i z a c ió n

n m ov i l
1 4 : I
Tema a s
e n z i m
de

1
Concepto de inmovilización

Métodos de inmovilización

Características de enzimas inmovilizadas

Aplicaciones de enzimas inmovilizadas

2
 Concepto de inmovilización

Una enzima inmovilizada es aquella que ha sido

físicamente confinada o localizada en una región definida
del espacio

Es aquella que tiene restringida la movilidad

Una enzima inmovilizada no está en solución, sino unida a

una superficie o enclaustrada en una matriz, pero
dispuesta para adquirir el sustrato y transformarlo en
producto (sistema de dos fases)
3
 Concepto de inmovilización
El uso de enzimas en forma soluble incapacita a que la
enzima pueda recuperarse tras la catálisis

L a i n mov i l i z a c i ó n e n z i má t i c a e n
superficies o polímeros insolubles
permite que el producto sea fácilmente
separable de la enzima
4
 Concepto de inmovilización

Inmovilización en una Confinamiento en una

superficie matriz

5
 Concepto de inmovilización

Ventajas de la inmovilización:
Permite la reutilización de las enzimas (aumento
de productividad)

Ideal para operaciones continuas

Los productos están libres de enzima

Aumenta la facilidad de operación y

control del proceso.
6
 Concepto de inmovilización

Ventajas de la inmovilización:
Mejora la estabilidad de las enzimas
Permite el desarrollo de sistemas de
reacción multienzimáticos

Ofrece un potencial considerable en uso

médico e industrial

Reduce los problemas de tratamiento de

efluentes
7
 Concepto de inmovilización

Inconvenientes de la inmovilización:
La actividad enzimática es menor
Necesidad de realizar el proceso de
inmovilización

Costos adicionales de reactivos para

realizar la inmovilización

8
 Métodos de inmovilización
Se pueden clasificar en dos grandes grupos:
- Métodos de retención física
- Atrapamiento
- Microencapsulación
- Métodos de unión química

- Unión a soportes { Adsorción

Unión covalente

- Entrecruzamiento
9
 Métodos de inmovilización
- Atrapamiento: consiste en la retención física de la enzima
en las cavidades interiores de una matriz sólida porosa

- Suele realizarse con polímeros tipo

poliacrilamida, colágeno, o alginato

- El proceso se lleva a cabo mediante la suspensión de la

enzima en una solución de monómeros e inducción de la
polimerización por Tª, o agente químico

10
Inmovilización enzimática (Atrapamiento)
 Métodos de inmovilización
- Microencapsulación: consiste en rodear a la enzima de
una fina capa de un material semipermeable

- Se realizan en sistemas como

micelas y liposomas, aunque hay
muchos materiales para la
microencapsulación

- Las microcapsulas son

esféricas de tamaños
comprendidos entre 1-100 µm
de diámetro

12
 Métodos de inmovilización
Unión a soportes:

-  Consiste en la unión entre la enzima y un material inerte

-  Son los métodos de inmovilización más utilizados.
-  Existen numerosos tipos de soporte tanto orgánicos
como inorgánicos

-  La unión entre la enzima y el soporte puede ser por:

- Adsorción

- Unión covalente
13
 Métodos de inmovilización
Inmovilización por Adsorción:
- La unión entre la enzima y el soporte se
produce mediante interacciones iónicas, fuerzas
de Van der Waals, puentes de H.
- La enzima inmovilizada se prepara poniendo en contacto
el soporte con la enzima y lavando el material no unido

- Ventajas: preparación sencilla, bajo coste, no hay

cambios en la enzima

- Inconvenientes: costes de optimización, poco estables

mecánicamente (unión débil al soporte)
14
 Métodos de inmovilización
Inmovilización por unión covalente:
- La unión entre la enzima y el soporte se
realiza a través de un enlace covalente entre
un aminoácido de la enzima y un grupo
funcional del soporte
- Grupos como Lys, Cys, Tyr en la enzima suelen suelen ser
los más reactivos

