UNIVERSIDAD DE COSTA RICA

ESCUELA DE QUÍMICA
SECCIÓN DE QUÍMICA ORGÁNICA

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA GENERAL I

QU-0213
Nombre: Mónica Calderón Céspedes Carné: B41202
Asistente: José David Arroyo Grupo: 03

Práctica # 7. Cromatografía.
Resumen
Se realizó la separación de ciertas sustancias mediante 3 tipos diferentes de
cromatografía. Con cromatografía de capa fina (TLC) se separó aspirina,
paracetamol, cafeína e ibuprofeno, además de una muestra de cafiaspirina. Se
utilizó la cromatografía de columna para separar los componentes de hojas de
espinaca. Además, se separó los colores que se utilizan en el pigmento de la
carcasa de los chocolates M&M’s, con ayuda de la cromatografía de papel. Se
concluye que la escogencia de la fase móvil y fase estacionaria es crucial para tener
resultados óptimos y además que la cromatografía de columna es muy eficaz ya
que la separación de componentes se realizó muy satisfactoriamente.

Introducción
La cromatografía es un método para separar componentes de una dicha
sustancia. Dicha técnica se distingue de las demás separaciones ya que esta se
basa a partir de obtener de dos fases inmiscibles entre sí, una fase móvil que se
desplaza en una dirección definida y otra fase fija o estacionaria. La fase
estacionaria puede ser sólida, gel o líquida, si es líquido debe estar distribuido en
un soporte sólido. Esta fase permanece fija durante el proceso de separación.
Ahora, la fase móvil es la sustancia que se utiliza como portadora de la mezcla, es
decir es el fluido que se desplaza a través de lecho cromatrográfico en una dirección
definida (Fuentes et al, 1998).
Este método se puede clasificar según el estado físico de la fase móvil; la
cromatografía líquida es cuando la fase móvil es un disolvente o mezcla de
disolventes y la fase estacionaria un sólido que interactúa con los componentes a
separar (líquido-sólido) o un líquido inmiscible con la fase móvil (líquido), depositado
en la superficie de un sólido (líquido-líquido). La cromatografía de gases tiene una
fase móvil, el cual es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la fase estacionaria es un
sólido (gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte (gas-líquido). (UNAM,
2007).
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 Existen tipos de cromatografía, dependiendo de los mecanismos de
interacción de los componentes de la muestra con la fase estacionaria: de adsorción
y partición. La adsorción es un fenómeno reversible fisicoquímico en donde las
moléculas del soluto transportadas por la fase móvil, que inciden sobre la fase
estacionaria sólida, quedan retenidas sobre la superficie. Esta retención es debido
a fuerzas de atracción débiles, similares a las fuerzas de Van der Waals. La partición
es un fenómeno donde si hay un sistema heterogéneo formado por dos fases en
equilibrio y se adiciona un tercer componente, éste se reparte entre ambas fases.
La partición se presenta cuando hay una fase estacionaria líquida, cuando la fase
móvil es líquida el coeficiente de distribución de un componente vendrá determinado
por la solubilidad relativa del mismo respecto a la fase estacionaria (Fuentes et al,
1998).
La cromatografía de papel no se utiliza tanto a nivel de laboratorio e industrial,
ya que este presenta un desarrollo muy largo, pero se utiliza en laboratorios clínicos
para detectar sustancias de bajo peso molecular como aminoácidos y azúcares. La
fase estacionaria es agua que se encuentra en las fibras del papel poroso y la fase
móvil es una mezcla de diferentes disolventes. Las diferentes sustancias presentes
en la mezcla a separar irán moviéndose dependiendo de la solubilidad en la fase
estacionaria o móvil. La cromatografía puede ser ascendente, si la movilidad está
impulsada tan solo por la capilaridad o descendente si actúa la capilaridad y la
gravedad (Silva & García, 2006).
La cromatografía de capa fina (o sus siglas en inglés TLC) utiliza una placa
recubierta con un adsorbente (fase estacionaria) en forma de una capa delgada con
un espesor constante, adherida a un soporte rígido que puede ser una placa de
vidrio, aluminio o poliéster. Hay adsorbentes con indicadores de fluorescencia lo
que permite la visualización del compuesto activo bajo luz ultravioleta (≈254 nm). El
eluyente, la fase móvil, asciende por capilaridad por la placa y arrastra los
componentes en forma diferenciada a lo largo de esta. El grado de elución de los
componentes a separar depende tanto de su propia polaridad como la polaridad del
eluyente utilizado (UNAM, s.f.).
La cromatografía de columna tiene una fase móvil líquida y pasa a través de
la fase estacionaria, sólida o líquida, la cual está retenida en un recinto cilíndrico.
Por lo general se utiliza pequeñas partículas de sílice (SiO2) o alúmina (Al2O3) como
fase estacionaria, ya que estas sustancias tienen a ser no reactivas y superficies
especialmente preparadas para incrementar su capacidad de absorber solventes.
La columna está saturada con solvente y se vierte un pequeño volumen de solución
que contiene solutos sobre la parte superior. Los solutos se desplazan hacia abajo
lentamente a lo largo de la columna y se eluyen en la parte inferior; si la fase móvil
es menor polar que la estacionaria, los solutos menos polares serán eluidos primero
y lo más polares en último lugar (Atkins & Jones, 2007).
El objetivo principal de la práctica fue separar e identificar compuestos
orgánicos con ayuda de cromatografía de columna, capa delgada y papel.

