BATERIAS

BIOQUIMICAS
NOMBRES : NATALIA ARAYA
KAREN CEA
MARCELINO LLANCAN
DEYANIRA SEPLVEDA
BRBARA PLAZA
 MTODOS BASADOS EN
PRUEBAS BIOQUMICAS
Las pruebas bioqumicas han sido ampliamente utilizadas para
diferenciar bacterias. Estas pruebas se fundamenta en
demostrar si el microorganismo es capaz de fermentar
azcares, la presencia de enzimas, la degradacin de
compuestos, la produccin de compuestos coloreados, etc
 PRUEBAS BIOQUMICAS

CITRATO
UREASA
MOVILIDA, INDOL, ORNITINA (MIO)
TRIPLE AZCAR HIERRO (TSI)
AGAR LICINA HIERRO (LIA)
 CITRATO
Color: verde
Indicador: bromotimol
Sustrato principal: citrato de sodio
Es una sal del cido ctrico.
Algunas bacterias pueden obtener energa de fuentes distintas de la fermentacin de los hidratos
de carbono, con el citrato como nica fuente de carbono.
La medicin de esta caracterstica es importante para identificar muchos miembros de la familia
enterobacteriaceae. Cualquier medio es usado para la detectar la utilizacin del citrato por las
bacterias que se van a probar debe carecer de protenas e hidratos de carbono como fuente de
carbono.
La utilizacin del citrato por la bacteria que se va a probar se detecta en el medio de citrato
por la produccin de subproductos alcalinos.
El medio contiene citrato de sodio, que es un anin, como nica fuente de carbono, y fosfato de
amonio como nica fuente de nitrgeno. Las bacterias que pueden utilizar el citrato tambin
pueden utilizar el nitrgeno de la sal del amonio, con produccin de amoniaco (NH+), lo que
produce la alcalinizacin del medio por conversin del NH a hidrxido de amonio (NH4OH).

El indicador es el azul de
Bomotimol, que es amarillo por
debajo del pH 6 y azul por
encima del pH 7.6
 Procedimiento

Se toma una colonia bien aislada de la superficie de un

medio de aislamiento primario y se siembra en forma de
estra en el agar inclinado del tubo de citrato.

El tubo se incuba a 35C durante 24 a 48 horas

Resultados
La prueba positiva est representada por la
produccin de color azul oscuro en el termino
de 24 a 48 horas, que indica que el
microorganismo en prueba ha sido capaz de
utilizar el citrato contenido en el medio, con
formacin de productos alcalinos.
 UREASA
Color: rosa
Indicador: rojo fenol
Sustrato principal: urea
La urea originalmente es amarillo claro. Su indicador es el rojo fenol, el cual en pH alcalino se
vuelve fucsia y en cido es amarillo (de hecho el tubo parte un poco cido). Lo importante aqu es
ver si hubo produccin de ureasa por parte de la bacteria.
Procedimiento
El medio lquido se siembra con una asa de cultivo
puro del microorganismo a probar.
La superficie inclinada del agar se siembra en estra y
se incuba a 35C durante 18 a 24 horas.
 Resultados

1. Caldo de Stuart:
Un color rojo en todo el medio indica alcalinizacin e hidrolisis de la urea

2. Agar de Christensen:
Degradadores rpidos de la urea (especies de Proteus)

Degradadores lentos de la urea (especies de Krebsiella)

 MIO: MOVILIDA INDOL ORNITINA
Indicador de pH: prpura de bromocresol
cido: amarillo pH 5.2
Alcalino: prpura pH 6.8
Medio no inoculado: prpura intenso brillante pH 6.0
El MIO se utiliza para la identificacin de enterobacterias sobre la base de movilidad, la
produccin de ornitina descarboxilasa e indol.
1. Descarboxilacin de ornitina
2. Produccin de indol
3. Movilidad
 Descarboxilacin de ornitina: mide la capacidad enzimtica de un
organismo para descarboxilar un aminocido para formar una amina,
con la siguiente alcalinidad

Produccin de indol: El triptfano es un aminocido que

puede ser oxidado por ciertas bacterias para formar tres
metabolitos principales: indol, escatol e indolactico
Procedimiento
Inoculacin: picadura en forma vertical
Tiempo: 24-48 horas
Temperatura: 35 37c

Resultados
Ornitina descarboxilasa
Positivo: color prpura en el medio
Negativo: color amarillo en el fondo del tubo que puede ser prpura al final
Indol
Positivo: anillo rojo en la superficie del medio
Negativo: no se produce color / color naranja en la superficie del medio, indica desarrollo de
escatol

