PROGRAMA DE BIOLOGIA
LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA
CROMATOGRAFÍA DE CAPA DELGADA (CCD)
Daniela Guzmán, Nelson Mercado & Kevin Pava
Profesor: Mario Alvarado. 29-03-2023
Laboratorio de química orgánica, Universidad Del Atlántico, Barranquilla
Resumen
En esta experiencia, se llevó a cabo la
cromatografía de capa delgada (CCD), es
una técnica analítica utilizada para separar
y purificar compuestos químicos en una
muestra. Para esto, fue colocada una
pequeña cantidad de la muestra en una
placa de vidrio o plástico cubierta con una
capa fina de un material adsorbente, en
este caso alúmina. Las muestras se
colocaron separadas en un extremo de la
placa y luego esta fue sumergida en un
solvente, el acetato puro (C4H8O2) que por
capilaridad subió a través de la capa
adsorbente. Los diferentes componentes
de la muestra se separaron a medida que se
daba la interacción (diferente en cada
compuesto) con la capa adsorbente y el
solvente, lo que resultó en la formación de
manchas separadas en la placa. Para
interpretar los resultados obtenidos, se
comparó la ubicación de las manchas de la
muestra con las manchas de referencia de
compuestos conocidos, y se determinó el
Rf (factor de retención) de cada
compuesto.
Palabras clave: cromatografía, alúmina,
solvente, factor de retención.
Abstract
In this experience, thin layer
chromatography (TLC) is an analytical
technique used to separate and purify
chemical compounds in a sample. For this,
a small amount of the sample was placed
on a glass or plastic plate covered with a
thin layer of an adsorbent material, in this
case alumina. The samples were placed
separately at one end of the plate and then
the plate was immersed in a solvent, pure
acetate (C4H8O2), which capillary rose
through the adsorbent layer. The different
components of the sample separated as the
interaction (different for each compound)
with the adsorbent layer and the solvent
occurred, resulting in the formation of
separate spots on the plate. To interpret the
results obtained, the location of the sample
spots was compared with reference spots
of known compounds, and the Rf
(retention factor) of each compound was
determined.
Keywords: chromatography, alumina,
solvent, retention factor.
1. Introducción
La cromatografía de capa delgada (CCD)
es uno de los métodos más ampliamente
utilizados para separar, identificar y, en
algunos casos hacer el seguimiento de una
reacción química. En principio del CCD es
sencilla. se produce una capa uniforme de
absorbente sólido adecuado (fase
estacionaria) sostenida sobre una placa de
aluminio o vidrio. Se coloca con un capilar
en el origen de la placa una mancha de
solución de compuesto orgánico o mezcla
en estudio, se deja que un solvente
adecuado (eluyente o fase móvil) ascienda
por la capa del absorbente por capilaridad.
El compuesto o compuestos separados se
localizan en la placa directamente en el
caso de compuestos coloreados, con la
ayuda de un indicador, o con luz
ultravioleta cuando la fase estacionaria
tiene el indicador ultravioleta
(químicamente inerte) el cual produce
fluorescencia al irradiarse con luz UV de
onda corta (254 nm) u onda larga (366 nm)
dependiendo el tipo de indicador utilizado.
(ver figura1)
Figura 1. Ilustración de la CCD.
Los compuestos ascienden por la capa de
absorbente a diferentes velocidades con
relación al eluyente, realizándose de esta
forma la separación de los compuestos de
la mezcla. A veces es posible identificar
los componentes midiendo la velocidad
relativa de cada uno con relación a aquella
del frente del solvente. Esta movilidad
relativa se conoce como el valor del Rf del
compuesto y se define por:
El valor de Rf es una constante de cada
compuesto bajo un conjunto de
condiciones definidas (eluyente, fase
estacionaria, temperatura, espesor del
absorbente y humedad). Los valores de Rf
se encuentran en el rango de 0 a 0.999%.
La distancia se mide al centro de la
mancha.
La cromatografía de columna (CC) es otro
de los métodos más efectivos utilizados
para la separación de compuestos,
especialmente cuando otros métodos de
separación más comunes han resultado
poco efectivos. En esta técnica
cromatográfica las mezclas se resuelven
pasando una fase líquida móvil (eluyente)
a través de la fase estacionaria sólida
empacada en una columna de vidrio. En la
CC clásica el sistema más empleado es el
de adsorción; como las fuerzas de
atracción son diferentes para los distintos
compuestos, estos fluyen de arriba hacia
abajo con velocidades diferentes, los
menos atraídos fluyen primero.
2. Objetivos
1. Separar los diferentes componentes de
una mezcla de compuestos orgánicos.
2. Purificar los compuestos orgánicos
obtenidos en la separación.
3. Identificar los diferentes componentes
de la mezcla de compuestos orgánicos.
4. Obtener productos químicos de alta
pureza para su uso en diferentes
aplicaciones.
5. Realizar análisis químicos de mezclas
complejas.
3. Método experimental
Fase estacionaria: preparación
1. Con ayuda de una regla y lápiz, se
midieron 0,5 cm de distancia desde
el borde de una alúmina, con esta
medida se trazó una línea
horizontal en extremo superior del
alúmina, en el extremo inferior se
hizo el mismo procedimiento. Se
marcaron 4 puntos con igual
 distancia de separación en la línea
inferior del alúmina, y debajo de
cada uno se puso A, B, C y MIX
respectivamente. (ver figura 2)

