CROMATOGRAFIA

UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES – FACULTAD DE INGENIERIA

LABORATORIO DE QMC 200

NOMBRE DEL EXPERIMENTO: CROMATOGRAFIA

ESTUDIANTE: HUANCA TARQUI RODRIGO CRISTHIAN
DOCENTE: ING. MARCOS CHAMBI YANA
AUXILIAR: PAMELA ZABALETA
CARRERA: INGENIERIA INDUSTRIAL
FECHA DE REALIZACION: 19-07-2017
FECHA DE ENTREGA: 20-07 2017

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OBJETIVOS
· Observar los diferentes cambios que sufren los compuestos colorantes en el tubo de ensayo.
· Hallar los diversos factores de retención para los seis tubos de ensayo.
· Hallar el factor de retención para el colorante de la espinaca en capa fina.

FUNDAMENTO TEORICO

En 1906 Tswett definió la cromatografía como: el método en el cual los componentes de una mezcla son separados en
una columna absorbente dentro de un sistema afluyente. En el cual los componentes son distribuidos en dos fases, una
de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria puede ser un sólido o un líquido
soportado en un sólido o en un gel (matriz). Mientras que la móvil es solvente.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final
de muchas síntesis).

Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material
empleadas son pequeñas.

Hay diferentes técnicas para la utilización de cromatografía:

·Cromatografía de papel: es un proceso donde el absorbente lo constituye un papel de Filtro. Una vez corrido el
disolvente se retira el papel y se deja secar, se trata con un reactivo químico con el fin de poder revelar las manchas.

·Cromatografía de capa fina: se basa en la preparación de una capa uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una
placa de vidrio u otro soporte.

·Cromatografía de cambio iónico: utilizan este método para la separar isotopos de Litio y Potasio utilizando resinas de
zeolita.

·Cromatografía de gel-filtracion: Fodin y Phorath en 1958 descubren que usando como fase de geles estacionarios se
consiguen separar polímeros sintéticos de alto peso molecular.

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·Cromatografía de afinidad: ideada de por Phorath en 1967, usando como fuente un péptido o proteína unida
covalentemente a un ligando y se utiliza para la separación de moléculas proteínas.

-Cromatografia de gas: La muestra es vaporizada e introducida en un flujo de un gas apropiado denominado de fase

móvil o gas de arrastre. Este flujo de gas con la muestra vaporizada pasa por un tubo conteniendo la fase estacionaria,
donde ocurre la separación de la mezcla. La fase estacionaria puede ser un sólido adsorbente o, más comúnmente, una
película de un líquido poco volátil, soportado sobre un sólido inerte o sobre la propia pared del tubo. Las sustancias
separadas salen de la columna disueltas en el gas de arrastre y pasan por un detector; dispositivo que genera una señal
eléctrica proporcional a la cantidad del material eluido.

La Cromatografía Gaseosa es una técnica utilizada para la separación y análisis de mezclas de sustancias volátiles.

Técnica Fase móvil Fase estacionaria

Cromatografía de gases Gas Sólido o líquido

Cromatografía líquida Sólido o líquido

en fase inversa Líquido (polar) (menos polar)

Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido

en fase normal (menos polar) (polar)

Cromatografía líquida
de intercambio iónico Líquido (polar) Sólido

Cromatografía líquida
de exclusión Líquido Sólido

Cromatografía líquida
de adsorción Líquido Sólido

Cromatografía de
fluidos supercríticos Líquido Sólido

Una de las técnicas cromatografícas más sencillas es la que se realiza en capa fina, llamada así porque la fase
estacionaria es una capa fina de un material poroso (gel de sílice, alúmina, etc.) extendida para su manejo mecánico
sobre un soporte inerte. La fase móvil es una mezcla de disolventes en diferentes proporciones, que emigra por la fase
estacionaria debido, sobre todo, a la capilaridad. El coeficiente de reparto es poco empleado en la práctica. En su lugar, y
relacionado con él, se emplea el denominado Rf, característico de cada sustancia, definido como la relación entre la
distancia que recorre dicha sustancia y la que recorre la fase móvil. Las más insolubles tendrán, en el disolvente
empleado, un Rf próximo a cero, mientras las más solubles se acercarán a uno. Cromatografía en columna: Se emplea
para la separación de mezclas o purificación de sustancias a escala preparativa. 

