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CROMATOGRAFA DE ADSORCIN

APLICACIN A LA SEPARACIN DE COMPUESTOS


ORGANICS
INTRODUCCIN

La cromatografa es una tcnica que permite separar los componentes de una mezcla. Esta
separacin se logra utilizando un sistema bifsico: fase estacionaria donde se retienen los
compuestos a separar y fase mvil que desplaza de forma diferencial los compuestos a travs de
la fase estacionara.
Dependiendo de la naturaleza de las fases, se pueden distinguir distintos tipos de cromatografa:

Cromatografa slido-lquido: la fase estacionaria es un slido y la mvil un lquido.

Cromatografa lquido-lquido: ambas fases son lquidos y en la estacionaria el lquido


se ancla a un soporte slido.

Cromatografa lquido-gas: la fase estacionaria es un lquido no voltil sobre soporte


slido y la fase mvil un gas.

Cromatografa slido-gas: la fase estacionaria es un slido y la mvil un gas.

Fase Fase
mvil mvil

MEZCLA

E
s
t Se retiene ms
F a
a c
s i
e o
n Se eluye primero
a
r
i
a

Figura 11.- Elucin de los componentes de una mezcla


La mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionaria y la fase mvil atraviesa el sistema
desplazando los componentes de la mezcla a distintas velocidades que dependen de la afinidad de
los mismos por cada una de las fases (Figura 11). Se denomina elucin a la migracin de los
componentes de la mezcla a lo largo de la fase estacionaria impulsados por la mvil.

Existen otras clasificaciones para los distintos tipos de cromatografa:

A) En funcin de la interaccin que se establece entre los componentes de la mezcla y las fases
mvil y estacionaria:

Cromatografa de adsorcin: se producen interacciones de tipo polar siendo la fase


estacionaria un slido.
Cromatografa de particin: la separacin se basa en las diferencias de solubilidad de
los componentes de la mezcla entre las dos fases siendo ambas lquidas. Cuando la
estacionaria es menos polar que la mvil se denomina cromatografa en fase inversa.
Cromatografa de intercambio inico: se producen intercambios entre iones presentes en
la fase estacionaria y los del compuesto orgnico solubilizado e ionizado en la fase mvil

B) En funcin del tipo de soporte empleado para la fase estacionaria:

Cromatografa en columna: utiliza como soporte una columna de vidrio


Cromatografa en capa fina: el soporte es una placa de vidrio, aluminio o plstico

La cromatografa se puede emplear para:

Conocer el nmero de componentes de una mezcla e identificarlos por comparacin con


patrones, Cromatografa Analtica

Separar mezclas de compuestos y como mtodo de purificacin, Cromatografa


Preparativa

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN

La cromatografa de adsorcin emplea una fase estacionaria slida de carcter polar,


ADSORBENTE y una fase mvil lquida, ELUYENTE. Se utiliza tanto con fines analticos como
preparativos y la separacin de los componentes de la mezcla viene determinada por las
interacciones polares de los componentes de la misma con las fases estacionaria y mvil. Por lo
tanto, los compuestos ms difciles de separar mediante este tipo de cromatografa, sern aquellos
que tengan una polaridad muy similar.

FASE ESTACIONARIA: ADSORBENTE


Est constituida por un slido poroso, finamente granulado, con centros activos polares en su
superficie donde se adsorben las molculas de los compuestos que se van a cromatografa. Cuanto
menor sea el tamao de partcula de este material mayor ser la capacidad de adsorcin.

La adsorcin se debe a interacciones intermoleculares del tipo dipolo-dipolo, dipolo-dipolo


inducido o enlaces de hidrgeno entre el adsorbente y el soluto. El adsorbente ms utilizado es la
gel de slice (Figura 12) donde las interacciones tienen lugar entre los grupos SiOH y SiO
Si; tambin se emplea con relativa frecuencia almina (Al2O3).

R
R'

: H-O-R

Figura 12.- Estructura de la gel de slice e interacciones con algunos compuestos polares

El adsorbente debe ser inerte con las sustancias a cromatografiar. La gel de slice presenta carcter
cido y la almina puede adquirirse con carcter neutro, cido o bsico.

