Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Bioquímica general
“Obtención de glucógeno a partir de hígado de rata y
su caracterización química.” Equipo 2.4. Ibarra Rivera
Arturo Iván y Vargas Valdez Fernanda Simone 4QM1
INTRODUCCIÓN.
El glucógeno es un polímero de
almacenamiento de glucosa; están
unidas por dos tipos de enlaces,
linealmente por enlaces glucosídicos
α1,4 y formando ramificaciones por
enlaces glicosídicos α1,6.
Las unidades de glucosa se pueden
separar desde el glucógeno por
digestión o hidrólisis y por movilización
o fosforólisis. Se le llama
glucogenolisis a la movilización del
glucógeno en los tejidos para su
degradación por fosforólisis.
La glucógeno fosforilasa cataliza la
escisión fosforolítica (fosforólisis) del
glucógeno para dar glucosa-1-P. La
escisión fosforolítica del glucógeno es
energéticamente ventajosa porque el
azúcar liberado ya está fosforilado
(G-1-P).
La regulación metabólica por
modificación covalente reversible por
fosforilación y desfosforilación, como
respuesta a la acción hormonal
(adrenalina en músculo y glucagón en
hígado) desencadena una cascada de
fosforilaciones que acaba activando a
la fosforilasa.
Funciones del glucagón:
- A nivel muscular: la glucosa se
degrada en la glucólisis para
obtener ATP.
- En el hígado: se libera glucosa
a la sangre para mantener la
homeostasis.
OBJETIVOS.
● Extraer el glucógeno del hígado
de una rata.
● Llevar a cabo la caracterización
del glucógeno mediante una
serie de reacciones conocidas
en prácticas anteriores.
RESULTADOS.
Porcentaje de glucógeno obtenido.
(Datos brindados por la profesora)
Peso del hígado de la rata: 18g
Peso de la charola de aluminio: 1.0g
Peso de la charola con el glucógeno:
1.845g
Peso de glucógeno:
1.845g - 1.0g = 0.845g de glucógeno
Porcentaje de glucógeno
Se aplica una ponderación
estableciendo lo siguiente:
18 g de hígado de rata es a 100%
0.845g de glucógeno es a x %
𝑥% =
(0.845𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜)(100%)
= 4. 69
(18 𝑔 𝑑𝑒 ℎí𝑔𝑎𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝑟𝑎𝑡𝑎)
Porcentaje de glucógeno obtenido:
4.69%
Si no existiera pérdida de glucógeno y
se obtuviera un 100% entonces
corresponde a un 7% que es
equivalente a 1.26 g:
(se aplica la siguiente ponderación)
18 g es a 100%
x g es a 7%
(7%)(18 𝑔)
𝑥𝑔 = (100%)
= 1. 26
Entonces el rendimiento de glucógeno Figura 2. Prueba de Fehling al
es: glucógeno hidrolizado. Prueba positiva
(aplicando la siguiente ponderación) en los tubos con HCl 2N y 4N y
positivo en los tubos con amilasa
1.26 g es a 100% concentrada y 1:2
0.845 g de glucógeno es x %
(0.845 𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑙𝑢𝑐ó𝑔𝑒𝑛𝑜)(100%)
𝑥% = (1.26𝑔)
= 67. 06
Rendimiento de glucógeno: 67.06%

Figura 3. Prueba de Seliwanoff en

glucógeno hidrolizado donde en todos
los tubos tubos hidrolizados con HCl
dio una coloración rosa tenue y
glucógeno hidrolizado con amilasa en
los dos tubos dio la misma coloración.

Figura 1. Pruebas realizadas al

glucógeno sin hidrolizar. Donde la
prueba de Molish resultó positiva y
para biuret y ninhidrina resultaron
negativas.
Figura 4. Prueba con yodo en
glucógeno donde en el tubo testigo de
glucógeno sin hidrolización enzimática
dio una coloración rojo-ámbar.
DISCUSIÓN.
