Cromatografía

GRUPO B-QMC 200L

AUXILIAR:UNIV. FABIANA PAZ
DOCENTE: ING. GRIMA VELASCO
LA CROMATOGRAFÍA COMPRENDE
UN CONJUNTO DE TÉCNICAS QUE
PRETENDEN SEPARAR UNA MEZCLA
BASÁNDOSE EN LA DIFERENTE
CAPACIDAD DE INTERACCIÓN DE
CADA COMPONENTE EN OTRA
SUSTANCIA. DE FORMA GENERAL,
CONSISTE EN PASAR UNA FASE
MÓVIL (LA MEZCLA), A TRAVÉS DE
UNA FASE ESTACIONARIA FIJA
SÓLIDA.
 TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

POR SU NATURALEZA
POR EL PROCESO
LÍQUIDO-LÍQUIDO
ADSORCIÓN
GAS-LÍQUIDO
REPARTO
LÍQUIDO-SÓLIDO
INTERCAMBIO IÓNICO
GAS-SÓLIDO

POR LA FASE ESTACIONARIA

PLANA
-PAPEL
-CAPA FINA TLC
COLUMNA
-CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
-CROMATOGRAFÍA DE GASES
 ABSORCIÓN ADSORCIÓN

ADSORBENTE

ADSORBATO

FENÓMENO FÍSICO DONDE UN

ES UN FENÓMENO FÍSICO
COMPUESTO LÍQUIDO O
QUE IMPLICA LA DIFUSIÓN
GASEOSO, SE PONE EN
DE MASA, NO IMPLICA
CONTACTO CON UN SÓLIDO
CAMBIOS QUÍMICOS, POR
ADSORBENTE, Y SE ADHIERE A
LO QUE ES REVERSIBLE.
SU SUPERFICIE.
ADSORCIÓN FISISORCIÓN

SE RIGE POR
FUERZAS DE
ATRACCIÓN DÉBILES,
NORMALMENTE VAN
DER WAALS. EL
ADSORBATO
CONSERVA SU
IDENTIDAD, EXISTE
FORMACIÓN DE
MULTICAPAS.
ADSORCIÓN QUIMISORCIÓN

SE RIGE POR
FUERZAS DE
ATRACCIÓN DÉBILES,
NORMALMENTE VAN
DER WAALS. EL
ADSORBATO
CONSERVA SU
IDENTIDAD, EXISTE
FORMACIÓN DE
MULTICAPAS.
 EL SOLUTO ES ADSORBIDO

EN LA SUPERFICIE DEL

ADSORBENTE Y DESORBIDO

POR EL SOLVENTE EN FASE

MÓVIL.

EL
CO
MP
MÁ UE
S ST
AT O
RA
EL ÍDO
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SO R
SE RB
RÁ EN
TE
MÁ ,
S DIF
DE ÍC
EL IL
CO UIR
RR Y
ER
Á ME
NO
S.

CAPA DELGADA-COLUMNA-CAPA PREPARATIVA

 SOLO PARA
CROMATOGRAFÍA EN
PLACA
 SON SÓLIDOS MUY POLARES, POROSOS. PARA
CARBÓN ACTIVADO
LAS PLACAS PREPARATIVAS SE PUEDE AÑADIR UN
SILICATO DE MAGNESIO ADHERENTE (YESO).
ALÚMINA
EL ADSORBENTE DEBE SER INERTE FRENTE A LA MUESTRA,
SÍLICA EN GEL Y DEBE SER HOMOGÉNEO, NUNCA IRREGULAR.
HIDRÓXIDO DE
ALUMINIO TAMAÑO DE GRÁNULO
HIDRÓXIDO DE CALCIO
CARBONATO DE CALCIO MAYOR SUPERFICIE- MAYOR ADSORCIÓN
ALMIDÓN
SI ES MUY PEQUEÑO NO SE LOGRA EL EQUILIBRIO, SI
ES MUY GRANDE PUEDE EXISTIR DIFUSIÓN Y
ALÚMIN
A (PH 7 ENSANCHAMIENTO DE MANCHAS.
Y SÍLIC -8)
A EN G HPLC- 5 MICRONES (ALTA RESOLUCIÓN)
(PH 4-5 EL
) SON L CCD Y CCP- 10 A 40 MICRONES
MÁS US OS
ADOS COLUMNA- 60-200 MICRONES (MENOS
RESOLUCIÓN)
 SU CAPACIDAD DE SER ADSORBIDO DEPENDE DE LA
POLARIZABILIDAD Y SU CAPACIDAD DE FORMAR
POLARIDAD
PUENTES DE HIDRÓGENO.
ÁCIDOS Y BASES
ALCOHOLES Y TIOLES UNIONES FUERTES:
ALDEHÍDOS Y CETONAS PUENTES DE HIDRÓGENO, INTERACCIÓN ENTRE
HALOGENUROS DE ALQUILO DIPOLOS PERMANENTES.
ÉSTERES
HIDROCARBUROS UNIONES DÉBILES:
INSATURADOS INTERACCIÓN ENTRE DIPOLOS PERMANENTES
HIDROCARBUROS Y TRANSITORIOS, Y ENTRE
SATURADOS TRANSITORIOS.
MIEN
TRAS
POLA MÁS
R SE
SOLU A EL
TO, S
ADSO ERÁ
RBID
FUER O MÁ
TEME S
COR NTE
RERÁ Y
MEN
OS.
SERIE ELUOTRÓPICA LA MEZCLA A SEPARAR DEBE ESTAR DISUELTA EN UN
SOLVENTE EN EL QUE ES MUY SOLUBLE.
ÉTER DE PETRÓLEO
ÉTER DIETÍLICO ES PREFERIBLE EMPEZAR EL DESARROLLO CON SOLVENTES
CICLOHEXANO DE BAJA POLARIDAD.
ACETATO DE ETILO SE DEBEN USAR SOLVENTES ANHIDROS Y MISCIBLES
ENTRE SÍ, DE OTRA FORMA LA RESOLUCIÓN NO SERÁ
TETRACLORURO DE
BUENA.
CARBONO
PIRIDINA SI LA ELUCIÓN ES MUY ELUY
BENCENO ENTE
RÁPIDA NO HAY EQUILIBRIO POLA S
DICLOROMETANO ARRA RES
ADSORCIÓN-DESORCIÓN Y STRE
ELUY RÁPID
CLOROFORMO LAS BANDAS SE DEFORMAN. ENTE O,
S NO
ETANOL SI LA ELUCIÓN ES MUY POLA
ARRA RES
METANOL LENTA PREDOMINA LA STRE
LENT
AGUA O.
DIFUSIÓN Y AFECTA LA
ÁCIDO ACÉTICO RESOLUCIÓN.
 CAPA FINA CAPA PREPARATIVA
SE USA CON APLICACIÓN
ANALÍTICA, NOS AYUDA A
ENCONTRAR EN SOLVENTE
DE DESARROLLO ADECUADO
TAMAÑO APROXIMADO
PARA UNA CROMATOGRAFÍA
20X20 CM. MUESTRAS
EN CAPA PREPARATIVA.
PEQUEÑAS
PARA UN COMPUESTO
ÚNICO SE DEBE LLEGAR A
UN RF 0.5.