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 Sección Experimental
El procedimiento se tomó del Manual del Laboratorio Química Orgánica
General I (QU-0213), página 90, experimento “Cromatografía”. No se hicieron
modificaciones cruciales para esta práctica (Pérez & Lamoureux, 2017).

Resultados
Cuadro I. Distancia recorrida por patrones en la placa cromatrográfica.
Patrón Distancia recorrida (cm) Rf
Aspirina 4 0,83
Ibuprofeno 4,5 0,94
Paracetamol 3,5 0,73
Cafeína 1,7 0,35
Cafiaspirina 2 3,8 0,42 0,79
Disolvente 4,8 -

Cuadro II. Distancia recorrida por M&M’s de diferentes colores en el papel filtro con
agua.
Color del M&M Distancia recorrida (cm) Rf
Rojo 1 0,10
Azul 6,2 0,62
Café 2,1 0,9 0,21 0,09
Verde 6,1 3,45 0,61 0,35
Amarillo 3,35 0,34

Figura 1. Columna cromatográfica de pigmentos naturales en espinaca.

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 Figura 2. Elección de la proporción del eluyente.

Figura 3. Pigmento de espinaca con diferentes proporciones de eluyentes bajo luz

UV.
-Muestra de cálculo
El cálculo que se realizó para los valores de relación frontal (Rf) es el siguiente:
𝑑𝑐 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑜𝑛𝑒𝑛𝑡𝑒
𝑅𝑓 = =
𝑑𝑑 𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
Por ejemplo, utilizando los datos de Cuadro I, fila 1, se obtiene lo siguiente:
4 𝑐𝑚
𝑅𝑓 = = 0,83
4,8 𝑐𝑚

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 Discusión
Los datos recolectados mediante la separación de componentes mediante
Cromatografía Capa Delgada se observan en el Cuadro I donde se obtuvo los
valores de distancia recorrida por el componente, además se calculó el valor de
relación frontal. En este caso cada valor de Rf va a depender de la diferencia
estructural de cada compuesto. Al trabajar con compuestos orgánicos como los
fármacos aspirina, ibuprofeno, paracetamol y cafeína, se puede denotar mediante
sus estructuras que estas poseen una polaridad media, ya que tienen ciertos lugares
donde se encuentra una densidad electrónica relativamente fuerte la cual es
ligeramente amortiguada mediante la no polaridad de la parte orgánica.

Figura 4. Representación de la Figura 5. Representación de la

estructura de la aspirina. Tomado de estructura del ibuprofeno. Tomado de
www.chemspider.com www.chemspider.com

En el Cuadro I se aprecia como el orden ascendente de valores de Rf

obtenidos experimentalmente fue Cafeína < Mancha 1 Cafiaspirina < Paracetamol
< Mancha 2 Cafiaspirina < Aspirina < Ibuprofeno. El compuesto que recorrió más
distancia va a tender a ser más no polar que el resto de los compuestos ya que va
a tender eluirse más fácilmente, mientras un compuesto bastante polar va a
quedarse retenido ya que absorbe más fácilmente a los centros activos de la fase
estacionaria, la sílice, ya que esta tiene un carácter polar.
Por lo cual el ibuprofeno tiene el mayor valor de velocidad de migración, ya
que en comparación a las otras moléculas es la que presenta menos polaridad. E
inversamente, la cafeína al ser el compuesto con mayor polaridad representativa
presenta la menor distancia recorrida. La elección del eluyente es bastante
importante para la separación de los compuestos, por lo cual se utilizó un disolvente
bastante polar, el cual fue una mezcla de 95% de acetato de etilo – 5% ácido acético,
lo cual aumenta la posibilidad de elución de los componentes.