Con base en los resultados obtenidos
a lo largo de la práctica, en el
rendimiento de glucógeno se obtuvo
un porcentaje del 67.06% a lo que se
le puede atribuir a esta cifra por
algunos factores directamente de la
rata. Dadas las circunstancias
actuales, difícilmente es posible
conocer la salud de la rata y edad.
Una de las razones por las que el
porcentaje obtenido sea bajo puede
atribuírsele a una patología llamada
glucogenosis tipo I o conocida como
enfermedad de von Gierke , que esta
patología se da por la deficiencia de la
enzima glucosa-6-fosfatasa que es
una enzima importante para la
glucogenogénesis (Devlin, 1999) por
ello el bajo rendimiento y porcentaje
de glucógeno obtenido. Más allá de
errores sistemáticos durante la
extracción de glucógeno por haber
estresado a la rata desencadenando
una cascada de fosforilaciones en
respuesta a la acción hormonal:
(adrenalina en músculo y glucagón en
hígado) Existen dos formas de la
enzima que degrada el glucógeno,
glucógeno fosforilasa a (R, fosforilada
y catalíticamente muy activa) y
fosforilasa b (T, desfosforilada y
normalmente inactiva). La fosforilación
en un resto de SER de cada
subunidad de la fosforilasa b hace que
se convierta en la fosforilasa a, y esa
fosforilación la cataliza la fosforilasa b
quinasa. La fosforilasa b quinasa se
activa a su vez, por fosforilación
(también por alto nivel de Ca+2 en
músculo). . La enzima que cataliza
esta última fosforilación, de la
fosforilasa b quinasa, es la proteína
quinasa, que a su vez se activa por la
unión del AMPc. El AMPc se forma
por el adenilato ciclasa, en respuesta
a la acción hormonal de la adrenalina
en músculo y del glucagón en hígado.
Luego la cascada de fosforilaciones y
activaciones por efecto de la
adrenalina adenilato ciclasa AMPc
Proteína quinasa A fosforilasa quinasa
glucógeno fosforilasa en músculo: la
glucosa se degrada en la glucólisis
para obtener ATP. En hígado: se libera
glucosa a la sangre para mantener su
nivel (Lehninger, 2007) por ello se
puede “perder” glucógeno. Para las
primeras pruebas del glucógeno sin
hidrolizar, solo dio positiva a la prueba
de Molish (Véase Figura 1) esto
porque el glucógeno es un
carbohidrato, específicamente un
polisacárido ramificado conformado
por la unión de glucosa por enlaces
a-1,4 y de a-1,6 en las ramificaciones.
Figura 5. Estructura del glucógeno
Las otras pruebas resultan negativas
puesto a que el glucógeno no es una
proteína o polipéptido o una
constitución de residuos de
aminoácidos.
Para las pruebas consecuentes,
cuando el glucógeno fue hidrolizado,
en la prueba de Fehling se formó
precipitado en los tubos con HCl 2N y
4N rojo-ladrillo, esto debido a que el
HCl y las condiciones de temperatura
logra romper los enlaces del
glucógeno, obteniéndose únicamente
glucosa que es un azúcar reductor,
gracias al poder reductor del grupo
carbonilo de la glucosa logra reducir la
sal de cobre en medio básico a óxido coloración rosácea tenue (Véase
cuproso que es el precipitado Figura 3). La hidrólisis por HCl el
rojo-ladrillo presente en el fondo de los producto es glucosa que es una
tubos (Fieser, 1982) (Berg, 2007). Es aldosa por lo que da el color rosáceo.
por ello que a mayor concentración de
HCl habrá mayor actividad hidrolítica
por lo que en el tubo con
concentración de HCL 4N se observa
mayor cantidad de precipitado (Véase
Figura 2). En el caso de la hidrólisis
enzimática por actividad de la amilasa,
en ambos tubos se observa
precipitado debido a lo antes Figura 6. Estructura de la Glucosa
mencionado. En el tubo con amilasa
concentrada se observa mayor En el caso de los productos formados
precipitado que al tubo con amilasa por la hidrólisis de la a-amilasa
1:2 esto porque en prácticas también son aldosas
anteriores de los factores que afectan
la velocidad de reacción, cuando
existe una mayor concentración o
cantidad de enzima hay una relación
directa sobre la velocidad, es decir, a
mayor cantidad de enzima mayor
velocidad o actividad enzimática de
hidrólisis en este caso del glucógeno Figura 6.1 Estructura de la maltosa.