Figura 2. Establecimiento de
puntos para cada compuesto en el
alúmina.

2. El docente dispuso
organizadamente tres cajas de Petri
vacías, y con ayuda de una pipeta
virtió o-metoxifenil piperazina en
la primera caja de Petri (compuesto
c), luego depositó fenacetina en la
segunda caja de Petri (compuesto
b) y por último, depositó ácido
salicílico en la tercera caja de Petri
(compuesto a). (ver figura 3 y 4)

Figura 4. Docente preparando los

compuestos.

3. Con ayuda de capilares, una gotita

Figura 3. Preparación de los de cada compuesto fue puesto en
compuestos a utilizar. cada uno de los puntos marcados
 con anterioridad, más en el cuarto
punto se echó una gotita de cada
compuesto (compuesto mix). (ver
figura 5)

Figura 6. Alúmina dentro del

beaker con acetato puro, se puede
evidenciar la absorción.

5. Cuidadosamente se sacó la
alúmina del beaker. (ver figura 7)

Figura 5. Utilización de capilares para

impregnar cada compuesto en la
alúmina.

Fase móvil: dilución

4. En un beaker con
aproximadamente 1cm3 de acetato
puro, se introdujo la alúmina para
que absorbiera el acetato hasta la
línea establecida en el extremo
superior, sobre el beaker se colocó
un vidrio reloj. (ver figura 6)

Figura 7. Alúmina impregnada con el

disolvente, acetato puro.
 Fase 3: revelación

6. Dentro de un beaker en la
campanilla de extracción, el
docente depositó cristales de yodo.
Luego, cuidadosamente puso
dentro la alúmina con el objetivo
de que se revelaran las manchas.
(ver figura 8)

Figura 8. Manchas reveladas y

marcadas con un lápiz.

En base al recorrido de las manchas de

cada compuesto, se tomaron medidas y fue
resuelta la ecuación:
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑝𝑡𝑜 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑎𝑙 𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑎𝑛𝑐ℎ𝑎
𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

Figura 8. Revelación de las manchas. Rf compuesto a

4. Datos experimentales 1.6

𝑅𝑓 = = 0,59
2,7
La placa alúmina con los compuestos
a, b y c en reacción con acetato puro se Rf compuesto b
reveló mediante los cristales de yodo. 3,1
(ver figura 8) 𝑅𝑓 = = 0,88
3,5

Rf compuesto c

0,3
𝑅𝑓 = = 0,33
0,9
 Se puede evidenciar una baja actividad de
5. Análisis de resultados los compuestos con el disolvente
Diclorometano-metanona 5%
Cada compuesto presentó un factor de (CH2/MeOH 5%).
retención distinto, esto es porque cada
punto original de cada compuesto se
desplazó con el solvente en diferentes
proporciones. Al mirar el desplazamiento
en Mix podemos afirmar que
definitivamente sucedió algo, la distancia
recorrida por el disolvente en arrastre a la
mezcla de los tres compuestos llega a
igualar la distancia que se tendría si se
suman los recorridos de cada compuesto
de forma individual.

Por otro lado, los otros grupos realizaron

su práctica con distintos disolventes,
veamos:

Acetato de hexano 1:1

Se puede evidenciar mayor actividad que

el anterior disolvente, en los compuestos
a y b.

