Aislamiento e identificación de microorganismos del genero Methanococcus

y Methanobacterium proveniente de aguas de desecho

Introducción
Methanococccus: es un genero de microorganismos hipertemofilos y metanógenos del
dominio Archaea. Son cocos gran positivos, se les incluye dentro de los
microorganismos termófilos los cuales se encuentran en grandes variedades de
ambientes. Son anaerobios ya que su solubilidad del oxigeno decrece con el aumento de
la temperatura, son organotrofos, pueden desarrollarse a temperaturas, 38°-75°C.
Methanobacterium: pertenece al dominio de Archaea, las células no son móviles, y sus
membranas celulares faltan el biopolímero peptidoglicano, utilizan formiato para producir
metano. Son ubicos en algunos tipos ambientales de poco oxigeno calientes, como los
digestores anaeróbicos, los lodos que producen y aguas termales.
Las bacterias metanogénicas obtienen su energía mediante la producción metabólica de
gas metano, utilizando sustratos como dióxido de carbono, acetato y sustratos de metilo
a través de procesos de hidrólisis y acetogenesis y son esenciales en la degradación
anaerobia de la materia orgánica en la naturaleza. El propósito de esta investigación fue
aislar bacterias metanogénicas para conservarlas en la colección de cultivos de la
Universidad Colegio Mayor de Cundinamarca. El muestreo se realizó por duplicado de
cuatro fuentes ubicadas en Bogotá D.C, Colombia, las cuales ofrecían las características
ambientales para su desarrollo. El procedimiento incluyó la toma de la muestra en
ambiente anaerobio, aislamiento en medios selectivos e identificación por observación
de las características microscópicas con coloración de Gram y de características
macroscópicas en los medios selectivos y verificación de producción de metano
mediante prueba piloto. Los resultados permitieron evidenciar la presencia de bacterias
de los géneros Methanococcus y Methanobacterium a partir de las fuentes
seleccionadas para el estudio. Se concluyó que el mejor método para la conservación de
estos géneros es la congelación con la adición de agentes reductores y glicerol como
criopreservante. Andrea, A. G. P (s/f).
 Diagrama de flujo
Preparación de los medio M.O y M.B en su forma líquida y sólida.

Tinción gran para observación de solidos

Producción de gas metano, proceso para observar el cultivo liquido
Se intentará realizar a través del siguiente dispositivo y se reportará el nivel de agua
desplazada.

Resultados
Después de los días transcurridos en nuestros medios solidos se pueden observar
colonias un poco convexas, hay aislamientos, presentan un color crema. También se
presentan estrías que no tienen mucho aislamiento.
Discusión
Los resultados permitieron evidenciar la presencia de bacterias de los géneros
Methanococcus y Methanobacterium a partir de las fuentes seleccionadas para el
estudio.

Se concluyó que el mejor método para la conservación de estos géneros es la

congelación con la adición de agentes reductores y glicerol como criopreservante.

El procedimiento incluyó la toma de la muestra en ambiente anaerobio, aislamiento en

medios selectivos e identificación por observación de las características
microscópicas con coloración de Gram y de características macroscópicas en los
medios selectivos y verificación de producción de metano mediante prueba control.

Esta investigación permitió aislar bacterias metanogénicas delas fuentes

seleccionadas, que crecieron en los medios específicos líquidos y sólidos MC y MB y
se detectó en el experimento la producción del gas. También se corroboró que las
bacterias metanogenicas no se encuentran solas en sus ambientes naturales si no
que sobreviven gracias a la simbiosis metabólica con otras, que le brindan sustratos
esenciales para la producción de energía, aspecto que se ve reiniciado en la
evaluación microscópica con coloración de Gram a partir de las muestras directas, las
cuales reportaron una gran variedad morfológica, diferente a bacilos y cocos que son
las compatibles con el Methanococcus y Methanobacterinm.

Las bacterias metanogénicas ofrecen una gran variedad de aplicaciones

biotecnológicas si se tiene en cuenta que degradan gran variedad de desechos
también son de interés industrial ya que a partir de materiales de desecho producen
gas metano, útil porque genera energía al ser usado como combustible. A partir de
estudio se plantean posibilidades de aplicación como en rellenos sanitarios, en los
cuales se siembran con otras bacterias para generar este gas, combustible que puede
ser utilizado para el propio mantenimiento delas instalaciones del relleno, posibilidad
que se puede reproducir en otros sistemas como el de fangos activados para el
tratamiento de aguas residuales, entre otros.

Conclusión
Observamos cómo es que las diferentes bacterias que se alojaron a un lado del
sembrado que se realizaron en la caja Petri, tenían diferentes formas unas eran
ovaladas, circulares, también se encontraron convexas con colores amarillos y
cremosos.

Los datos obtenidos del aislamiento bacteriano en los medios líquidos y sólidos
MC y MB indicaron crecimiento de bacterias con características compatibles con
Methanococcus y Methanobacterium. La verificación morfológica mediante
coloración de Gram se presenta en los resultados. Las características
macroscópicas de las colonias obtenidas en los agares fueron las siguientes: en el
 agar MC para Methanococcus se observó la presencia de colonias puntiformes,
pequeñas de color amarillo pálido y en el agar MB para Methanobacterium las
colonias que crecieron fueron redondas grandes, pegajosas, brillantes, que toman
el color del medio.

Referencias

Andrea, A. G. P., Sofía, Á. G. L., Elizabeth, B. M., Constanza, C. L., & Consuelo, S. L. L.
(s/f). Aislamiento e identificación de microorganismos del género Methanococcus y
Methanobacterium de cuatro fuentes de Bogotá D.C. Com.mx.
https://www.imbiomed.com.mx/articulo.php?id=61776

Pruebas bioquímicas para identificación de microrganismos

Diagrama de flujo
Resultados

Se les pone una gota de el reactivo correspondiente para evaluar que el microrganismo
sea positivo o negativo.

Pruebas Más reactivo Positivos Negativos

TSI Reactivo Kovacs Formación de Alcalino/Alcalino
acido
MIO Reactivo de Kovacs Ornitina: sin cambioOrnitina: color
de color amarillo
Indol: Morado Indol: No cambia
Fenil Alanina Cloro Férrico Color verde Sin cambio de
Citrato Color azul Color verde
Caldo de Urea Color rosa Sin color
Rojo metilo Alfa-Natol Anillo rojo Anillo amarillo
Vogues Proskauer Hidróxido de potasio Anillo rosa Sin cambio de color

Estas pruebas se realizaron con tres bacterias diferentes y estos fueron los resultados:

Pruebas Positivo Negativo

Prueba 1 TSI Alcalino/alcalino
MIO Movilidad positiva
Fenil Alanina No cambio
Citrato Sin cambio
Caldo de urea Sin cambio
Rojo metilo Anillo amarillo
Vogues Sin cambio
Prueba 2 TSI Alcalino/alcalino
MIO Ornitina positiva Indol sin cambio
Fenil Alanina Sin cambio
Citrato Color azul

Caldo de urea Sin cambio

 Rojo metilo Anillo rojo
Vogues Sin cambio
Prueba 3 TSI Alcalino/alcalino
MIO Sin cambios
Fenil Alanina No cambio
Citrato Sin cambio
Caldo de urea Sin cambio
Rojo metilo Anillo amarillo
Vogues Sin cambio