Qu es la

Cromatografa?
Es un mtodo de
separacin de mezclas
en sus constituyentes
individuales
Tiene dos finalidades:
Purificacin
Anlisis
Por qu se llama
Cromatografa
KHROMATOS
(Color)
GRAPHOS
(Escritura)

MIGUEL TSWEET (BOTANICO RUSO-1906). REALIZO LA PRIMERA

CROMATOGRAFA EN COLUMNA.
Eter de Eter de
Eter de
petrleo petrleo
petrleo

Mezcla de
pigmentos
vegetales
CaSO4
Inicios de la
Cromatografa
Es una tcnica de separacin basada en la diferente
velocidad con que se mueven los solutos a travs de
un medio estacionario mediante el flujo en un
disolvente llamado eluente o fase mvil.

F. F. Runge qumico alemn, describi el proceso de

separacin en la cromatografa en papel.

El ruso Mijail Tswett , estableci ventajas de la

cromatografa, terminologa, sent las bases de los
principales procedimientos experimentales relativos
a sta tcnica.
Inicios
Fu hasta finales de la Las nicas sustancias que
dcada de los 30 y no pueden ser examinadas
principios de los 40 por cromatografa son:
cuando se empez a Las insolubles
desarrollar la tcnica Las que descomponen con
teniendo este mtodo el solvente o con la fase
diversas aplicaciones. estacionaria.
Mtodos:
M TO D O S CRO M A TO GR FICO S

SIM PLES IN STRU M EN TA LES

PA PEL PLA CA CO LU M N A GASES LQ U ID O S

Elementos bsicos de la
cromatografa
Fase estacionaria Fija
Slida: Slica gel, almina,etc.
Lquida: Solventes polares, no polares, y mixtos.

Fase mvil Se desplaza

Lquida: Solventes polares, no polares y mixtos.
Gaseosa: Gas inerte (Nitrgeno, helio, etc. )
Columna
Fase
Mvil

Inyeccin Migracin Elucin

Compuestos
Proceso de las
Fase mvil Fase mvil
separaciones
cromatogrficas

Es la distribucin de
los constituyentes
Fase
de una mezcla entre estacio-
la fase estacionaria naria
y la fase mvil.
Algunas sustancias son retenidas ms fuertemente en la fase
estacionaria por:
Su mayor polaridad, lo que favorece su adsorcin en dicha
fase.
La menor solubilidad en la fase mvil.

Otras sustancias son menos retenidas, debido a:

Su menor polaridad, lo que disminuye su capacidad de
adsorcin en la fase estacionaria.
Su mayor solubilidad en la fase mvil
Clasificacin de la
cromatografa
Esta tcnica analtica se clasifica de acuerdo a
su mecanismo de separacin en
cromatografa de:
Reparto
Adsorcin
Exclusin.
Intercambio inico
Cromatografa de afinidad
Cromatografa de
Reparto
Usa una fase La fase mvil puede
estacionaria lquida ser un lquido o un gas
que forma una fina segn sea el caso de la
pelcula sobre la cromatografa; en caso
de que la
superficie de un cromatografa sea
soporte slido. lquido / lquido la fase
El soluto est en mvil ser un liquido, o
equilibrio entre el de un gas en cuyo caso
lquido estacionario y es cromatografa gas/
la fase mvil lquido.
El soluto se disuelve en la
fase lquida con que est CROMATOGRAFIA DE
recubierta el soporte REPARTO O PARTICIN
slido
Fase estacionaria:
Lquido sostenido o
adsorbido en un slido inerte.

