UD 1.

- LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

1.- BIOLOGÍA MOLECULAR Y CITOGENÉTICA

Se define la Biología Molecular como la parte de la Biología que estudia la composición,

estructura y función de las moléculas biológicamente importantes, así como los procesos en
los que están implicadas.

Englobaría el estudio de ácidos nucleicos y proteínas. Sin embargo, el desarrollo de nuevas

técnicas y metodologías ha provocado la especialización de los laboratorios y la separación de
ambos estudios, y Así:

- La denominación BIOLOGIA MOLECULAR, se reserva para el estudio de los ácidos

nucleicos estructura y función

- El estudio de las proteínas se realiza en laboratorios de PROTEÓMICA

La Biología Molecular, se ha convertido en la herramienta más potente de la genética. Así, la

CITOGENÉTICA, se ha considerado clásicamente, como la parte de la genética que estudia la
estructura, función y comportamiento de los cromosomas en metafase. En la actualidad, está
tomando auge la citogenética molecular, basada en el uso de técnicas de la biología molecular.

El laboratorio de biología molecular y citogenética se podrían considerar laboratorios de

genética. El RD 1277/2003, de 10 de Octubre, define la Unidad de Genética como la unidad
asistencial que, bajo la responsabilidad de un facultativo con formación adecuada, está
dedicada a la realización de pruebas genéticas y la emisión de los dictámenes
correspondientes con fines diagnósticos.

Según esta definición, ambos laboratorios quedarían encuadrados dentro de la unidad de

genética.

Los dos laboratorios requieren un equipamiento especializado y costoso y con un problema

común: LA CONTAMINACIÓN. Por ello, ambos laboratorios se estructuran en dos áreas de
trabajo perfectamente separadas:

- Áreas sucias

- Áreas limpias

Entre las que no debe ser posible cruce de materiales para evitar la contaminación

2.- EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

La técnica básica que se lleva a cabo en un laboratorio de BM es la reacción en cadena de la

polimerasa (PCR). Esta técnica de laboratorio permite, a partir de una cantidad mínima de
ADN, obtener millones de copias iguales a ésta.
 2.1.- EL EQUIPAMIENTO

Tanto en el laboratorio de BM como en el de Citogenética podemos encontrar dos tipos de

equipamiento: un equipamiento específico y un equipamiento genérico.

2.1.1.- EQUIPAMIENTO ESPECÍFICO

Este equipamiento cuenta con una infraestructura adecuada para realizar PCR. Consta de:

- El termociclador

- El equipo de electroforesis

- El documentador de geles

También aparatos automáticos necesarios para:

- La extracción de ácidos nucleicos

- Secuenciadores para la secuenciación de fragmentos que son objeto de estudio.

TERMOCICLADOR
Es el aparato en el que se lleva a cabo la PCR. Consta de: Bloque incubador y la tapa
termostatizada.

EL BLOQUE INCUBADOR

Es la parte más importante. Se trata de un soporte metálico, con múltiples pocillos para
colocar los tubos de reacción de PCR.

Es capaz de mantener homogéneamente, en todo el volumen, durante los tiempos que se

necesiten, las diferentes temperaturas que se programan para cada fase y en cada uno de los
ciclos de PCR. El rango de temperaturas que pueden alcanzar va desde 4ºC a 96ºC.

Los distintos tipos de termocicladores se diferencian en la tecnología que utilizan para calentar
y enfriar este bloque.:

- Sistemas de aire caliente y frío o resistencias eléctricas (sistema más utilizado en

los aparatos antiguos)

- Materiales semiconductores junto con el efecto Peltier (Efecto termoeléctrico que

produce una transferencia de calor entre dos metales o semiconductores
diferentes unidos por soldaduras cuando son atravesados por una corriente
eléctrica continua. El resultado final es que uno de los semiconductores se calienta
y el otro se enfría. Este efecto se utiliza en los termocicladores actuales).

LA TAPA DEL BLOQUE INCUBADOR

Es una tapa termostatizada a 102-105ºC que, una vez cerrada, entra en contacto directo con
los tubos de reacción. Esto evita que el agua de la mezcla de reacción PCR se evapore por
efecto de las temperaturas alcanzadas en el bloque incubador y se condense en la tapa, más
fría, con la consiguiente concentración de los reactivo en la mezcla que alteraría el desarrollo
de la reacción.