FASE MOVIL: ELUYENTE

Es un disolvente en el que los componentes de las mezcla son, al menos, parcialmente solubles.
Al aumentar la polaridad del disolvente aumenta la velocidad de elucin de los compuestos de la
mezcla.
Se puede utilizar un nico disolvente o una mezcla de disolventes e incluso llevar a cabo la
elucin con un gradiente de polaridad aumentando progresivamente la proporcin del disolvente
ms polar.
RETENCIN
Las molculas de soluto S se adsorben en los centros polares de la fase estacionaria X y, a medida
que se produce la elucin, van siendo desplazadas por las molculas de disolvente/s que
constituyen la fase mvil M. La retencin de un soluto se puede justificar por la competencia que
se establece entre S y M por adsorberse a los centros polares X, es decir, depende de los valores
de las constantes de los equilibrios:
X + S XS

X + M XM

Que estn en funcin de:


Polaridad del compuesto a eluir que depende de sus grupos funcionales
Naturaleza del adsorbente
Naturaleza del disolvente

ORDEN DE POLARIDAD DE LOS COMPUESTOS ORGNICOS:

cidos carboxlicos > Fenoles > Alcoholes y Tioles > Aminas > steres > Aldehdos y
Cetonas > Hc. Aromticos > Hc. Halogenados > teres > Hidrocarburos Insaturados >
Alcanos
Cuanto ms polar sea un compuesto ms se retendr en la fase estacionaria. Por ejemplo, se
retiene ms un alcohol que un hidrocarburo

ORDEN DE POLARIDAD DE LOS ELUYENTES MS HABITUALES:

H2O > CH3-OH > (CH3)2CH-OH > CH3-CN > Dioxano > CH3COOEt > THF > CH2Cl2 (Cloruro
de metileno) > CHCl3 (Cloroformo) > CCl4 (Tetracloruro de carbono) > CH3(CH2)4CH3

Para un mismo compuesto, un aumento en la polaridad de la fase mvil hace que se se desplace
con ms facilidad de la fase estacionaria. Por ejemplo, se eluir ms rapidamente una amina en
acetonitrilo que en hexano

Para compuestos poco polares, que se retienen poco en el adsorbente, se utilizan eluyentes
apolares o poco polares como, por ejemplo, hexano

Para compuestos muy polares, que quedan muy retenidos en el adsorbente, se emplean eluyentes
muy polares como, por ejemplo, metanol o mezclas metanol-diclorometano

Para compuestos de polaridad media se emplean eluyentes de polaridad intermedia y son muy
aconsejables en estos caso las mezclas en distintas proporciones de hexano-acetato de etilo

CROMATOGRAFA ANALTICA EN CAPA FINA (CCF)

La fase estacionaria (adsorbente) se encuentra depositada, formando una capa fina de un espesor
uniforme sobre una placa de vidrio, plstico o una lmina metlica. La mezcla a analizar se
deposita con un capilar a una pequea distancia del borde inferior de la placa (Figura 13) y se
introduce en una cubeta donde est la fase mvil (eluyente), que ascender a lo largo de la capa
por capilaridad eluyendo a los componentes de la mezcla a distintas velocidades, lo que provoca
su separacin (Figura 14). Cuando el frente del disolvente se encuentra a 0.5 cm del borde
superior, se saca la placa de la cubeta, se marca hasta donde ha llegado el eluyente y se deja secar
para, a continuacin, proceder al la visualizacin de las manchas correspondientes a los productos
cromatografiados.

Figura 13. Aplicacin de la muestra Figura 14. Desarrollo de la placa

Determinacin del Rf

Se conoce como Rf (rate factor) la relacin entre las distancias recorridas por un compuesto y por
el disolvente desde el origen del cromatograma.

Distancia recorrida por el compuesto


Rf =
Distancia recorrida por el disolvente
Cada compuesto en unas condiciones cromatogrficas determinadas: adsorbente, disolvente,
temperatura, etc..., tiene un valor constante y caracterstico de Rf. Sin embargo, solo se pueden
establecer comparaciones entre los Rf de dos compuestos cuando los dos se eluyan juntos en la
misma placa. La distancia recorrida por el compuesto se mide desde el centro de la mancha
(Figura 15)

Frente del
disolvente

R XA
f(A) =
B Y
R >R B menos polar que A
Y f(B) f(A)
R XB
X f(B) =

A
B
Y
XA Origen

Figura 15.- Determinacin del Rf de dos compuestos A y B

Visualizacin del Cromatograma

Con luz UV (ultravioleta).- Las placas suelen llevan incorporado un indicador fluorescente que
absorbe luz UV y emite luz visible, generalmente verde. Cuando se cromatografan sustancias que
absorben en el UV donde se encuentra el compuesto no absorbe el indicador y como resultado
vemos una mancha que indica su presencia.

