David Mateos Jaén

Práctica 11: determinación de urea.

Introducción.
La urea es un compuesto cristalino que se encuentra presente en el organismo de los
seres vivientes, más concretamente de los mamíferos. Por consiguiente, los seres
humanos también cuentan con una nada desdeñable cantidad de esta sustancia dentro
de sus cuerpos.
Este producto químico es el producto terminal del metabolismo de las proteínas dentro del
organismo de los seres humanos y también de los demás mamíferos. Esto significa que
se produce al momento de descomponerse la comida dentro del estómago y al
descomponerse las proteínas propias de los alimentos.
Este producto pasa entonces ser expulsado por las excreciones del cuerpo, razón por la
cual tanto la orina como las heces fecales cuentan con una amplia cantidad de este
compuesto en su composición.

Fundamento.
NH4+ + salicilato + NaCl → Indofenol.

Es un sistema enzimático colorimétrico para la determinación de Urea en muestras de

sangre por reacción a punto final. La urea presente en la muestra consume, según las
reacciones acopladas descritas a continuación, NADH que se cuantifica
espectrofotométricamente.

Objetivo.
El objetivo de esta practica es aprender a realizar la determinación de la urea en suero y
conocer de esta manera el procedimiento y los valores normales para poder realizar un
diagnostico a partir de las datos obtenidos tras esta prueba.
Equipo, materiales y reactivos.
➢ Puntas de pipeta azules y amarillas.
➢ Micropipeta de 1000 ul y de 20ul.
➢ tubos eppendorf.
➢ suero.
➢ probeta.
➢ reactivo A.
➢ reactivo A2.
➢ Pipeta.
➢ auxiliar de pipeteo.
➢ pape de filtro.
➢ pipeta pasteur.
➢ Tubos de ensayo.
➢ gradilla.
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Procedimientos.
➢ Limpiamos la zona de trabajo.
➢ Colocamos el papel de filtro, nos lavamos las manos y nos colocamos la bata y los
guantes.
➢ Colocamos los materiales necesarios en la zona de trabajo.
➢ Cogemos tres tubos de ensayos y los rotulamos para identificarlos, uno para la
muestra(M), otro para el patrón℗ y por ultimo otro para el blanco.
➢ Añadimos en cada tubo de ensayo 1ml del reactivo preparado.
➢ En el tubo del patrón añadimos 10ul del suero del paciente. Tapar con parafina y
homogeneizar con cuidado.
➢ Preparamos el tubo de la muestra para ello añadimos 10ul del suero del paciente
en este tubo y tapamos con parafilm para homogeneizar.
➢ Al blanco no se le añade nada quedando solo 1 ml del reactivo preparado.
➢ Esperamos 10 minutos para dejar reposar los reactivos.
➢ Una vez esperados los 10 minutos cogemos con ayuda de una micropipeta
añadimos 1ml de reactivo B a cada tubo y volvemos a dejar reposar 10 minutos.
➢ Una vez hecho esto preparamos las cubetas, ponemos las iniciales
correspondientes en el corcho o en el propio papel de filtro para identificarlas y
pasamos de los tubos de ensayo con ayuda de una pipeta pasteur a las cubetas
cada muestra enrasando correctamente.
➢ Nos vamos al espectrofotómetro y colocamos una longitud de onda de 600nm, y
medimos todas las cubetas.
➢ Primero introducimos el blanco y hacemos el blanco, cuando el espectrofotómetro
se ponga a 0 sacamos la cubeta de blanco y colocamos la cubeta del patrón,
medimos y apuntamos los resultados.
➢ Sacamos el patrón e introducimos la muestra y apuntamos los resultados.
➢ Apagamos el espectrofotómetro y recogemos por ultimo la zona de trabajo.
Resultados.
Al medir en el espectrofotómetro hemos obtenido los siguientes resultados:

Patrón→ 0,385.
Muestra→ 0,061.
(concentración del patrón 50mg/dl)

Realizamos los cálculos necesarios y obtenemos:

Cm = 0,061/0,385x50= 7,9mg/dl

Los valores normales son:

Mujeres: 6 – 20 mg/dl
Hombres: 8-22mg/dl nuestro paciente se encuentra dentro de
los valores de referencia, por tanto está bien.

Urea = bunx2,4. 7,9= bun x 2,4 bun = 7,9 2,4= 3,2 mg/dl
 David Mateos Jaén

Conclusiones.
Esta es una prueba solicitada por el médico y es muy importante ya que su
objetivo de saber si los riñones y el hígado están funcionando correctamente,
porque ya que las proteínas son metabolizadas, la urea producida es filtrada por
los riñones y eliminada a través de la orina

Incidencias y precauciones para la optima realización

de la prueba.
No se han encontrado incidencias al realizar la práctica.