Preguntas : Producción biotecnológica de enzimas

1. ¿Qué enzimas fueron utilizadas en la década de los 60´s? Las enzimas microbianas

2. ¿Qué tipo de enzimas son las más utilizadas en el mercado de los biocatalizadores? Menciona las razones por las
que estas enzimas son las más utilizadas.
Las amilasas y proteasas y son las mas utilizadas debido a su productividad y su disminución de costos de los
biocatalizadores microbianos

3. ¿Qué factores se deben considerar en la producción biotecnológica de enzimas?

• La escala de trabajo: a nivel de laboratorio o industrial
• Pureza de la enzima
• Fuente natural de la enzima: el tipo de microorganismo que la sintetiza; hongo filamentoso, bacteria,
levadura.
• Saber que tipo de enzima es: si es una enzima intracelular esta retenida dentro de la células o
extracelular la cual se excreta al medio de cultivo.
4. ¿A qué se refieren las operaciones del upstream?
Son las operaciones que se realizan previo al proceso fermentativo, son las operaciones que se encargan del
preparación y crecimiento del inóculo

5. ¿Cuáles son los tipos de cultivo en los que se producen las enzimas? ¿Cuáles son las diferencias entre los tipos
de cultivos?
Existen dos tipos de cultivo, el cultivo liquido sumergido (FSL) y el cultivo en sustrato solido (FSS) y la diferencia es que
en el FSL tiene agua libre disponible y sus nutrientes están en solución mientras que en el otro no hay agua libre lo que
hace que crezcan sobre la superficie de un soporte sólido húmedo

6. Menciona las etapas del downstream

• Recuperación
• Purificación
• Formulación
7. ¿Cuáles son las características de las enzimas extracelulares?¿Qué operaciones del downstream requieren?
Son enzimas que se producen y se excretan al exterior de la célula. Las operaciones que requiere son; en las operaciones
de recuperación requerirá una separación y ruptura de células del extracto enzimático y la concentración de dicho
extracto. Pasara por operaciones de purificación, de deshidratación y finalmente de formulación.

8. ¿Cuáles son las características de las enzimas intracelulares? ¿Qué operaciones del downstream requieren?
Son enzimas que quedan retenidas dentro de las células. Requieren de la fermentación, en las operaciones de
recuperación incluirán la separación de las células del medio de cultivo, se libera la enzima de la célula por ruptura
celular, obtener el extracto enzimático y proceder a la purificación de dicho extracto y finalmente requieren del proceso
de formulación.

9. ¿Qué operaciones son las más utilizadas para separar la biomasa?

Son las operaciones de separación del tipo liquido-solido, pero para acelerar el proceso se usan la filtración y la
centrifugación.

10. Después de separar la biomasa ¿qué fase se conserva si se está trabajando con una enzima extracelular?¿Cuál es
la fase conservada para una enzima intracelular?
La enzima extracelular conserva la fase liquida mientras que la enzima intracelular conserva la fase solida

11. ¿Qué es un método de disrupción? Menciona su clasificación y los métodos correspondientes

Se trata de la disgregación de la membrana y pared celular con la consiguiente desestabilización de la misma y liberación
del contenido intracelular. Los métodos se pueden clasificar en: métodos físicos, como molino de perlas,
homogeinizadores, ultrasonicadores; métodos químicos, como surfactantes, álcalis fuerte, solventes orgánicos y
métodos enzimáticos, ejemplo lisozimas, glucanasas.

12. ¿Cuál es la etapa previa a la purificación enzimática?¿Cuáles son los métodos más utilizados?
Es la concentración del extracto crudo, con el cual se busca eliminar el contaminante mas abundante que es el agua y los
métodos mas utilizado son: métodos térmicos, precipitación con sales o solventes y filtración por membrana.

13. ¿Cuál es el objetivo de la purificación enzimática?

Su objetivo principal es remover todos aquellos contaminantes que se encuentran en el extracto crudo y que pueden
interferir en su uso posterior.

14. ¿Cuál es la composición del extracto crudo si la enzima es intra o extra celular?
Si la enzima es extracelular el extracto contendrá un pool de enzimas extracelulares y pequeños solutos de bajo peso
molecular, en el caso de extracto de enzimas intracelulares este contiene todos los componentes intracelulares, entre
ellos, una mezcla compleja de proteínas y ácidos nucleicos.

15. ¿Qué es el rendimiento de purificación?

Es el incremento de pureza del compuesto y la perdida de enzima en las operaciones de fraccionamiento.

16. ¿Es rentable utilizar enzimas puras en procesos industriales?

Dependiendo ya que las operaciones de purificación en general son costosas y el precio del producto muchas veces no
puede compensar los costos de obtención de enzimas puras.

17. ¿Cuál es la principal operación utilizada para purificación de enzimas? Menciona las propiedades físicas
consideradas en esta operación
Son las etapas cromatográficas que utilizan propiedades físicas como el tamaño molecular, solubilidad y distribución de
carga en la superficie.

18. ¿Cuáles son las principales cromatografías utilizadas en la purificación de enzimas? Investiga el costo de una
columna cromatográfica de las principales para purificar enzimas
• Cromatografía de exclusión molecular o filtración en gel: separa las moléculas por su peso molecular.
• Cromatografía de intercambio iónico: separa las proteínas de acuerdo a su carga neta a un determinado
pH. Costo de una columna es de 270.96 pesos.
• Cromatografía por interacción hidrofóbica: separa las proteínas de acuerdo a su hidrofobicidad
• Cromatografía de afinidad: separa una proteína gracias a su afinidad con un ligando absorbido en el
relleno
19. ¿A qué se refiere la operación de la formulación del biocatalizador?
Se refiere a una serie de operaciones diversas tendientes a la estabilización, estandarización y presentación del producto
de acuerdo a su aplicación.

20. ¿En qué formas se comercializan las enzimas? Se comercializan de dos maneras, liquidas y solidas.

21. Indica las operaciones necesarias para comercializar enzimas sólidas

Las enzimas solidas se mezclan con estabilizantes y se someten a operaciones de secado ya que conservar la vida útil del
producto por más tiempo debido a la disminución de la actividad acuosa y como operaciones adicionales puede ser
almacenadas a temperatura ambiente con el concomitante ahorro de energía de refrigeración y a su vez son más
fácilmente transportables.

22. Indica las operaciones necesarias para comercializar enzimas líquidas

Las enzimas líquidas incluye la concentración, la adición de estabilizantes y la posterior filtración. Los estabilizantes más
empleados son la glucosa, sacarosa y algunos polioles. Estas sustancias mantienen la estructura nativa de la proteína y
de este modo evitan la desnaturalización. Luego el producto se filtra para eliminar sólidos insolubles y reducir la carga
microbiana