Un tipo especial de termociclador es el termociclador a tiempo real. Este, además de los

componentes anteriores, incorpora un sistema láser y detección de fluorescencia capaz de
excitar y medir la fluorescencia emitida por cada tubo de reacción individualmente. Esta
tecnología permite destectar la síntesis de productos a tiempo real.

EQUIPO DE ELECTROFORESIS
Esta técnica permite:

- Separar moléculas de ácidos nucleicos de distintos tamaños y

- Analizar los productos amplificados en una PCR y/o

- Purificar y obtener fragmentos de tamaños concretos de ADN

Se lleva a cabo aplicando un campo eléctrico en una disolución tampón (pH 7,5 - 7,8) en la que
se sumerge una matriz que contiene las muestras de ácidos nucleicos. Estos migran con mayor
o menor velocidad a través de la matriz en función de la carga neta que poseen (negativa a
este pH), su tamaño y su conformación tridimensional.

La matriz que se utiliza es:

- Un gel de agarosa o (0,5% y 2%. Para separar fragmentos de mayor tamaño, son
electroforesis rápidas y con resolución limitada)

- Un gel de poliacrilamida (Para separar moléculas de menor tamaño con mayor

poder de resolución)

El uso de uno u otro dependerá de:

- tamaño de las moléculas

- Y de la resolución que queramos obtener

La localización final de los ácidos nucleicos, en el gel se realiza con un agente intercalante
fluorescente como el bromuro de etidio.

El equipamiento para realizar la electroforesis consta de:

- Soporte plástico o “cama” donde solidifica el gel

- Cubeta de electroforesis. Se compone de:

o Un soporte central para la “cama” con el gel

o Dos zonas de depósito de tampón de electroforesis en cada uno de los

extremos

o Electrodos positivo y negativo en cada extremo

- Fuente de alimentación, que suministra corriente eléctrica continua a la cubeta de

electroforesis. Debe permitir seleccionar voltaje o amperaje y graduar su
intensidad.

DOCUMENTADOR DE GELES

Una vez terminada la electroforesis se podrán visualizar los resultados mediante el uso del
documentador de geles.

Este, es un equipo que permite visualizar las bandas de los ácidos nucleicos en el gel después
de la electroforesis y obtener una fotografía de él.

Este equipo consta de:

- Un transiluminador. Consiste en una fuente de luz ultravioleta (245-365nm)

situada por debajo de una superficie transparente al UV donde se coloca el gel.
Cuando la luz UV ilumina el gel, el bromuro de etidio emite fluorescencia ,
visualizándose las bandas correspondientes a las moléculas de ácidos nucleicos
 - Una cámara fotográfica. La visualización del gel se realiza con una cámara
fotográfica adecuada para trabajar con luz UV y controlada por un software. Así es
posible visualizar el gel en una pantalla de un monitor, mejorar las condiciones de
la imagen, obtener fotografías y realizar mediciones.

2.1.2.- EQUIPAMIENTO GENÉRICO

Cabe destacar los siguientes:

LA CABINA DE BIOSEGURIDAD

Consta de los siguientes elementos:

a. Un panel frontal transparente que contribuye a mantener la estabilidad del flujo

laminar en el interior.

b. Una rejilla frontal, que genera una corriente entrante de aire que impide el escape de
posibles contaminantes por la ventana de trabajo

c. Un sistema mecánico que impulsa el aire entrante y el aire recircularizado hacia la

parte superior de la cabina.

d. Un filtro HEPA de gran superficie, que forma el techo de la cabina. Parte del aire
impulsado por el sistema mecánico (70% en las de clase IIA y 30% en las IIB) se fuerza a
pasar a través de ese filtro, generando un flujo laminar estable libre de partículas y
microorganismos. Los Filtros HEPA (del inglés High Efficiency Particle Arresting) son
filtros de aire de alta eficiencia que retienen partículas de tamaño superior a 0,2 con
una eficacia del 99,995%. Retienen bacterias, hongos, esporas y levaduras, evitando la
contaminación.
En laboratorios de BM se deben utilizar cabinas de flujo laminar vertical de clase II, que
protegen de la contaminación a la muestra, a la persona manipuladora y al medio ambiente.
Su uso es especialmente importante cuando se trabaja con ARN, ya que las ARNasas son
omnipresentes y pueden degradar el ARN de una muestra rápidamente.

También son imprescindibles cuando se trabaja con cultivos celulares.

