INFORME DE LABORATORIO DE

QUÍMICA ORGÁNICA

INFORME N°10
“PROPIEDADES QUÍMICAS DE
AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS”

 Profesor: Francisco Javier Maria Ramírez Cruz

 Alumnos: - Enriquez Saenz, Cristopher Jose
- Noblecilla Guillen, Guillermo Renato
- Salazar Espinoza, María del Carmen
- Silva Reategui, Luis Enrique
 Horario de Prácticas: Lunes 15:10 – 17:00
 Fecha de Realización de la Práctica: 26/06/17
 Fecha de Entrega de Informe: 03/07/17

LIMA - PERÚ
 ÍNDICE
1. Introducción y Marco Teórico
2. Objetivos
3. Materiales
4. Procedimiento
5. Cálculos y Resultados
6. Análisis de Resultados
7. Conclusiones
8. Recomendaciones
9. Cuestionario
10. Referencias Bibliográficas
1. INTRODUCCIÓN Y MARCO TEÓRICO
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un
grupo carboxilo (COOH). Los aminoácidos más frecuentes y de mayor interés
son aquellos que forman parte de las proteínas. Dos aminoácidos se combinan
en una reacción de condensación entre el grupo amino de uno y el carboxilo
del otro, liberándose una molécula de agua y formando un enlace amida que se
denomina enlace peptídico; estos dos "residuos" de aminoácido forman un
dipéptido. La unión de varios aminoácidos da lugar a cadenas llamadas
péptidos o polipéptidos, que se denominan proteínas cuando la cadena
polipeptídica supera una cierta longitud; los aminoácidos tienen tanto
propiedades ácidas y básicas dependiendo del medio donde se encuentren.
No todos los aminoácidos son igualmente solubles en agua debido a la
diferente naturaleza de su cadena lateral, por ejemplo, si ésta es ionizable el
aminoácido será más soluble. Los aminoácidos sufren en los seres vivos tres
reacciones principales que se inician cuando un aminoácido se une con el
fosfato de piridoxal formando una base de Schiff o aldimina. De ahí en adelante
la transformación depende de las enzimas, que tienen en común el uso del
fosfato de piridoxal como coenzima.

2. OBJETIVOS
 Dar a conocer las características más importantes de los aminoácidos y
proteínas.

3. MATERIALES
 Gradilla
 Tubos de ensayo
 Piseta con agua destilada
 Pipeta de 10mL
 Gotero (25 mL) de glicina 2%
 Gotero (25 mL) de albúmina
 Gotero (25 mL) de tirosina 2%
 Gotero (25 mL) de cisteína 2%
 Gotero (25 mL) de ninhidrina 0.3%
 Gotero (25 mL) de hidróxido de sodio 10%
 Gotero (25 mL) de hidróxido de sodio 20%
 Gotero (25 mL) de hidróxido de sodio 40%
 Gotero (25 mL) de acetato de plomo 10%
 Gotero (25 mL) de sulfato cúprico pentahidratado 1%
 Gotero (25 mL) de sulfato cúprico pentahidratado 10%
 Gotero (25 mL) de ácido clorhídrico 10%
 Gotero (25 mL) de ferrocianuro de potasio
 Goteros (25 mL) de ácido clorhídrico concentrado
  Goteros (25 mL) de ácido nítrico concentrado
 Gotero (25 mL) de Reactivo de Millon
 Botella de alcohol etílico 96°

