UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES

FACULTAD DE INGENIERIA

PRACTICA N°4
INFORME DE LABORATORIO
“CROMATOGRAFÍA”

ESTUDIANTE: UNIV. CHAMACO MAMANI LESLIE LISBETH

DOCENTE: ING. ROBERTO PARRA ZEBALLOS
AUXILIAR: UNIV. COYO LLANQUE MARIELA
MATERIA: LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA 1 QMC-200L
GRUPO: “A”
LA PAZ – BOLIVIA
 CROMATOGRAFÍA

1. OBJETIVOS

1.1 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Realizar, observar y analizar que la cromatografía es una técnica muy útil para la Utilizar las
técnicas de cromatografía en papel y capa fina.

1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Utilizar las técnicas de cromatografía en papel y capa fina.

 Observar la importancia de la elección del solvente en un proceso de cromatografía, ya que de

esta depende la eficiencia.

2. MARCO TEÓRICO

ANTECEDENTES

La cromatografía es un poderoso método de separación que tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia La
cromatografía en columna fue inventada y denominada así, a principios del siglo XX por botánico ruso Mikhail
Tswett. El empleo la técnica para separar varios vegetales, tales como clorofilas y xantofilas, a través de una
columna de vidrio rellena con carbonato de calcio finamente dividido. Las especies separadas aparecían como
bandas coloreadas en la columna lo que justifica el nombre que eligió para el método (del griego CHRONA que
significa <<color>>, y GRAPHEIN que significa <<escribir>>)

PRINCIPIOS

La palabra Cromatografía significa Escribir en Colores, porque cuando fue desarrollada los

componentes separados eran colorantes. Se define como una técnica o método físico de separación basado en
las diferentes velocidades con que se mueven os solutos disueltos en un disolvente llamado Eluyente (fase móvil)
a través de un medio estacionario o fijo. Los componentes a separar se distribuyen entre la fase estacionaria y la
fase móvil o fluido que pasa a través o a lo largo de la fase estacionaria. Como los componentes de la
mezcla presentan diferente tendencia a permanecer en cualquiera de las fases, la separación se da por el
movimiento de la fase móvil en relación con la estacionaria y de la distribución de las sustancias entre las dos
fases. Las moléculas que prefieren disolverse" en la fase, móvil serán eluidas más rápido que las que son
preferencialmente solubles en la fase estacionaria y que tienden a quedar retenidas En resumen se fundamenta
en la separación entre la fase estacionaria sólida o liquida y la fase móvil liquida o gaseosas

Los fenómenos rectores del proceso de retención y separación son la adsorción y la absorción. El primero queda
delimitado a la superficie interracial es decir se refiere a la fijación o retención de la sustancia entre la superficie de
las dos fases.
La absorción determina la retención de una especie química por parte de una masa y depende de la tendencia que
tiene este a formar mezcla o reaccionar al químicamente con la misma.

LOS ELEMENTOS QUE INTERVIENEN EN LA CROMATOGRAFÍA

 Fase estacionaria
  Fase móvil
 Muestra.

En general una cromatografía se realiza permitiendo que la mezcla de moléculas que se desea separar (muestra)
interaccione con un medio o matriz de soporte, que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase
móvil) que es inmiscible con la fase estacionaria se hace fluir a través de esta para lavar (eluir) a las moléculas en
la muestra.

CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRAFICOS

Los métodos cromatograficos se clasifican tomando en cuenta el estado de agregación, la forma física del sistema
y de acuerdo al proceso de separación, así tenemos:

FASE TÉCNICA PROCESO

FASE MÓVIL
ESTACIONARIA CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFICO

Capa fina Adsorción

Liquida
Solida Columna Intercambio iónico

Excl. Molecular
Gas Columna
Adsorción

Papel
Liquida Partición
Liquida Capa fina

Columna
Gas Partición
Columna

CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN

La cromatografía líquida de adsorción se caracteriza por utilizar una fase estacionaria sólida (Adsorbente) de
carácter polar y una fase móvil líquida (Eluyente) apolar, y se utiliza tanto con fines analíticos (identificación de
sustancias) como con fines preparativos (aislamiento), siendo su limitación más importante la dificultad de separar
sustancias de polaridad parecida

Las moléculas pueden enlazarse de dos formas a una superficie:

 Adsorción física o fisisorcion

 Adsorción química o quimisorcion

La adsorción física, consiste en un enlace débil originado por fuerzas de Van Der Walls, y en principio no hay una
redistribución de carga en la molécula/átomo y la superficie.