Fase mvil:
Lquido (CLL)
Gas (CLG)

Nota: Los lquidos de las 2 fases

deben ser inmiscibles entre s.
Cromatografa de
Adsorcin
Usa una fase estacionaria El soluto se adsorbe sobre las
slida y una fase mvil superficie de las partculas
lquida o gaseosa slidas, la separacin se
CROMATOGRAFA DE explica con la desercin de
ADSORCIN sustancias contenidas en la
fase mvil sobre un
slido estacionario
Fase estacionaria: slido.
Pueden ser sistemas
Fase mvil: lquido/slido y gas/slido. En
Lquido ( CSL) cualquier fenmeno de
Gas (CSG) adsorcin influyen tres
variables:
adsorbente, eluente y solutos
.
Cromatografa de
adsorcin
El trmino adsorcin en el contexto
cromatogrfico se refiere a interacciones
dbiles.
Xm

S
Cromatografa de
adsorcin
Cromatografa lquido/ Cromatografa gas
slido: la fase /slido: los adsorbentes
estacionaria suele ser gel mas
de slice , almina, carbn usados son: almina, gel de
activado y polvo poliamida. slice, carbn activado y
Algunas veces al aplicar mallas moleculares. Se
almina pueden ocurrir realizan en columna.
cambios qumicos, es El material que sea
decir, utilizado como adsorbente
quimisorcin durante el debe
paso del soluto por la fase presentar una estructura
estacionaria. rgida, tamao uniforme y
ser qumicamente inerte.
Cromatografa de
Exclusin
La separacin est basada en los diferentes
volmenes moleculares de los solutos.
El tiempo de elusin es proporcional al peso
molecular de los mismos, lo que provoca ser
no muy usada con compuestos de alto peso
molecular.
Principalmente en este proceso se emplean
geles no inicos de partculas uniformes y
porosos, como fase estacionaria.
Tambin llamada de filtracin por
gel o de permeacin por gel.
Separa molculas por su tamao, las
molculas grandes pasan ms rpido que las
pequeas, no hay una interaccin entre la
fase estacionaria y el soluto, sino que la fase
mvil pasa a travs de un gel poroso.
Los poros pequeos dejan pasar a las
molculas grandes y las molculas pequeas
tardan ms tiempo en pasar a travs de la
columna.
Se excluyen las
molculas
grandes
Cromatografa de
intercambio
En este tipo de inico
Los iones en
cromatografa existen disolucin de carga
aniones como: -SO3- ,o opuesta son atrados
cationes como: a la fase estacionaria
-N(CH3)3+ . por fuerzas
Iones covalentemente electrostticas.
unidos a la fase La fase mvil es un
estacionaria slida,
lquido.
que ordinariamente es
una resina.
Cromatografa de
intercambio inico
Los aniones mviles
permanecen cerca de los
cationes que estn
covalentemente unidos a la
fase estacionaria

Resina catinica, que solo

fija aniones.
Cromatografa de
Afinidad
Es la ms selectiva, emplea interacciones de
molculas de un soluto en particular y una
segunda molcula que est unida
covalentemente (inmovilizada) a la fase
estacionaria.
La molcula inmovilizada podra ser un
anticuerpo unido a una protena determinada.
Solo la protena que reacciona con el
anticuerpo se fija en la columna.
Cromatografa de
Afinidad
Todas las dems molculas se eliminan

Una clase
especfica de
molculas, se une
a la fase
estacionaria
 Disolventes comnmente
utilizados
Pentano
Ciclohexano
Dioxano
Benceno
ter etlico POLARIDAD

Cloroformo
Cloruro de metileno
Acetona
Etanol
Metanol
Agua
Aspectos fsicos de la
Cromatografa
La velocidad lineal de flujo, nos dice
cuntos cm recorre el disolvente dentro de la
columna en un minuto.
Cromatograma, es un grfico que
representa la respuesta del detector en
funcin del tiempo de elucin.
Tiempo de retencin tr, de un componente
es el tiempo necesario despus de la
inyeccin de una mezcla en la columna hasta
que ese componente llegue al detector.
Aspectos fsicos.
Volumen de Coeficiente de
retencin Vr, el reparto, o
volumen de la fase particin, si K es la
mvil necesario para constante de la
eluir un soluto S en la fase 1 S en la fase 2
reaccin:
determinado de la
columna. K
S 2
Eluyente, fluido que S 1
entra por la columna.
Eluato, fluido que
sale por el extremo de
la columna.(efluyente)
Aspectos fsicos.
Coeficiente de En general, los
distribucin D, se cocientes de
define: particin y
distribucin se
concentracin total de la fase 2
D asocian a la fuerza
concentracin total de la fase 1
de retencin de los
diferentes
componentes del
soluto por la fase
estacionaria
Aspectos fsicos.
Coeficiente de difusin, mide la velocidad
a que se mueve al azar una sustancia desde
una regin de mayor concentracin a otra de
menor concentracin.
Altura de plato, es la constante de
proporcionalidad entre la varianza(de la
banda y la distancia que ha recorrido
(x).Cuanto ms pequea es la altura de un
plato, ms estrecha es la banda.
Eficacia de la separacin
Diferencia de tiempos de elucin de los
respectivos picos, cuanto ms distantes sean
mejor.
Anchura de los picos, cuanto ms anchos
sean los picos, peor la separacin.
 Resolucin = 0.75
Resolucin = 0.50