Polaridad: La polaridad química o sólo polaridad es una propiedad de las moléculas que representa la desigualdad de
las cargas eléctricas en la misma. Esta propiedad se relaciona con otras propiedades químicas y físicas como la
solubilidad, punto de fusión, punto de ebullición, fuerzas intermoleculares, etc. Al formarse una molécula de forma
covalente el par de electrones tiende a desplazarse hacia el átomo que tiene mayor carga nuclear (más número de
protones). Esto origina una densidad de carga desigual entre los núcleos que forman el enlace (se forma un dipolo
eléctrico). El enlace es más polar cuanto mayor sea la diferencia entre las electronegatividades de los átomos que se

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enlazan; así pues, dos átomos iguales atraerán al par de electrones covalente con la misma fuerza (establecida por la
Ley de Coulomb) y los electrones permanecerán en el centro haciendo que el enlace sea apolar.

En resumen la cromatografía es una técnica ampliamente utilizada en la resolución de macromoléculas de interés en la

industria biotecnológica, biológica y bioquímica. Esta versión instrumental de la cromatografía convencional resulta
ventajosa debido a los pequeñísimos volúmenes que se necesitan para el estudio en cuestión y los resultados se
obtienen en un mínimo de tiempo.

La cromatografía se ha aplicado extensivamente en medio ambiente: gases de invernadero, compuestos orgánicos

volátiles, hidrocarburos en suelos y agua, bifenilos policlorados, halofenoles, metales… Los cromatógrafos de gases
acoplados con espectrómetros de masas se pueden “miniaturizar” y transportar al campo. También se han ideado
práctico sensores cromatográficos.

DATOS RECOPILADOS
DATOS CROMATOGRAFICOS PARA LOS TINTES
COLOR DEL TINTE XD (DISTANCIA XS (DISTANCIA S (SEMBRADO) (cm)
RECORRIDA POR EL RECORRIDA POR EL
SOLVENTE) (cm) SOLUTO) (cm)
NEGRO-BOLIGRAFO 10,1 7,5 1,8
ROJO-BOLIGRAFO 10,9 9,7 0,8
VERDE-BOLIGARFO 10,3 8,8 1,1
AMARILLO-MARCADOR 10,8 2,6 2,3
CELESTE-MARCADOR 12,5 4 2
LILA-MARCADOR 11,5 8,4 3

DATOS CROMATOGRAFICOS PARA LA ESPINACA

COLOR DEL TINTE XD (DISTANCIA XS (DISTANCIA S (SEMBRADO) (cm)
RECORRIDA POR EL RECORRIDA POR EL
SOLVENTE) (cm) SOLUTO) (cm)
EXTRACTO DE 3,3 1,3 0,8
ESPINACA

CALCULOS
Rf PARA LOS TINTES
NEGRO-BOLIGRAFO

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ROJO-BOLIGRAFO

VERDE-BOLIGRAFO

AMARILLO-MARCADOR

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CELESTE-MARCADOR

LILA-MARCADOR

Rf PARA EL EXTRACTO DE ESPINACA

EXTRACTO DE ESPINACA EN CAPA FINA

ANALISIS DE RESULTADOS
Para los tintes de color rojo, verde y lila los valores de Rf son muy próximos a la unidad.

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OBSERVACIONES
· Para los colorantes rojo, verde y lila el valor de Rf es muy próximo a la unidad.
· El valor de Rf para la espinaca es aproximadamente la mitad en cuanto a lo que recorre el disolvente.
· Los disolventes son bastante volátiles y se debió tener mucho cuidado.

CONCLUSIONES
· Se pudo observar los diferentes cambios que sufren los compuestos colorantes en el tubo de ensayo.
· Se logró hallar los diversos factores de retención para los seis tubos de ensayo.
· Se logró hallar el factor de retención para el colorante de la espinaca en capa fina.

BIBLIOGRAFIA
- Guia oficial facultad de ingeniería UMSA para laboratorio qmc 200.

- Galagovsky Kuraman química organica fundamentos teorico practicos para laboratorio.

- Chambi Yana Marcos, Guia de practicas laboratorio química organica.