PERMITE ANALIZAR Y SEPARAR CANTIDADES MAYORES DE

MUESTRA.
COLUMNA PERMITE CAMBIO SECUENCIAL DE POLARIDAD DE SOLVENTE
DE ELUCIÓN.
TIENE DESPLAZAMIENTO ILIMITADO DE FRENTE DE
SOLVENTE.
 CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN
LA SEPARACIÓN SE BASA EN LA DISTRIBUCIÓN SELECTIVA DEL SOLUTO EN LAS
DIFERENTES FASES, POR SU RESPECTIVA CONSTANTE DE PARTICIÓN.
LA FASE ESTACIONARIA ES AGUA SOBRE CELULOSA, ALMIDÓN, ETC.
LA FASE MÓVIL ES UN LÍQUIDO INMISCIBLE CON AGUA

RF
ES UNA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDO-LÍQUIDO DE SÓ
PE LO
CO ND
E F E D
DE ICI EL
PA EN
RT T
ICI E
ÓN
.
LA POLARIDAD DEL AGUA SIEMPRE
SERÁ MAYOR A LA DEL SOLVENTE
ORGÁNICO, POR LO QUE:

LAS SUSTANCIAS POLARES SERÁN

MÁS RETENIDAS, Y MÁS
DESPLAZADAS LAS MENOS
POLARES.
 CROMATOGRAFÍA
GASEOSA

GAS-SÓLIDO GAS-LÍQUIDO
EL MECANISMO ES EL MECANISMO ES
LA ADSORCIÓN EN LA PARTICIÓN EN
UN SUSTRATO UNA PELÍCULA
SÓLIDO. LÍQUIDA.
 CROMATOGRAFÍA DE
INTERCAMBIO IÓNICO
SE EMPLEA EN LA SEPARACIÓN DE SUSTANCIAS IÓNICAS, QUE PUEDEN SER
INORGÁNICAS COMO ORGÁNICAS (ENZIMAS, PROTEÍNAS, HORMONAS,
VIRUS, ÁCIDOS NUCLEICOS, ETC.)
SE USAN: RESINAS, GELES Y CELULOSAS DE INTERCAMBIO IÓNICO.

INTERCAMBIO CATIÓNICO INTERCAMBIO ANIÓNICO

 CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN
SOBRE GELES
SE UTILIZA EN LA SEPARACIÓN DE SUSTANCIAS QUE POSEEN
VOLÚMENES MOLECULARES DIFERENTES.

MENOR PESO
LA SUSTANCIA DE MAYOR
MOLECULAR
PESO MOLECULAR, NO PUEDE
PENETRAR EN EL GEL, Y PASA
MÁS RÁPIDO.
LAS MOLÉCULAS MÁS
PEQUEÑAS PENETRAN EN LOS
MAYOR PESO
POROS DEL GEL Y SON MÁS
MOLECULAR
RETENIDAS POR EL MISMO
 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA
RESOLUCIÓN (HPLC)
ES SIMILAR A LA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA, SIN EMBARGO, EL SOPORTE ES DE
MATERIAL MUY PEQUEÑO, ENTRE 5-10 MICRONES DE DIÁMETRO, OFRECIENDO UN
GRAN EMPAQUETAMIENTO, LO QUE PUEDE HACER EL PROCESO MUY LENTO. POR
ESTA RAZÓN SE NECESITAN GRANDES PRESIONES PARA QUE EL SOLVENTE FLUYA.
 a c i a s
G r