Figura 6. Representación de la Figura 7. Representación de la

estructura del paracetamol. Tomado de estructura de la cafeína. Tomado de
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 De igual forma se realizó la separación de los componentes de la muestra de
Cafiaspirina, en donde se encontró dos marcas, las cuales obtuvieron 0,42 y 0,79
como valores de Rf, gracias al valor de relación frontal se puede denotar que los
componentes respectivos en dicha muestra son de cafeína y aspirina
respectivamente. Por lo cual es un método bastante eficiente para separación de
componentes y la clasificación de los mismos si se tiene el valor de referencia de
las sustancias puras. Para poder revelar las marcas de los compuestos se utilizó la
ayuda de luz UV, ya que dichos compuestos orgánicos son incoloros, de igual forma
se utilizó la cámara de cristales de yodo, los cuales forman un complejo y brinda
color a los compuestos orgánicos, por lo cual también es otro método funcional para
revelar las manchas orgánicas.
La cromatografía de papel se realizó con el recubrimiento de colorante de los
M&M’s, donde se buscaba hallar los tonos que conformaban dichos colores. En el
Cuadro II se observa la distancia recorrida y sus respectivos Rf. Los colores
primarios se pueden ordenar ascendentemente con respecto a sus valores de
relación frontal de la siguiente forma: Rojo < Amarillo < Azul. En el caso del café y
el verde como son colores que surge de la combinación de los primarios, se observa
en el Cuadro II como los valores de Rf para el verde indican que dicho color se
constituye del color azul y amarillo, de igual forma en el café con mismos valores Rf
se denota que este color está constituido por rojo y amarillo.
Dicho tipo de cromatografía se basa en que el adsorbente es el agua, el cual
a su vez es adsorbida por la celulosa del papel y forma una película que adsorbe
los compuestos polares, por esta razón actúa como la fase estacionaria y el
disolvente, NaCl, el cual se ioniza en agua, interactúa con los componentes de los
colorantes. Los colorantes que se encuentran en dichos chocolates son E100, E120,
E133, E160a, E160e y E171; estos provienen de componentes orgánicos como
curcumina ó el ácido carmínico (Make, s.f.).

Figura 8. Representación de la Figura 9. Representación de la

estructura de la curcumina. Tomado de estructura del ácido carmínico.
www.chemspider.com Tomado de www.chemspider.com

Al utilizar un disolvente polar los componentes polares van a tender a

moverse fácilmente. En este caso el componente más polar sería el azul y el menos
polar el rojo.
Se realizó la cromatografía de columna a pigmentos naturales de la espinaca.
La extracción de dicha planta se realizó utilizando etanol, para eliminar el agua, y
además se utilizó éter de petróleo como separador de los pigmentos en la planta.

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 En la Figura 1 se puede observar como satisfactoriamente se separó los
componentes de la extracción de espinaca, donde los tonos verdes corresponden a
clorofilas a, los verdes azulados a clorofilas b y los colores amarillo-naranja se
deben a los carotenos.

Figura 10. Estructura de ciertos pigmentos que se encuentran en plantas. Tomado

de: http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa003.pdf
La cromatografía de columna comparte principios parecidos a la
cromatografía de capa delgada, donde la sustancia más polar va a ser más afín a
la fase estacionaria, la sílice, cuyo compuesto es polar. De esta forma, provoca que
los compuestos polares no se eluyan fácilmente, a lo contrario, los compuestos
polares van a ser arrastrados más fácilmente por la fase móvil, 7:3 Hexano:Acetato
de etilo, el cual es una mezcla con tendencia no polar. Dicho disolvente se escogió
a partir de una prueba rápida con TLC, el cual se puede observar en la Figura 2, ya
que esta mezcla permitía ver claramente el arrastre de cada sustancia en la
espinaca.
Así, el caroteno, el cual es un compuesto mucho más lineal y menos polar
que las clorofilas, va a tender a eluirse mucho mejor a través de la columna. Y las
clorofilas al tener grupos con mayor densidad electrónica en su estructura, van a
adsorberse más fácilmente a la fase estacionaria.

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 Conclusiones
 El método de cromatografía capa delgada es bastante útil a nivel de
laboratorio si se requiere de un método rápido y levemente eficaz.
 La cromatografía de papel es la menos útil, pero de igual forma se consiguen
resultados que entran en un rango de aceptación apreciable.
 La cromatografía de columna requiere un poco más de tiempo al
investigador, pero es en la que se obtiene mejores resultados visuales.
 La decisión de la escogencia de la fase móvil y estacionaria es sumamente
de importancia en este tipo de experimentos para obtener resultados
óptimos.

Referencias
Atkins, P.; Jones, L. (2007). Principios de química: los caminos del descubrimiento.
Argentina: Editorial Médica Panamericana.
Fuentes, X.; Castiñeiras, M.; Queraltó, J. (1998). Bioquímica clínica y patología
molecular. España: Editorial Reverté.
Make. (s.f.) Recuperado de: http://mmsmake.com/producto-2/
Pérez, A.; Lamoureux, G. (2017), Manual de Laboratorio Química Orgánica General
I (QU-0213). Costa Rica: Universidad de Costa Rica.
Silva, M.; García, M. (2006). Laboratorio de bioquímica: técnico sup. en laboratorio
de diagnóstico clínico. España: Editorial MAD.
Universidad Nacional Autónoma de México. (2007). Química analítica instrumental
II: Técnicas cromatográficas. Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf
Universidad Nacional Autónoma de México. (s.f.). Manual de prácticas Química
Orgánica I: Práctica 6 Cromatografía en capa fina. Recuperado de:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/6.-CROMATOGRAFIA_26249.pdf