La adsorción química, implica un cambio sustancial en la densidad electrónica entre substrato (superficie solida
sobre la que tiene lugar la adsorción) y adsorbato (molécula o átomo que se adsorbe). La naturaleza del enlace
puede ser intermedia entre iónico y covalente.

Utilizaremos los siguientes términos

 Sustrato
 Adsorbato
 Adsorción
CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN O REPARTO

El mecanismo de separación de componentes de una mezcla en esta cromatografía es la extracción liquido-liquido

o liquido-gas, que consiste en poner una mezcla liquida en contacto con un segundo liquido inmiscible, que
selectivamente extrae uno o más de los componentes de la mezcla.

o Cromatografía de reparto en fase normal: estacionaria más polar que fase móvil
o Cromatografía de reparto en fase reversa: estacionaria menos polar que fase móvil

CROMATOGRAFÍA DE PERMEACION EN GEL

A cromatografía e permeacin en gel es un método de purificación de polímeros naturales y sintéticos, que separa
moléculas en función a la diferencia de sus tamaños moleculares.
La fase móvil es líquida, normalmente acuosa, y la fase estacionaria también es líquida, pero está contenida en el
interior de una matriz solida porosa que tiene propiedades de gel cuando se hidrata.
La matriz solida porosa está constituida por un polímero de extraño entrecruzado con epiclorhidrina, polímero
altamente hidrofilico, se hincha en contacto con el solvente acuoso.

CROMATOGRAFÍA DE INTERCAMBIO IÓNICO

a Fase Estacionaria es una resina de intercambio iónico que contiene grupos cargados, teniendo la propiedad de
separar especies ionizadas (Cationes o Aniones); la Fase Móvil es generalmente una solución amortiguadora de
pH. En proteínas la cromatografía de intercambio iónico se basa en las diferencias en signo y magnitud de la carga
eléctrica neta de las proteínas a un valor de pH determinado. La afinidad de cada proteína a los grupos cargados
de la columna está influenciada por el pH y por la concentración de iones en solución (concentración salina) que
compiten con la proteína en la interacción con la matriz. La separación de la proteína de la matriz cargada puede
obtenerse gradualmente cambiando el pH y la concentración salina de la fase móvil, de tal forma que se genere
un gradiente de
concentración.

CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

Permite la separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un determinado ligando. En
este caso las proteínas que se retienen en la columna son aquellas que se unen específicamente a un ligando que
previamente se ha unido covalentemente a la matriz de columna. Después de que las proteínas que no se unen al
ligado son lavadas o eludidas a través de la columna, la proteína de interés que ha quedado retenida en la columna
se eluye o libera mediante el empleo de una solución que contiene bien ligado libre u otro compuesto que rompa
la interacción entre el ligado y la proteína

TÉCNICAS CROMATOGRAFÍAS

Columna se usa un tubo cilindrico

Plana: El soporte es un placa plana o los Capa fina
intersticitos de un papel Papel (particion)

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Técnica de mediana resolución en el cual una mezcla de solutos sembrada sobre papel de filtro
logra separarse entre sí basándose en:
  Los diferentes coeficientes de partición de los solutos entre la fase acuosa estacionaria débilmente unido
a las fibras de celulosa del papel y a la fase liquida orgánico móvil corriendo a través de la hoja por acción
capilar
 Diferencias en la adsorción del soluto a las fibras de celulosa y disolución en la fase móvil.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Es un procedimiento rápido y sencillo para separar mezclas de sustancias y para identificar/caracterizar o para
determinar semicuantitativamente componentes individuales. La sepa ración se basa en que las sustancias
investigadas se reparten de modo diferencial entre una fase estacionaria y otra móvil: en la TLC el Eluyente (fase
móvil) se desplaza por una fina capa del sorbonte (fase estacionaria), transportando así los componentes
individuales de la mezcla de sustancias más o menos lejos dependiendo de su solubilidad y/o de su
comportamiento frente a la adsorción. Al contrario que, en la cromatografía en columna, el proceso separativo
transcurre en un sistema abierto, la 8placa separativa plana. El recorrido particular de cada sustancia se emplea
así p ara su identificación.
Las separaciones se realizan generalmente por el “procedimiento ascendiente”, introduciendo el borde inferior de
la placa cromatografía en el solvente, que será succionado por acción de las fuerzas capilares del recubrimiento
de la superficie de la placa.

