PRACTICA DE LABORATORIO # 2

DETERMINACIÓN DE Pseudomona aeruginosa EN AGUA EMBOTELLADA

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR

FACULTAD INGENIERIAS Y TECNOLOGIAS

PROGRAMA: INGENERIA AGROINDUSTRIAL

INTEGRANTES:
CAMILO ANDRES GARZON VILLERO
JORGE ANDRES VILLERO ARAUJO
MAZHARY MARQUEZ ARRIETA
AMELYS FERREIRA AHUMADA
YOLI VANESSA RAMIREZ MERCADO

MATERIA: MICROBIOLOGIA

VALLEDUPAR

2022
Contenido
INTRODUCCION.............................................................................................................................3
1. OBJETIVOS.............................................................................................................................3
1.1. ESPECIFICOS.....................................................................................................................3
1. MARCO TEORICO.................................................................................................................4
Epidemiología................................................................................................................................7
2. MATERIALES Y REACTIVOS:.............................................................................................7
EQUIPOS:........................................................................................................................................8
3. PROCEDIMIENTO:.................................................................................................................8
5. ANALISIS Y RESULTADOS.................................................................................................9
5. ARTÍCULOS SOBRE PSEUDOMONA AERUGINOSA EN AGUA.................................9
ARTICULO 1....................................................................................................................................9
Universidad del Zulia Venezuela, 2013....................................................................................9
RESULTADOS..............................................................................................................................10
POSTURA DE LAS NORMAS NACIONALES E INTERNACIONALES ANTE LA
PRESENCIA DE P. AERUGINOSA EN AGUA DE BOLSA Y EMBOTELLADA................11
NORMAS INVIMA.........................................................................................................................11
CONCLUSIÓN...............................................................................................................................13
ANEXO...........................................................................................................................................13
Referencias.......................................................................................................................................13
 INTRODUCCION

Cuando hablamos de pseudomona, hacemos referencia a la bacteria Gram-

negativa, aeróbica, con motilidad unipolar. Es un patógeno oportunista en
humanos y también en plantas. Como otras Pseudomonas, P. aeruginosa secreta
una variedad de pigmentos como piocianina (azul verdoso), fluoresceína (amarillo
verdoso fluorescente) y piorrubina (rojo pardo). P aeruginosa es a menudo
identificada, de modo preliminar, por su apariencia perlada y olor a uvas in vitro.
La identificación clínica definitiva de P. aeruginosa frecuentemente incluye, tanto
identificar la producción de piocianina y fluoresceína como determinar su habilidad
de crecer a 42 °C.
Las enfermedades derivadas por la ingestión de agua, son muy frecuentes en
países en desarrollo; es por esto que la vigilancia y control por parte de las
entidades gubernamentales sobre las plantas procesadoras de agua es continua y
deben ser controladas durante todas las etapas del procesamiento desde la
recepción de la materia prima hasta el almacenamiento y distribución del producto
empacado; a pesar de esto, se evidencia que en el mercado se expenden
productos de diferentes calidades y sin registro sanitarios. El control de la
potabilidad y calidad del agua es muy importante, ya que esta es vehículo de
transmisión de enfermedades producidas por patógenos intestinales, como
bacterias, virus, protozoos y helmintos; o por contaminación fisicoquímica debido a
la aparición de sustancias no deseables o que siendo elementos de la
composición habitual del agua superan la concentración máxima admisible. Las
aguas envasadas presentan una microflora autóctona o natural que no suele ser
peligrosa para la salud.
1. OBJETIVOS

GENERAL: determinar la presencia de pseudomona aeruginosa en una muestra

de agua de botella marca cristal
1.1. ESPECIFICOS

➢ Determinar la presencia de Pseudomonas aeruginosa en agua embotellada

 ➢ Mediante un medio de cultivo selectivo y diferencial que permite el
crecimiento de diferentes especies de Pseudomonas

1. MARCO TEORICO

La pseudomona aeruginosa, es una bacteria muy extendida, y puede encontrarse en

el agua, la tierra, animales o plantas, ya que sus necesidades alimenticias son
mínimas, aunque las enfermedades producidas por esta bacteria están asociadas a su
preferencia por los medios húmedos. En los seres humanos puede encontrarse en las
zonas más húmedas del cuerpo, como son las axilas, los oídos y la zona alrededor
del ano.