- Ventajas: la unión es mas duradera, alta resistencia

mecánica
- Inconvenientes: la unión entre la enzima y el soporte
puede afectar a la flexibilidad de la enzima y a la catálisis15
 Métodos de inmovilización
- Unión directa al soporte funcionalizado

Soporte M o l é c u l a Enzima Enzima inmovilizada

funcionalizadora

-  Ej: penicilina acilasa de Kluyvera citrophila

óxido de sílice
triclorotriazina
16
 Métodos de inmovilización
- Unión a través de un espaciador bifuncional

Espaciador
Soporte Enzima Enzima inmovilizada
bifuncional

-  Ej: espaciadores: dialdheidos, carbodiimidas

-  Este tipo de unión dota de flexibilidad a la enzima

17
 Métodos de inmovilización
Inmovilización por entrecruzamiento (o cross-linking):

- Consiste en la formación de enlaces

covalentes entre las enzimas entre sí o a
través de moléculas bifuncionales

- Al aumentar el tamaño molecular aparente de la enzima

aumenta su insolubilidad
- Se usan dialdehidos, diaminoésteres, diaminas u
otras proteínas

- Enzimas unidas con enlaces intermoleculares

irreversibles
18
 Características de las enzimas inmovilizadas
- La inmovilización altera el comportamiento de las
enzimas.
- Son más estables (aumento de la rigidez las protege de
la desactivación térmica o química)
- Están protegidas de las proteasas del medio

- Se evita la agregación intermolecular de la enzima

- La actividad catalítica puede disminuir (unión incorrecta

al soporte, unión del soporte al centro activo)
- La actividad catalítica disminuye drásticamente si el
sustrato de la enzima es voluminoso.
19
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Reactores enzimáticos
Un reactor enzimático consiste en un recipiente cerrado
termostatizado y con agitación donde ocurre la reacción
enzimática

Tipos de reactores:
- Discontinuos (o por lotes): aquellos en los que no
entra ni sale material cuando ocurre la reacción

- Continuos: aquellos en los que continuamente está

entrando material reactante y se está retirando
producto
20
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
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Reactores enzimáticos
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 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
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22
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Reactores enzimáticos
Aplicaciones industriales:

- Síntesis química

- Síntesis de medicamentos

- Industria agroalimentaria

- Tratamiento de residuos

23
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Reactores enzimáticos

24
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Aplicaciones médicas: desbridamiento de úlceras
- Una buena cicatrización de las úlceras pasa por una
buena eliminación del tejido muerto

- Las proteasa (papaína, tripsina,

colagenasa) se han utilizado con éxito
para ayudar a la limpieza (colágeno,
fibrina y elastina del tejido muerto)

- La inmovilización de proteasas en apósitos y vendas es

una alternativa de suministro de la enzima
25
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Aplicaciones médicas: desbridamiento de úlceras

26
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Aplicaciones médicas: tratamiento del cáncer

- Las células tumorales parecen utilizar principalmente

Asn como nutriente esencial

- Algunos tipos de leucemia pueden tratarse mediante la

eliminación de la asparagina del organismo
Reaction diagramm

Reaction catalyzed by asparaginase (3.5.1.1)

A s p a rag i n a s a s e u t i l i z a
terapeuticamente para la + H2O = + NH3

eliminación de la Asn
L-asparagine + H2O = L-aspartate +
27
NH3
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas
Aplicaciones médicas: tratamiento del cáncer

- La asparaginasa puede inmovilizarse en la fibra hueca

de hemodializadores

- Las tecnologías de inmovilización

permiten aplicar alternativas menos
invasivas que la inyección de la
asparaginasa en el torrente
sanguineo

28
 Aplicaciones de las enzimas inmovilizadas

Aplicaciones analíticas: Biosensores (tema 15)

29