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA

Se utiliza columnas de vidrio, rellenas de alúmina, silica u oxido de magnesio. La fase estacionaria está constituida
por un sólido poroso, el cual queda soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plástico o
vidrio, la fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase estacionaria. La
solución que sale al final de la columna se remplaza constantemente por nueva solución que se suministra desde
el contenedor por la parte superior de la columna

Hay tres tipos de cromatografía en columna:

 Cromatografía de filtración en gel

 Cromatografía de intercambio iónico
 Cromatografía de afinidad y de inmunoafinidad

3. RESUMEN DE LOS VIDEOS

CROMATOGRAFIA

Técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos
que se establece al ser arrastrados por una fase móvil a través de un lecho cromatografico que contiene las fases
estacionarias

Los componentes de una mezcla son disueltos en una fase móvil que se desplaza a través de una fase estacionaria

Cada molécula interacciona en distinta forma con la fase móvil y la fase estacionaria (según sus propiedades físicas
entonces atraviesan la fase móvil a diferente velocidad

cromatografía (chroma – color y graphein – escribir)

Fundamentos de separación cromatografías

 Fundamentos remotos: propiedades físicas o físico – químico de los analíticos, solubilidad, adsorción,
volatilidad, tamaño, carga, reactividad, etc.
 Fundamentos próximos: se refiere al hecho que es muy improbable que dos especies presenten
cuantitativamente el mismo par de propiedades físicas o físicos – químicos frente a un sistema
cromatografico. Por lo tanto, en estas diferencias, que pueden ser pequeñas, se basa la separación cromatografía

Las 2 fases (FM) Y (FE) se eligen de forma tal que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto
entre la FM y FE

Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la fe se mueve lentamente con el flujo de FM;
por el contrario, los componentes que se unen débilmente de la fe, se mueven con rapidez

Como secuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan en bandas o

zonas discretas que pueden analizarse cualitativamente y cuantitativamente

Otras clasificaciones según el tipo de fase móvil

Puede ser

 Un liquido (cromatografia liquida)

 Un gas (cromatografia gaseosa)
 Ser un fluido supercriterio (cromatografía de fluido supercrítico)
 Se admite por la IUPAC que, en cromatografía de gas, la expresión de GAS PORTADOR puede utilizarse
como sinónimo de fase móvil
 En cromatografía de elución, la expresión Eluyente es también sinónimo de la FM

TIPOS DE CROMATOGRAFIA

TIPOS DE CROMATOGRAFIA
Criterio según la naturaleza de las fases
cromatografia de adsorcion
cromatografia de intercambio ionico
Criterio según mecanismo de separación
cromatografia de exclusion molecular
cromatografia de afinidad
Relacion de polaridad entre la fase movil y la fase estacionaria
criterio segun la forma de desarrollar el proceso cromatografico
criterio segun la dispocion geometrica de las fases

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL

Video1

Lo primero que realiza es la obtención de 0,5g de hoja de planta una vez obtenido se corta en trozos muy pequeños
las hojas para que la trituración sea más cómoda añadimos 2 o 3 ml de acetona y magnesio para estabilizar la
clorofila evitar su degradación, machacamos todo lo añadido, continuamos hasta que obtenemos una masa verde
después se filtra lo contenido en la probeta, poco antes de hacerlo humedecemos el papel filtro para evitar que
la clorofila se pegue, añadimos acetona hasta obtener 10 ml en la probeta después se pasa a escurrir con ayuda
de las pinzas y retiramos el embudo después vertió el contenido de la probeta aun tubo de ensayo, utilizamos los
capilares para añadir un gota en el papel de filtro (a un centímetro de cada lado del papel) Quitar el papel hasta
que se seque y repetirlo como 50 veces continuamos con la cromatografía en dos dimensiones para la primera
dimensión utilizamos un cubeta con npropanol en éter

de petróleo para la segunda dimensión es necesario girar el papel. La segunda cubeta contiene cloroformo en éter
de petróleo después de 10 min y cuando los pigmentos dejan de migrar se pone el papel en la oscuridad durante
5 min y se deja secar y lo obtenido fue
Video 2