4. PROCEDIMIENTO
1. Reacción de ninhidrina
 Agregar 15 gotas de glicina, albúmina y muestra problema en 3 tubos de
ensayo.
 Agregar a cada uno de ellos 2 gotas de la solución de ninhidrina al 0.3%.
 Calentar a baño maría.
2. Reacción xantoproteica
 En 4 tubos de ensayo colocar 15 gotitas de tirosina, glicina, albúmina y
muestra problema.
 Añadir 1 mL de ácido nítrico concentrado.
 Calentar por unos minutos y observar.
 Agregue a cada uno de los tubos 1 mL de hidróxido de sodio al 20%,
observe.
3. Prueba de Millon
 Colocar 15 gotas de glicina, tirosina, albúmina y de muestra problema en
4 tubos de ensayo.
 Agregar a cada uno de ellos 5 gotas del reactivo de Millón
 Calentar por unos minutos y observar.
4. Prueba para aminoácidos azufrados
 Colocar 15 gotas de glicina, cisteína, albúmina y su muestra problema
en 4 tubos.
 Agregar ocho gotas de NaOH al 40% y calentar.
 Añadir 5 gotas de acetato de plomo al 10%.
5. Reacción de Biuret
 En cada uno de 4 tubos ensayos se le adiciona por separado 15 gotas
de glicina, cisteína de solución de albúmina y la muestra problema.
 Añadir 10 gotas de hidróxido de sodio al 10%.
 Agregar dos gotas de solución de sulfato de cobre al 1%.
6. Desnaturalización de la albúmina
 En cada uno de 5 tubos de ensayo colocar 20 gotas de solución de
albúmina.
  Al primero, calentarlo poco a poco observando la temperatura
aproximada a la que tiene lugar de la coagulación.
 Al segundo tubo se adiciona 30 gotas de alcohol (etílico).
 Al tercer tubo adicionar unas gotas de ácido clorhídrico concentrado.
 Al cuarto tubo añadir ácido nítrico concentrado.
 Al quinto tubo, solución concentrada de hidróxido de sodio.
7. Precipitación de proteínas mediante cationes
 Preparar 6 tubos de ensayos:
a) 20 gotas de agua
b) 20 gotas de solución de albúmina
c) 20 gotas de agua más 3 gotas de ácido clorhídrico 10%
d) 20 gotas de solución de albúmina más 3 gotas de ácido clorhídrico al
10%
e) 20 gotas de agua más 3 gotas de solución de NaOH al 10%
f) 20 gotas de solución de albúmina más 3 gotas de solución de NaOH
al 10%.
 A continuación, adicione a cada tubo 2 mL de solución de sulfato de
cobre al 10%.
8. Precipitación de proteínas mediante aniones
Se prepara únicamente 3 tubos idénticos a los tubos b,d y f del ensayo anterior.
A cada uno se adiciona 2 gotas de solución de Ferricianuro de potasio.
Observe el tubo que presente precipitado de proteína.
5. CÁLCULOS Y RESULTADOS
1. IDENTIFICACIÓN DE ∝- AMINOÁCIDOS LIBRES. REACCIÓN DE
NINHIDRINA
Ninhidrina Observación
∝-Aminoácido (glicina) + Coloración violeta
Albúmina - Transparente
Muestra Problema N°
- Transparente
(tirosina)

EVALUACIÓN
¿Cómo verificó la presencia de alfa-aminoácidos libres?
- Por el cambio de color a un tono morado.

¿Por qué la albúmina no tuvo el mismo comportamiento?

- Porque no presenta aminoácidos alfa libres, entonces no reacciona con la
ninhidrina.

2. RECONOCIMIENTO DE R: ANILLOS AROMÁTICOS. REACCIÓN

XANTOPROTEICA
Xantoproteica Observación
Tirosina + Coloración amarillo
Glicina - Translucido
Albúmina + Coloración amarilla
Muestra problema
- Translucido
(cisteína)
EVALUACIÓN
¿De qué manera identificó que el aminoácido y la proteína cuenta con
restos bencénicos?
- Por el cambio de coloración a amarillo.

¿La albúmina tiene restos bencénicos?

- Sí, se comprobó con el cambio de color.

¿A qué conclusión llegó con su muestra problema?

- A que no tenía presencia de anillos bencénicos, porque la reacción fue
negativa.

3. RECONOCIMIENTO DE RESTOS FENÓLICOS. PRUEBA DE MILLON

Millon Observación
Tirosina + Coloración rojo
Glicina - Translúcido
Coloración roja (menos positivo que
Albúmina +
tirosina)
Muestra problema
- Blanco
(cisteína)
EVALUACIÓN
¿Cómo verificó la presencia de restos fenólicos?
- Por el cambio de coloración a una tonalidad roja.

¿Si en la prueba xantoproteica dio positiva la reacción, necesariamente

la misma muestra tiene que dar positiva la prueba de Millon?
- Sí, ya que en la prueba xantoproteica dio positiva la reacción a la tirosina y
albumina, lo mismo sucedió con la prueba de Millon.

¿Si una muestra da positiva la prueba de Millon, necesariamente tiene

que dar positiva la prueba Xantoproteica?
- Sí, ya que la prueba de Millon reacciona con los grupos nitrogenados de la
tirosina y esta es la que da como positivo en la reacción xantoproteica.

¿A qué conclusión llegó con su muestra problema?

- A que la cisteína no tiene restos fenólicos, ya que no hubo un cambio de
coloración.
4. PRUEBA PARA AMINOÁCIDOS AZUFRADOS
Acetato de plomo/
Observación
NaOH
Cisteína + Marrón
Glicina - Translucido
Albúmina + Marrón intenso
Muestra problema
- Translucido
(tirosina)
EVALUACIÓN
¿De qué manera verificó la presencia de restos azufrados en
aminoácidos y
proteínas?
- Gracias al cambio de coloración a marrón.

