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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES


CUAUTITLN C1
Qumica
Bioquimica Metabolica
Grupo 1701
Reporte de la prctica No. 4 Extraccin de
glucgeno de hgado de ratn
Equipo No. 1

Diaz Puente Maria Fernanda


Flores Garcia Zayra
Gamboa Leon Angela Citlali

Fecha de realizacin de la prctica: 28-Ago-2015


Fecha de entrega del reporte: 05- Octubre-2015
Semestre 2016-I
Asesores: Q. Karla Hernandez Perez
Q.F.B. Jessica Filisola Villaseor

INTRODUCCIN:
En esta sesin experimental se llev a cabo la extraccin de glucogeno del higado de un
raton. Los seres vivos almacenan glcidos en forma de polisacridos, que sirven como
materiales de reserva. El almidn en los vegetales superiores y el glucgeno en los

animales. El glucgeno consta de cadenas de glucosa unidas por enlaces glucosdicos (14) y ramificaciones, cada 8 10 unidades, de glucosa mediante enlace glucosdico (1-6).

El glucgeno es especialmente abundante en el hgado en donde puede ocupar hasta un


10% de su peso y en msculo, un 1%.
La extraccin del glucgeno del hgado de esta prctica implica un proceso de
homogeneizacin del tejido y ruptura celular, as como la extraccin y la eliminacin de las
protenas para evitar interferencias en los anlisis posteriores. Para la valoracin de la
glucosa, que en esta prctica solo se realizar de forma cualitativa, hay que someter al
precipitado de glucgeno a una hidrlisis cida, de esta forma se rompen los enlaces
glicosdicos y se libera glucosa.
El glucgeno acta como regulador de la glucosa sangunea, almacenndola como
glucgeno durante una buena alimentacin (glucognesis) y liberndola por fosforlisis
(glucogenolisis) durante el ayuno, ya que en esta situacin no hay absorcin intestinal. La
duracin del glucgeno heptico en ayunas es de aproximadamente 24 h. A partir de este
momento, la concentracin en sangre se mantiene por sntesis de glucosa a partir de
sustancias distintas a los carbohidratos (gluconeognesis). En estos mecanismos de
control, actan la adrenalina y el cortisol.
Se emplearon tcnicas de anlisis cualitativos para la identificacin de carbohidratos como
lo fueron, la reaccin de Molish, y la reaccin del yodo. Estas tcnicas dan como positivos a
los carbohidratos con capacidad reductora, con aldehdos y algunos cidos como el frmico,
lctico, ctrico; permite diferenciar aldosas de cetosas e identificar a los polisacridos como
lo son el almidn y glucgeno.

OBJETIVOS:
Objetivo general:

Sacrificar los ratones sometidos a diferentes condiciones de estado y alimentacin para


despus llevar a cabo una diseccin extrayendo de los mismos el hgado y as cuantificar el
glucgeno presente en cada uno de ellos.
Objetivos particulares:
Observar cmo la dieta y el sometimiento de estrs en los animales de
experimentacin influyen en la cantidad almacenada de glucgeno.
Comprobar cmo se llevan a cabo las rutas metablicas de sintesis y
degradacion de glucogeno.
Comparar los niveles de glucgeno heptico en ratones sometidos a una
dieta rica en Carbohidratos y a una dieta normal.
Realizar las reacciones de identificacin de carbohidratos (Molish y Lugol)
para comprobar la presencia de Glucgeno.
METODOLOGA.
La indicada en el Manual de Bioquimica Metabolica, correspondiente a la Practica No. 4
Extraccin de glucgeno de hgado de ratn, Pgs. 50-51.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS:

Tabla 1. Descripcin de condiciones de alimentos y estado emocional para los ratones


sacrificados, separados por 4 lotes.

Lote
Lote 2: Ratn con

Peso del hgado

Peso del
glucgeno

% del glucgeno

1.3 g

0.4 g

30.76%

dieta rica en
carbohidratos
sacrificado sin estrs.

1.3 g

0.3 g

23.07%

1.6 g

0.4 g

25%

Lote 4: Ratn con


dieta rica en
carbohidratos
sacrificado con estrs.

2.4 g

0.2 g

8.33%

2.4 g

0.2 g

8.69%

1.1 g

0.3 g

27.27%

1.3 g

0.1 g

7.69%

2g

0.2 g

10%

1.6 g

0.1 g

6.25%

1.4 g

0.1 g

7.14%

Lote 1: Ratn con


dieta normal
sacrificado sin estrs.

Lote 3: Ratn con


dieta normal
sacrificado con estrs.