Vamos a iniciar como material con una hoja de caladio la limpiamos, quitamos las nerviaciones depositamos el
limbo en el vaso de precipitado y pesamos 5 g, extraído el limbo y lo cortamos en pedazos y la depositamos en el
mortero posteriormente agregamos 8 g de arena también añadimos 3ml de acetona, por ultimo le introducimos 4
g de cloruro de calcio lo mezclamos y machucamos) con ayuda del pistilo, ahora doblamos el papel filtro en dos y
lo introducimos en el embudo par que el papel que adhiera al embudo lo rociamos de éter de petróleo en el embudo
depositamos la mezcla extraída una vez filtrada la solución la sentamos en la caja de petro ahí colocamos el papel
filtro

Video 3

Vamos a utilizar un papel de filtro de mezcla vamos a utilizar una tinta negra (Parker) es la que sale mejor en la
mancha se hace orificio con el bolígrafo y por el orificio se hace pasar un rollito de papel que es el que va absorber
el disolvente, para la tinta el disolvente será el agua, ponemos el rollito de papel en la tinta negra traspasando el
agua se absorbe y se valla desplazando.

COLUMNA DE CAPA FINA

La tónica de cromatografía de capa fina al igual que otros técnicos cromatografías se basa en la distinta afinidad
que existe entre los componentes de una mezcla entre una fase estacionaria y otra móvil que se desplaza a
través de la primera. En esta tónica en particular generalmente la fase estacionaria es capa de agente de sílice
que es capaz de absorber agua en su superficie y que está depositado sobre una lámina de aluminio. Mientras
que la fase móvil consiste en una mezcla diluyentes con características específicas de a acuerdo a cada prueba.
La fase móvil tiene característica de ascender por capilaridad a través de la placa de sílice a una velocidad
arrastrando componentes en función de su mayor o menor afinidad por la fase estacionaria o por la fase móvil,
esta mayor o menor afinidad viene dado por el grado de relación de polaridades siendo así por

ejemplo que claramente el agente estacionario es un compuesto altamente polar, así también el agente móvil
es una mezcla compleja con una polaridad distinta al agente estacionario.

Esto para que la separación de los componentes de la mezcla sea más clara y entendible, es decir en espectro
más amplio de colores.

En la figura por ejemplo se tiene una mescla de tres componentes como ser el A,B,C. en este caso supóngase
que el componente A tiene mayor afinidad con el agente volátil y C al contarario tiene mayor afinidad con el
agente o fase estacionaria, del B podemos decir que posee una afinidad intermedia entre las dos fases.

Conforme a la afinidad de cada de uno de los componentes se puede observar el desplazamiento de los
mismos en a través de la placa. Claramente se observa que el componente C se encuentra retenido por la
fase estacionaria, mientras que el compuesto A claramente es arrastrado por la fase móvil.
Posteriormente después de un tiempo de evolución se puede observar con mayor claridad los diferentes
componentes de la mezcla.

El procedimiento consiste en colocar pequeñas muestras de la mezcla en una hoja cromatografía muy cerca a
uno de sus extremos, en forma de una gota provocando una mancha de unos 1 a 4 mm de diámetro o de forma
continua en forma de una línea, posteriormente la hoja de cromatografía se deberá introducir en un recipiente
hermético que contiene la fase móvil que consiste en un fluido generalmente en fase líquida o vapor. El nivel de
la fase móvil debe ser de unos 1.5 cm y quedar por debajo de la pigmentación aplicada en la hoja. Por propiedad
de adsorción el solvente asciende en por el papel por muy por encima del nivel de la misma. Arrastrando la
mancha consigo en un espectro variado de colores que es un indicador de las propiedades y de la composición
de la mezcla. El extremo más próximo al nivel de la fase liquida del solvente se dice que tiene mayor afinidad
con la fase estacionaria, mientras que el otro extremo que se encuentra más alejada del nivel del solvente se
dice que es más afín a la fase móvil del solvente.

En caso de que el resultado no se observa ningún colorido se aplican otras técnicas complementarias como el
revelado mediante un reactivo químico o de proceso físico.

CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA

Para realizar una separación utilizando la técnica de cromatografía de columna

 Fijaremos la columna en una de las pinzas metálicas a un soporte en posición vertical

 En un vaso de precipitados se introduce una porción de DISOLVENTES que utilizaremos como base móvil
y añadir pequeñas pociones del sólido que constituye la fase estacionaria mientras se agita con una varilla
de vidrio hasta obtener una pasta viscosa, esta mezcla se introduce en la columna
 Se coloca un Erlenmeyer bajo la columna, se abre la llave de paso de forma que el líquido fluido salga,
continuar añadiendo de la pasta viscosa hasta que todas las fases estacionarias se hayan introducido en
la columna
 Seguidamente se cierra las llaves de paso
 Con la ayuda de una pibeta se añade la disolución de la muestra a separar en la parte superior de la
columna
 Se abre la llave de paso y se deja bajar el nivel del disolvente justo por encima del nivel de la fase
estacionaria, se añade una pequeña cantidad de disolventes y de nuevo se deja bajar el nivel hasta que
la muestra se encuentra absorbida en la fase estacionaria
 Las columnas se llenan de disolventes y se empieza la ilusión de los productos contenidos en la mezcla a
analizar, se continúa añadiendo disolventes y las fracciones que salen por la parte inferior se recogen en
diferentes tubos de ensayo hasta que elijan todos los productos
 Cada una de las fracciones eluidas se analizan mediante CCF para identificar donde se encuentra los
diferentes productos de la mezcla inicial, las fracciones que contienen en el mismo producto pueden
reunirse para su posterior identificación y cuantificación.

Método general para separación y purificación de compuestos orgánicos. Realizaremos un experimento para
cromatografía de columnas sobre sílica gel/gravedad de una mezcla de 2 colorantes.
procedimiento experimental

Materiales a utilizar:

Reactivos:

Etanol, agua destilada, disolución de una mezcla de dos colorantes en agua etanol, para formar la columna: sílica
gel para cromatografía/gravedad, opcional arena de mar.

Procedimiento experimental para realizar columna

 Preparación y relleno de la columna

 Introducción de la muestra

Medimos mezcla de colorante con ayuda de jeringa graduada, depositar contenido en vial, finalmente con
ayuda de pipeta Pasteur depositamos sobre paredes de columna cerca de lado solvente describiendo
movimientos circulares (realizar esta operación con delicadeza)

Añadir con pipeta poco Eluyente para lavar el vial, pipeta Pasteur y pared interior de columna.
 Elusión de las fracciones
Añadir disolvente por la pared de columna para no modificar horizontalidad del frente, rellenar el resto
desde el Erlenmeyer, una vez rellenado, abrir llave. Estas eluyen manteniendo flujo constante de
disolvente, los colorantes eluyen en orden de polaridad creciente. Volumen muerto no contiene producto
(se desprecia), la sílica gel no debe disecarse.

Primer Erlenmeyer se recoge disolución naranja que contiene primer colorante puro. Para acelerar el colorante
rosa aumentar polaridad eluyente, preparar disolución de agua etanol en proporción 4 a 1. Se recarga con el nuevo
eluyente de mayor polaridad, siguiendo las indicaciones. Continuar recogiendo disolvente, al salir disolución rosa
por la parte inferior, cambiar Erlenmeyer, para recoger separado la rodamina pura en 1 o varias fracciones.

Resultado final de la cromatografía en columna:

1.- Primer colorante: naranja de metilo puro

2.- Segundo colorante: Rodamina: fracciones 3 y 4

es una técnica de separación de mezclas de dos o más compuestos de polaridad diferente para que dicha
separación se lleve a cabo es necesario tener un absorbente y un eluyente absorbente constituye la fase
estacionaria eluyente constituye la fase móvil del sistema la cromatografía de columna es una separación sólido
líquido, teórica basada en la absorción y solubilidad en la absorción las moléculas orgánicas se adhieren a la
superficie de la fase estacionaria con mayor o menor fuerza dependiendo de la afinidad, la cual tiene que ver con
la polaridad de los componentes en la elución las moléculas orgánicas con menor afinidad a la fase estacionaria
son arrastradas por el eluyente provocándose una migración diferencial de los componentes de la mezcla

esta técnica de separación consta de 4 etapas

1.- Empaque de la columna

2.- Adición de la muestra a separar

3.- Elución de la columna

4.- Recuperación de las sustancias separadas

Existen diversos absorbentes

 Celulosa
 Silicato de magnesio
 Silicato de calcio
 Acido silícico
 Gel de sílice
 Alúmina
 Óxido de magnesio
 Carbón activado