¿A qué se debe el color marrón-gris característico de esta prueba?

- Se debe a la reacción del acetato de plomo por la presencia de
aminoácidos azufrados

¿A qué conclusión llegó con su muestra problema?

-A que la tirosina no es un aminoácido azufrado.

5. RECONOCIMIENTO DE ENLACES PEPTÍDICO. REACCIÓN DE BIURET

Biuret Observación
Cisteína 2 capas, una capa negra
Glicina Azul claro
Albúmina Violeta
Muestra Problema N°
Celeste, dos capas
(tirosina)

EVALUACIÓN

¿En las pruebas realizadas con el reactivo de Biuret, encontró alguna

diferencia con cada una de las muestras ensayadas? ¿Cómo lo
diferenció?
- Sí, hay diferencias. Se diferencian por las diferentes tonalidades que toma la
proteína.

¿Su muestra problema tiene enlaces peptídicos?

- La tirosina sí presenta enlaces peptídicos.

6. DESNATURALIZACION DE LA ALBUMINA
Temperatura (°C) +
Alcohol etílico -
Ácido clorhídrico (concentrado) +
Ácido Nítrico (Concentrado) +

Solución Concentrada de NaOH +

EVALUACIÓN
¿De qué manera identificó que el aminoácido y la proteína cuenta con
restos bencénicos?
- Por el cambio de coloración a amarillo.

¿La albúmina tiene restos bencénicos?

- Sí, se comprobó con el cambio de color.

¿A qué conclusión llegó con su muestra problema?

- A que sí tenía presencia de anillos bencénicos, porque la reacción fue
positiva.

7. PRECIPITACIÓN DE PROTEÍNAS MEDIANTE CATIONES Y ANIONES

Cu+2
No hay precipitado.
20 gotas de agua
Cambio de color.
No hay precipitado.
20 gotas de sol. de albúmina Cambio de color a
celeste.
20 gotas de agua más 3 gotas de HCl (10%) No se forma precipitado.
20 gotas de sol. de albúmina más 3 gotas de HCl No hay precipitado.
(10%) Cambio de color a azul.
20 gotas de agua más 3 gotas de NaOH (10%) Se precipita el agua.
20 gotas de sol. de albúmina + 3 gotas de NaOH Se precipita la proteína
(10%.) y cambio de color.

EVALUACIÓN

¿En cuál de los tubos precipitó la proteína con: el Cu2+?

- En el tubo 6 que contenía solución de albumina y NaOH.

¿Qué ocurrió en el quinto tubo de ensayo?

- Hubo precipitación del agua.

