INTRODUCCIN

En este informe se discuten algunas reacciones de coloracin: reaccin con

Ninhidrina, reaccin Xantoproteica, Prueba de Millon, prueba de Biuret, prueba
de Hopkins-Cole, prueba de Sakaguchi y prueba del grupo SH. As tambin se
realiza la desnaturalizacin de protenas.
La protena, como su nombre indica, han sido consideradas durante muchos
aos como el componente primario de la materia viviente. Hasta mucho mas
tarde no se reconoci la gran importancia de los cidos nucleicos y han
constituido materia de discusin a lo largo de las ltimas dcadas. El principio
bsico de la estructura de las protenas es bastante simple. Consisten en
largas cadenas de aminocidos enlazados unos a otro mediante enlace
pptidos. No obstante aparecen complicaciones:1) procedentes de la presencia
de alrededor de veinte tipos diferentes de radicales de aminocidos en las
cadenas pptidas; 2) procedentes de la larga longitud de estas cadenas.

OBJETIVOS
Identificacin de aminocidos por mtodos colorimtricos, basados en
las reacciones de los grupos R.
Identificar a qu tipo de aminocido o protena pertenece la muestra
problema.
Realizar las reacciones de coloracin: (reaccin ninhidrina,
xantoproteica, de Millon, de Biuret, de Sakaguchi, de grupo SH y de
Hopkins-Cole).

MARCO TEORICO
Las protenas son macromolculas formadas por cadenas lineales de
aminocidos. Por sus propiedades fsicoqumicas, las protenas se pueden
clasificar en protenas simples (holoproteidos), que por hidrlisis dan solo
aminocidos o sus derivados; protenas conjugadas (heteroproteidos), que por
hidrlisis dan aminocidos acompaados de sustancias diversas, y protenas
derivadas, sustancias formadas por desnaturalizacin y desdoblamiento de las
anteriores. Las protenas son indispensables para la vida, sobre todo por su
funcin plstica (constituyen el 80% del protoplasma deshidratado de toda
clula), pero tambin por sus funciones biorreguladoras (forma parte de las
enzimas) y de defensa (los anticuerpos son protenas). Las protenas
desempean un papel fundamental para la vida y son las biomolculas ms
verstiles y ms diversas. Son imprescindibles para el crecimiento del
organismo. Realizan una enorme cantidad de funciones diferentes, por ejemplo
estructural (como el: colgeno), inmunolgica (anticuerpos), Contrctil (actina y
miosina), entre otras.
Desnaturalizacin de una protena
Si en una disolucin de protenas se producen cambios de pH, alteraciones en
la concentracin, agitacin molecular o variaciones bruscas de temperatura, la
solubilidad de las protenas puede verse reducida hasta el punto de producirse
su precipitacin. Esto se debe a que los enlaces que mantienen la
conformacin globular se rompen y la protena adopta la conformacin
filamentosa. De este modo, la capa de molculas de agua no recubre
completamente a las molculas proteicas, las cuales tienden a unirse entre s
dando lugar a grandes partculas que precipitan. Adems, sus propiedades
biocatalizadores desaparecen al alterarse el centro activo. Las protenas que se
hallan en ese estado no pueden llevar a cabo la actividad para la que fueron
diseadas, en resumen, no son funcionales. Esta variacin de la conformacin
se denomina desnaturalizacin. La desnaturalizacin no afecta a los enlaces
peptdicos: al volver a las condiciones normales, puede darse el caso de que la
protena recupere la conformacin primitiva, lo que se denomina
renaturalizacin.

MATERIALES
Tubos de ensayo
Gradilla
Esptula
Propipeta
Pipetas graduadas
de 1 y 5 ml
Pisetas
Pinzas para tubos
de ensayo
Cilindro graduado
de
10 y 250 ml
Baln Aforado de
1000 ml
Goteros de vidrio

REACTIVOS
Ninhidrina
Hidrxido de sodio
Sulfato de Cobre II
Acido Ntrico
concentrado
Acetato de Plomo
Naftol
Hipoclorito de sodio
Magnesio
Acido Oxlico
Acido Sulfrico
concentrado
Mercurio
Acido Ntrico
Agua destilada

EQUIPOS
Agitador de
tubos de
ensayo
Campana de
extraccin.
Bao de
mara
Balanza
analtica
Mechero

PRUEBA DE NINHIDRINA
Todas aquellas sustancias que presentan al
menos un grupo amino y uno carboxilo libre,
reaccionaran con la ninhidrina. La positividad
se manifiesta por la aparicin de un color
violceo o amarillo, debido a que los
aminocidos poseen esta caracterstica, la
reaccin sirve para identificarlos.
Algunas soluciones de amonio y aminas,
dan
la
coloracin
caracterstica
aparentemente debido a una oxidacin y
reduccin intramolecular de la ninhidrina en
presencia de amoniaco.

Prueba
Ninhidrina
con Carne

Prueba
Ninhidrina
con Pollo

PROCEDIMIENTO: Tomar la sustancia problema y agregarle 1ml de reactivo de

Ninhidrina se calienta hasta ebullicin durante un minuto. Dejar enfriar y observar. La
aparicin de un color violceo o amarillo claro indica la presencia de una protena,
polipptido o aminocido. Y rojo o amarillo fuerte indica la positividad.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de carne
y una muestra de pollo, en la prueba de la ninhidrina con carne se noto un color rojizo
en este caso se determino que el resultado es POSITIVO e indica presencia de
protenas y aminocidos. En el caso de el pollo, se obtuvo un color amarillo claro por
ende podemos afirmar que existe presencia de protenas y que el resultado es

POSITIVO.