EL SISTEMA DE PURIFICACIÓN DE AGUA

Se necesita suministro estable de agua purificada tipo II y agua ultrapura tipo I

En el mercado hay muchos equipos de purificación de aguas basados en distintas tecnologías

como desionización, resinas de intercambio iónico, ósmosis inversa, filtración, etc. Si el
consumo es bajo se puede comprar como si se tratara de un reactivo más.

ESPECTROFOTÓMETRO

La medida de la concentración de ácido nucleico de una muestra y de su pureza requiere

lectura de absorbancias a longitudes de onda entre 230 y 320 nm. Puesto que las cantidades
de muestra son muy pequeñas, se necesitan espectrofotómetros que cuantifiquen ácidos
nucleicos en concentraciones pequeñas y en volúmenes pequeños (1l) basados en cubetas
capilares.

MICROSCOPIO DE LUZ TRANSMITIDA Y FLUORESCENCIA

M. de fluorescencia.

 Fluorescencia es la luz visible que emiten determinadas sustancias al ser iluminadas

con una luz de λ corta, como la luz ultravioleta. Las sustancias que emiten
fluorescencia se llaman fluorescentes o fluorocromos.

 Es un microscopio especial diseñado para observar la fluorescencia emitida por estas

sustancias después de ser iluminadas.

 Consta de: lámpara de mercurio (muy potente), filtro de excitación, solo deja pasar
la luz ultravioleta, que incide sobre la muestra y si tiene sustancias fluorescentes
emitirá fluorescencia que penetrara en el objetivo junto con la luz ultravioleta no
absorbida por la muestra. Filtro barrera, colocado entre el objetivo y los oculares,
que solo deja pasar la luz fluorescente emitida por la muestra
Imprescindible para interpretar las técnicas de hibridación in situ fluorescente. Debe tener
filtros de fluorescencia adecuados para los fluorocromos utilizados y se aconseja que tenga un
sistema de captación de imágenes.

AUTOCLAVE

Imprescindible si se trabaja con miroorganismos. Se utiliza para esterilizar.

INCUBADOR O ESTUFA

Variables en función de las muestras con las que se trabaje.

Si se trabaja con bacterias se necesitan estufas de cultivo de microbiología. Si se trabaja con

cultivos celulares se requieren incubadores con CO2 y humedad controlada.

BAÑO TERMOSTÁTICO, TERMOBLOQUE Y PLACA CALEFACTORA

Es básico para realizar incubaciones, digestiones y tratamientos enzimáticos. Deben ser de

temperatura regulable. La placa calefactora debe alcanzar de manera homogénes y estable
temperaturas de 95-100ºC para desnaturalizar el ADN de las células y tejidos en las técnicas de
hibridación in situ.
CENTRÍFUGA Y MICROCENTRÍFUGA

Deben tener rotores que permitan centrifugar tubos de 50 ml a Eppendorf de 0,2 ml. Lo ideal
es que sea refrigerada.

NEVERAS Y CONGELADORES DE -20ºC Y -80ºC

Para conservar reactivos y muestras

La mayor parte de reactivos se conservan a -20ºC. Las de ARN y el almacenamiento a largo

plazo de muestras de ADN a -80ºC.

OTROS EQUIPAMIENTOS

Aparatos básicos de cualquier laboratorio: agitadores, balanzas, pHmetro….

2.2.- ESTRUCTURA DEL LABORATORIO

La estructura del laboratorio de BM está condicionada por la realización de la PCR.

La realización de una PCR implica:

- Preparación de ácidos nucleicos

- Extracción y purificación de ADN de una muestra

- Reacción de amplificación

- Análisis de los productos de reacción mediante electroforesis y documentación del

gel
Cada una de estas actividades debe realizarse en un área de trabajo independiente. Así, debe
constar como mínimo de cuatro salas independientes:

- Sala de preparación de reactivos. Esta es el área “limpia” del laboratorio (sin

ADN). En ella se preparan todos los reactivos que se van a utilizar, incluyendo la
mezcla de reacción de PCR. Es fundamental que los reactivos no se contaminen
con ADN, por ello esta sala debería tener una ligera presión positiva, para evitar la
entrada de cualquier fuente de contaminación y es imprescindible que disponga de
una cabina de bioseguridad.

- Sala de preparación de muestras y extracción de ADN. Es una sala sucia (con

ADN), por lo que sería conveniente que tuviera una ligera presión negativa, para
evitar que pueda escaparse material contaminante. Debe contar con una cabina de
bioseguridad y un espectrofotómetro.

