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Ruby N.

Gutirrez
5.1

II PARCIAL
LAB N8: BACILOS GRAM (-) FERMENTADORES Y NO FERMENTADORES
Tincin de Gram
Enterobacterias:
- Bacilos cortos gram negativos no esporulados.
- Pueden o no tener motilidad.
- Anaerobios facultativos o anaerbicos
- Oxidasa (-)
- Pseudomona =
- Glucosa (+)
enterobacteria
- Citrato (+)
o Oxidasa (+)
o Glucosa (-)
o Citrato (-)

Bacilo

Gram

(-)

pero

no

MEDIOS DE CULTIVO EN PLATO


- Escherichia coli
- Pseudomona aeruginosa
- Klebsiella pneumoniae
- Salmonela sp
- Shigella flexneri
- Enterobacter cloacae
- Proteus vulgaris

MacConkey Fermentacin
- Medio selectivo por contener sales biliares y violeta cristal que inhiben el crecimiento de bacterias no
entricas.
- Medio diferencial porque contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro). Las bacterias capaces de
fermentar lactosa producirn un cambio en el pH del medio por liberacin de productos cidos. Como
consecuencia sus colonias aparecern de color fucsia/violeta, contrastando con la coloracin amarillenta
de las colonias incapaces de fermentar la lactosa.

SS

Salmonella

Medio de cultivo selectivo para Salmonella y Shigella.


Compuesto x sales biliares y violeta cristal q inhiben el crecimiento de
coliformes, lactosa y rojo neutro (indicador de pH).
Las colonias fermentadoras de lactosa producirn cidos y cambiar el
color del medio a rosa. Como Shigella (lactosa negativa) y Salmonella no utilizan
este azcar forman colonias transparentes.
El tiosulfato es la fuente de azufre para la produccin de cido sulfhdrico
de las bacterias sulfato-reductoras. Este cido reacciona con la sal de hierro y se
forma sulfuro de hierro de color negro. Las colonias de Salmonella se observan
transparentes con un precipitado negro (cido sulfhdrico) en el centro.

EMB (eosin methylene blue) Fermentacin


- Contiene sucrosa y lactosa.
- Utiliza como inhibidor e indicador a eosina azul de metileno.
- Prueba negativa: si se mantiene igual color al medio (rojo), indicativo de la no fermentacin de azcares.
- Escherichia coli produce un color verde metlico caracterstico para esta prueba positiva.

Medio con citrato de Simmons Shigella; Enterobacter


- Indica la capacidad de las bacterias de metabolizar el citrato. Contiene
citrato
como nica fuente de carbono, fosfato de amonio como nica fuente de
Salmonella
fosfato y azul de bromotimol como como indicador de pH.
- nicamente las bacterias capaces de metabolizar citrato podrn
multiplicarse en este medio, al utilizar los fosfatos presentes liberan iones
amonio (bsicos) que junto con la eliminacin de citrato (cido) generar una
fuerte basificacin del medio que ser aparente con un cambio de color del
indicador de pH de verde a azul.

Prueba de urea Deteccin de enzimas

Klebsiella

- Indicador de pH utilizado es el rojo fenol.


- Esta prueba detecta la presencia de la enzima ureasa en el
metabolismo bacteriano, la cual al hidrolizar urea forma productos
amoniaco que alcalinizan el medio y se evidencia con el cambio de
color del medio desde un amarillo plido hasta un rojo fucsia.
- Proteus

Prueba SIM (sulfuro indol motilidad) motilidad (+) = turbiedad sin observacin del inoculo
- Se emplea para detectar la presencia de la enzima triptofanasa en bacterias, que degrada el
aminocido triptfano a indol.
- Al aadir el reactivo de Kovac o de Ehrlich que contiene p-dimetilaminobenzaldehdo, reacciona tanto
con el indol como con el triptfano produciendo compuestos de color rojizo.
- Motilidad indica presencia de flagelos
- Proteus = SIM +

E. coli

TSI (triple sugar iron) Podemos evaluar fermentacin, produccin de gas y produccin de H2S
- Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azcares: 10% lactosa, 10% sucrosa y 1%
dextrosa y un ligador que es en este caso el hierro. La siembra se realiza tanto en la superficie del agar
(aerobiosis) como en la profundidad de ste (anaerobiosis).
- Medio K (alcalino) de color rojo. Medio A (cido) de color amarillo.
- K/A: bacteria metaboliza slo la glucosa: En la superficie la utilizar por va respiratoria, y donde la
tensin de oxgeno disminuya lo suficiente, emplear una pequea proporcin por va fermentativa. Esto
generar una pequea cantidad de cidos que sern neutralizados por las aminas derivadas de la
decarboxilacin oxidativa de las protenas. Como resultado, el medio mantendr su color rojo en la
superf, al no haber cambiado de pH. Por el contrario, las bacterias crecidas en la profundidad emplearn

