David Mateos Jaén

Práctica 7: determinación de colesterol total.

Introducción.
En esta practica realizaremos un perfil lipídico incluye la determinación en suero de los
niveles de colesterol total que incluye las mediciones de HDL,LDL y triglicéridos , el cual
puede estar alterado en casos de hipotiroidismo, diabetes mellitus, obesidad, síndrome
nefrótico, pancreatitis aguda, ictericia obstructiva, hiperadrenocorticismo, insuficiencia
hepática, síndrome de mala absorción, errores innatos del metabolismo e hipertiroidismo ,
entre otros. En el espectrofotómetro se medirá a 500 nm para determinar la concentración
concreta de cada parámetro
Fundamento.

El colesterol se determina por la acción de las enzimas colesterol esterasa y colesterol

oxidasa. La primera libera del colesterol de los ésteres de Colesterol, y la segunda oxida
el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrógeno, el cual en presencia de la enzima
peroxidasa reacciona con el sistema cromogénico dando origen a un compuesto
coloreado que absorbe a 500nm.

Objetivo.
El objetivo principal es aprender a realizar la practica correctamente, para:

➢ Conocer los fundamentos de la determinación de colesterol total en sangre por el

método enzimático del colesterol esterasa.
➢ Manejar los valores de referencia para el colesterol total en sangre y su utilidad
diagnostica.
➢ Desarrollar destreza en el manejo del espectrofotómetro.
➢ Interpretar los resultados obtenidos.
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Equipo, materiales y reactivos.

➢ Cubetas
➢ Gradilla
➢ Micropipeta
➢ Puntas de micropipeta
➢ Parafilm
➢ Espectrofotómetro
➢ Reactivo A
➢ Muestra de suero.

Procedimientos.
➢ Limpiamos la zona de trabajo.
➢ Colocamos el papel de filtro nos colocamos la bata y los guantes.
➢ Colocamos los materiales en la zona de trabajo.
➢ Atemperamos el suero y los reactivos.
➢ Cogemos tres cubetas y a cada una de ellas le ponemos una inicial para
identificarlas como muestras, patrón y blanco.
➢ En la cubeta del blanco añadimos con ayuda de una micropipeta de 1000ul 1ml de
reactivo A, todas las demás cubetas tienen 1ml de reactivo A.
➢ En la cubeta del patrón añadimos 10ul de patrón, en la cubeta de la muestra
añadimos 10ul de la muestra y dejamos reposar 15 minutos una vez que hemos
homogeneizado utilizando parafilm en las cubetas.
➢ En el espectrofotómetro sacamos el soporte, ponemos el espectrofotómetro a
500nm introducimos el blanco y hacemos el blanco, posteriormente introducimos el
patrón y apuntamos, sacamos el patrón e introducimos la muestra y apuntamos.
➢ Recogemos la zona de trabajo y apagamos el espectrofotómetro.
Resultados.
Hemos obtenido los siguientes datos:
patrón→ 0,314.
Muestra→ 0,301.

Cm = (0,301/0,314)x200= 191,71.

Los valores normales de colesterol total en un adolescente como es el nuestro es por

debajo de 170mg/dl por tanto los valores que nos ha dado están altos por tanto e l
colesterol alto puede producir una peligrosa acumulación de colesterol y otros depósitos
en las paredes de las arterias (aterosclerosis). Estos depósitos (placas) pueden reducir el
flujo sanguíneo a través de las arterias, lo que puede provocarte complicaciones.

Conclusiones.
El colesterol total, junto con una determinación de triglicérido provee una información
valiosa para la predicción de la enfermedad coronaria del corazón.
Altos niveles de colesterol se asocian a riesgo de padecer enfermedades
cardiovasculares, en especial aquel unido a las LDL(colesterol malo), en cambio el
colesterol HDL (colesterol bueno) se transporta al hígado para su metabolización y
excreción por vía biliar y por tanto no se asocia con riesgo de enfermedades coronarias.
 David Mateos Jaén

Incidencias y precauciones para la optima realización

de la prueba.
No se han encontrado incidencias al realizar la práctica.