- Sala de PCR: Dispone de los termocicladores y un espacio para añadir las muestras
de ADN a la mezcla de reacción

- Sala de post-PCR: Dispone de los equipos de eelectroforesis y de documentación

de geles. Es también una sala “sucia”, fuente importante de contaminación por
productos amplificados, por lo que también debería tener una ligera presión
negativa. Idealmente, la documentación de geles puede situarse en una sala
oscura junto con el microscopio de fluorescencia.

2.3.- EL FLUJO DE TRABAJO

Marca el sentido único de los procesos en el circuito de trabajo.

El flujo de trabajo y de las muestras debe ser siempre unidireccional, desde las áreas limpias
hacia las sucias.

Pre-PCR ---- PCR ------- Post-PCR

Este flujo implica que cada área de trabajo sea autónoma en el sentido de que debe disponer
de su propia infraestructura básica y del material de trabajo, ya que no es posible el
intercambio entre las distintas salas.

El material de trabajo son: las micropipetas automáticas, los equipos de protección individual
(guantes, batas, desechables, gafas de protección,…) o el material fungible (tubos, Eppendorf,
gradillas, pipetas,…) y, por supuesto, se debe evitar el retorno de cualquiera de ellos de las
áreas sucias a las limpias.

2.4.- CONDICIONES DE TRABAJO

Deben cumplirse las normas genéricas de cualquier laboratorio como no comer, beber, fumar,
maquillarse,…..

Pero también, hay que establecer unas condiciones específicas dirigidas a impedir, o al menos
minimizar la contaminación de las muestras.
CONTAMINACIÓN DE LA MUESTRA

Es la introducción accidental en la muestra de material exógeno que altera su pureza.

Los dos tipos de contaminantes más peligrosos son:

- Los ácidos nucleicos extraños a la muestra

- Las enzimas no deseadas que degradan que degradan ácidos nucleicos (nucleasas)

Las fuentes de contaminación pueden ser muy variadas:

- Contaminación cruzada por:

o Material del medio ambiente o microorganismos ambientales. Por

ejemplo: aerosoles generados durante manipulación de las muestras,
como pipeteos, centrifugas,..

o Contaminantes procedentes del propio personal técnico de laboratorio.

Como pueden ser células de descamación de la piel, pelo, guantes
contaminados……

o Contaminantes de las superficies de trabajo. Son los que se acumulan

sobre las superficies de trabajo.

- Contaminación por productos amplificados, generados en el propio laboratorio

mediante PCR

- Contaminación de los reactivos comerciales y del material fungible. Esto es

debido a que la mayoría de los fabricantes garantizan la esterilidad de sus
productos, aunque esto no es sinónimo de ausencia de ADN o nucleasas. El
término estéril significa ausencia de microorganismos viables, pero no se garantiza
la eliminación del ADN de los microorganismos ni la inactivación de las enzimas,
sobre todo de las ARNasas.

2.5.- NORMAS PARA LA MANIPULACIÓN DE MATERIALES Y REACTIVOS

Una de las formas de evitar la contaminación es la separación física de las áreas de trabajo y el
flujo unidireccional entre ellas.

La contaminación de reactivos y material fungible por nucleasas se puede evitar utilizando solo
aquellos que estén certificados como libres de nucleasas. La posible contaminación por ADN
no se puede controlar, por lo que es imprescindible llevar un control exhaustivo de los
reactivos (lotes, fechas de apertura, fechas de caducidad, ..) y realizar controles negativos en
todas las técnicas. Las condiciones de trabajo más importantes para prevenir la contaminación
consiste en el uso de buenos hábitos de trabajo en condiciones de esterilidad basados en la
técnica aséptica.
 TÉCNICA ASÉPTICA

Se entiende por técnica aséptica en los laboratorios de BM como el conjunto de actividades

encaminadas a prevenir la contaminación por microorganismos, ácidos nucleicos y nucleasas.