Seal
Seal

tiempo
tiempo
Resolucin = 1.00 Resolucin = 1.50
Seal

Seal

tiempo tiempo
Cromatografa lquida.
Cromatografa de lquidos de alta eficacia
Fase mvil, lquido a alta presin
Fase estacionaria slido en columnas de un
dimetro de 3 a 10 micras.
Analito: lquido.
Utiliza instrumentacin especializada.
http://kerouac.pharm.uky.edu/ASRG/HPLC/HP
LCMYTRY.HTML
 Cromatografa de lquidos en
columna
Sentido de flujo

A+B
1

A+B
A B
2
 Cromatografa de lquidos en
columna
Sentido de flujo

3 A B

4 A B
 Cromatografa de lquidos
en columna
Sentido de flujo
Tiempo
5
A B Registrador

Diafragma
de Columna
inyeccin
de muestra
Detector
Cromatografa gaseosa.
La cromatografa tambin se puede clasificar
en cuanto al mtodo de anlisis en
cromatografa de gases:
Fase mvil: gas portador (He, N2 o H2)
Fase estacionaria: lquido no voltil, o un
slido.
Analito: gas o lquido voltil
Ver:

http://www.uib.es/depart/dqu/dquo/pau/Cromatograf
%92a/chrom10/chrom/GC/concept/main.htm
Cromatografa de gases
La cromatografa de gases es un mtodo
fsico de separacin en el cual los
componentes a separar se distribuyen
entre dos fases, una de las cuales
constituye la fase estacionaria, de gran
rea superficial, y la otra es un GAS (fase
mvil) que pasa a travs o a lo largo de la
fase estacionaria
 Componentes de un
Cromatgrafo de gases
Un suministro y una entrada de gas de
acarreo
Puerto de inyeccin
Columna normalmente localizada en el
interior de una cmara termostatizada
(horno)
Detector
Sistema computarizado para analizar,
registrar e imprimir el cromatograma
Cromatgrafo de gases
Inyeccin de la muestra
Las muestras lquidas Los productos de
se inyectan mediante descomposicin y los
una jeringa a travs componentes no
de un disco de goma, voltiles de la muestra
en un inyector se acumulan dentro
caliente. de un tubo de vidrio.
El gas portador Se requieren distintos
arrastra la muestra tipos de inyeccin
vaporizada desde el para diferentes tipos
de muestras.
inyector a la columna
Inyeccin de la muestra
Inyeccin de muestra

