SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN DE COMPUESTOS POR CROMATOGRAFÍA EN

CAPA DELGADA CCD Y POR COLUMNA ABIERTA CC

Armenia – Quindío
29/10/2021

Separación y purificación de compuestos por cromatografía en capa delgada CCD

y por columna abierta CC.

Juan Esteban Gañan Bueno; Sara Cristina Vásquez Bedoya; Laura Alejandra Villamizar
Arias

Juane.gananb@uqvirtual.edu.co ; sarac.vasquezb@uqvirtual.edu.co ;
lauraa.villamizara@uqvirtual.edu.co

Resumen:

En la práctica de laboratorio, se aplicó el método de separación y purificación de

compuestos por cromatografía en capa delgada o placa CCD, y por columna abierta
CC, con el objetivo de conocer las técnicas de estos métodos, para la separación e
identificación de diferentes compuestos orgánicos, y colorantes.

El método se aplico en una muestra de espinaca, de la cual se encontraron 4

componentes diferentes, los cuales fueron: caroteno, xantofila, clorofila b y clorofila a. la
diferencia del factor de retención fue de 0.4 entre el pigmento a y b, y se concluyo que
lo que ayuda a la separación de estos compuestos y colorantes es la polaridad de la
sustancia.

Palabra clave: separación, cromatografía, CCD, CC.

Introducción:

La cromatografía en capa delgada es un procedimiento utilizado en la separación,

identificación y cuantificación de los componentes de una mezcla de sustancias (en
solución) en el cual se hace uso de un lecho constituido finamente por un polvo
finamente pulverizado, que opera como fase estacionaria, colocado en una placa plana
ordinariamente de forma cuadrangular o rectangular hecho de vidrio, aluminio o
plástico. La separación se lleva a cabo colocando una gota de la solución que porta la
mezcla a una distancia de 1 cm aproximadamente en uno de los costados de la placa,
sin permitir que esta se extienda más allá de un par de milímetros. Una vez permitida la
evaporación del disolvente, la placa debe ser introducida ligeramente inclinada dentro
del recipiente que contenga la fase móvil para que el disolvente permita subir por la
placa. (Unidad de informatica del instituto de química , s.f.)

La cromatografía de capa delgada se ha empleado extensamente en química (donde

cabe destacar la química de productos naturales), bioquímica, toxicología, ciencias
ambientales, ciencias de los alimentos, etc. Nombre alternativo: cromatografía en capa
delgada. Acrónimo: CCD, CCF. (Unidad de informatica del instituto de química , s.f.)

Para la cromatografía en columna es una de las técnicas más útiles para purificar
compuestos. Esta técnica utiliza una fase estacionaria, que se embala en una columna,
y una fase móvil que pasa a través de la columna. Esta técnica aprovecha las
diferencias de polaridad entre compuestos, permitiendo que las moléculas suelen estar
separado. (jove, s.f.). Se introduce la muestra en la columna y el paso de un disolvente
o mezcla de disolventes (eluyente) hace que se separen las impurezas del producto
deseado o que se separen los componentes de una mezcla, debido al diferente tiempo
de retención sobre la fase estacionaria. El paso del eluyente que recorre la columna
aire mediante una bomba. (De Química Recursos Educativos de Química , s.f.)

Metodología:

Procedimiento 1: preparación de la muestra vegetal.

Se inicio recolectando en un mortero, 10g de espinaca finamente picada, la cual se

macero hasta obtener una pasta, luego se le adiciono 8ml de hexano y 4ml de etanol, y
se homogenizo hasta obtener la coloración verde en el disolvente, esta se conservó
finalmente en tubo de ensayo.

La fase móvil correspondiente para usar en esta práctica fue el Hexano/Acetona 7:3.

Procedimiento 2: cromatografía en columna abierta.