-www.quimicaorganica.net/cromatografia.html

-http://quimicaorganica2im43.blogspot.com/2013/09/cromatografia.html

CUESTIONARIO
1.- Definase y descríbase cada uno de los siguientes conceptos: desarrollo, elución, filtración, adsorción,
adsorbente, coadyuvante de filtración, fluorescencia, resina.

Desarrollo.- Es todo el desenvolvimiento que se realiza en el experimento de cromatografía.

Elución.- Extracción de una sustancia absorbida desde un lecho poroso o columna de cromatografía mediante un chorro
de líquido o gas o mediante la aplicación de calor.

Filtración.- Se entiende por filtración a aquel proceso mediante el cual un elemento es colocado a través de un tipo de
tamiz o filtro por el cual se separan sus partes, quedando retenidas aquellas partes que no pasan por su tamaño y siendo
filtradas aquellas que sí pasan por el espacio del filtro

Adsorción.- Fenómeno por el cual un sólido o un líquido atraen y retiene en su superficie gases, vapores, líquidos o
cuerpos disueltos.

Adsorbente.- Un adsorbente es un sólido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie un componente presente
en corrientes líquidas o gaseosas. Se caracterizan por una alta superficie específica y por su inercia química frente al
medio en el que se van a utilizar.

Coadyuvante de filtración.- Es un agente químico que favorece al filtrado de una determinada solución.

Fluorescencia.- Propiedad que tienen algunas sustancias de reflejar luz con mayor longitud de onda que la recibida,
cuando están expuestas a ciertos rayos del espectro.

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Resina.- Sustancia orgánica de consistencia pastosa, pegajosa, transparente o translúcida, que se solidifica en contacto
con el aire; es de origen vegetal o se obtiene artificialmente mediante reacciones de polimerización.

2.- Se piensa que un colorante desconocido sea azul de metileno. ¿Cómo se podría comprobar esta suposición
utilizando un procedimiento con base en técnica cromatografica?

R Lo que se debe hacer es hallar el valor del factor de retención y comparar con el valor teorico de el azul de metileno y
si es que son bastante próximos o en todo caso iguales se trata de el azul de metileno.

3.- ¿Cuáles son algunos de los métodos que se pueden emplear para la localización de las bandas de adsorción,
cuando una mezcla de componentes incoloros se somete a una cromatografía de este tipo?

R La Cromatografía en capa fina y la cromatografía en columna presentan varios elementos en común. En ambas existe
una fase sólida estacionaria (el adsorbente) sobre la cual se deposita o "siembra" una solución concentrada de la mezcla
a separar, la cual es a continuación arrastrada o "eluida", por la fase móvil (un solvente o una mezcla de solventes). Los
componentes de la mezcla poseen diversas solubilidades en la fase móvil e interaccionan con la fase estacionaria a
través de diversos mecanismos (interacciones de Van dar Walls, dipolodipolo, puentes hidrógeno, y otras.), siendo
retenidos en diferente medida según la magnitud de estas interacciones de absorción.

4.- Indíquese algunas de las aplicaciones de adsorción en columna.

R A diferencia de la Cromatografía en Capa Fina, que se utiliza tanto con fines analíticos como preparativos, la
Cromatografía en Columna se usa sólo con fines preparativos, siendo el métodos más general para la separación y
purificación de compuestos orgánicos, tanto sólidos como líquidos.

En este tipo de cromatografía, la fase estacionaria (adsorbente) impregnada con la fase móvil (eluyente) se deposita en
el interior de una columna de vidrio dispuesta verticalmente que termina en un estrechamiento provisto de una llave. La
mezcla que se va a separar se deposita sobre la parte superior de la fase estacionaria y la fase móvil atraviesa todo el
sistema. Los distintos compuestos son arrastrados por la fase móvil (eluídos) y van saliendo por el otro extremo de la
columna donde se recogen en fracciones. Los más polares son más fuertemente retenidos por la fase estacionaria polar
y salen más tarde que los compuestos poco polares, que son eluídos muy rápidamente.