Incluye:

a. Lavado de manos. Es una norma de higiene básica cuando se manipulan muestras

biológicas y reactivos químicos, independientemente de que se usen guantes.

b. Uso de equipos de protección individual (EPI). Los principales equipos de protección

individual son: guantes sin talco y batas

c. Descontaminación de superficies. Se pueden realizar por métodos físicos (ej: la

irradiación con luz UV) o químicos (Ej: lavado con soluciones de hipoclorito sódico al
10% o descontaminantes comerciales como DNA Zap, DNA Remover,…)

d. Prevención de la contaminación ambiental. Para prevenir la contaminación cruzada

ambiental es imprescindible el uso de:

- Cabinas de bioseguridad de clase II

- Puntas de micropipetas especiales. Evitan la contaminación de las pipetas

automáticas por aerosoles producidos al aspirar los fluídos. Estas puntas de
pipetas pueden ser de dos tipos:

o De desplazamiento positivo. Tienen en su interior un émbolo o pistón que

las convierte en microjeringas. Las pipetas que las utilizan tienen un
vástado que encaja en el émbolo, el cual sube y baja en el interior de la
punta succionando y expulsando el fluido, sin que se toque en ningún
momento el cuerpo de la pipeta ni se produzcan aerosoles.

IMAGEN

o Puntas con filtro. Son más utilizadas. Tienen un filtro en su interior que
impide que los posibles aerosoles alcancen el cuerpo de la pipeta.

e. Prevención de carryover. La contaminación por productos amplificados es un serio

problema. Para evitarlo, nunca hay que revertir el flujo de trabajo.

USO EFICIENTE DE LOS RECURSOS

Resulta impresdindible implantar estándares de calidad adecuados y desarrollar indicadores de

calidad que permitan comprobar que se está funcionando correctamente. El uso eficiente de
los recursos debe contemplar los siguientes puntos:
 - Equipamiento e infraestructura. Se debe contar con un plan de mantenimiento
(diario, semanal, mensual,..) y de revisiones técnicas periódicas. El mantenimiento
debe incluir las calibraciones y la limpieza de los equipos.

- Reactivos: Hay que asegurar la trazabilidad de los reactivos, desde su recepción

hasta su consumo o eliminación por caducidad. Esto implica registros de entrada,
control de lotes y caducidades y almacenamiento correcto.

- Recursos humanos. Todo personal de nueva incorporación debe recibir un

adecuado adiestramiento, Además se debe diseñar un plan de formación
continuada

- Técnicas. Todos los procedimientos deben estandarizarse mediante

procedimientos normalizados de trabajo que incluyan todos los aspectos de la
técnica

- Gestión medioambiental. Dirigidas a:

o Reducir en la medida de lo posible los consumos de agua, electricidad y

papel.

o Garantizar el correcto reciclado de los residuos de tipo urbano

3.- EL LABORATORIO DE CITOGENÉTICA Y CULTIVOS CELULARES

El LABORATORIO DE CULTIVOS CELULARES tiene como objetivo la propagación o crecimiento

de células eucarióticas de organismos pluricelulares en medios de cultivo artificiales en
condiciones controladas.

El LABORATORIO DE CITOGENÉTICA, tiene como objetivo el estudio de los cromosomas de

especies eucariotas.Este se puede considerar como una ampliación especializada del
laboratorio genérico de cultivos celulares que engloba:

- Un área de cultivo enfocada a la obtención de células en mitosis

- Un área de genética enfocada al estudio de los cromosomas metafásicos

3.1.- EQUIPAMIENTO

 Cabina de flujo laminar. En el interior de la cual se realizan todos los procesos y

manipulaciones de cultivos celulares: preparación de medios, siembra de cultivos,
cambios de medio,… La adecuada es la cabina de seguridad biológica de clase II.

 Incubador de CO2. Proporciona las condiciones ambientales óptimas para el

crecimiento de las células en el medio de cultivo. Consta de:

IMAGEN
 - Control de temperatura, responsable de fijar y mantener estable la temperatura
óptima para cada tipo de cultivo

- Recircularización del aire interior, para homogeneizar la temperatura.

- Control de CO2. El CO2 se suministra comprimido en botellas presurizadas y este

dispositivo lo mezcla con aire en la proporción adecuada (4-7%) y lo inyecta en el
interior del incubador

- Control de humedad. Para evitar la evaporación del medio de cultivo. Los más
sencillos lo consiguen colocando una bandeja con agua en el suelo del incubador,
aunque los actuales incorporan un dispositivo de control de humedad que inyecta
agua estéril

 Microscopìo invertido. Para la observación directa del control del crecimiento del
cultivo. Se caracteriza por tener invertidas la posición de la fuente de luz (por encima
de la platina) y el revólver de objetivos (por debajo de la platina) respecto de un
microscopio convencional.