(Peña, 2002). Cuando existe una
hidrólisis por actividad enzimática,
esta ruptura de los enlaces del
glucógeno es al azar pero específica,
lo que sucede es que la amilasa
(a-amilasa 1,4) hace la ruptura lineal
de la cadena de glucosa pero cuando
se acerca a una ramificación con
enlace a-1,6 la enzima se detiene. Por Figura 6.2 Estructura de la isomaltosa.
lo que se obtienen los siguientes En la prueba con yodo. Sólo se
productos: maltosa, isomaltosa y observa que da positiva la prueba a
glucosa (Martínez et. al, sin año). yodo por polisacárido ramificado
Dichos productos son azúcares gracias al color rojo-ámbar en el tubo
reductores por lo que dan positivo a la testigo sin hidrolizar (a-amilasa) esto
prueba de Fehling. debido a que, a diferencia de
Para la prueba de Seliwanoff, en los polisacáridos lineales, los
tubos hidrolizados con HCl y con polisacáridos ramificados forman
a-amilasa dan positivo a la prueba de hélices más cortas por las
Seliwanoff para aldosas por la ramificaciones lo cual se ven un tanto
impedidas para unirse por fuerzas de ● Berg, M., Tymockzo, L. y Stryer,
atracción por cargas por lo cual los L. (2007). Bioquímica.
complejos que, en polisacáridos Barcelona, España. Editorial
lineales, se unen totalmente formando Reverté (6a ed.) pp. (309).
una coloración azul intensa casi negra. ● Peña, A., Arroyo, A., Gómez, A.
Es por el impedimento para la y Tapia, R. (2002). Bioquímica.
formación de los complejos de yodo México, D.F. Editorial Limusa
genera dicha coloración (MacFaddin, pp. (199-204).
2003). ● MacFaddin, F. (2003). Pruebas
bioquímicas para la
CONCLUSIONES. identificación de bacterias de
● El glucógeno es un polisacárido importancia clínica. Madrid.
ramificado. Editorial Médica Panamericana
● La hidrólisis ácida es más (3a ed.) pp. (391-394)
efectiva que la hidrólisis
enzimática. TABLAS.
● La glucosa, maltosa e Tabla 1. Realizada por Fernanda Simone
isomaltosa son azúcares Vargas Valdez
reductores. ¿Qué hice? ¿Para qué lo hice?
● La hidrólisis del glucógeno da
lugar a aldosas como es la Pesar el vaso de Obtener el peso del
glucosa. pp solo y hígado mediante:
después con el peso del vaso de pp
REFERENCIAS.
hígado con el hígado - peso
● Nelson D.L, Cox M.M (2005) del vaso solo = peso
“Lenhinger: Principios de del hígado
Bioquímica” Omega 4° Edición.
México Pesar el hígado Calcular el
rendimiento y para
● Alberts, Bray, et all. (2011)
adicionar después el
“Introducción a la Biología tricloroacético
celular”
● Panamericana 3° Edición. Extraer el hígado Si se estresa
México Mckee T. , Mckee J.R. sin estresar a la bajaran los niveles
(2003) rata de glucógeno en el
hígado
● Bioquímica: La base molecular
de la vida. 3° Edición. México Lavar el hígado Eliminar la sangre
● Devlin, M. (1999). Bioquímica: en agua fría para obtener sólo el
libro de texto con aplicaciones tejido y evitar la
clínicas. España. Editorial descomposición
Reverté (3a ed.) pp. (317). Adición del ácido Precipitar las
● Fieser, F. (1982). Experimentos tricloroacético proteínas y poder
de química orgánica. 10% solubilizar el
Barcelona, España. Editorial glucógeno
Reverté pp. (140).