Para la elección de la fase móvil adecuada se toma en cuenta la siguiente serie eluotropica

 Éter de petróleo
 Ciclohexano
 Tetracloruro de carbono
 Benceno
 Cloroformo
 Acetato de Etilo
 Acetona
 Etanol
 Metanol
 Agua
 Ácido Acético
empaquetamiento

Necesario colocar una base de lana de vidrio en la columna, luego colocar poco a poco el absorbente y compactar
homogéneamente, por último, colocar una delgada capa de arena tratada químicamente lo cual impide paso de
impurezas a la columna

accionamiento

Necesario acondicionar la columna cromatografía, pues de esta manera se mejora la interacción del analito con la
fase estacionaria

adición de muestra

Inmediatamente luego del acondicionamiento se añade la muestra sin permitir que la columna se seque

elución

Posterior a la adición de muestra se inicia la elución con la fase móvil elegida y se puede observar la separación
de los componentes en base a las bandas formadas por cada una de ellos

4. CONCLUSIONES
Se puede concluir a través de los videos que la cromatografía es un conjunto de técnicas basadas en el principio
de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar
y determinar las cantidades de dichos componentes.
Con el estudio de la cromatografía de los ácidos y sus distintos tipos de reacciones químicas se pudo determinar
que las sustancias pueden estar unidas en un factor que mediante la cromatografía de las reacciones pueden
separarse

5. ANALISIS DE RESULTADOS

Se realizó las tres técnicas de cromatografía:

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Tras a ver terminado de ver los videos de cromatografía en papel se puede observar que la técnica se puede
realizar en cada tipo hoja en los videos lo realizaron desde hoja caladio hasta espinaca donde después del proceso
que le aplicaron se pudo observar los resultados que sería estos

En el procedimiento obtención de 0,5g de hoja de planta una vez obtenido se corta en trozos muy pequeños las
hojas para que la trituración sea más cómoda añadimos 2 o 3 ml de acetona y magnesio para estabilizar la clorofila
evitar su degradación, machacamos todo lo añadido, continuamos hasta que obtenemos una masa verde después
se filtra lo contenido en la probeta, poco antes de hacerlo humedecemos el papel filtro para evitar que la clorofila
se pegue, añadimos acetona hasta obtener 10 ml en la probeta después se pasa a escurrir con ayuda de las pinzas
y retiramos el embudo después vertió el contenido de la probeta aun tubo de ensayo, utilizamos los capilares para
añadir una gota en el papel de filtro (a un centímetro de cada lado del papel)

CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA

Para saber la composición de la mezcla existen dos métodos básicos y conocidos para la determinación de los
mismos.

1 Durante el procedimiento de realización de la prueba se coloca otra gota de una sustancia patrón al lado de
la mezcla, el cual se presume que posee, o lo que se está buscando. Y por el arrastre de distancia similar que
observa después de la prueba confirma la presencia o no del componente en la mescla en la mescla.

2 El otro método consiste en registrar las distancias de recorrido que cada uno de los compuestos a partir de la
línea base a si también la distancia de recorrido de fase móvil. En función de eso datos se establece un
parámetro (una cantidad adimensional) conocido como la razón de migración que es el indicador de la
presencia de algún elemento, que está dada por:

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
Para saber la composición de la mezcla existen un métodos básicos y conocidos para la determinación

Durante el procedimiento para cromatografía en columna realizaremos un experimento para cromatografía de

columnas sobre sílica gel/gravedad de una mezcla de 2 colorantes

Durante el procedimiento Medimos mezcla de colorante con ayuda de jeringa graduada, depositar contenido en
vial, finalmente con ayuda de pipeta Pasteur depositamos sobre paredes de columna cerca de lado solvente
describiendo movimientos circulares (realizar esta operación con delicadeza)