6. ANÁLISIS DE RESULTADOS
En la reacción de ninhidrina se observó una muestra coloreada de color
morado (glicina) que significa que hubo una reacción positiva y efectivamente
se encuentran aminoácidos libres en la sustancia. La glicina es un aminoácido
así que por ende se presenta libre porque al enlazarse con otro aminoácido ya
sería denominado péptido. «El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma
complejos coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los
aminoácidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina e
hidroxiprolina y café para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena
lateral. Esta reacción también identifica los grupos alfa-amino libres presentes
en péptidos y proteínas.» (1). En este caso solo se observó 2 resultados:
morado e incoloro, ya que no se trabajó con dichas sustancias que presentan
aquella reacción distinta a la mayoría de sustancias. La muestra problema fue
tirosina y no hubo reacción alguna con la ninhidrina.
En la reacción xantoproteica se trata de reconocer a aquellos aminoácidos que
presentan un anillo aromático en su cadena como es el caso de la tirosina. Esta
tirosina fue nuestra única reacción positiva en esta segunda parte de la
experimentación. Mientras que los otros aminoácidos y la albúmina
presentaban una reacción, pero no aquella que indica la presencia del anillo
aromático. «Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos
reaccionan con ácido nítrico concentrado formando nitroderivados de color
amarillo o anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia
de Tirosina, Fenilalanina y Triptófano.» (2). La muestra problema de cisteína
mostró un tono amarillento muy suave casi imperceptible. Esto se pudo haber
dado debido a que no se lavó de la manera más adecuada el tubo después de
la reacción de ninhidrina, dejando así un pequeño resto de tirosina.
La prueba de Millon se utiliza para detectar restos fenólicos en la sustancia a
prueba. Este reactivo de Millon es una mezcla de mercurio y ácido nítrico por lo
que podría ser de peligrosa manipulación. «El anillo fenólico tiene un
comportamiento característico frente a las sales de Mercurio a pH ácido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico de la tirosina y las
proteínas que la contienen.» (3). La albumina y la tirosina salieron positivos,
mientras que la glicina y la muestra problema, en este caso cisteína, salieron
negativos porque se tornaron transparente y blanco respectivamente.
Durante la prueba de aminoácidos azufrados se utiliza la reacción con acetato
de Plomo alcalino. Los aminoácidos azufrados o proteínas con restos de estos
forman un precipitado visible de sulfuro de plomo reaccionando con el acetato
de plomo en medio alcalino, se torna de marrón o gris oscuro si la reacción es
positiva. Esto sucede debido a la liberación de azufre a ebullición en medio
alcalino de NaOH, da como resultado la formación de sal de plomo.
En la reacción Biuret, se trata de identificar proteínas o péptidos ya que este
reactivo solo se tiñe violeta a partir de los 2 enlaces peptídicos (tripeptidos)
hacia adelante. De las 4 muestras usadas todas son aminoácidos libres a
excepción de la albumina que es una proteína (polipéptido) la cual si cumple
con la coloración antes mencionada. «El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en
solución acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reacción se basa en la
formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un
complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos
presentando un máximo de absorción a 540 nm.» (4).
Para desnaturalizar las proteínas se utilizó 4 compuestos químicos: Etanol,
Ácido Clorhídrico, Ácido Nítrico y NaOH. Pasado los 10 minutos de espera
luego de haber aplicado estos reactivos en tubos diferentes que contenían
albúmina; se pudo observar que solamente coagulo la proteína el Ácido Nitrico.
Los otros agentes también son capaces de desnaturalizar la albúmina solo que
requieren más tiempo para hacerlo, tiempo que nos escaseaba. «Al añadir
etanol ocurre lo mismo que cuando se fríe o cuece un huevo, las cadenas de
proteína se desenrollan y se forman enlaces que unen unas cadenas con
otras… a continuación, el efecto de la adición de etanol transcurrida media
hora.» (5). El Ácido Nítrico coagula la albúmina en 10 minutos debido a que
presenta un PH más extremo que los demás compuestos, es decir, un pH más
pegado a los extremos (en este caso es de pH 1, ácido).

7. CONCLUSIONES
Se logró dar a conocer las propiedades más resaltantes de las proteínas
mediante las experiencias realizadas y el uso de diferentes reactivos. Se pudo
reconocer los alfa-aminoácidos mediante el uso de la ninhidrina. Asimismo, se
determinó que aminoácidos y proteínas presentan un grupo R, esto se logró
mediante la reacción xantoproteica. Finalmente, podemos concluir que fue una
práctica exitosa y se logró completar las practicas planteadas.

8. RECOMENDACIONES
 Al Trabajar con ninhidrina, evitar el contacto con la sustancia.
 Evitar la inhalación de polvo.
 Asegurar una ventilación apropiada y no tirar los residuos por el
desagüe.
 El ácido nítrico es principalmente irritante y causa quemaduras y
ulceración de todos los tejidos con los que está en contacto.
 Tener cuidado al interactuar con acetato de plomo ya que es muy
inflamable.

9. CUESTIONARIO
1. ¿Con cuál de los reactivos empleados en la práctica se utiliza para
verificar la presencia de ∝-aminoácidos en una hidrólisis de la proteína?

