CROMATOGRAFA:

Propiedades fsicoqumicas
Profesor: Lpez Naranjo Francisco

Delgadillo Montoya Ma. Griselda

Flores Mrquez Kenia

Lpez Rojas Jesica Ivette

Verde Len Eduardo Damin

Corts Velzquez Paola

Equipo:

Cromatografa
Mtodo fsico de separacin para la caracterizacin de mezclas
complejas.
Es un conjunto de tcnicas que se basa en el principio de
retencin selectiva.
Objetivo: Separar los distintos componentes existentes en una
mezcla (permitiendo as su identificacin e incluso determinar
las cantidades de los componentes).
Dentro de las tcnicas de cromatografa existe una fase mvil y
una fase estacionaria.
Los componentes de la mezcla interactan entre si hasta
obtener la separacin de ellos mediante la fase estacionaria.

Clasificacin
Cromatografa plana:
En papel
CCF
Cromatografa en columna:
Gases
Lquidos
Fluidos supercrticos

Cromatografa Lquido-lquido
Se llevan a cabo sobre:
Celulosa o gel de slice hmeda
Pueden ser en:
Forma de tira de papel
Capa fina
Columna
(Fundamental para la separacin de sustancias solubles
en agua*)

El nico factor que influye en el movimiento de un

compuesto a lo largo del papel es la solubilidad relativa
el mismo en la fase mvil y en la estacionaria.
Sustancias solubles solo en el disolvente emigran a la
misma velocidad de este.
Sustancias solamente solubles en agua permanecern
en el origen de la cromatografa.

CROMATOGRAFIA
POR EXCLUSION DE
TAMAO DE
PARTICULAS

Las tcnicas cromatogrficas,

basadas en la separacin de
los componentes de una
mezcla, aprovechando su
distribucin entre dos fases:

la fase mvil y la fase

estacionaria.

En la cromatografa de
exclusin la fase estacionaria
es slida y la fase mvil es
lquida.

El relleno de columna
se comporta como un
tamiz o filtro dnde
se distinguen tres
tipos de molculas:
Molculas
permeable
s

Molculas
excluidas
Molculas
fraccionab
les

Molculas
permeables:
molculas pequeas
que entran el
interior del relleno
poroso, pasan
lentamente y
quedan retenidas
en el poro.

- Molculas
excluidas:
molculas de
medida superior al
poro del relleno que
no entran en el
relleno y pasan
rpidamente por l.

- Molculas
fraccionables:
molculas
intermedias que
entran de manera
parcial en el relleno
poroso.

EN LO QUE RESPECTA
A LA
se utiliza
un ESTACIONARIA
FASE

material poroso
con las
siguientes
caractersticas:

Resistencia mecnica a las

alta presiones
.

preparacin
rpida y
sencilla;

Estabilidad
qumica
(al pH y a la
temperatura)
;

mxima
inercia frente
a los
compuestos a
separar;

Estos
materiales
pueden
clasificarse
segn

Su
constituci
n
qumica

flexibilida
d de su
estructur
a

microestructur
a

orige
n

La caracterstica
principal del
eluyente empleado
como fase mvil es:
que debe arrastrar
los diferentes
componentes, sin
interaccionar ni con
la muestra ni con la
fase estacionaria.
Por tanto, la
muestra debe ser
soluble en la fase
mvil

Adems de la estabilidad
qumica, hay
otros parmetros a tener en
cuenta:

A mayor viscosidad,
menos reproducibles
son los resultados.

El aumento de la
temperatura favorece la
resolucin de la
muestra, ya que la
difusin se produce con
mayor facilidad.

Los valores bajos de

fuerza inica favorecen
las interacciones inicas
soluto-fase
estacionaria, mientras
los valores altos
favorecen las
interacciones
hidrofbicas.

Al aumentar el flujo
del eluyente se produce
una disminucin de la
eficacia dela columna.

El pH influye en la
ionizacin de los solutos
y grupos activos de la
fase estacionaria.

Las columnas pueden ser de

vidrio, borosilicato o de
material plstico
transparente.

No se utilizan columnas
metlicas para evitar
fenmenos de catlisis, que
pueden provocar
degradaciones del gel o de la
muestra.

Una columna corta y con volumen

pequeo puede dar lugar a
separaciones incompletas.

Mientras que una columna

larga y con un volumen grande
provoca diluciones
innecesarias

A mayor grado de
compactacin, mayor ser el
volumen que ocupan las
partculas de la fase
estacionaria y por tanto,
menor el volumen muerto.

Cromatografa de
reparto o de
particin

Que es?
Se caracteriza por una FASE ESTACIONARIA lquida
anclada en un SOPORTE SOLIDO y una FASE LQUIDA
MOVIL.
Ambas fases son inmiscibles

La separacin se da por la
particin del soluto entre
dos fases lquidas
(solubilidad relativa)

Ley de reparto

 Se aproxima mucho a la Cromatografa en

Contracorriente
Las sustancias ms retenidas tienen
mayor afinidad (solubilidad) por la fase
estacionaria, que por la fase mvil
La separacin de las sustancias se d por
diferencias en esta solubilidad relativa

Cromatografa de
intercambio inico.