Proteus

E. coli

Control

Salmonella

Shigella

Pseudomona

desde el primer momento la glucosa x va fermentativa, generando cidos q no sern neutralizados,


provocndose un descenso del pH y el color del medio en el fondo del tubo cambiar a amarillo.
o Indicador: Rojo fenol
o Shigella
A/A: la bacteria fermenta dextrosa y sacarosa o lactosa (fermenta 2 azcares): los cidos producidos
modificarn tambin el pH de la superficie del medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la
cantidad de cidos producidos en esta fermentacin, ya que la lactosa se encuentra en el medio a mayor
concentracin que la glucosa. El color del medio en la superficie cambiar a amarillo.
o E. coli
K/K: la bacteria es aerobia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azcares
son respirados, degradndose completamente hasta CO2, que se elimina y no modifica el pH.
o Pseudomona aeruginosa
A/A (g): aparicin de burbujas, rotura o elevacin del agar del fondo del tubo.
o E. coli
K/A (H2S): aparicin de un precipitado de color negro en el fondo del tubo. Algunas bacterias
respiradoras anoxobinticas son capaces de emplear el tiosulfato sdio como aceptor final de electrones
en la cadena transportadora. Este compuesto se reduce a cido sulhdrico que reacciona con el hierro
Fe2+ presente en el medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.
o Dextrosa fermentada
o Salmonella

Reaccin
Aerbica

A/A
(g)

K/K

K/A

K/A
H2S

A/A Reaccin
H2S Anaerbica

Klebsiella
Prueba de fermentacin de azcares
-

Indicador = Rojo fenol


Lactosa +
o Klebsiella
o Enterobacter cloacae

Medio MRVP (rojo metilo Voges-Proskauer)


- La liberacin de cidos orgnicos generar un acusado descenso
del pH que podr ser detectado aadiendo al medio un indicador de
pH como el rojo de metilo (rojo a pH 4.0).
Escherichia coli
- va catablica
- fermentacin mixta de cidos
- Si la fermentacin que se ha llevado a cabo produce acetona
puede ser detectada aadiendo al medio: 1 KOH y 2alfa-naftol
que reaccionarn con este compuesto produciendo rojo
caracterstico.
- va anablica
- Klebsiella pneumoniae

Prueba de fenilalanina Deteccin de enzimas


- En este medio, el aminocido presente es la fenilalanina, empleado para
determinar la presencia de la enzima fenilalanina desaminasa en bacterias.
Proteus
- La accin de esta enzima se evidencia por la aparicin del producto resultado
(cido fenilpirvico) que se detecta mediante adicin de cloruro frrico,
resultando un compuesto de coloracin verde oscuro.

Prueba de oxidasa
- Se basa en la capacidad del colorante tetrametil-p-fenilendiamonio de oxidarse al ceder electrones al
citocromo c en su presencia, produciendo formas coloreadas (azul/morado).
- Permite diferenciar el grupo Enterobacteriaceae (que carecen de citocromo c) del gnero Pseudomonas
(que posee citocromo c).
- Taxo N + agua halo prpura

LAB N9 MICROBIOLOGA DE AGUA Y ALIMENTOS


-

ETA: Enfermedad Transmitida por Alimentos


Tipos
o Microorganismos
o Toxinas
o Objetos
Caso de ETA: 1 persona
Brote de ETA: 2 + personas que presentan una enfermedad similar despus de consumir alimentos del
mismo origen , y q stos sean el vehculo de la enfermedad
Infecciones alimentarias: ETAs x ingestin de alimentos o agua contaminadas con agentes infecciosos
(If Shigella, S. aureus)
Intoxicaciones alimentarias: ETAs x ingestin de toxinas (Ix Salmonella, B. cereus)
Homogenizacin de muestras Stomacher
Plato Petrifilm: medio de cultivo q contiene un nutriente Bilis rojo violeta (Violet Red Bile, VRB), un
agente gelatinizante soluble en agua fra, un indicador de la actividad de la glucoronidasa, y un indicador
de tetrazolio q facilita la enumeracin de las colonias
Colilert prueba para determinar coliformes totales o fecales en lquidos + luz UV
o Reactivo con una formulacin a base de sales, y sustratos con nitrgeno y carbono q son
especficos para los coliformes totales. Las bacterias no coliformes son inhibidas y no pueden
metabolizar los nutrientes indicadores.
Durante la metabolizacin de estos nutrientes, se produce un color amarillo y
fluorescencia, con lo cual queda confirmada la presencia de coliformes totales y de E. coli,
respectivamente.
o Resultados
Incoloro = (-) coliformes totales y E. coli (nico indicador de contaminacin fecal)
Amarillo = (+) coliformes totales
Fluorescencia = (+) E. coli (coliformes fecales)
Salmonella typhimurium perodo de incubacin: 6 a 72 horas
Shigella
o Inoculo de 10 bacterias
o Shigalike toxin
o Perodo de incubacin: de 5 a 6 das
o Causa disentera
Escherichia coli diarrea del viajero (E. coli enterotoxignica)
Clostridium botulinum = botulismo
Staphylococcus aureus
o Perodo de incubacin: 1 a 6 horas
o Enterotoxina termorresistente x la mala refrigeracin
Bacillus cereus
o Toxina diarreica Perodo de incubacin: 10 a 12 horas
o Toxina emtica Perodo de incubacin: 1 a 6 horas