Se utilizó el reactivo Biuret, que lo tiñó de color violeta

2. ¿Cuál es el grupo responsable de la reacción positiva con la prueba
Xantoproteica?
El grupo responsable es el anillo aromático que presenta el aminoácido.
Característico del triptófano que se precipita a partir de sus disoluciones en
ácido sulfúrico al añadir sulfato mercúrico. Debido a la presencia del triptófano
la prueba xantoproteica con la seroalbumina dará positiva.
3. ¿Cómo comprobaría que la albúmina de huevo contiene aminoácidos
con restos fenólicos?
El reactivo de millón detecta restos fenólicos en aminoácidos (tirosina). Para
ello, se procede a la mezcla de los reactivos de Millon a la sustancia y se lleva
a una cierta temperatura (alrededor de 50°C). Se tornará de color rojo ladrillo.
4. ¿Cuál o cuáles de los siguientes aminoácidos dan positiva con el
reactivo de Xantoproteica?
a) Triptófano b) Tirosina c) Histidina d) Fenilalanina e)
Metionina f) Glicina
- Triptófano y tirosina.
5. ¿Con qué prueba reconocería, los enlaces peptídicos de una proteína?
En enlace peptídico presente en una proteína puede ser reconocido por la
reacción de Biuret da una coloración violeta característica.
6. Si se tiene una solución neutra de proteína y se le añade algunos mL
de soda al 10%. Indicar si precipita la proteína al añadir unos mL de:
a) Ferrocianuro de potasio: no forma precipitado, debido a que el ferrocianuro
para reaccionar necesita una proteína en su forma catiónica o acida.
b) Sulfato de cobre: CuSO4 Si hay precipitación de la proteína. Porque el
sulfato reacciona con la proteína en su forma catiónica.
7. Explique a qué se debe el fenómeno de la desnaturalización de las
proteínas.
Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de
orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena
polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura
tridimensional fija. La desnaturalización es la desorganización de la forma
molecular completa de una proteína.
8. ¿Por qué el ácido nítrico produce una coloración amarilla cuando se
pone en contacto con un pedazo de cabello o piel?
Proteína rica en azufre que constituye la parte fundamental de las capas más
externas de la epidermis y de tejidos como las uñas, el pelo, etc. Sustancia
proteínica que se encuentra en el tejido conjuntivo, óseo y cartilaginoso, y que
por la acción del calor se convierte en gelatina. El ácido nítrico produce una
coloración amarilla debido a la presencia de aminoácidos aromáticos de la
queratina y el colágeno.
9. ¿Cómo separaría Ud. a los aminoácidos contenidos en una mezcla?
Usaría el proceso de la Electroforesis: La separación electroforética es una de
las técnicas más empleadas en Bioquímica y consiste en la separación de
moléculas cargadas (en este caso, aminoácidos) en presencia de un campo
eléctrico. Al existir una diferencia de potencial que genera un campo eléctrico,
las moléculas se desplazarán hacia el polo positivo (ánodo) o hacia el polo
negativo (cátodo), en función de su carga eléctrica. La velocidad de migración
electroforética de una molécula dada depende la carga eléctrica, de las
dimensiones moleculares y del soporte empleado. Para realizar una
electroforesis se necesita una fuente de alimentación (que genera la diferencia
de potencial), una cubeta y un soporte (papel o diferentes geles de acetato de
celulosa, agarosa o poliacrilamida). En el caso de moléculas pequeñas como
los aminoácidos, se utiliza el papel como soporte. Así, se deposita una muestra
de la solución problema (por ejemplo, una mezcla de aminoácidos) Verónica
González Núñez -12- sobre la tira de papel, que hace de puente entre los dos
polos (que se encuentran en dos cubetas con tampón a un pH determinado).
La fuente de alimentación se enciende, generando un campo eléctrico y
transcurrido un cierto tiempo, se apaga, se retira el papel, se revela con un
reactivo apropiado y se identifican los componentes de la mezcla. La carga
neta de cada aminoácido al pH en el que tiene lugar la electroforesis
determinará la dirección y la velocidad de la migración electroforética. De esta
forma, se pueden separar los aminoácidos presentes en una mezcla en
disolución.
10. Aplicación de la reacción con la ninhidrina en la cromatografía.
Explique.
La ninhidrina es un poderoso agente y reactivo común para visualizar las
bandas de separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis,
también es utilizada con fines cuantitativos para la determinación de
aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos alfa cuyo pH se encuantra
entre 4 y 8, dando una coloración que varía de azul a violeta intenso. En el
caso de la prolina, que estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un
grupo imino , con una coloracion final amarilla.
“Podemos citar como ejemplo del procedimiento de cromatografía en papel la
separación de aminoácidos en fracciones por cromatografía descendente en
papel Whatman No. 1, empleando la elución fenol saturado con agua. Los
aminoácidos aparecen como manchas coloridas después de revelar el
cromatograma rociándolo con reactivo de ninhidrina.”

10. REFERENCIAS BIBLIÓGRÁFICAS

 Tadeo Lozano J. GUÍA No 9: ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE
AMINOACIDOS [Internet]. Bogotá: Universidad de Bogotá. [accesado 20
de noviembre de 2016]. Disponible en:
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/o
rganica/ guia_9_aminoacidos.pdf
 Reacción de Biuret [Internet]. [accesado 21 de noviembre de 2016].
Disponible en: http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
 DESNATURALIZANDO PROTEÍNAS [Internet]. Asociencia. [accesado
21 de noviembre de 2016]. Disponible en:
http://pendientedemigracion.ucm.es/info/analitic/Asociencia/
DesnatProteinas.pdf