Tabla 2. Resultados de glucgeno extrado de hgado de ratn sometido a diferentes


condiciones, de acuerdo a las indicaciones de cada lote.
ANLISIS DE RESULTADOS:
Se realiz sacrificio de ratones a diferentes condiciones, con el fin de extraer de su hgado
el glucgeno almacenado en este rgano. Se determin que se extrajera de tejido heptico
y no del muscular debido a que, a pesar de que la cantidad de glucgeno presente en
msculo es menor en cuanto a la de hgado (msculo 1%-hgado 8%), por medios prcticos
es preferente cuantificar en este rgano. Por lo tanto, hay que tomar en cuenta que cuando
se cuantifica la cantidad de glucgeno presente en hgado, nos referimos principalmente a
analizar el nivel de glucosa en sangre, y cuando se cuantifica la cantidad de glucgeno en
msculo se cuantifica la cantidad de glucosa-6-fosfato, la cual no puede estar presente en
sangre. La diferencia del producto en ambos rganos radica a que en msculo no se
encuentra la enzima glucosa-6-fosfatasa que es la encargada de desfosforilar la glucosa y
permitir que salga a sangre.
Al aadir cido tricloroactico al homogeneizar el tejido , precipitan numerosas sustancias
de peso molecular elevado, como las protenas y los cidos nucleicos, en tanto que el
glucgeno continua disuelto. El glucgeno puede separarse de los monosacridos y otros
compuestos hidrosolubles por precipitacin con alcohol, porque los polisacridos son mucho
menos solubles en alcohol acuoso que los monosacridos.
Las condiciones en las cuales fueron divididos los ratones para su sacrificio se muestran en
la tabla 2 . Como se puede observar hay mayor cantidad de glucgeno en el Lote 3. Ratn
con dieta rica en carbohidratos sacrificado sin estrs.
Debido a que la dieta de cada lote se suministr durante dos semanas se analizar primero
la gluconeognesis (ruta metablica que se encarga de la sntesis de glucgeno), debido a
que los ratones consumieron una alta cantidad de carbohidratos.

La insulina es la hormona que se encarga de disminuir la concentracin de glucosa de


manera que se mantenga en un rango normal.
La insulina liberada se une a un receptor especfico , que es una glicoprotena con dos
subunidades alfa y dos beta, y que se encuentra ubicado en la membrana plasmtica de las
clulas. Una vez que la insulina interacciona con su receptor se pueden activar varias vas
de sealizacin, entre las cuales se encuentran la glucogenesis. La insilina provoca que la
glucosa entre a las clulas del hgado (hepatocitos) y se convierte en glucosa-6-fosfato por
medio de la enzima glucoquinasa (por ser quinasa utiliza ATP, dejando ADP),
posteriormente se convierte glucosa-6-fosfato a glucosa-1-fosfato por medio de la enzima
fosfoglucomutasa, despus de esto se forma uridinadifosfatoglucosa por medio de UTP
liberando un pirofosfato inorgnico (PPi). La uridinadifosfato se convierte en glucgeno el
cual presenta enlaces glucosdicos a-(1,4) por medio de la enzima GLUCGENO SINTASA.
Finalmente la enzima ramificadora del glucgeno convierte los enlaces glucosdicos a-(1,4)
a enlaces glucosdicos ramificados a-(1,6).

Imagen __. Activacin la glucgeno sintasa por Insulina


Por lo tanto en el lote antes mencionado, es evidente que habr mayor cantidad de
glucgeno en comparacin a los dems lotes, principalmente comparado con el Lote 1:
Ratn con dieta normal sacrificado sin estrs. Debido a que a diferencia de ste la cantidad
de carbohidratos ingeridos durante el periodo de tiempo marcado es menor. Cabe aclarar
que hacemos esta comparacin debido a que el Lote 3 y el Lote 4 tienen como condicin
llevar los ratones a un estado de estrs, el cual provoca que se lleve a cabo otra ruta
metablica conocida como glucogenolisis.
La glucogenolisis se da cuando los niveles de glucosa en sangre son bajos. Estos cambios
de glucosa en sangre puede ser provocados por diferentes factores, como lo son la falta de
alimento (estado de ayuno) o a causa de emociones fuertes como el estrs. Cuando se
presenta esto, una hormona polipeptdica es secretada por las clulas alfa de los islotes de
Langerhans del pncreas, llamada Glucagn.
La funcin de esta hormona consiste en elevar la concentracin de glucosa en la sangre
para que se mantenga en un rango normal y todos los tejidos puedan utilizar esta glucosa
para obtener energa.