Es muy poco frecuente que la Pseudomonas aeruginosa produzca trastornos en

personas sanas. La enfermedad se origina como resultado de alteraciones en las
defensas normales del huésped. Esto puede suponer la pérdida de protección que
proporcionan las membranas mucosas o la piel, como ocurre con la "otitis externa".
Sus mínimas necesidades de nutrición, adaptabilidad y relativa resistencia a los
antibióticos permiten a esta bacteria sobrevivir cerca de su anfitrión.

Las infecciones por Pseudomonas aeruginosa son graves, especialmente cuando

existe bacteriemia. Ésta suele presentarse en pacientes con enfermedad grave de
base, larga estancia hospitalaria y uso previo de antibióticos.

Al parecer la lesión inicial provocada por la P. aeruginosa al epitelio respiratorio y

otras mucosas está mediada por pili o fimbrias y por un exopolisacórido mucoide
conocido como alginato. Existen receptores de estas adhesinas en las células
epiteliales.

El microorganismo produce diversas enzimas extracelulares como la proteasa

alcalina, elastasa, fosfolipasa, citotoxina y exoenzimas A y S. la alteración de los
tejidos del huésped por estos productos bacterianos extracelulares crea las
condiciones necesarias para la proliferación e invasión bacteriana y la consiguiente
destrucción del tejido.

La Pseudomonas aeruginosa frecuentemente ocasiona infecciones adquiridas en el

hospital, prolongando el período de hospitalización, incrementando los costos
médicos, particularmente en pacientes inmunocomprometidos o críticamente
 enfermos. Estas infecciones son difíciles de tratar debido a que las cepas
responsables pueden ser resistentes a múltiples antibióticos, incluyendo
cefalosporinas de tercera generación. Puede ocurrir resistencia antibiótica durante o
después del tratamiento de las infecciones por P. aeruginosa.

1. FUNDAMENTO TEÓRICO:
 Agua envasada:
Es aquella apta para el consumo humano, contenida en recipientes
herméticamente cerrados, de materiales, formas y capacidades diversas,
aprobadas por las autoridades competentes y que es adecuada para el
consumo directo sin que sea necesario tratamiento ulterior y con cierre
inviolable el cual deberá permanecer en tal condición hasta que llegue a
manos del consumidor final. Se considera, legalmente, un alimento en
muchas naciones individuales y por el Codex Alimentarius de los estados
de las Naciones Unidas, que está reglamentado por Food and Drug
Administration (FDA), que define el agua embotellada como "agua que se
destina al consumo humano y que es sellada en botellas o cualquier otro
recipiente con ingredientes añadidos, excepto que puede contener
opcionalmente agentes antimicrobianos seguros y adecuados y dentro de
las limitaciones, el fluoruro puede también ser añadido bajo el estándar
de calidad. El agua embotellada puede ser utilizada como una bebida por
sí mismo o como ingrediente en otras bebidas. (ministerio de salud
publica, 2022)
 Pseudomonas en el agua envasadas:
Las personas consideran que el agua envasada está libre de
microorganismos y es apta en cualquier condición para su consumo. Día
a día se vende a través de la publicidad alrededor del mundo, que esta
agua es totalmente libre de impurezas y absolutamente inocua.
Generalmente se evalúa el contenido de bacterias en el agua envasada
en botellas y bolsas únicamente en base al contenido de coliformes.
Después del embotellado, la cuenta bacteriana en el contenedor aumenta
rápidamente gracias al contenido de materia orgánica en el agua. Este
aumento tiende a ser mayor en aguas no carbonatadas y en
contenedores plásticos. Entre las bacterias predominantes se encuentra
el género Pseudomonas, algunas de las cuales son conocidas como
oportunistas. Su presencia en estas aguas indica una contaminación en el
proceso. (ministerio de salud publica, 2022)
 Descripción general de Pseudomonas aeruginosa:
Pseudomonas aeruginosa pertenece a la familia Pseudomonadaceae y
es una especie de bacilo recto o ligeramente curvado, que miden de 0,5 a
0,8 µm x 1,5 a 3 µm, gramnegativos pertenecientes a la rama γ de las
proteobacterias, misma a la que pertenecen las enterobacterias (Woese,
 1987), oxidasa positiva, aerobios estrictos, aunque en algunos casos
pueden utilizar el nitrato como aceptor de electrones. Además, produce
amoniaco a partir de la arginina, y puede utilizar citrato como única fuente
de carbono. Los miembros de este género generalmente son móviles por
un flagelo polar, catalasa positiva y no forman esporas. Algunas especies
sintetizan una cápsula de exopolisacárido que facilita la adhesión celular,
la formación de biofilm o biopelículas que los protege de la fagocitosis de
los anticuerpos o del complemento, propiedad que le confiere un aumento
en su patogenicidad. Los microorganismos de esta especie son ubicuos
en el ambiente. Su presencia es común en suelos y en agua naturales
como lagos y ríos en concentraciones desde 10/100 ml hasta > 1 000/100
ml, sin embargo, no es frecuente en agua potable y se detecta en ella en
bajas concentraciones. Esta especie sobrevive en agua destilada y agua
desionizada, además, puede encontrarse tanto en ambientes oligotróficos
como en ambientes con alto número de nutrientes, como en aguas
residuales (ministerio de salud publica, 2022)