Con un agente revelador.- Se emplea cuando las sustancias no absorben radiacin UV. El
revelador reacciona con los productos absorbidos dando lugar a compuestos coloreados y
por tanto se utilizar uno u otro en funcin del compuesto que se quiera visualizar. Algunos
ejemplos: H2SO4 concentrado en etanol para azcares, ninhidrina para aminocidos y yodo para
compuestos insaturados y aromticos.

Aplicaciones de la CCF

La CCF es una tcnica cualitativa muy utilizada en los laboratorios de Qumica Orgnica para:
Determinar el nmero de componentes de una muestra: Precaucin si solo hay una mancha
muy retenida o aparece junto al frente del disolvente hay que probar otro eluyente (Figura 16).
A+B

A
(a) A+B (b) (c)
X X X

Figura 16.- Separacin de dos componentes A y B de una mezcla. (a) Eluyente poco polar
(b) Eluyente de polaridad adecuada (c) Eluyente muy polar

Comprobar la pureza de un compuesto: aparecer una sola mancha. Se debe comprobar


que solo hay una mancha utilizando distintos eluyentes.
Determinar la identidad de dos compuestos:
Hay que tener precaucin, pues valores de Rf iguales (o prcticamente iguales) para dos
compuestos en una misma placa no garantizan inequvocamente su identidad. En la misma
placa hay que cromatografiar una mezcla de los compuestos cuya identidad se quiere
comprobar (Figura 17).

X X X X X
A B A M B

Figura 17.- Comprobacin de la no identidad de dos compuestos A y B. M,


Mezcla de ambos

Seguir la evolucin de una reaccin: cada cierto tiempo se cromatografan en una misma
placa los reactivos y la mezcla de reaccin (Figura 18).
Reaccin: A + B C

X X X X X X
A MR B A MR B

Figura 18.- Evolucin de una reaccin entre dos compuestos A y B (reactivos) para dar
lugar a un compuesto C. Mezcla de reaccin = MR

Determinar el disolvente ms apropiado para llevar a cabo una separacin mediante una
cromatografa preparativa (en columna o en placa)

Seguir el progreso de una cromatografa en columna (CC) (Figura 19)

X X X X X X X X X X
M 1 2 3 4 M 5 6 7 8

Figura 19.- Anlisis de las fracciones (1,2....8) de una Cromatografa en


Columna. M = mezcla antes de cromatografiar
CROMATOGRAFA EN COLUMNA (CC)

Es el mtodo ms utilizado para la separacin y purificacin de compuestos orgnicos, slidos o


lquidos, a escala preparativa. La fase estacionaria (adsorbente) se coloca en una columna de
vidrio que termina en un estrechamiento con una llave y se impregna con el eluyente (fase mvil).
La mezcla a separar se deposita en la parte superior de la columna y la fase mvil atraviesa el
sistema (Figura 20).
Los compuestos se van eluyendo disueltos en el eluyente, se van recogiendo ordenadamente en
fracciones de pequeo volumen (1,2,.....) y se analizan por CCF (Figura 18). Los productos van
saliendo de la columna segn su polaridad, primero salen los menos polares que son los menos
retenidos por el adsorbente y los ltimos los ms polares por su mayor retencin en la fase
estacionaria. El adsorbente ms utilizado para este tipo de cromatografa es la gel de slice y en
segundo lugar la almina.

El tamao de partcula del adsorbente es importante para la separacin y su eleccin depende en


gran medida de que la elucin de la cromatografa se realice por gravedad o a media presin
(flash chromatography). En una elucin a media presin se pueden emplear tamaos de partcula
ms pequeos, que permiten una separacin ms eficaz. Sin embargo, en una elucin por
gravedad el uso de tamaos de partcula pequeos impediran el flujo del disolvente.

Antes de realizar una separacin en cromatografa de columna hay que elegir adecuadamente el
disolvente haciendo ensayos en CCF.

