Práctica 7 Obtención de glucógeno a partir de hígado de rata y su caracterización química.

Barajas Hernández Paulina Lucrecia y Martínez Martínez Diana Edith

4QM1 Sección 2
Laboratorio de Bioquímica General, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional

RESULTADOS
INTRODUCCIÓN. Tabla 1. Caracterización química del glucógeno sin
hidrolizar.
El glucógeno es un polisacárido de reserva
energética formado por cadenas ramificadas de Prueba Observación
glucosa; no es soluble en agua, por lo que forma Molish Positivo
dispersiones colídales. Abunda en el hígado y en Biuret Negativo
menor cantidad en el musculo esquelético. Su Ninhidrina Negativo
estructura se parece a la de la amilopectina del
almidón, aunque es mucho más ramificada. Está
formada por varias cadenas que contienen de 12 a
18 unidades de glucosa unidas por enlaces
glucosídicos α-1,4; uno de los extremos de esta
cadena se une a la siguiente cadena mediante un
enlace α-1,6-glucosídico, tal y como sucede en la
amilopectina.
La importancia de que el glucógeno sea una
molécula tan ramificada es debido a que:

• La ramificación aumenta su solubilidad.

• La ramificación permite la abundancia de
residuos de glucosa no reductores que van a
ser los lugares de unión de las enzimas
glucógeno fosforilasa y glucógeno sintetasa,
es decir, las ramificaciones facilitan tanto la
velocidad de síntesis como la de
degradación del glucógeno.
Figura 1. Caracterización química del glucógeno
La hidrolisis de los enlaces glicosídicos puede ser con las pruebas de Molish, Biuret y Ninhidrina.
catalizada por ácidos o enzimas en la hidrolisis, los
enlaces se rompen y forman oligosacáridos, para
formar glucosa. La hidrolisis también puede ser Tabla 2. Resultados de la caracterización química
llevada por la enzima α-amilasa del glucógeno hidrolizado.
OBJETIVOS

• Obtener glucógeno a partir de hígado de rata Hidrolisis Ácida (HCL) TESTIGO Enzimátic Blanco
o hígado de pollo. a (amilasa)
• Caracterizar químicamente el glucógeno
obtenido de hígado de rata o hígado de pollo.
• Identificar la estructura que se encuentra en 1N 2N 4N TUBO 4 Conc. 1:2 H2O
el glucógeno y conocer su modificación al
realizar experimentación de la hidrolisis. Fehling + + + - + + -
• Obtener el glucógeno y saber de manera
experimental el manejo de esta para tener Lugol - - - + - - -
una buena práctica.
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Figura 4. En la izquierda se puede ver los cristales

de glucógeno que se utilizo en la práctica y en la
derecha la amilasa obtenida de los dos participantes
del equipo