Mortero frío y Obtener una pasta
moler con arena que nos permita producto no
romper la contiene residuos de
membrana de los proteínas
hepatocitos para
obtener el Hidrólisis de Romper la molécula
glucógeno glucógeno de glucógeno y
hacer más pruebas
Centrifugar Fase orgánica: de caracterización
glucógeno + Ácido
tricloroacético Lugol Identificar
Fase acuosa: polisacáridos
Precipitado de
proteínas Fehling Identificar presencia
de azúcares
Resuspender el Reextraer reductores
precipitado en el glucógeno de las
ácido proteínas Seliwanoff Identificación de
tricloroacético precipitadas aldosas y cetosas
5%
Tabla 1.1 Actividades y finalidades
Agregar el doble Precipitar/flocular el
durante la práctica. Realizada por
de volumen en glucógeno mediante
alcohol la disolución de Ibarra Rivera Arturo Ivan
otros carbohidratos Actividad Finalidad
en el alcohol y
disminuyendo la Previamente Poder obtener el
constante dieléctrica pesar vaso de peso del hígado
del medio precipitados de rata por
vacío. diferencia.
Dejar evaporar Obtenemos un
el etanol sólido que nos dará
el peso del Extracción del Sacrificar a la
glucógeno obtenido hígado de la rata sin
rata. estresarla para
Prueba de Prueba general para evitar que,
Molish carbohidratos y fisiológicamente
saber que nuestro hablando, no se
producto es un desarrollen
carbohidrato reacciones de
degradación de
Prueba de Biuret Identifica formación
glucógeno.
de enlaces
(Sustancia de
peptídicos para
experimentación)
saber que nuestro
producto no es una Posteriormente Determinar peso
proteína pesar el vaso de del hígado por
precipitados con diferencia de
Prueba de Identifica grupos
el hígado de peso. Y
Ninhidrina amino libres para
rata. determinar el
saber que nuestro
rendimiento del
 glucógeno. constante
dieléctrica del
Lavar el hígado Retirar restos de medio
con agua helada sangre tanto
y cortarlo en interna como Evaporar el Obtener
trozos pequeños. externa para alcohol glucógeno
tener solo el sólido.
tejido.
Pesar glucógeno Obtener el dato
Adición de ácido Sustancia que sólido para calcular el
tricloroacético solubiliza al porcentaje de
10% glucógeno y glucógeno
precipita obtenido.
proteínas que no
son de interés. Prueba de Determinar si el
Molish el sólido
Previamente Triturar el hígado obtenido es un
tener mortero en para obtener el carbohidrato.
hielo y adición glucógeno de las
de arena células Prueba de biuret Determinar si el
hepáticas, la producto no es
arena tiene una una proteína
función (más de dos
mecánica para enlaces
triturarlo peptídicos)

Centrifugar Obtener dos Prueba Determinar si el

fases donde la Ninhidrina producto no
fase orgánica se cuenta con
encuentra el residuos de
glucógeno con el proteínas
ácido (aminoácidos)
tricloroacético la
otra fase Hidrólisis de Degradar el
precipitado de glucógeno glucógeno para
proteínas y otras pruebas
sustancias que posteriores.
no son de
Prueba con Identificar
interés.
Lugol polisacáridos
Resuspender la Extraer la mayor
Prueba de Identificar
fase orgánica cantidad de
Fehling azúcares
adicionando glucógeno y no
reductores
ácido desperdiciar
tricloroacético reactivo. Prueba de Identificar
5% Seliwanoff aldosas o
cetosas.
Adición el doble Flocular el
de volumen de glucógeno.
alcohol Disminuye la PREGUNTA EXTRA.
 1. ¿Qué función tiene la
alfa-amilasa?
La alfa-amilasa tiene la función de
hidrolizar o romper enlaces
a-glucosídicos de polisacáridos de alto
peso molecular. En el proceso de la
digestión desde la masticación, en las
glándulas salivales secretan saliva que
contiene alfa amilasa que logra
degradar el almidón de los alimentos
para formar maltosa y dextrina.
Aunque también se secreta dicha
enzima por los jugos pancreáticos que
son llevados a la primera parte del
intestino delgado para degradar
polisacáridos y otras biomoléculas
para aprovechar sus nutrientes por el
cuerpo humano.