera de plantear el mismo proceso es considerar que en un proceso de
respiracin el aceptor final de electrones es siempre externo mientras que en
un proceso de fermentacin el aceptor final es interno.
La respiracin es mucho ms efectiva energticamente que la fermentacin
porque en aqulla la oxidacin del compuesto orgnico es ms completa que
en esta y, como resultado de ello, se liberan 688 kcal/mol (DGo) en la
respiracin de glucosa y slo 58 kcal/mol en la fermentacin. (Estos valores
hay que considerarlos a la luz de la necesidad de 7.3 kcal/mol para la sntesis
de ATP).
Las rutas fermentativas son anaerobias porque no requieren oxgeno como
aceptor final de los electrones. Esto no quiere decir que en ausencia de
oxgeno slo se pueda producir fermentacin: el aceptor final de los electrones
puede ser un compuesto inorgnico oxidado que los reciba al final de la cadena
respiratoria producindose un proceso de fosforilacin oxidativa en ausencia de
oxgeno. En estos procesos decimos que los microorganismos son capaces de
respirar otras molculas diferentes al oxigeno como son los nitratos (NO3--) los
sulfatos (SO4=).
2.- Rutas fermentativas para la utilizacin del piruvato
En la oxidacin de un mol de glucosa a piruvato se producen en total 2 moles
de ATP como rendimiento neto (se producen 4 moles de ATP y se consumen
dos) y se genera tambin un mol de NADH+H+. Cuando se produce la entrada
en el ciclo de Krebs del piruvato se va a generar una gran cantidad de
NADH+H+ que se reoxida principalmente mediante la fosforilacin oxidativa.
Cuando una clula carece de cadena respiratoria, el NADH+H+ no puede
reoxidarse a NAD+ y, por consiguiente, no se puede regenerar el agente
aceptor de hidrgeno necesario para las primeras fases de la glicolisis. Los
procesos fermentativos reducen el piruvato regenerando el NAD+ necesario
para los procesos metablicos iniciales del catabolismo de la glucosa.
Diferentes tipos de bacterias reducen el piruvato de maneras diversas dando
lugar a distintos procesos de fermentacin que se conocen por sus productos
finales.

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

2.1.- Fermentacin etanlica o alcohlica: el piruvato se reduce para


formar etanol y CO2:
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi 2 etanol + 2 CO2 + 2 ATP
este es el proceso de fermentacin que lleva a cabo Saccharomyces cerevisiae
y algunas (pocas) bacterias.
Su importancia industrial es evidente: la fermentacin alcohlica produce el
alcohol presente en las bebidas fermentadas (vino cerveza, etc.) y el CO2 que
se libera en esta fermentacin es el causante del esponjamiento de la masa de
pan durante su fermentacin. En este ltimo caso el proceso de coccin
posterior durante la fabricacin permite eliminar todo el alcohol de manera que
no queda presente en el producto final.
2.2.- Fermentacin homolctica: se denomina as la fermentacin cuyo
nico producto final es el cido lctico. Su ecuacin global es:
Glucosa + 2 ADP + 2 Pi 2 cido lctico + 2 ATP
Estas bacterias producen el piruvato por catabolismo de la glucosa siguiendo la
ruta de Embden-Meyerhof (va glucoltica clsica).
Es un proceso de fermentacin presente en muchas bacterias del grupo lctico:
Streptococcus (grupo de enterococos), Pediococcus y varios grupos de
Lactobacillus.
Su importancia industrial estriba en la bajada del pH de los productos donde se
encuentran estas bacterias: esta bajada del pH como consecuencia de la
liberacin de cido lctico es suficiente para producir unos cambios qumicos
en el producto (precipitacin de protenas durante el cuajado de la leche),
cambios microbiolgico (proteccin del deterioro microbiano de alimentos
como consecuencia de la eliminacin de la flora competidora) y organolpticos
(los cidos orgnicos de cadena corta, y entre ellos el cido lctico tienen
caractersticas de produccin de sabor) que hacen de esta fermentacin un
proceso muy relevante en la produccin de alimentos.
La fermentacin homolctica es la causante de las agujetas producidas en los
msculos despus de un esfuerzo intenso en el que la cantidad de oxgeno
aportada a las fibras musculares no es suficiente para asegurar toda la
reoxidacin del NADH+H+. Las agujetas se producen por los depsitos de cido
lctico entre las fibras musculares. Asimismo, la fermentacin homolctica es
responsable de la alteracin del esmalte dental en la boca causado por
bacterias lctica flora habitual.
2.3.- Fermentacin heterolctica: denominada as porque su producto final
no es exclusivamente cido lctico. El proceso tiene un rendimiento menor al
de la fermentacin homolctica como se desprende de la produccin de slo un