Se aade un poco de etanol a la columna y luego se vierte la suspensin previamente preparada en


su interior. Se abre la llave, se golpean suavemente las paredes de la columna mientras dura la
sedimentacin del adsorbente para que este se compacte adecuadamente procurando que no se
formen burbujas y evitando que se seque la gel de slice.
Eluyente

Pinzas y Mezcla para


nueces Arena cromatografiar
Adsorbente

Arena
Algodn

Soporte

Figura 20.- Esquema de montaje de una Cromatografa en Columna

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
1.- Separacin por cromatografa en columna de una mezcla de violeta cristal y naranja
de metilo
Se sujeta la columna, en posicin vertical, a un soporte utilizando dos pinzas: una cerca de la
llave y otra en la parte superior y se introduce un pequeo copo de algodn en su extremo
inferior. Se coloca un erlenmeyer debajo de la columna y un embudo en la parte superior
(Figura 20). En un vaso de precipitados se prepara una suspensin con 5g de gel de slice
(adsorbente) y 50mL de etanol (eluyente).

Se aade un poco de etanol a la columna y luego se vierte la suspensin previamente


preparada en su interior. Se abre la llave, se golpean suavemente las paredes de la columna
mientras dura la sedimentacin del adsorbente para que este se compacte adecuadamente
procurando que no se formen burbujas y evitando que se seque la gel de slice.

El etanol que se va recogiendo de la columna se incorpora al vaso donde se prepar la


suspensin adsorbente-eluyente para as recuperar la gel de slice que hubiera podido quedar y
se transvasa todo de nuevo a la columna.
Se deja que el eluyente baje hasta una altura sobre el adsorbente de 1-2 mm, se cierra la llave
de la columna se quita el embudo y con una pipeta se aade cuidadosamente 1 mL de luna
solucin preparada de violeta cristal y naranja de metilo. Se abre la llave de la columna para
que esta disolucin quede inmersa en la gel de slice y se vuelve a cerrar cuando la disolucin
de colorantes alcanza una altura de 1 mm sobre el adsorbente.
Se aaden con una pipeta 5mL de etanol con mucho cuidado y muy lentamente para no
distorsionar el frente de la columna. A continuacin, se abre la llave y se contina aadiendo
etanol para desarrollar la columna hasta que se recoja el primer colorante. Despus se utiliza
una mezcla de disolventes: etanol/trietilamina en proporcin 9:1 como eluyente para el
segundo colorante (Figura 21).

Durante todo el proceso nunca debe secarse la columna!

Figura 21.- Esquema de separacin de dos componentes por Cromatografa en Columna

El naranja de metilo es un colorante azoico (los azo-derivados contienen el agrupamiento


N=N-, son compuestos intensamente coloreados y muchos se emplean como colorantes) que
se utiliza como indicador cido-base y es amarillo en medio bsico y rojo en medio cido. El
violeta cristal es un colorante derivado del trifenilmetano. Ambos compuestos son muy
polares y sus estructuras son:

H3C + H3
-
Cl

H3C
- +
N N SO3 Na
H
3 Naranja de Metilo
H3C CH3

CH3 CH3
Violeta Cristal
2.- Cromatografa en capa fina de Benzhidrol y trans-Estilbeno

Se dispone de tres disoluciones, previamente preparadas, de benzidrol (B), trans-estilbeno (E)


y una mezcla de ambos (M). Se introduce un tubo capilar en la disolucin B, tomando una
pequea cantidad de la misma y por su extremo se coloca en una placa de cromatografa, con
gel de slice como adsorbente, una mancha a unos 7 mm del borde izquierdo de la placa y a 1
cm del borde inferior. A la misma altura y a unos 7 mm del borde derecho se coloca con otro
capilar una mancha de la solucin E y en la parte central de la placa una mancha de la
solucin M de nuevo con un capilar diferente (Cuidado, no confundir los capilares de cada
disolucin!)(ver Figuras 13 y 14).

Se dejan secar y se introducen en el interior de una cubeta de cromatografa conteniendo 5 mL


de tolueno, de modo que el disolvente no toque la zona en la que se encuentran las manchas
(Figura 14).

Se tapa la cubeta y cuando el disolvente ha ascendido a 1 cm del borde superior se saca la


placa y se marca el nivel del disolvente en un extremo de la misma. Se deja secar y se revela
la placa en una lmpara de luz ultravioleta, localizando la posicin de cada mancha. Se miden
las distancias recorridas por el frente del disolvente y para cada mancha, y se calcula el valor
de Rf (Figura 15)
Se repite todo el proceso utilizando como eluyente etanol.