 Patogénesis:
P. aeruginosa es un patógeno oportunista y posee una virulencia particular.
El microorganismo por lo común requiere de una alteración significativa en
las líneas de defensa primarias (p. ej., una herida) o una vía para
esquivarlas (p. ej., una solución contaminada o una sonda endotraqueal)
para iniciar la infección. La unión a las células epiteliales es el primer paso
en la infección y probablemente esté mediada por pilosidades, flagelos y
una cubierta de polisacáridos extracelulares. Los receptores incluyen ácido
siálico y N-acetilglucosamina que se originan en los glucolípidos de la
superficie celular. La unión es favorecida por la pérdida de fibronectina de
superficie, lo que explica en parte la propensión en personas debilitadas.
(ministerio de salud publica, 2022)

 Manifestaciones clínicas
Pseudomonas aeruginosa puede causar diversos tipos de infecciones,
pero rara vez causa enfermedades graves en personas sanas sin algún
factor predisponente. Coloniza |predominantemente partes dañadas del
organismo, como quemaduras y heridas quirúrgicas, el aparato
respiratorio de personas con enfermedades subyacentes o las lesiones
físicas en los ojos. Desde estos lugares puede invadir el organismo y
causar lesiones destructivas o septicemia y meningitis. Las personas con
fibrosis quística o inmunodeprimidas son propensas a la colonización por
P. aeruginosa, que puede conducir a infecciones pulmonares progresivas
graves. Las foliculitis y las otitis relacionadas con el agua se asocian con
ambientes húmedos y cálidos como las piscinas y bañeras de
 hidromasaje. Muchas cepas son resistentes a diversos antibióticos, lo que
puede aumentar su relevancia en el ámbito hospitalario. (ministerio de
salud publica, 2022)

Epidemiología

✓ La Pseudomona aeruginosa tiene una distribución mundial, es

cosmopolita.
✓ Se aísla de suelos, agua, plantas, animales, incluyendo al hombre,
algunas veces es patógeno para animales y vegetales.
✓ La epidemiología de la P. aeruginosa refleja predilección por un
medio ambiente húmedo, esto es evidente ya que ambiente natural
está relacionado con agua y suelo.
✓ La colonización humana por esta bacteria ocurre en sitios húmedos
como las axilas, los oídos y la zona alrededor del ano.
✓ La humedad es un factor crítico en los hospitales, los reservorios en
hospitales pueden ser: equipos de ventilación mecánica, soluciones
de limpieza, medicamentos, desinfectantes, etc.
✓ La enfermedad humana extrahospitalaria también se asocia a
ambientes húmedos como en piscinas, soluciones para lentes de
contacto, etc.
✓ Los pacientes con quemaduras serias en la piel, pacientes ventilados
o con heridas pueden producir una infección por la presencia de P.
aeruginosa
✓ El espectro clínico de las infecciones es muy cambiante y está
influenciado por factores dependientes del huésped, el agente y el
medio ambiente, por ello es importante revisar periódicamente las
características clínicas y microbiológicas de las infecciones como
parte de un sistema de vigilancia epidemiológica y control de las
mismas.

