GLUCOGENÓLISIS

PRACTICA N° 5

GLUCOGENÓLISIS

I. OBJETIVOS

 Evaluar el proceso metabólico de la glucogenólisis en el hígado y la cuantificación del

glucógeno y la glucosa liberada, para determinar su relación con la temperatura y con
el tiempo.

II. MARCO TEÓRICO

Nuestro organismo obtiene energía a partir de la glucosa, que puede ser almacenada en el
hígado y en los músculos, en forma de glucógeno. Por lo tanto, el glucógeno, constituye la
principal fuente de energía para los músculos. El glucógeno es un polisacárido de reserva
energética de los animales, formado por cadenas ramificadas de glucosa. Está formado por
varias cadenas cortas (12 a 18 unidades) de glucosa. Los enlaces presentes en el glucógeno son
del tipo glucosídico cada intervalo de entre 8 y 10 residuos enlazados de esta forma. El hígado,
capta y almacena glucosa transformándola en glucógeno, proceso conocido como glucogénesis.
La glucogenólisis es un proceso catabólico llevado a cabo en el citosol que consiste en la
remoción de un monómero de glucosa de un glucógeno mediante fosforólisis para
producir glucosa 1 fosfato, que después se convertirá en glucosa 6 fosfato, el segundo paso de
la glucólisis. Es antagónica de la glucogénesis. Estimulada por el glucagón en el hígado,
epinefrina (adrenalina) en el músculo e inhibida por la insulina. Es un proceso que requiere un
grupo específico de enzimas citosolíticas: la glucógenofosforilasa que segmenta
secuencialmente los enlaces glucosídicos, la fosfoglucomutasa que convierte la G1P en G6P la
cual puede hidrolizarse a glucosa (en hígado) o seguir la vía glucolítica (hígado y músculo) y
por último la Glucosil transferasa α(1→4) y la amilo-1,6-glucosidasa,que se encarga de
hidrolizar las ramificaciones. Su deficiencia produce la Enfermedad de Cori y la Enfermedad de
Pompe.

En esta práctica determinaremos cuanlitativamente el glucógeno en un corte de hígado y la

glucosa en el filtrado obtenido de este mismo, luego de incubarlo. De esta manera cuando se
coloca un trozo de hígado en un medio salino, sin sustratos, va a predominar la glucogenólisis,
es decir, la despolimerización del glucógeno

III. MATERIALES Y REACTIVOS

 Hígado de res licuado

 Almidón
 Agua
 Lugol
 Vasos de precipitados
 pHmetro
 Baño Maria
 Matraz
 Balanza analítica

IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1. Medir el pH de la muestra (hígado licuado).
2. Adicionar 5 ml de extracto de hígado a un tubo de ensayo y luego se le adiciona
3 gotas de lugol y observar.
3. Pesar 10 gr de almidón y 1 gr de cloruro de sodio.
4. Llenar 10 ml de agua en un vaso precipitado.
5. Adicionar la solución de almidón y cloruro de sodio a 125mL de hígado licuado
y luego medir el pH.
6. La nueva solución (almidón + NaCl + hígado licuado) se divide en 4 tubos
de ensayo utilizando un tubo de control que contiene 5 ml de agua.
7. Los tubos de ensayos fueron puestos a baño María a 37° para luego hacer la
prueba de lugol y observar.
8. Cada 2 segundos retirar un tubo de ensayo para luego adicionar 3 gotas de
lugol.
9. Observar el cambio de color que evidencie la presencia de glucosa.
V. RESULTADOS

Tabla 1: Descripción de los resultados

OSBERVACIONES
Tiempo Adición de 3 gotas de
lugol
2s 4s 1 min 2 min

Tubo 1

Se observa un crecimiento de la espuma en la Presencia de

muestra esto se puede deber a la temperatura manchas oscuras al
del baño maria contacto del lugol con
la muestra

Tubo 2

Se observa un crecimiento de la espuma en la

muestra esto se puede deber a la temperatura
del baño maria

Presencia de
manchas oscuras al
contacto del lugol con
la muestra
Tubo 3
 Se observa un crecimiento de la espuma en la Presencia de
muestra esto se puede deber a la temperatura manchas oscuras al
del baño maria contacto del lugol con
la muestra

Tubo 4

Se observa un crecimiento de la espuma en la Presencia de

muestra esto se puede deber a la temperatura manchas oscuras al
del baño maria contacto del lugol con
la muestra

Al tratarse de un tubo con agua no cambia nada Presencia de una

Control en aspecto solo se puede decir que la coloración amarilla
temperatura se incrementa por acción del lugol

Elaboración propia, 2018

Tabla 2: Descripción de los resultados

Muestra agua Almidón glucosa Hígado

Resultado - + - -
Elaboración propia, 2018
DISCUSIONES

El resultado para la obtención de glucógeno a partir de hígado de res fue negativo, así
como la prueba control, ya que ambas mostraron el color que el lugol debe marcar
cuando es negativa en polisacáridos: viraron a una coloración amarilla. Los resultados
arrojados por los demás tubos de prueba muestran que se obtuvo en la muestra de
almidón pequeñas cantidades de glucógeno; las respuestas de esta problemática se
deben al control que se tuvo ese día en el laboratorio por situaciones externas ya que,
el manejo del recipiente que contenía la muestra o al procesar esta y así pudo ser
contaminado, además también puede deberse a una contaminación por el operador o
factores ambientales, etc.