El tiempo necesario para eluír un compuesto de la columna recibe el nombre de "tiempo de retención" y es característico
para cada compuesto en unas condiciones cormatográficas dadas (naturaleza, cantidad y características del adsorbente,
El adsorbente más utilizado para la cromatografía en columna es el gel de sílice, mientras que la alúmina y el florisil
(silicato de magnesio) se emplean como sustitutos cuando el gel de sílice es incompatible con la mezcla que se va a
cromatografiar.

El proceso de cromatografía en columna se puede realizar de forma que la fase móvil atraviese la fase estacionaria por
gravedad (tamaño de partícula 0.063-0.200 mm) o aplicando media presión (flash cromatography, diámetro de partícula
entre 0.040-0.063 mm). En este último caso, se conecta a la cabeza de la columna un compresor de media presión (5-10
psi).

El diámetro de la columna y la cantidad de gel de sílice debe estar de acuerdo tanto con los Rf de las sustancias a
separar como con la cantidad de muestra que se va a someter al proceso.

5.- ¿Qué significan los términos ‘hidrofilo’y ‘lipofilo’¿Por qué los componentes mas hidrófilos de una mezcla son
retenidos mas fuertemente sobre una columna de gel de sílice o de celulosa que los componentes mas lipófilos,
cuando se usa butanol como disolvente?

Hidrófilo.- Que absorbe agua con facilidad.

Lipófilo.- Que tiene tendencia a combinarse con los lípidos.

Este fenómeno ocurre debido a que el butanol es un disolvente polar prótico.

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UN PASO MÁS
- Investigue que son las isotermas de adsorcion.

Una isoterma de adsorción (también llamada isoterma de sorción) describe el equilibrio de la adsorción de un material en
una superficie (de modo más general sobre una superficie límite) a temperatura constante. Representa la cantidad de
material unido a la superficie (el sorbato) como una función del material presente en la fase gas o en la disolución. Las
isotermas de adsorción se usan con frecuencia como modelos experimentales, que no hacen afirmaciones sobre los
mecanismos subyacentes y las variables medidas. Se obtienen a partir de datos de medida por medio de análisis de
regresión.

-¿Qué es una resina de intercambio anionico y que una de intercambio cationico?

Resinas de intercambio catiónico

Estas resinas están disponibles en 3 tamaños diferentes de cuentas. El medio (<150μm) y grandes (<300μm) los granos
son más útiles para el flujo por gravedad y por esferas (sin flujo) las solicitudes. El mayor tamaño de los granos hace fácil
la separación de un líquido a granel. En el medio (<150μm) y pequeñas (<75μm) los granos son más útiles para
aplicaciones de bombeo. El menor tamaño de los granos reduce la altura de plato de cromatografía (proporciona más
rápido equilibrio con velocidades de flujo más alto).

Resina de Intercambio Iónico.

Son materiales sintéticos, sólidos e insolubles en agua, que se presentan en forma de esferas o perlas de 0.3 a 1.2 mm
de tamaño efectivo, aunque también las hay en forma de polvo.

- ¿Cuáles son los criterios que se adoptan para seleccionar un solvente a utilizarse para separar una muestra de
diferentes componentes por cromatografia?

El solvente debe ser inerte con la fase estacionaria, barato preferentemente, no debe ser toxico.

- ¿Cuáles son las fases estacionarias mas utilizadas en cromatografia?

Son aquellos liquidos que cumplan con los siguientes requisitos: No actuar como catalizador de decomposiciones, debe
ser bajamente viscoso y principalmenet debe ser inmiscible con la alimentacion.

-¿Cuáles son algunos criterios que deben tenerse en cuenta en la eleccion de un adsorbente en una separacion
cromatografica determinada?

Hay varios factores que deben tomarse en cuenta en la elección de un adsorbente para una separación cromatografica
determinada. Desde luego debe ser insoluble en el disolvente que se va a utilizar para la separación y no debe
reaccionar con las sustancias que van a separarse ni debe actuar como catalizador de sus descomposición,
transposición o isomerización, ha de tener un compuesto uniforme prescindiendo de su origen y debe ser incoloro
cuando sean de localizar visualmente las unas correspondientes a compuestos coloreados.

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ANEXOS
CROMATOGRAFIA PARA LOS TINTES

CROMATOGRAFIA PARA EL EXTRACTO DE ESPINACA

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