Para el ensamble del montaje, se fijó la columna con ayuda de una nuez al soporte
universal, la columna tenía en su interior un trozo de algodón el cual funcionaba como
filtro. Luego se preparó la mezcla de la columna, con la silica y la fase móvil asignada.
Y se agregó a la columna con ayuda de un embudo, sin permitir que la silica se secara;
En la Figura 1 se muestra el montaje con la silica.
 Figura 1: Inicio del montaje cromatografía por columna

Luego se insertó un trozo de algodón nuevamente, que sirvió de filtro para la muestra,
después de esto se midieron 0.5ml de la muestra con la ayuda de una pipeta, una vez
depositada la muestra se deja correr la fase móvil sin dejar secar la silica.

Figura 2. Montaje con todas las sustancias correspondientes

se recogieron todas las fracciones en Erlenmeyer y fueron ordenadas según su orden
de recolección.

Figura 3. Extracciones finales de la cromatografía

Al final de la cromatografía se obtuvieron 4 muestras, 3 que proceden de la extracción

de la espinaca en estado “puro”, y una última que se vertió en el beaker de 200 ml,
donde fue lo restante.

Figura 5. Las tres muestras importantes de la cromatografía

Al final se determinó que la muestra más verde correspondía al color original de la
espinaca, y las otras dos muestras eran sustancias y nutrientes también propios de la
misma verdura.

Procedimiento 3: cromatografía en placa de silica gel.

Se inicio cortando la placa de un tamaño de 4cm x 2cm, luego se trazó una línea a
0.5mm del borde inferior y superior de la placa. Luego se derritió un tubo capilar,
obteniendo la forma de un mini gotero, donde se depositó la muestra; después se
coloco un punto de esta en la línea base, se repitió el proceso varias veces dejando el
punto de una tonalidad verde oscura y se dejó secar.

Mientras se secaba, se agrego una pequeña cantidad de fase móvil en un vaso

precipitado, luego se insertó la placa en el vaso, de manera que quedara sumergido
hasta antes de la línea base; se dejó que la fase móvil subiera por la placa hasta la
línea superior; Como se muestra en la figura 6. y luego se retiró del vaso precipitado, se
dejó secar, y se procedió a medir la distancia de las marcas finales.

Figura 6. Desplazamiento de la fase móvil hasta la línea superior.

 Figura 7. Resultado final de cromatografía en placa de silica gel.

Análisis de la muestra:

se pudo observar que los colores obtenidos tanto en la recolección por columna como
en la placa eran los mismos, (verde intenso, verde claro, amarillo).

Los componentes de la hoja de espinaca son:

 Amarillo oscuro: caroteno.

 Amarillo claro: xantofila.
 Verde oscuro: clorofila b.
 Verde claro: clorofila a.
 Figura 8. Estructuras y polaridades de los pigmentos encontrados.
(TEC, s.f.)

Resultados:

Procedimiento 2.

Desplazamiento de la
Fase fija Fase líquida fase móvil

Espinaca Hexano: acetona Gravedad

Procedimiento 3.

-polar (b)

+ polar (a)

2.7cm 3cm
2.3cm

Figura 9. Medidas de recorrido.

Fórmula para hallar el factor de retención:

RF= D/DFM

 RF: factor de retención.

 D: Distancia.
 DFM: Distancia fase móvil.

RF= Da/DFM
RF= 2.3/3= 0.76 cm

RF= Db/DFM
RF= 2.7/3= 0.9 cm

Conclusiones:

 se identificó que los diferentes componentes de la espinaca, tenían diferentes

polaridades, los mas polares fueron las clorofilas, y aunque a xantofila es polar,
su polaridad era mínima, y el caroteno no es nada polar.
  En la placa de silica gel se observo como el color amarillo oscuro (caroteno)
quedo más cerca de la línea superior esto significa que tiene menor retención,
mientras que el verde oscuro, claro y el amarillo claro (clorofila a y b, xantofila)
mas cerca de la línea base por lo cual su retención es mayor, esto debido a su
polaridad.