Fase estacionaria

Flujo de la corriente

Muy soluble / tiende a adsorberse a la fase estacionaria

Poco soluble / tiende a ser eluida por la fase mvil
Inyeccin con divisin
Se utiliza cuando los analitos constituyen >
0.1 % de la muestra en la columna
cromatogrfica.
Se introduce entre 0.2 y 2 % de la muestra en
la columna.
La temperatura en el inyector se mantiene
alta para facilitar una evaporacin rpida.
El flujo del gas portador arrastra la muestra a
la cmara de mezcla, donde se realiza una
completa evaporacin y homogenizacin.
 Puertos de inyeccin
Inyector directo vaporizante (FVI)
El puerto de inyeccin vaporizante
transforma de manera instantnea la
muestra lquida inyectada en vapor antes de
que esta sea introducida en la columna. Esto
se consigue seleccionando una temperatura
del inyector superior a la del punto de
ebullicin del compuesto menos voltil de la
muestra, a menudo alrededor de los 150oC.
Puertos de inyeccin
Inyeccin con divisin
Inyector de split / splitless Se utiliza cuando los analitos que
Inyector de separacin/divisin interesan constituyen el 1 % de la
muestra en la columna
Jeringa
cromatogrfica.
La temperatura del inyector se
Septo
mantiene alta para facilitar una
102 ml/min 1 ml/min evaporacin rpida.
Purga del septo El flujo del gas portador arrastra
la muestra a la cmara de mezcla,
donde se realiza una completa
evaporacin y homogenizacin.
Salida de la
divisin
Al pasar por el capilar se produce
la divisin y slo pasa a la
Columna 100 ml/min
columna el 1 % de la mezcla, el
resto se ventea.
1 ml/min
Inyeccin sin divisin
Es apropiada para analizar trazas del analito
que constituyen menos del 0.01% de una
muestra de alto punto de ebullicin, en
disolventes de bajo punto de ebullicin.
Se inyecta dentro de la gua, un volumen de 2
microlitros de disolucin diluido en disolventes
de bajo punto de ebullicin.
La temperatura del inyector en la inyeccin
debe ser menor 220C.
Inyeccin en columna.
Se usa con muestras que se descomponen
por encima de su punto de ebullicin.
La disolucin se inyecta directamente en la
columna, sin pasar por un inyector caliente.
La temperatura inicial de la columna es
suficientemente baja para que condensen los
solutos en una banda estrecha.
Para una mejor inyeccin en columna se usan
jeringas de 0.25 a 0.32 mm de dimetro.
Gas portador
El gas portador cumple bsicamente dos
propsitos:
Transportar los componentes de la muestra
Crear una matriz adecuada para el detector.

Un gas portador debe reunir ciertas

condiciones:
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la
muestra como con la fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar
COLUMNAS
MATERIAL DEL RECIPIENTE: Acero Inoxidable,
vidrio, aluminio, cobre, tefln.
SOPORTE SOLIDO: Esferas de polmeros,
esferas de vidrio, tierra de diatomeas
calcinadas, (P, WAN, SILANIZADAS)
FASE ESTACIONARIA:
CGL:
Lquidos polares (Carbowax)
Lquidos no polares (OV-1)
Lquidos semipolares (OV-17)

CGS:
Slidos (Slica Gel, Almina)
 TIPOS DE
COLUMNAS
 Detectores:
Los detectores ms
Un detector nos indica
comunes y utilizados son:
qu sale de la columna.
Conductividad trmica Conductividad
Flama ionizada electroltica
Captura de electrones Fotoionizacin
Detector de N y P Infrarrojo
Fotomtrico de flama Selectivo de masa
Etc.
Detector de conductividad
trmica.
Responde a todos los analitos, pero la
conductividad trmica no es suficientemente
sensible para detectar cantidades pequeas
cuando se trabaja con columnas tubulares
abiertas con dimetro inferior a 0.53 mm.
La conductividad trmica mide la capacidad de
una sustancia para trasmitir calor de una regin
caliente a una fra.
Se utiliza H2 o He como gas portador para dar el
menor lmite de deteccin.
La sensibilidad aumenta cuando; aumenta la
corriente en el filamento.
Detector de ionizacin de
llama.
Lo que sale de la columna se quema en una

mezcla de H2 y aire.
Los cationes que se producen en la llama
conducen la corriente elctrica desde la punta
del quemador que acta de nodo y un
colector catdico. Esta corriente elctrica es la
seal que da el detector.
Es sensible a otros gases son H2, He, N2, O2,
NO, CO, o sea que no es universal.
Detector de captura
electrnica.
Es sensible en particular a las molculas que
contienen halgenos, carbonilos conjugados,
nitrilos, nitrocompuestos y compuestos
organometlicos.
Es insensible a los hidrocarburos, alcoholes y
cetonas.
El gas portador tiene que ser con un 5% de metano.
Contiene un istopo de Ni63 radiactivo que lanza e- y
mantiene un campo estable, al llegar la muestra es
golpeada por los e- y libera ms e-, la diferencia de
potencial elctrico se capta en el detector.