Movilidad
Positiva: Los organismos mviles migran de la lnea de siembra y se difunden en el medio
provocando turbiedad.
Negativa: crecimiento bacteriano acentuado siguiendo la lnea de siembra.
 TSI: TRIPLE AZCAR HIERRO
Indicador: rojo fenol
cido: amarillo
Alcalino: rojo
Medio no inoculado: naranja rojizo, pH 7.4
Determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono especfico incorporando
en un medio de crecimiento bsico, con produccin o no de gases, junto con la determinacin de
posible cido sulfhdrico.
El acido en el medio hace virar el amarillo del indicador de pH, rojo fenol.
A 6 horas de la incubacin, la zona de la estra y en el fondo del tubo tendrn un color
amarillo (fermentador de glucosa)
Si el fondo permanece rojo, no hay variacin de pH
(no fermentador de glucosa)
Si el color rojo es ms intenso que el original, hay
alcalinizacin ( no es miembro de la familia
enterobacteriaceae)

Al agotar la glucosa la bacteria utiliza la lactosa o

sacarosa.
Despus de 18-24 horas el medio permanece amarillo,
reaccin cido sobre cido (A/A). Fermentador de
lactosa.
La lactosa de gas romper el agar o lo empujara hacia
arriba. Reaccin A/A ms gas.
Si no utiliza la lactosa, har uso de protenas o aminocidos.
El metabolismo proteico se produce en la superficie de la zona inclinada donde el oxigeno es
abundante.
18-24 horas de incubacin: zona inclinada roja fondo del agar amarillo (metabolismo
anaerobio de glucosa inicial). Reaccin alcalina sobre cido.

Las bacterias que fermentan glucosa tambin pueden formar productos alcalinos a partir de
la utilizacin de la peptona sobre la zona inclinada. Reaccin K/K
Procedimiento

Inoculacin: picadura y estra sobre superficie del agar

Tiempo: 18-24 horas
Temperatura: 35-37C

Resultados

K/A: fermentacin de glucosa solamente (superficie alcalino profundidad cida). Caracterstico de

bacterias no fermentadoras de lactosa como Shigella.
A/A: fermentacin de glucosa y lactosa (superficie cida / profundidad cida). Caractersticos de
E.coli y grupo Klebsiella- Enterobacter.
K/K: NO fermentacin de glucosa y lactosa ( superficie alcalina/profundidad alcalina).
Caracterstico de bacterias no fermentadoras como Pseudonomas aeruginosa.
 LIA: AGAR LISINA HIERRO

Color: lila
Indicador: prpura de bromocresol
Sustratos principales: lisina y glucosa
cido amarillo pH: 5.2
Alcalino prpura pH:6.8
Medio no inoculado: prpura intenso brillante pH 6.0
Mide la capacidad enzimtica de un organismo para descarboxilar un aminocido (lisina y arginina)
para formar una amina con la consiguiente alcalinidad

El color original es prpura. La enzima que interviene ac en la descarboxilacin tambin

es inducible: para que se expresen los genes debe existir una induccin. Esa seal de
induccin es que el medio est cido. Por lo tanto, para que se exprese la enzima lisina
descarboxilasa la bacteria tuvo que haber usado la glucosa (produccin de cido). La
lisina descarboxilasa toma el aminocido lisina y le saca el grupo carboxilo (reaccin de
descarboxilacin). Conjuntamente con ello ocurre una elevacin del pH. Entonces, estando
en una condicin cida inicial, vuelve a subir el pH (vuelve el color prpura).

Procedimiento

Inoculacin: por picadura y estra, inoculo liviano

Tiempo: 18-24 horas
Temperatura 35-37C
Resultados
A: cido
K: alcalino
N: neutra
R: rojo

K/K: Desaminacin oxidativa/ descarboxilacin

K/A: No desaminacin

Produccin de H2S: Ennegrecimiento del medio

Produccin de gas: burbujas o levantamiento del medio de cultivo de las paredes del tubo
 CASO CLNICO

MARIA FERNANDA LPEZ RIQUELME EDAD 25 AOS SE ACERCA A LA CLNICA SANTA MARA
CON DOLOR AL ORINAR Y ESCASES DE ORINA Y FIEBRE, EL MDICO SOLICITA UN EXAMEN DE
ORINA COMPLETA Y UN UROCULTIVO.
GRACIAS