Primer Erlenmeyer se recoge disolución naranja que contiene primer colorante puro. Para acelerar el colorante
rosa aumentar polaridad eluyente, preparar disolución de agua etanol en proporción 4 a 1. Se recarga con el nuevo
eluyente de mayor polaridad, siguiendo las indicaciones. Continuar recogiendo disolvente, al salir disolución rosa
por la parte inferior, cambiar Erlenmeyer, para recoger separado la rodamina pura en 1 o varias fracciones.
 6. BIBLIOGRAFIA

 GUÍA DE LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA I – UMSA FACULTAD DE INGENIERÍA

 PROTOCOLO CROMATOGRAFIA

7. CUESTIONARIO

1. Explique la diferencia entre cromatografía de adsorción y partición

RES: Cromatografía de adsorción: se basa principalmente en las diferencias en la afinidad relativa de los
compuestos por el sólido utilizado como fase estacionaria. Las separaciones obtenidas se determinan casi
exclusivamente por interacciones polares, siendo la fase estacionaria más polar que la fase móvil.
Cromatografía de partición: la fase estacionaria es un líquido soportado en un sólido inerte. Otra vez, la fase
móvil puede ser un líquido (cromatografía de partición líquido-líquido) o un gas (cromatografía de partición gas-
líquido, GLC). La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de partición en la cual la fase estacionaria
es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel.

2. ¿Cuáles son las ventajas y desventajas de la cromatografía en capa fina en comparación con la
cromatografía en columna?

RES:
CROMATOGRAFÍA EN CAPA DELGADA
VENTAJAS
 Bueno para el análisis de materias orgánicas complejas.
 Separación e identificación de compuestos o mezclas.
 No se requieren cantidades grandes de muestra.
 Sencillo, barato y con un alto grado de pureza.
 El tiempo que se necita para conseguir la separación es mucho menor y la separación generalmente es
mejor.
 Los resultados son fácilmente reproducibles
DESVENTAJAS
 Los disolventes tienden a tener diferente volatilidad dependiendo el clima.
 Algunos disolventes son potencialmente peligrosos para la salud y el medioambiente, así que se debe
considerar esto para escoger a los disolventes

CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
VENTAJAS
 Gran estabilidad de la fase estacionaria.
 No existen fuerzas de relación elevada.
 Permite una velocidad de muestreo alto.
 No se producen procesos de retención irreversibles por lo tanto no hay deterioro de columna.
 Permite separación y compuestos con matrices acuosas.

DESVENTAJAS
 Solo se usa con compuestos coloridos ya que se tienen que ver los colores a la horade separar a cada
uno
 3. Explique la diferencia que existe entre el adsorbente utilizado en cromatografía en capa delgada y
el de columna. Hacer una lista en orden creciente de actividad.

RES: Generalmente el gel de sílice empleados en la técnica de capa fina, son generalmente mucho más finos
menor tamaño de partícula) que la clase de gel y alúmina correspondiente s a la cromatografía en columna.
La mayor superficie del adsorbente de la clase correspondiente en capa fina, produce generalmente una
separación mucho mejor que la que se puede obtener en cromatografía de columna. este adsorbente de grado
fino no se emplea en cromatografía de columna ya que la velocidad del flujo sería demasiado lenta. Por esto
mismo el adsorbente para columna será más grueso (mayor tamaño de partícula) esto debido a que entre más
grueso sea el adsorbente, más rápidamente pasará el disolvente través de él

capa delgada
silica gel (se utiliza en un 80% de las separaciones)
oxido de alumnio o aluminia (acida, neutra o basica)
celulosa (nativa o micro - cristalina)
poliamidas
Estos adsorbentes deben tener las siguentes caracteristicas
tamaño de particula pequeño
diametro de poro grande
area superficial grande
homogeneidad
alta pureza

4. Hacer una lista de los Eluyente usados comúnmente en cromatografía en columna y capa delgada
en orden creciente de polaridad.

hexano
eter de petroleo
heptano
ciclohexano
tetracloruro de carbono
benceno
tolueno
cloroformo
aumento de polaridad eter dietilico
acetato de etilo
piridina
acetona
propanol
etanol
metanol
agua
mezcla de disolventes

5. ¿Por qué es necesario que la cámara de elusión esté saturada con los vapores del Eluyente?

RES: porque así será más fácil el arrastre de los pigmentos y no se secará la placa

6. ¿Cómo se clasifica la cromatografía en función de su fase estacionaria?