2. MATERIALES Y REACTIVOS:

• Cajas de petri esteriles

• Beaker estéril
 • Erlenmeyer estéril
• Agar cetrimide
• Caldo lactosado con magnesio.
• Cloroformo
• Pipetas

EQUIPOS:

• Incubadorasl
• Contador de colonias
• Incubadora a 35ºC +/- 2ºC.
• Estufa
3. PROCEDIMIENTO:

1. Verter 100ml de agua embotellada en un erlenmeyer que

contiene 100ml de caldo lactosado con magnesio.

2. Incubar a 37ºc por 24- 48 horas.

3. Pasado este tiempo adicionar 0.1 ml de la preparación anterior a

cajas de petri que contiene agar cetrimide.

4. Expandir la muestra por toda la superficie de la caja con ayuda de

una varilla de hockey o asa redonda.

5. Incube las cajas de petri a una temperatura de 42ºC por un tiempo

de 24
-48 horas, la aparición de cualquier crecimiento indica la
presencia de Pseudomona sp, la presencia de pigmentación azul
verdosa o fluorescencia ( piocianinas) es prueba presuntiva de
P. aeruginosa.

6. Adicionar colonias presuntivas a 10 ml de agua peptonada e

incube a 42ºc por un tiempo de 24- 48 horas, hasta la aparición de
 color azul verdoso.

7. Añadir 2 ml de cloroformo a la preparación anterior, la capa

cloroformica subyacente a la capa acuosa se tiñe de azul. La
producción de piocianinas confirma la aparición de Pseudomona
aeruginosa.

5. ANALISIS Y RESULTADOS.

El agua embotellada, puede ser cualquier fuente de agua potable que recibe
tratamientos físicos y químicos, y que está libre de agentes infecciosos. Por
lo tanto, los resultados obtenidos en el laboratorio son razonables ya que el
agua debe estar libre de microorganismos.

• Se reportan 0 UFC/ml de pseudomona aeruginosa en 100ml de

agua tratada de botella marca adel

5. ARTÍCULOS SOBRE PSEUDOMONA AERUGINOSA EN AGUA

TRATADA Y EMBOTELLADA.

ARTICULO 1

Calidad microbiológica del agua potable envasada en bolsas y

botellas que se venden en la ciudad de Maracaibo, estado Zulia-
Venezuela.

AUTORES: Benítez Payares, Betty Mercedes; Ferrer Villasmil, Kenna Josefina;

Rangel Matos, Lisbeth Coromoto; Ávila Larreal, Ayarí Guadalupe; Barboza,
Yasmina; Levy, Alegria.

(Sistema de Información Científica Redalyc, 2022)

Universidad del Zulia Venezuela, 2013.

METODOLOGÍA: para la Determinación de P. aeruginosa, Se preparó un medio de

cultivo no selectivo, doble concentración (medio Asparagina).
RESULTADOS.

En la presente Tabla se presentan los valores promedio del índice del NMP
obtenidos para P. aeruginosa de las diferentes marcas de agua envasadas analizadas
en el presente estudio. Los resultados señalan que 7 marcas de agua envasadas (B, C,
D. E. F. I, J) en bolsas y botellas comercializadas en la ciudad de Maracaibo
mostraron crecimiento de este patógeno, donde se puede apreciar que la marca B,
arrojó el mayor crecimiento (28,0 NMP/100mL), es decir, que las marcas
mencionadas no cumplieron con los valores establecidos por COVENIN (1451-82),
quienes reportan valores < 2,2 NMP/100mL, lo cual es indicativo de ausencia total
de P. aeruginosa en agua envasada. Hallazgo que es preocupante debido a que la P.
aeruginosa es un germen oportunista del sistema respiratorio y de tejidos blandos.