Definicin
La cromatografa de intercambio inico (o cromatografa
inica) es un proceso que permite la separacin de
iones y molculas polares basado en las propiedades de
carga de las molculas. Puede ser usada en casi
cualquier tipo de molcula cargada, incluyendo grandes
protenas, pequeos nucletidos y aminocidos.

Fundamento
El principio bsico de la
cromatografa de intercambio
inico es que las molculas
cargadas se adhieren a los
intercambiadores de forma
reversible de modo que dichas
molculas puedan ser
asociadas o disociadas
cambiando el ambiente inico

 La FE consta de una matriz (R) con grupos funcionales cargados (A)

y contraiones de carga opuesta (M), susceptibles de intercambiarse
con especies de la misma carga contenidas en la FM (X) .

RA M+ + X+ RAX+ + M+
(intercambio catinico)
RA+M + Y RA+Y + M
(intercambio aninico)

 El mecanismo de retencin ms comn es el intercambio

simple de los iones de la muestra y de la fase mvil con el
grupo cargado de la fase estacionaria.

 INTERCAMBIADORES ANINICOS: Son portadores de

grupos con cargas positivas que unen aniones de forma
reversible. Los intercambiadores dbilmente bsicos ms
corrientes son los grupos aminos alifticos o aromticos.
INTERCAMBIADOR CATINICO: Los intercambiadores
catnicos son portadores de grupos con carga negativa
que unen cationes de modo reversible.
El grupo cido sulfnico es un intercambiador de cationes
fuertemente cido. Otros grupos de utilizacin corriente
son el carbonilo e hidroxilo fenlico.

 La matriz puede estar hecha de diferentes materiales.

Los de uso comn son de dextrano, celulosa,

poliacrilamida, copolmeros del estireno y
divinilbenceno.

La eleccin entre intercambiadores fuertes o dbiles

est basada en el efecto del pH sobre la carga y la
estabilidad.

CROMATOGRAFA POR ADSORCIN

El fenmeno de adsorcin es el proceso por el cual tomos o molculas
de una sustancia que se encuentra en determinada fase, son retenidas en
la superficie de otra sustancia, que se encuentra en otra fase.
Como resultado de este proceso, se forma una capa de lquido o gas en la
superficie de una sustancia slida o lquida.
Es una tcnica til para muestras solubles en solventes poco polares.
La retencin depende de la interaccin entre los grupos polares con los
de la fase estacionaria, por medio de fuerzas electrostticas originadas
por dipolos permanentes o puentes de hidrgeno.

En este tipo de cromatografa la fase estacionaria es el

ADSORBENTE, superficie altamente polar y la fase mvil
(oeluyente), obliga a las sustancias a migrar y esto produce una
competencia entre la tendencia del soluto a quedarse retenido en
la fase fija o correr con eleluyente.
Las sustancias altamente polares tendrn mayor afinidad por la
fase estacionaria y por lo tanto,eluirnen segundo trmino
respecto a una sustancia menos polar que, al ser poco retenida por
la fase estacionaria, ser fcilmente arrastrada por el solvente.
Lossolventes
altamente
polaresson
poderosos que los no polares.

agenteseluyentesms

FASE ESTACIONARIA: ADSORBENTE

Esta fase esta constituida por un slido poroso, finamente
granulado, con centros activos polares en su superficie donde
se adsorbern las molculas de los compuestos que se van
asometer a la tcnica de cromatografa.
Cuanto menor sea el tamao de partcula de este material
mayor ser la capacidad de adsorcin.

El adsorbente utilizado debe ser inerte con las sustancias de la

mezcla o el analito de inters.

FASE MOVIL: ELUYENTE

Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son,
al menos, parcialmente solubles.
Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la velocidad
de elucin de los compuestos de la mezcla.
Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de
disolventes e incluso llevar a cabo la elucin con un gradiente
de polaridad aumentando progresivamente la proporcin del
disolvente ms polar.

RETENCIN
Las molculas de soluto (S) se adsorben en los centros polares de la fase
estacionaria (X ) y, a medida que se produce la elucin, van siendo
desplazadas por las molculas de disolvente/s que constituyen la fase mvil
(M).
La retencin de un soluto se puede justificar por la competencia que se
establece entre S y M por adsorberse a los centros polares X, es decir,
depende de los valores de las constantes de los equilibrios:

Los cuales estn en funcin de:

La polaridad del compuesto aeluirque depende de sus grupos funcionales
La naturaleza del adsorbente
La naturaleza del disolvente

En los procesos de adsorcin hay dos aspectos que deben ser

considerados:

1) El efecto de la adsorcin sobre la energa interfacial del

sistema en el equilibrio (termodinmica)

2) La rapidez del proceso de adsorcin (cintica).

Segn sus caractersticas la adsorcin puede clasificarse en dos

tipos:
a) Adsorcin fsica (fisisorcin): En este tipo de adsorcin, el
analito no est fijo en la superficie del adsorbente, sino que
tiene movilidad en la interfase.
En este tipo de adsorcin el analito conserva su naturaleza
qumica.

b) Adsorcin qumica (quimisorcin): Sucede cuando hay

interaccin qumica entre el analito y el adsorbente. Esta fuerza
de interaccin es fuerte.
En este tipo de adsorcin el analito sufre una transformacin en
su naturaleza qumica.