PRUEBA DE BIURET
Es una prueba general para polipptidos y
protenas ya que sirve para reconocer las
uniones peptidicas. La positividad se
Prueba Biuret
manifiesta por la aparicin de una coloracin
con Pollo
violeta, la formacin de un complejo de
coordinacin entre los cationes cuprico en
medio alcalino con las uniones peptidicas.

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 1ml de hidrxido de

sodio Mezclar. Se aade gota a gota Sulfato Cuprico al 0,5% hasta la aparicin de un
color violeta, azul o amarillo. El violeta indica la positividad.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo.
En la prueba de Biuret con pollo se noto un color violeta oscuro en este caso se
determino que el resultado es POSITIVO e indica presencia de protenas.
PRUEBA XANTOPROTEICA
Es una reaccin que reconoce los
aminocidos que poseen el grupo bencnico
(Tirosina, Fenilalanina, Triptofano). Las
protenas que tienen en su composicin
estos aminocidos tambin darn la
reaccin. La positividad se reconoce por la
aparicin de un color amarillo o verde debido
a la formacin de nitrocompuestos.

Prueba
Xantoproteica con
Pollo

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 1ml de acido ntrico

concentrado, mezclamos bien. Calentar a la llama y observar. La formacin de un color
amarillo, naranja o verde indica la positividad (Hacer la prueba de Hopkins-Cole) Si es
incoloro indica la presencia de otros aminocidos (Hacer la Prueba de Millon).
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo.
En la prueba Xantoproteica con pollo se obtuvo un color amarillo claro por ende
podemos afirmar que existe presencia de protenas y que el resultado es POSITIVO.

PRUEBA HOPKINS- COLE

Es para identificar el Triptofano y las
protenas que lo contienen. La positividad se
reconoce por la aparicin de un anillo color
violeta-rojizo.

Prueba Hopkinscole con Pollo

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 1ml de reactivo de

Hopkins-Cole. Tomamos Acido Sulfrico concentrado, se deja caer lentamente por las
paredes del tubo y observamos. La aparicin de un color negro o gris indica la
positividad.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo.
En la prueba de hopkins-cole con pollo se obtuvo un color grisaseo,en este caso
podemos decir que el resultado es POSITIVO.
PRUEBA DE MILLONS
La reaccin es debida a la presencia del
grupo hidroxifenilico (-C6H4OH) en la
molcula proteica. Cualquier compuesto
fenolico no sustituido en la posicin 3,5
como la Tirosina, Fenol y Timol dan positiva
la reaccin. El mecanismo de la reaccin es
poco conocido, posiblemente se deba a la
formacin del complejo oxido de mercurio y
fenol. La positividad se da con la presencia
de un color rojo para la Tirosina.

Prueba de Millons
con Pollo

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 1ml de reactivo de

Millons. La presencia del color rojo indica la positividad. El incoloro indica la presencia
de la Fenilalanina.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo.
En la prueba de Millons con pollo se obtuvo un color amarillento, en este caso
podriamos decir que es debido al colorante usado en el o que simplemente la prueba
resulto NEGATIVA ya que para ser positiva era necesario un color rojo o incoloro para
demostrar la presencia de Fenilalanina.

PRUEBA DE SAKAGUCHI
Es una prueba para identificar Arginina y se
usa para identificar protenas ya que casi
todas las protenas poseen ese aminocido.
El desarrollo de un color rojo marca la
reaccin positiva y se debe a la presencia
del grupo guanidina, que caracteriza la
Arginina.

Prueba de
Sakaguchi con
Pollo

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 5 gotas de

Hidroxido de Sodio, 8 gotas de Naftol y 10 gotas de hipoclorito de sodio . Mezclamos
bien y observamos. La presencia de un color rojo indica la positividad.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de carne.
En la prueba de Sakaguchi con carne se obtuvo un color caf oscuro, en este caso
podemos decir que el resultado es NEGATIVO ya que para ser positiva era necesario
un color rojo.
PRUEBA GRUPO SH
Esta reaccin dar positiva con aquellos
aminocidos que presenten azufre en su
estructura, como son la cistina, la cisteina y
la metionina. La reaccin consiste en
someter la muestra a una hidrlisis alcalina
con hidrxido de sodio.

Prueba Grupo SH

PROCEDIMIENTO: Tomamos la sustancia problema y agregamos 1ml Hidroxido de

Sodio, 1ml de acetato de plomo. Mezclamos bien, calentamos a la llama por 4 minutos
mezclando continuamente, observamos. La aparicin de un color negro o gris indica la
positividad.
ANALISIS DE RESULTADOS: Se uso como sustancia problema una muestra de pollo.
En la prueba de Grupo SH con pollo se obtuvo un color negro, de esta manera
podemos afirmar que el resultado es POSITIVO.

CONCLUSIN
Existen diferentes pruebas para la identificacin de protenas y aminocidos
que permiten establecer un resultado positivo o negativo de acuerdo a las
caractersticas y composicin de cada una de ellas, evidenciado en
coloraciones, presencia de anillos, etc. Se establecieron las caractersticas de
estas
pruebas
para
la
identificacin
cualitativa
de
sustancias
que pueden contener aminocidos, protenas o pptidos. Y cuando se usan
varias pruebas en la muestra, se pueden determinar ciertas sustancias en
especfico.
Muchos resultados no dieron a los esperados (tericos) pero se pudo deber a
la contaminacin de las muestras o la contaminacin de los equipos (tubos de
ensayo).