RES:
NATURALEZA DE FASE ESTACIONARIA
CLASIFICACION
NATURALEZA DE FASE MOVIL
 Liquido liquido – liquido: partición
 Liquido – solido: adsorción, cambio iónico, exclusión, afinidad
 Gas gas – liquido (CGL) gas – solido (CGS)

7. ¿Cuál es la función de la fase móvil y como se lleva a cabo la separación en la cromatografía de

adsorción?

RES: Su función es eluir los componentes de la mezcla a separar a través de la fase estacionaria. La cromatografía
de adsorción se lleva a cabo mediante el uso de una fase estacionaria donde se observará la elución de los
componentes de la mezcla, los cuales serán eludidos por el disolvente, que es la fase móvil

8. ¿Cuándo es conveniente activar una placa y cómo se activa?

RES: Antes de que se puedan usar las placas generalmente deben ser calentadas para retirar el agua que actúa
como una impureza y evita una buena separación. La magnitud de calor depende del tipo de separación que se
requiere para compuestos hidrófilos o polares, el secado al aire o con un secador de pelo son generalmente
suficientes, para los compuestos hidrofóbicos o no polares es necesario un calentamiento mas intenso. Las placas
de óxido de aluminio y de gel de sílice con adhesivo requieren ser secadas al aire durante aproximadamente 30
min. Y después ser activadas en un horno a 100 ͦC alrededor de 30 min. las placas de celulosa deberán secarse al
aire libre durante 30 min y activarse al horno durante 10min a 105 ͦC

9. ¿Cuál es el orden de polaridad en que salen los compuestos de una cromatografía en columna?

RES: En la cromatografía de columna las moléculas de una mezcla son separadas en base a la afinidad de las
moléculas por la fase estacionaria o por la fase móvil. Si una molécula A tiene más afinidad por la fase estacionaria
que la B, B bajara más rápido que A

1 pentano
2 hexano
3 ciclohexano
4 eter de petroleo
5 tetracloruro de carbono
6 benceno
7 tolueno
8 eter elitico
9 cloroformo
10 acetato etilo
11 acido acetico
12 cloruro de metilo
13 dicloroetano
14 acetona
15 etanol
16 metanol
17 agua

10. ¿Por qué es importante que las muestras a separar por cromatografía deban estar lo más secas
posible?

RES: Para que no interfiera el agua con la elución, por medio del disolvente, de los componentes de la muestra

11. ¿Por qué al cargar una columna se recomienda que la muestra lleve la mínima cantidad de
disolvente?

RES: Las cantidades altas de flujo dan malas separaciones, el promedio es de 3 a 4 ml /min en una columna de
40 cm de altura aproximada
 12. ¿Por qué cuando se usa alúmina como adsorbente no se recomienda usar acetona como Eluyente?

RES: Porque se desnaturaliza y queda pegada en las paredes de la columna.

13. ¿Cuál es la aplicación de la cromatografía en placa preparativa?

RES: Las separaciones en capa fina características se realizan en placas de vidrio o plástico que se recubren con
una capa delgada y adherente de partículas finalmente divididas, esta capa constituye la fase estacionaria. Las
capas finas preparadas sobre vidrio se denominan cromatoplacas o placas simplemente

14. ¿Qué diferencia existe entre cromatografía en capa delgada analítica y cromatografía en placa
preparativa?

RES: La diferencia existe es que la preparativa se emplea generalmente para elegir un Eluyente o mezcla de
eluyentes ideal para la cromatografía en columna, la analítica ya cuenta con un Eluyente ideal y registra Rx, es
decir, se analiza la elusión de los componentes para arrojar un valor numérico final

15. ¿Cómo se clasifican los reveladores en forma general?

RES: Se clasifican en físicos y químicos

16. Cuando una sustancia orgánica no se revela con I2 o luz UV, ¿qué otros reveladores pueden usarse
para observar la sustancia?

RES: Con reveladores químicos específicos para los componentes separados

17. ¿Qué debe hacerse para encontrar el Eluyente adecuado para una sustancia en una cromatografía
en columna?

RES: Si la sustancia es polar, el eluyente debe de ser un Eluyente polar, pero si no es polar, como fue el caso del
ácido benzoico, se debe de utilizar un eluyente no polar, con el fin de que se alcance la máxima solubilidad y que
las fuerzas intermoleculares ayuden que el soluto pase a través de la columna.