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

mol de ATP por mol de glucosa fermentada. La obtencin del piruvato en estas
bacterias se logra mediante el catabolismo de la glucosa por la ruta de las
pentosas.
La reaccin global es:
Glucosa + ADP + Pi Ac. lctico + etanol + CO2 + ATP
Este proceso lo llevan a cabo bacterias del grupo lctico pertenecientes a los
gneros Leuconostoc y Lactobacillus.
Industrialmente el proceso es relevante en la produccin de alimentos
fermentados (por ejemplo el sauerkraut). Otra bacteria productora de este tipo
de fermentacin es Lactobacillus acidophilus que facilita el metabolismo de la
leche.
2.4.- Fermentacin del cido propinico: las bacterias que presentan este
tipo de fermentacin se pueden utilizar tanto azcares como lactato como
puntos de partida para el proceso. La ruta es un proceso complejo en el que se
genera acetato, CO2 y cido propinico como productos finales.
Esta ruta fermentativa la presentan las bacterias del tipo Propionibacterium y
otras anaerobias estrictas presentes en el rumen de herbvoros donde llevan a
cabo una fermentacin secundaria de los productos de las fermentaciones
lcticas primarias.
Industrialmente Propionibacterium es importante en la fermentacin del queso
para producir el tipo suizo: la fermentacin propinica utiliza en este caso el
lactato producido en las fermentaciones lcticas primarias produciendo CO2
responsable de los ojos del queso suizo y acumulacin de cidos orgnicos
de cadena corta responsables de caractersticas organolpticas.
2.5.- Fermentacin cido-mixta: La fermentacin cido mixta produce cido
actico, etanol, H2 ,CO2 y proporciones diferentes de cido lctico o propinico
(frmico) segn las especies. Es un tipo de fermentacin que llevan a cabo las
enterobacterias. En esta ruta de fermentacin se produce ATP adems de la
reoxidacin del NADH+H+.
La produccin de formiato o CO2 + H2 depende de la presencia en la bacteria
de una enzima denominada formiato-liasa responsable del paso. No todas las
bacterias la tienen y su actividad es detectable por la produccin de grandes
cantidades de gas (el H2 es insoluble) como consecuencia de la fermentacin
del azcar.
2.6.- Fermentacin butanodilica: es una variante de la anterior presente
en algunas enterobacterias como Klebsiella, Serratia y Erwinia, especie en la
que se da una fermentacin cida mixta butanodilica. En esta ruta se
desprende CO2 y se logra como producto final el 2.3-butanodiol. Como paso

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Capitulo 3 MICROORGANISMOS DE INTERES INDUSTRIAL

intermedio de la ruta se produce acetona que puede servir para la


identificacin de las bacterias que presentan esta ruta mediante la reaccin de
Voges-Proskauer que permite distinguir bacterias muy semejantes como
Escherichia y Enterobacter.
2.7.- Fermentacin del butanol: es un tipo de fermentacin llevado a cabo
por bacterias anaerobias estrictas del gnero Clostridium. En el curso de esta
fermentacin se producen compuestos orgnicos disolventes de gran
importancia industrial y que, histricamente, han sido los primeros productos
industriales bacterianos de importancia econmica relevante durante la 1
Guerra Mundial (trabajo de Weizmann).
3.- Rutas fermentativas de utilizacin de aminocidos
En algunas bacterias del gnero Clostridium se producen procesos acoplados
de oxidacin de aminocidos con el objeto de produccin de energa. Como en
estos procesos no se utiliza ningn aceptor externo de los electrones de la
oxidacin (el aceptor es el segundo aminocido de la pareja) tcnicamente
constituyen procesos de fermentacin de aminocidos en los que se llega a la
desaminacin y descarboxilacin de los aminocidos que intervienen en la
pareja.
El ejemplo ms representativo es la desaminacin y descarboxilacin oxidativa
de la alanina a acetato acoplada con la desaminacin reductiva de la glicina en
el proceso conocido como reaccin de Stickland.
4.- Conclusin
Los procesos de fermentacin, en sentido metablico, son aquellos en los que
se produce una oxidacin de compuestos orgnicos reducidos siendo el aceptor
final de electrones un compuesto orgnico interno que se reduce. En estos
procesos puede producirse algn rendimiento energtico; pero su principal
funcin es la reoxidacin del NADH+H+ a NAD necesario para poder iniciar los
primeros pasos del catabolismo. Los diferentes procesos pueden identificarse
por sus productos finales.

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