Comparación de resultados: claramente podemos observar que los resultados

no coinciden, ya que en nuestra práctica en el agua embolsada ‘la Loma’ no
detectamos la presencia de P. Aeruginosa, mientras que las autoras de este
articulo reportan la presencia de P. Aeruginosa en 7 de 10 muestras de marcas
agua embolsadas que tienen venta en su país (Venezuela), Aunque es verídico
afirmar que en 4 de 10 muestras no hubo crecimiento de este patógeno.
POSTURA DE LAS NORMAS NACIONALES E INTERNACIONALES ANTE LA
PRESENCIA DE P. AERUGINOSA EN AGUA DE BOLSA Y EMBOTELLADA.
(higieneambiental, 2022)

Como hemos citado un artículo de procedencia venezolana, es necesario citar una norma
nacional muy importante es este país: las COVENIN.

NORMAS COVENIN: COMISIÓN VENEZOLANA DE NORMAS INDUSTRIALES. (1982).

Agua potable envasada. Requisitos. Norma N° 1431-82. Venezuela.

NORMAS INVIMA

Parágrafo 1. Para efectos de identificar los índices microbiológicos permisibles

señalados en el presente artículo se adoptan las siguientes convenciones:

n= número de muestras a examinar

m=índice máximo permisible para identificar nivel de buena calidad.
M= índice máximo permisible para identificar nivel de calidad
aceptable. C= número de muestras permisibles con resultados
entre n y M
<= Léase menor de
>=Léase mayor de

ORGANIZACION PANAMERICANA DE LA SALUD (1987). Guías para la

Calidad del Agua Potable. Volumen 2, Criterios relativos a la salud y otra
información de base". Organización Mundial de la Salud, Publicación Científica Nº
506. Washington D.C. (SALUD, 2022)

ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD (1995). Guía para la Calidad del

agua potable. Ginebra. OPS/ OMS. Segunda Edición. 1: 6-23. (ORGANIZACIÓN
MUNDIAL DE LA SALUD, 2022)

Las normas COVENIN, al igual que la Organización Mundial de la Salud y la

Organización Panamericana de la Salud; así como otros estándares nacionales e
internacionales, establecen que el agua envasada destinada para el consumo
humano debe estar exenta de P. aeruginosa.

señala que este microorganismo es un germen patógeno que afecta a niños y

adultos de edad avanzada, además de tener preferencia por los la Organización
Panamericana de la Salud, inmunosuprimidos y por personas que padezcan
infecciones de tracto urinario o de quemaduras en la piel. Por ser un patógeno
oportunista, su cantidad se debe limitar tanto como sea posible.

las normas colombianas invima establecen que para que el agua tratada sea
aceptable de cumplir con <2/100ml. Para P. Aeruginosa. (Sistema de Información
Científica Redalyc, 2022)

CONCLUSIÓN
 Finalmente logramos concluir que la ausencia de P. Aeruginosa en agua
embotellada marca adel tratada refleja el alto grado de salubridad de
dicha agua; de tal manera logra cumplir con los estándares de calidad
planteados tanto por las normas nacionales, como internacionales.

Cuando una muestra de agua tratada de cualquier marca, presenta

crecimiento de P. Aeruginosa, se aprecia como un indicador de
contaminación durante el proceso de envasado.
P. Aeruginosa, es una de las especies más reportadas en el agua envasada, de ahí la
importancia de actualizar diferentes aspectos relacionados con los riesgos
microbiológicos potenciales en aguas envasadas, entonces por ser un patógeno
oportunista, su cantidad se debe limitar todo lo posible.
ANEXO

Referencias
higieneambiental. (13 de 10 de 2022). Obtenido de https://higieneambiental.com/pseudomonas-
aeruginosa-une

ministerio de salud publica. (18 de 10 de 2022). Obtenido de

https://www.minsalud.gov.co/Normatividad_Nuevo/DECRETO%200475%20DE
%201998.PDF

ORGANIZACIÓN MUNDIAL DE LA SALUD. (13 de 10 de 2022). Obtenido de https://www.who.int/es

SALUD, O. P. (13 de 10 de 2022). OPS. Obtenido de OPS: https://www.paho.org/es

Sistema de Información Científica Redalyc. (13 de 10 de 2022). Sistema de Información Científica

Redalyc. Obtenido de https://www.redalyc.org/articulo.oa?id=90428348002