 El factor de retención fue menor para el pigmento el cual fue de 0.76 cm y para el
b que fue mayor es de 0.9cm.

Cuestionario:

1. ¿Cuál es la utilidad de la cromatografía de capa fina? Haga una lista al menos de

3 sustancias que se pueden usar como reveladores de una placa de CCD.

R/=
- Determinar el grado de pureza de un compuesto. Se puede determinar así, por
ejemplo, la efectividad de una etapa de purificación.
- Comparar muestras. Si dos muestras corren igual en placa podrían ser idénticas. Si,
por el contrario, corren distinto entonces no son la misma sustancia.
- Realizar el seguimiento de una reacción. Es posible estudiar cómo desaparecen los
reactivos y cómo aparecen los productos finales o, lo que es lo mismo, saber cuándo la
reacción ha acabado. La muestra a analizar se deposita cerca de un extremo de una
lámina de plástico o aluminio que previamente ha sido recubierta de una fina capa de
adsorbente (fase estacionaria).
Entonces, la lámina se coloca en una cubeta cerrada que contiene uno o varios
disolventes mezclados (eluyente o fase móvil). A medida que la mezcla de disolventes
asciende por capilaridad a través del adsorbente, se produce un reparto diferencial de
los productos presentes en la muestra entre el disolvente y el adsorbente. (PDF, s.f.)

Listado:
 Sílice gel.
 Alúmina.

2. ¿qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para un compuesto que
se purifica en cromatografía en columna?

R/=
Si la sustancia es polar, el eluyente debe de ser un eluyente polar, pero si no es
polar, se debe de utilizar un eluyente no polar, con el fin de que se alcance la
 máxima solubilidad y que las fuerzas intermoleculares ayuden a que el soluto pase
a través de la columna. (Monografias Plus, s.f.)
3. Consulte la diferencia entre una cromatografía en capa fina y de columna.

R/=
en capa fina se puede ver como una reacción se esta llevando a cabo al tener un
patrón de comparación, la de columna se utiliza para mayores cantidades de
muestra y el tamaño en los adsorbentes es diferente, ya que es mayor en el de
capa fina que en el de columna, motivo por el cual utilizamos sílice gel diferente
para cada cromatografía. (Monografias Plus, s.f.)

4. Escriba una lista de solventes utilizados en cromatografía de columna en orden

de polaridad decreciente.

R/=
 Agua
 Metanol
 2-propanol
 Acetona
 Acetato de etilo
 Diclorometano
 Cloroformo
 Tetraclorometano
 hexano
(PDF, s.f.)

5. consultar otros adsorbentes utilizados en cromatografía de columna.

R/=
 Sílice gel.
 Alúmina.
 Sacarosa.
 Almidón.
(PDF 2, s.f.)

Referencias
De Química Recursos Educativos de Química . (s.f.). De Química . Obtenido de
https://www.dequimica.info/cromatografia-columna-cc
jove. (s.f.). JOVE. Obtenido de https://www.jove.com/es/v/10217/column-
chromatography?language=Spanish#:~:text=Cromatografía%20en%20columna%20es
%20un,sólido%2C%20llamado%20la%20fase%20estacionaria.
Monografias Plus. (s.f.). Monografias Plus. Obtenido de
https://www.monografias.com/docs/Pr%C3%A1ctica-7-Cromatograf%C3%ADa-
en-Columna-Org%C3%A1nica-1-F3J8NWYMY
PDF. (s.f.). Obtenido de http://www.qfa.uam.es/qb/practicas/P6-guion.pdf
PDF 2. (s.f.). Obtenido de
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/quimbiotec/curso0405/practica10.pdf
TEC. (s.f.). TEC. Obtenido de https://actiweb.one/equipo1qe/practica_7.html
Unidad de informatica del instituto de química . (s.f.). UNIQUIM . Obtenido de
https://uniiquim.iquimica.unam.mx/glossary/cromatografia-en-capa-delgada/