 Equipo de criogenia. Permite conservar a largo plazo y en forma viable muestras de

células y líneas celulares. Este equipo está constituido por un tanque o depósito de
nitrógeno líquido

 Para el laboratorio de citogenética son fundamentales:

o Un equipo de análisis de imágenes para analizar metafases con el fin de

obtener un cariotipo. Consta de:

 Microscopio óptico convencional para visualizar metafases teñidas

con técnicas de bandeo

 Cámara digital para obtener imágenes de las metafases para su

posterior análisis

 Software específico para el análisis de metafases, que permitan

emparejar cromosomas para obtener el carioti`po

o Un microscopio óptico convencional y de fluorescencia. Para recuentos de

células, estudios de viabilidad y morfología celular,…

Además de este equipamiento específico debe haber:

- Un equipo de esterilización

o Autoclave para esterilizar todo el material

o Un sistema de filtración con filtros de 0,22 para esterilizar soluciones

- Un sistema de purificación de agua para preparar reactivos y medios de cultivo

- Neveras y congeladores de -20ºC y -80ºC

 - Otros equipamientos: centrífugas con rotores adecuados, pHmetros, agitadores,..

3.2.- LA ESTRUCTURA DEL LABORATORIO DE CULTIVOS CELULARES Y CITOGENÉTICA

También se aplica el criterio de la separación física de áreas limpias y áreas sucias.

En el laboratorio de citogenética deben encontrarse como mínimo tres salas:

- Sala de cultivos. Es la sala limpia del laboratorio en la que se va a realizar todos los
procedimientos relacionados con el cultivo celular. Debe estar situada en una zona
tranquila, no de paso. Aquí deben estar las cabinas de flujo laminar, los
incubadores y el microscopio invertido.

- Sala de laboratorio convencional. Es la sala “sucia”, con el resto del equipamiento,

excepto el equipo de criogenia. Aquí se realizan todos los procedimientos que no
estén directamente relacionados con el cultivo celular, como la preparación de
extensiones, tinciones, cariotipos,… Puede tener una zona oscura para el
microscopio de fluorescencia.

- Sala de frío, con los congeladores y el equipo de criogenia. Debe estar separada de
la sala de cultivos, porque los congeladores generan bastantes turbulencias

3.3.- LAS CONDICIONES DE TRABAJO: TÉCNICA ASÉPTICA

Las condiciones de trabajo en la sala de cultivos se deben ajustar a una estricta técnica
aséptica, por ello todas las manipulaciones se realizan dentro de la cabina de flujo laminar.

Entre las normas más importantes, que afectan al protocolo de trabajo en la cabina de flujo
laminar , se pueden citar las siguientes:

- Lavado frecuente de las manos

- Uso de guantes y batas desechables estériles

- Uso exclusivo de material y reactivos estériles. El material desechable estéril no es

intercambiable con el de otras salas.

- No introducir mecheros bunsen en las cabinas porque generan turbulencias que

alteran el flujo laminar

- Colocar en el interior de la cabina exclusivamente el material que se vaya a utilizar

en la sesión de trabajo

- No sacar el material estéril de su embalaje hasta el momento de uso, evitando

tocar con él cualquier superficie

- El material usado reutilizable de vidrio se puede colocar en un recipiente con

hipoclorito al 10% hasta finalizar la sesión de trabajo. Después se lleva al
laboratorio general para su limpieza y esterilización.
 - El material fungible utilizado en la cabina se deposita en contenedores adecuados
para material contaminado, que se retiran al finalizar la sesión de trabajo

- Restringir el acceso a la sala de cultivos exclusivamente al personal que esté

realizando algún procedimiento. No se deben recibir visitas en esta sala.

- Limpieza de las cabinas de flujo laminar con etanol al 70% o desinfectante

comercial apropiado al finalizar cada sesión de trabajo

- En las cabinas dotadas de lámpara germicida UV, esta se puede conectar después
de la limpieza un máximo de 30 minutos

- Realizar un mantenimiento programado de las cabinas (mínimo anual) que incluya

comprobación del filtro HEPA

- Limpieza y desinfección de superficies con etanol al 70% o desinfectantes

apropiados.

4.- LA SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

La seguridad en los laboratorios de biología molecular, citogenética y cultivos celulares hace

referencia a la prevención de la exposición del personal a agentes nocivos y también a impedir
la liberación de estos al exterior.

En función de la naturalez de estos agentes, la seguridad puede ser:

- Biológica o bioseguridad. Trata la prevención ante agentes patógenos y toxinas.