Con respecto a la muestra, por lo cual no se obtuvieron los resultados deseados, esto se
debe a que el animal pudo a ver sido sacrificado con muchos días de anticipación, lo que
llevo a la pérdida del glucógeno, ya que para que la prueba de positiva debe ser
sacrificado el animal al momento de la práctica.

Para poder apreciar la glucogenolisis dada en el extracto al ser reaccionado con el

almidón, necesitamos mover la sustancia constantemente para que se puede observar
los cambios de Dextrina hasta Glucógeno.

Debemos mantener el recipiente que contiene el extracto, en la temperatura especifica

del baño maría el cual es de 37°C ya que el medio interfiere mucho en las reacciones.
Es muy importante tener el tubo control para determinar la cantidad para agregar de
almidón al extracto de hígado ya que así podemos saber, que contiene en más cantidad
nuestra muestra.

VI. CONCLUSIONES

 Se conoció el proceso de glucogenolisis mediante el cual el glucógeno es

catalizado por el enzima glucógeno fosforilaza hasta la obtención de glucosa.
 Se llegó a determinar la presencia de glucosa derivado de la glucogenolisis, en
los tubos de ensayo mediante la prueba de lugol la cual fue negativa.
 Se evaluó el proceso metabólico de la glucogenólisis en el hígado y la
cuantificación del glucógeno y la glucosa liberada, para determinar su relación
con la temperatura y con el tiempo.

VII. RECOMENDACIONES

 No excederse en el tiempo ni en el aumento de la temperatura de incubado de la

muestra que fue de 37◦C, ya que esto podría provocar una desnaturalización
del enzima glucógeno fosforilaza.
  Tener una muestra de hígado bien licuado para poder determinar con precisión,
usando el lugol, la dextrina, maltosa y glucosa mediante los tubos de ensayo a
través de los tiempos determinados por el siguiente laboratorio.

VIII. CUESTIONARIO

1. Explicar las formas en los que los seres vivos almacenan los carbohidratos.

En los organismos autótrofos o vegetales, los carbohidratos se almacenan en forma de

azúcares, o monosacáridos, que son producidos mediante la fotosíntesis, es decir, la
energía solar es transformada en energía calórica a través del glucógeno.

En los animales y seres humanos, por otro lado, el glucógeno que resulta de la ingesta
de carbohidratos se almacena en los músculos y en el hígado formando membranas que
aportan calorías al organismo.

2. Explique cuando se presenta la glucogenólisis.

3. Mencionar las enzimas y la función que cumplen en la glucogenólisis.

La glucosa es la molécula básica de los azúcares, que cumple con la función de
proporcionar energía al organismo, y para tal fín debe pasar por un proceso de
degradación para poder ser usada en el ciclo metabólico de los carbohidratos.

La degradación o ruptura de la molécula de glucosa depende de la acción de complejos

enzimáticos encargados de favorecer este proceso, que se da por etapas (aquí sól
describiré someramente los pasos esenciales del proceso enumerando las enzimas
participantes):

Enzimas Hexoquinasas se encargan de la fosforilación de la molécula de glucosa y su

paso a Glucosa-6-Fosfato (G-6-P);

La fosfoglucoisomerasa se encarga de la isomerización de la glucosa fosforilada, es

decir, su conversión en fructosa-6-fosfato;

Exise una enzima que a su vez fosforila la F-6-P, que es la fosfofructoisomerasa;

La enzima aldolasa se encarga de la degradación de las moléculas fosforiladas a

moléculas más pequeñas (triosas) que pueden formar gliceraldehido y
dihidroxiacetona, y esta última tambien puede isomerizarse a través de la aldolasa;

La deshidrogenasa es la responsable de la oxidación de las moléculas obtenidas a partir

de la glucosa, donde participa la coenzima NAD+;

En los procesos siguientes se comienza a produicr ATP, por medio de la fosforilación de

la molécula de ADP mediante la enzima fosfoglicerato quinasa. Existe también una
reorganización estructural de las triosas, creando enlaces de alta energía, donde
participan enolasas y mutasas;

Como un sub-producto de este proceso es el piruvato, este será sometido a un proceso

de utilización, por medio de las enzimas piruvato quinasas.

4. Realice el esquema de las reacciones enzimáticas que ocurren en la glucogenólisis.

IX. ANEXOS

Figura 1. Pesado del hígado

Figura 2. Peso del cloruro

Figura 3. Procesado del Hígado

 Figura 4. Muestra dividida

Figura 5. Muestra reaccionando al lugol

Figura 6. Prueba del lugol