Cuando el glucagn interacciona con los receptores de glucagn en la membrana


plasmtica de las clulas, se activa una cascada de sealizacin molecular que
desencadenana mltiples procesos celulares mediante la activacin e inactivacin de
diversas enzimas.
Los receptores de glucagn se encuentran asociados a protenas G, y una vez que el
glucagn interacciona con dichos receptores, las protenas G sufren un cambio
conformacional y se activan. Las protenas G activas difunden por la membrana plasmtica
y activan a la enzima adenilato ciclasa, que cataliza la formacin de AMPc a partir de AMP
lineal. El AMPc activa la protena quinasa y se desencadena la cascada de fosforilaciones.
La protena quinasa cataliza la fosforilacin de la fosforilasa b quinasa. La fosforilasa b
quinasa-P fosforila a la fosforilasa b hasta la fosforilasa a , que es activa y degrada al
glucgeno. La protena quinasa cataliza tambin la fosforilacin de la glucgeno sintasa,
hacindola inactiva para la sntesis. Como respuesta a la accin hormonal, el AMPc
formado controla, mediante la activacin de la Protena quinasa y una cascada de
fosforilaciones, la sntesis y la degradacin del glucgeno de forma coordinada.

Imagen __. Activacin la glucgeno fosforilasa por Glucagn

Imagen __. Ilustracin de la degradacin y activacin de Glucgeno


El porcentaje de glucgeno reportado a condiciones normales de alimentacin y de estado
sin estrs, en diversas fuentes de consulta en tejido heptico es de aproximadamente el 10
% del peso total de hgado. Sin embargo, en la tabla 2 se puede observar que la cantidad
de glucgeno presente en diferentes muestras hepticas vara. Esto se se explica debido a
que el ratn pudo recibir una alimentacin no muy acorde con su masa corporal, a pesar de
seguirse las indicaciones nutrimentales que se plantearon para el cuidado del animal, y
pese a seguir la dieta recomendada para el ratn. Otro factor importante que pudo haber
dado la diferencia en dicho porcentaje para los lotes 1 y 2 (los cuales son bajo condiciones
sin estrs), es precisamente el estrs, ya que se llev a cabo una mala manipulacin del
animal a la hora de sacrificarlos, provocando que la degradacin de glucgeno se llevar de
manera ms elevada.
En cuanto a los lotes 3 y 4 los cuales fueron llevados a condiciones de estrs, tanto para
dieta alta en carbohidratos,como para dieta normal, mostraron porcentajes de glucgeno
entre 7-8% reduciendo as la cantidad de glucgeno, aunque no tan significativamente si se
compara con los ratones del lote 1. Lo cual concuerda con la ruta de glucogenlisis antes
mencionada, ya que al haber estrs es evidente que la cantidad de glucgeno ser menor.
Para la identificacin del glucgeno extrado del hgado de ratn, se llevaron a cabo
reacciones Cualitativas, conocidas como prueba de Lugol y de Molish.
La prueba de Molish, nos permiti detectar la presencia de hidratos de carbono en
nuestra muestra (que en nuestro caso era identificar glucgeno);. Dicha prueba est

basada en la formacin de furfural o derivados de ste (originado por los cidos


concentrados que provocan una deshidratacin de los azcares) a partir de los
carbohidratos para obtener el furfural que se combina con el -naftol sulfonato originando
un complejo prpura.
En cuanto a la prueba con lugol, esta se fundamenta en que el lugol ocupada los espacios
vacos en las hlices de la cadena de unidades de glucosa, originando un color rojo caoba
con la muestra de glucgeno. Se sabe que di postivo para glucgeno porque esta prueba
es especfica para la identificacin de almidn originando un complejo azul-violeta.

CONCLUSIONES:
- El tejido debe mantenerse fro todo el tiempo para evitar que empiece a
descomponerse.
- El tratamiento con cido tricloroactico (TCA) hace que precipiten las
protenas y cidos nucleicos de la mezcla. El glucgeno aislado se precipita
con etanol.
- El glucgeno heptico es la principal fuente de glucosa sangunea,
sobre todo entre comidas.
- La glucognesis, es la ruta anablica por la que tiene lugar la sntesis
de glucgeno
- El metabolismo del glucgeno est regulado por sistemas hormonales
como el de la adrenalina, insulina y glucagn.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
- Stryer,L (1996).Bioqimica. (4a ed). Barcelona, Espaa: De Revert.
- Nelson, D.L. y Cox, M.M. (2000). Principios de Bioqumica de
Lehninger.(3a ed). Barcelona, Espaa:Omega.
- Starr.,Taggart.,Evers (2009). Biologa La unidad y la diversidad de la
vida. (12a ed) Mxico: CENGAGE Learning.