- Química. Para la prevención en lo referente a la exposición a agentes químicos

Bioseguridad

Engloba todas las normas, técnicas, prácticas y hábitos de trabajo que intentan evitar la
exposición accidental del personal a agentes biológicos potencialmente peligrosos 8patógenos
y toxinas) o su liberación al medio ambiente.

Cualquier muestra biológica debe considerarse como potencialmente peligrosa y deben

adoptarse mediadas mínimas de protección en lo referente al uso de EPI.

El principal problema de bioseguridad lo plantea el trabajo con microorganismos y con

organismos modificados genéticamente (GMO).

El RD 178/2004, de 30 de enero, por el que se aprueba el Reglamento General para el

Desarrollo y Ejecución de la Ley 9/2003, de 25 de abril, clasifica las actividades de utilización
confinada de los GMO en cuatro tipos en virtud del riesgo para la salud humana y medio
ambiente:

Tipo 1: riesgo nulo o insignificante

Tipo 2: Riesgo bajo

Tipo 3: riesgo moderado

Tipo 4: Riesgo alto

Esta valoración del riesgo se realiza siguiendo los criterios que establece el propio RD (Anexo I)
donde se describen los elementos a tener en cuenta y el procedimiento que se aplica para
realizar la evaluación del riesgo.

También establece (Anexo II) las medidas de protección y confinamiento mínimas según el tipo
de actividades desarrolladas en el laboratorio.

En los laboratorios de citogenética y cultivos celulares se beberían aplicar como mínimo las
medidas de protección y contención de nivel 2.

Seguridad química

El RD 363/1995, de 10 de marzo, establece hasta 15 tipos de sustancias peligrosas en base a

sus características fisicoquímicas, toxicológicas y peligrosidad para la salud humana.

Las buenas prácticas de laboratorio referidas a seguridad química deben incluir medidas para:

- Prevenir la exposición del personal a estas sustancias, entendiendo por exposición

el contacto con ellas por penetración cutánea, inhalación o ingestión

- Su almacenamiento seguro

- Gestión eficiente de los residuos que generen

Estas medidas se establecerán con base en el catálogo de productos utilizados en el

laboratorio y de acuerdo con la Ficha de Datos de Seguridad (FDS) específica de cada producto,
que aporta información de hasta 16 apartados relativos a la composición, manipulación,
peligros, vías de exposición, efectos tóxicos, almacenamiento, eliminación y primeros auxilios.

La FDS debe ser suministrada obligatoriamente por el distribuidor del producto y debe
guardarse en el laboratorio.

Como medidas genéricas se pueden mencionar las siguientes:

- Utilización de los EPI adecuados a las posibles vías de exposición de cada producto

- Prohibición de pipetear con la boca

- Manipulación de productos volátiles en el interior de campanas de aspiración de

gases
- Manipulación de productos inflamables alejados de fuentes de calor y llamas

- Correcto etiquetado de todos los envases que contengan agentes químicos,

incluyendo las soluciones stock y de trabajo preparadas en el laboratorio a partir
de productos puros. El etiquetado debe incluir como mínimo:

o Nombre del producto, fecha de preparación y el pictograma de peligro, en

su caso.

- Almacenamiento de los productos químicos en armarios adaptados a sus

características de peligrosidad (inflamables, tóxicos, corrosivos,…) y respetando
siempre las incompatibilidades.

Como ejemplo de sustancias peligrosas habituales en los laboratorios de biología

molecular y citogenética, se pueden mencionar los siguientes:

- Inflamables: alcoholes (etanol, isopropanol,…)

- Tóxicos y muy tóxicos: acrilamida, bromuro de etidio,…

 - Carcinógenos: acrilamida, formaldehido

- Mutágenos: acrilamida, bromuro de etidio,

- Teratógenos y/o perjudiciales para la fertilidad: acrilamida, formamida,…

EQUIPAMIENTO Y NORMAS DE SEGURIDAD

- Deben disponer de instalaciones de emergencia debidamente señalizadas, duchas

de emergencia, lavaojos, extintores..