DISCUSIÓN
En esta practica solo se realizo la segunda parte de
Figura 2. Resultados de la caracterización química
la experimentación que fue la caracterización
del glucógeno hidrolizado con la prueba de Lugol.
química del glucógeno. Ya que estaba listo el paso
de la obtención del glucógeno en su forma de
cristales(figura4), a estos cristales dados en clase
se les tomo un peso de 0.015 g para poder realizar
la solución de glucógeno y de ahí poder realizar sus
correspondientes caracterizaciones.
Como sabemos el glucógeno un polisacárido de
reserva energética formado por cadenas
ramificadas de glucosa en la primera
experimentación que se realizó para nuestro
glucógeno sin hidrolizar fue una caracterización
química con las pruebas de Molish, Biuret y
ninhidrina.
Cada una con sus diferentes fundamentos nos
ayudaron a describir mejor nuestro glucógeno por
ejemplo en estas 3 pruebas dio negativo en la de
Biuret y ninhidrina y positivo en la de Molish, esto se
Figura 3. Resultados de la caracterización
química del glucógeno hidrolizado con la prueba
de Fehling.
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puede ver en nuestra tabla 1 y de una
representación fotográfica en nuestra (figura 1).
Gracias a estos podemos decir que nuestro
glucógeno es un carbohidrato y esto se sabe ya que
en la prueba de Molish -Udransky nos ayuda a la
identificación de carbohidratos por la formación del
furfural o sus derivados que se condensan con el
alfa-naftol dando un anillo violáceo en la interfase
como prueba positiva.
Mientras que para la prueba de Biuret era una
prueba para proteínas y péptidos de cadena no
menor a 3 unidades, lo cual no corresponde para
nuestro glucógeno por lo que dio negativo, de ser
positivo hubiéremos visto un color violáceo o
precipitación de hidróxido cúprico, lo mismo para la
prueba de ninhidrina esta es para los grupos amino
libres, lo cual esto no es una característica del
glucógeno, de haber sido positiva hubiéramos
observado aparición de color azul o violeta.
La siguiente caracterización fue con nuestro
glucógeno hidrolizado donde este se trabajó
sometiéndolo a diferentes pruebas como lo fueron la
de Fehling y Lugol y a diferentes características
como la adición de el HCL a normalidades de
(1N,2N,4N,) en los tubos 1,2 y 3 y su adición de
gotas de NaOH al 40 % respectivas (2,4,8 gotas).
También se tomo un tubo blanco que fue el numero
4 y otros 2 con la concentración de amilasa
concentrada y diluida cabe recalcar que esta
amilasa fue obtenida por los dos participantes del
equipo (figura4), se recolecto la saliva de cada uno
con un volumen aproximado de 2 ml para nuestra
experimentación.
Viendo la tabla 2 se demostró que en la prueba de
Lugol todos los tubos que no fueron el testigo dio
negativo (figura2) y esto fue porque el tubo testigo
era nuestro glucógeno sin hidrolizar y por ende este
glucógeno esta mas ramificado como se sabe la
prueba de Lugol o de yodo es conocida por que este
yodo es atrapado por los polisacáridos formando
clatratos y dependiendo de su estructura de este
polisacárido daba una coloración especifica en este
caso para los polisacáridos muy ramificados una
prueba positiva es de color rojo como se vio en
nuestro tubo 4. Mientras que como las otras no
Sección 2
contaban con estas especificaciones no dieron
ninguna coloración positiva.
Para nuestra prueba de Fehling podemos ver de
nuevo en la tabla 2 que fue negativa para agua y el
tubo 4 que era el glucógeno sin hidrolizar mientras
que en los demás si dio positiva la prueba (figura3).
En esta prueba se identifica los azucares reductores
pues se basa en la acción reductora que tienen
estos azucares sobre los iones cúpricos , el poder
reductor de los oligosacáridos y los polisacáridos
dependerá del número de carbonilos que no estén
involucrados en enlaces glucosídicos es decir que
tengan un enlace glucosídico libre es por eso que no
en todas los tubos dio positivo porque tenían que
tener un enlace glucosídico libre para dar la reacción
positiva, nos dimos que fue positiva nuestra
reacción por que se produjo el precipitado rojo
ladrillo este se veía en diferentes cantidades
dependiendo del tubo sin embargo en nuestro caso
era un poco difícil hacer la comparación de esas
cantidades de precipitado un dato interesante que
se logro ver en una de las amilasas (tubo 6) es que
tenía mucho precipitado por lo que indicaba que era
más eficiente la amilasa y que esta digiere mejor el
alimento sin embargo una de las cosas
contradictorias era que hay una alta probabilidad de
caries .
CONCLUSIONES
• El método de aislamiento utilizado en esta
práctica se basa en las propiedades del
glucógeno no compartidas por otras
sustancias presentes en el hígado.
• Mediante la prueba de Ninhidrina negativa
logramos determinar que el glucógeno no
contiene grupos amino libre, pero si contiene
carbohidratos debido a que dio positivo en la
prueba de Molish.
• El glucógeno contiene unidades de glucosa
unidas por enlaces glicosídicos α-1,4 y α-1,6.
• La enzima alfa-amilasa presente en la saliva
es capaz de romper el enlace α-1,4 del
glucógeno.
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BIBLIOGRAFÍA

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https://www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-
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