Anotar los resultados obtenidos con ambos eluyentes. Cul de los dos es el compuesto ms
polar? Cul es el disolvente ms adecuado para esta separacin? Sera adecuado utilizar
metanol en esta separacin? Cmo se podran nombrar el benzhidrol y el trans-estilbeno
segn las normas IUPAC?

3.- Cromatografa en capa fina de acetofenona y p-toluidina

Siguiendo los pasos anteriores, se realiza la cromatografa en capa fina de acetofenona, p-


toluidina y la mezcla de ambos utilizando como eluyentes: acetato de etilo, hexano y mezcla
acetato de etilo hexano en proporcin 2:8

Anotar los resultados obtenidos. Formular los compuestos acetofenona yp-toluidina.Cul


de los dos es el compuesto ms polar?. Cul es el eluyente ms adecuado para esta
separacin? Sera adecuado utilizar acetonitrilo en esta separacin
ANEXOS

FIGURA 1.
COLORANTES PARA CIEMBRA
COLOR AZUL

FFIGURA2.
COLORANTES PARA
CIEMBRA
FIGURA3.
COLORANTE PARA CIEMBRA
COLOR ROJO

FIGURA4.
COLORANTES PARA CIEMBRA
COLOR
FIGURA 5.
SE INTRODUCE EN UNA CUBETA DONDE LA FASE MOVIL ELUYENTE
SUBIRA ELUYENDO LOS COMPONENTES LA CUAL PROVOCA SU
SEPARACION
CUESTIONARIO
1.- Por qu los derivados halogenados suben ms que los alcoholes en una cromatografa en
capa fina?

R.- Los derivados de halgenos suben ms que los alcoholes porque su punto de ebullicin
son bajos a comparacin del de los alcoholes.

2.- Al cambiar un eluyente menos polar por otro ms polar Cmo se afecta la velocidad de la
elucin de un alcohol? y de una cetona?

R.- Cuando cambiamos un eluyente menos polar a uno ms polar la velocidad de elucin de
un alcohol va a ser ms veloz, pero en el caso de la cetona no ser asi al contrario ira
disminuyendo haciendo ms difcil su elucin.
3.- El valor del Rf depende del adsorbente utilizado? y del eluyente?

R.- El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra estos son:
Tipo de adsorbente, eluyente, as como de las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturacin, etc.
Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que mejor correr duplicados de la misma placa.
4.- Sugerir un ensayo para determinar la pureza con un compuesto por CCF

R.- La cromatografa que se realiz fue para determinar el efecto de la concentracin en la


muestra a utilizar (1A). en esta cromatografa se utiliz acetato de etilo como eluyente. Se
colocaron 3 muestras en el punto de aplicacin, la primera con 3 aplicaciones, la segunda con
6 y la tercera con 9. Se observ que se obtuvieron 3 manchas sobre la cromatoplaca que a
simple vista resultaba difcil de apreciar, pero con luz UV y la cmara de yodo se pudieron
apreciar. La muestra con 3 aplicaciones revelo una mancha mas cercana a la frontera del
eluyente, mientras que las otras dos muestras con 6 y 9 aplicaciones revelaron mostraron
manchas mas cercanas al punto de aplicacin, y a la misma distancia. La muestra de 3
aplicaciones estaba poco concentrada por lo que subi mas en la cromatoplaca.

6.- Sugerir un ensayo, utilizando la CCF, para determinar cual es el disolvente mas adecuado
para separar el cido difenilactico del bencilfenilter por cromatografa en columna
utilizando gel de slice como adsorbente.
R.- El disolvente ms apropiado para este ensayo es el tiner. Segn a lo que se pudo averiguar
es el nico disolvente que es efectivo en este ensayo.

OBSERVACIONES
1. Tener cuidado con los sembradores ya que nos podemos lastimar al partirlos.
2. Tener cuidado al cortar la placa recubierta con capa delgada de la fase estacionaria
adsorbente.
3. Tapar la cubeta de vidrio ( cubeta cromatografica).

CONCLUSIONES
Bueno la cromatografa de adsorcin es un sistema el cual sirve para separar los componentes
de una mezcla y medir las proporciones de los componentes el cual se tiene un sistema bsico
como fase estacionaria y la fase mvil.

BIBLIOGRAFIA


WIKIPEDIA
RINCON DEL VAGO

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