- Estar dotados con equipos de protección individual (EPI) adecuados según las
muestras que se manipulen y los procedimientos que se desarrollen, como
guantes, batas desechables, gafas de seguridad, mascarillas,…

- Deben tener instalaciones adecuadas para el almacenamiento de sustancias

tóxicas y peligrosas

- Contenedores adecuados para la recogida selectiva y la clasificación de residuos

- Deben disponer de kits para recogida de derrames de productos químicos y

citotóxicos

- Debe contar con un manual de seguridad y un plan de gestión de residuos

Además el personal debe cumplir las siguientes normas:

- Lavado frecuente de manos

- Utilización de los EPI adecuados

- Uso de ropa de trabajo adecuada y abrochada, evitando mangas anchas, colgantes,

zapatos abiertos, y, en general ropa que deje al descubierto una parte importante
del cuerpo.

- Prohibición de comer, beber, fumar y maquillarse en el laboratorio

- Uso de gafas de seguridad cuando se llevan lentes de contacto

- Prohibición de pipetear con la boca

- Recibir la formación adecuada para el manejo de los aparatos

- Conocer el plan de gestión de residuos y el manual de seguridad del laboratorio y

cumplir las normas de actuación que recogen ambos documentos

El manual de seguridad

Documento de obligado conocimiento de todo el personal del laboratorio.

Debe contener la siguiente información:

- Evaluación de los riesgos inherentes a cada puesto de trabajo en el laboratorio

 - Descripción y normas de utilización del equipamiento de seguridad del laboratorio

- Hábitos de trabajo apropiados para minimizar los riesgos de exposición

- Normas de almacenamiento de productos químicos

- Normas para la eliminación de deshechos y gestión de residuos, incluyendo los

derrames

5.- GESTIÓN DE RESIDUOS

Estos laboratorios deben disponer de un plan de gestión de residuos tóxicos y peligrosos. Este
plan debe incluir medidas para la recogida selectiva, la clasificación y el almacenamiento
temporal de residuos hasta su recogida por una empresa gestora.

Se deben especificar medidas para gestionar:

- Residuos biosanitarios especiales. Aquí se incluyen los objetos punzantes y

cortantes que han estado en contacto con productos biológicos, cultivos
microbiológicos y material contaminado con los mismos,…

- Residuos químicos. Se incluyen los envases que han contenido productos

químicos, reactivos caducados o innecesarios, los EPI contaminados, los filtros de
cabinas de aspiración de gases, los derrames,…

- Residuos citotóxicos. Incluye los restos de productos carcinógenos, mutágenos y

teratógenos, así como los envases que los hayan contenido.

- Residuos radiactivos

Como norma general, los residuos se recogen en:

- Contenedores para los residuos sólidos

- Garrafas en el caso de residuos líquidos

Y deben cumplir con:

- Estar homologados y ser específicos para cada tipo de residuo

- Diferenciarse normalmente por código de color

- Estar perfectamente etiquetados

En cuanto a su manejo, no se deben llenar más de 2/3 de su capacidad y deben cerrar

herméticamente.

Además, el plan de gestión de residuos debe especificar las normas de actuación en caso de
derrames.
La gestión de derrames implica tres acciones que deben ejecutarse de forma inmediata:

- Neutralización. Va a depender de las características químicas del producto

derramado

- Absorción. El material absorbente que se use dependerá de la naturaleza del

derrame. Algunos ejemplos son:

o Serrín para líquidos no inflamables ni tóxicos ni corrosivos

o Carbón activo, para líquidos inflamables, tóxicos o corrosivos

o Absorbentes-neutralizadores comerciales, para cualquier derrame líquido

según indicadores de la casa comercial

o Celulosa para absorber directamente derrames de pequeñas cantidades

- Eliminación. El residuo se introduce en un envase adecuado y se elimina en el

contenedor específico.

o Los derrames de productos en polvo se recogen directamente, evitando la

formación de aerosoles y de polvo en suspensión

o Los derrames de productos volátiles tóxicos por inhalación recogidos con

celulosa deben ser eliminados rápidamente en envases adecuados con
cierre hermético, o bien, poner la celulosa en una cabina de aspiración de
gases con filtro de carbón activo hasta su evaporación y posterior
tratamiento como residuo químico.

Durante la realización de estas actividades:

- Debe restringirse el acceso al laboratorio

- Las personas responsables de la recogida deben estar equipadas con los EPI
adecuados al producto derramado

- Se debe tener especial cuidado con derrames de líquidos inflamables y volátiles

ACTIVIDADES

1. Buscar características:

a. Agua purificada tipo II y agua ultrapura tipo I

b. Métodos de purificación de agua:

i. Electrodesionización

ii. Resinas de intercambio iónico

iii. Ösmosis inversa

iv. Filtración

2. Cabinas de seguridad biológica

3. Pictogramas