6. Preguntas

1. ¿Cuáles son algunos criterios

que deben tenerse en cuenta en la
elección de absorbente
en una separación
cromatográfica determinada?
La clave de la
Diclorometano-metanona 5% separación cromatográfica es que la
(CH2/MeOH 5%) velocidad de movimiento de cada
sustancia depende de su afinidad
relativa por las dos fases. En
general, el componente con mayor
afinidad por la fase estacionaria se
mueve lentamente
(más retención), mientras que el
componente con mayor afinidad por la
fase móvil
(menos retención) se mueve más
rápido. Así, el medio cromatográfico
(columna, placa o papel) actúa como
controlador de velocidad para cada
especie de la mezcla, permitiendo su
separación y, a través de detectores, su
caracterización química. Se deben
considerar varios factores al
seleccionar un solvente para una
separación cromatográfica específica.
Por supuesto, debe ser insoluble en
el solvente usado para la separación,
no puede reaccionar con la
sustancia que se va a separar y
no puede actuar como catalizador para
la descomposición, reordenamiento o
isomerización, y debe ser un
compuesto homogéneo
independientemente de su origen.
Y cuando sea posible determinar
visualmente la ubicación del clavo
correspondiente a la
conexión de color, debe ser incoloro.
2. ¿En qué consiste la
cromatografía de CCD
preparativa?
La cromatografía en capa fina (CCD);
es una técnica cromatográfica
utilizada, entre otras cosas, para
separar componentes puros que
forman parte de una mezcla. Esta
separación se logra por la diferencia
entre la adhesión de las moléculas
componentes a la fase móvil
(generalmente el solvente) y la fase
estacionaria (la llamada capa delgada,
que puede ser papel o gel de sílice).
Esta diferencia se manifiesta en el
mayor o menor desplazamiento o
movilidad de cada componente
individual, lo que permite separarlos e
identificarlos.
3. Usted tiene un compuesto
impuro y quisiera saber cuántas
sustancias están contaminando
su compuesto. Explique cómo lo
haría utilizando cromatografía
de capa delgada o de papel.
Para determinar si un compuesto
orgánico es impuro y qué sustancias lo
contaminan realizando un
procedimiento de cromatografía de
capa fina adecuado para separar los
compuestos orgánicos de la muestra.
Aparecerán puntos o manchas en una
placa de cromatografía de capa fina a
medida que observa la dispersión de la
sustancia en la placa a medida que se
adsorbe o se une más fuerza a la capa
inmovilizada y, por lo tanto, habrá
menos manchas en la placa. Cuanto
más dispersos, menos sucios. Estos
puntos corresponderán a
contaminantes.
4. Entregue un dibujo que presente
los resultados obtenidos, los Rf
experimentales, los compuestos
encontrados en el medicamento y
un breve comentario sobre los
reveladores utilizados.
5. Investigue el nombre que reciben términos de sensibilidad y resolución,
los reveladores de yodo y ácido y es menos efectiva en la separación de
sulfocrómico. ¿Por qué? compuestos muy similares o de baja
concentración.
Generalmente se utiliza como reactivo
revelador yodo, el cual forma
complejos coloreados con los 8. Referencias bibliográficas
componentes orgánicos (con tonos
amarillo-marrón), pero las manchas • Cromatografía en capa
desaparecen con el tiempo con lo que delgada | Unidad de
es conveniente señalar las manchas Informática del Instituto de
aparecidas. Química. (s. f.-
Otro reactivo revelador bastante b). https://uniiquim.iquimica.u
utilizado es el ácido sulfúrico, que nam.mx/glossary/cromatografi
reacciona con los componentes a-en-capa-delgada/
orgánicos produciendo manchas
negras luego de ser carbonizadas. • De Química. (2021, 26
También es utilizado el permanganato noviembre). ▷ Cromatografía
potásico, que deja unas manchas de de capa fina (CCF). De
color amarillo. El tamaño de las Química. https://www.dequimi
manchas no está relacionado con la ca.info/cromatografia-ccf/
cantidad de componente separado.
Además de estos reveladores • Durst,H,D.(1995) química
generales, existen otros específicos: orgánica experimental.
2,4 - dinitrofenilhidracina (para Editorial reverté, pág.79
aldehídos y acetonas). Verde de Barcelona, España.
bromocresol (para ácidos
carboxílicos).
• Nguyen, Kelly; Mata-Chavez,
Paradimetilaminobenzaldehido (para
Hector; Nguyen, Lien;
aminas). Ninhidrina (para
Stoddard, Jonathan M. (13 de
aminoácidos).
marzo de 2007). «TLC plates
as a convenient platform for
solvent-free
7. Conclusión
reactions».Chemical
Communications (en inglés)
En esta práctica se aprendieron a
identificar los factores a implementar
para la realización exitosa de la
cromatografía de capa delgada. Esta
técnica es útil para la identificación y
separación de compuestos en una
muestra, ya que es rápida, fácil de usar
y requiere poco equipo especializado.
Sin embargo, tiene limitaciones en