Coliformes
o Escherichia
o Klebsiella
o Enterobacter
o Citrobacter *
HACCP = Hazard Analysis and Critical Control Points
o Concentra el control en los puntos crticos para la inoculidad del producto alimentario evaluado,
valoriza la comunicacin entre la industria y la inspeccin.
Agua apta para consumo humano
o Incolora
o Inodora
o Insabora
o No sedimentos
o Concentracin de cloro = 102/ ml

LAB N10 INFECCIONES CAUSADAS POR MICROORGANISMOS ANAEROBIOS


-

Bacilos gram +
o Olor ftido
o Medio hecho de carne
o Infeccin de origen exgeno
o Esporulados
Clostridium perfringes
Clostridium botulinum (botulismo)
Clostridium difficile (colitis pseudomembranosa)
Gangrena gaseosa
Clostridium tetani (ttano)
Bacilos gram
o Bacteroides
o Fusobacterium
Cocos gram +
o Peptostrepstococos
Anaerobios estrictos
o Bajo ritmo de multiplicacin
o Carecen de citocromo oxidasa, superxido dismutasa y catalasa
o Factores predisponentes
Traumatismos
Cirugas
Mordeduras o quemaduras
Obstrucciones
o Presencia de abscesos o tejidos necrticos
o Difciles de controlar
o Infecciones por anaerobios
Bacteroides forsythus infecciones mixtas
S produce superxido dismutasa
Peritonitis
o Flora normal en boca e intestinos
o Enfermedades dentales:
Caries
Periodontitis
Enfermedades periodontales necrosantes
Clostridium perfringes
o Enterotoxina A
o Exgeno
o Anaerobio poco estricto
o No mvil
o Espora oval subterminal
o Doble hemlisis (alpha y beta hemoltico)
o Suelo, agua, tracto intestinal
Clostridium tetani
o Produce H2S, fermenta y tiene motilidad

o Esporas terminales
o Parlisis del msculo
o Ttano generalizado
Clostridium botulinum
o Espora subterminal
o Toxinas termolbiles
o A, B, E (toxinas en humanos)
o Bloquea la emisin de acetilcolina parlisis flcida (inhibe la contraccin del msculo)
o Neurotoxina
o Botox
o Diagnstico
Clnico
Microbiolgico intoxicacin alimentaria
Clostridium difficile
o Produce toxina responsable de la enfermedad gastrointestinal asociada a antibiticos
o Produce diarrea benigna
o Toxina A (enterotoxina) y B (citotoxina)
o Esporas germinan en el colon
o Espora oval subterminal
o Mvil
o Tratamiento
Drenaje quirrgico
Clindamicina y metronidazol
Cultivo
o Jarra de anaerobios
o Medios complejos
o Putresinas y cadaverinas aminas de Clostridium sp
Resultados
o Infeccin endgena: producida por la reactivacin de organismos previamente latentes
o Infeccin exgena: se desarrolla a partir de una bacteria que se encuentra generalmente fuera del
cuerpo y que ha penetrado el mismo.
o Mantener los cultivos alejados del oxgeno para mejores resultados

Mtodo de jarra y vela


Se necesita un frasco con tapn de rosca y una vela. Una vez sembradas las placas y los
tubos, se colocan en el interior del frasco junto con la vela encendida y se cierra el frasco
hermticamente. Cuando la vela consume todo el O2 del frasco, se apaga consiguiendo
una atmsfera de 5-7% O2 (microaeroflico).

Recipiente Gas Pak e indicador azul de metileno


Consta de un soporte para placas incluido en una cubeta transparente con tapa
hermtica. Para crear la atmsfera anaerbica se utiliza un sobre comercial con
catalizador que contiene una tableta de borohidrato sdico y otra de bicarbonato sdico y
cido ctrico.
Las placas y los tubos sembrados en el interior de la jarra junto al sobre abierto al que
previamente se le han aadido 10 mL de agua destilada estril para generar la liberacin
de CO2 e H2. Para confirmar el ambiente anaerobio, se coloca dentro de la jarra un papel
indicador (azul de metileno) que cambia de color (de azul a blanco) en presencia de
CO2.
Perlas de paladio = catalizador de la reaccin
Tapa Brewer
Anteriormente era utilizado para tapar el plato Petri y as crear un ambiente con bajo % de
oxgeno.

Plato Spray
Consta de una lnea central que divide en 2 segmentos: en uno cido piroglico y en el
otro NaOH que al mezclarlo en el medio de cultivo, reaccionaban formando H2O y CO2.

Cultivo en caldo de carne de Clostridium


La capa de aceite mineral estril permite que la superficie del caldo con carne molida
de corazn de vaca quede totalmente cubierta para impedir la difusin de O2 al
medio. Antes de inocular es conveniente hervir el medio durante 10 min para liberar el
O2.

Tincin de Meller para esporas de Clostridium

LAB N11 - MYCOBACTERIAS, NOCARDIAS Y ACTINOMYCES


-

Bacilo cido Alcohol Resistente (BAAR)


Alto contenido de lpidos
Aerobios estrictos
Pared compuesta de cido mictico (cidos grasos de cadena muy larga) que no permite la decoloracin
del gram
Tinciones:
o Ziehl Neelsen (carbol fucsina, alcohol cido, azul de metileno) si la bacteria est teida de rojo
es un BAAR
o Kinyoun
o Auramina-Rodamina MFluorescencia
Medios
o Lowestein Jensen
o Middle Brook
o Castaeda
o Sabouraud

Medio de Lowenstein Jensen


Hecho a base de huevo, se cocina el huevo batido con extracto de papa y se le aade verde malaquita
(medio selectivo), inhibidor para bacterias Gram positivas. Posee un fondo cremoso verde plido.
Asparagina = fuente de nitrgeno

Cultivo de Mycobacterium tuberculosis


- No es una mycobacteria atpica.
- Diagnstico lento debido a su periodo de incubacin de 3-6 semanas.
- Vacuna BCG (Bacilo Cimette Guerin) que se obtiene de M. bovis.

Cultivo de mycobacterias atpicas afectan a los inmunosuprimidos (SIDA)


- MAPP (Mycobacterias del Ambiente Potencialmente Patgenas)
- Segn Runyon, se clasifican en:
o Fotocromgenas (poseen pigmentos, amarillo, en la luz) crecimiento lento
M. kansasii, M. marinum, M. simiae
o Escotocromgenas (pueden o no presentar pigmentos, amarillo o naranja, en luz u oscuridad)
M. flavescens, M. scrofulaceum, M. gordonae
o No Fotocromgenas (no pigmentadas en la luz, de crecimiento lento)
M. terrae, M. gastric, M. complejo avium-intracellulare, M. paratuberculosis
o Crecimiento rpido (pueden o no tener pigmentos) crecen en menos de 1 semana
M. chelonae, M. fortuitum

Muestra de esputo BAAR (+) con tincin de Ziehl Neelsen


Esta tincin demuestra la capacidad de bacterias
teidas de resistir a la decoloracin por cidos y
alcoholes. Esto se correlaciona con su alto contenido en
lpidos de su pared celular y presencia de cidos
miclicos que aumentan el carcter hidrfobo.
Mezcla en carbol-fuscina capaz de teir las
clulas en caliente. El carbol facilita la penetracin de
fuscina en la envoltura celular.
Azul de metileno como colorante de contraste.
Los Bacilo Alcohol cido Resistente (BAAR)
resisten el tratamiento orgnico y se vern teidas de
rosado/fuscia. El resto de las bacterias se decolorarn y
se contrastarn con azul de metileno.

Grnulo histopatolgico de Nocardia


- Bacterias Gram positivas filamentosas, pueden producir BAAR (+) y confundirse con M. tuberculosis.
Para aislarlo se utiliza el medio de Sabouraud a temperatura ambiente.
- Se pueden observar como maraas enredadas en una biopsia pulmonar que pudieran bien confundirse
con un artefacto histolgico.
- Crecen a temperatura ambiente en BHI, agar sangre, Lowenstein Jensen, Sabouraud
Actinomyces
- Bacilos gram positivos cortos
- Grnulo de azufre