Manual Procedimeintos

EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO
MAN-280-1 7-V4
DEL MUNICIPIO DE VILLAVICENCIO
Vigencia:
LABORATORIO CLINICO
05/06/2019
Manual de Procedimientos técnicos de Documento Controlado
laboratorio clínico Página 1 de 51
CONTENIDO
Página
1. OBJETIVO 2
2. ALCANCE Y RESPONSABLES 2
3. DEFINICIONESY TERMINOLOGIA APLICABLE 2
4. MARCO NORMATIVO 3
5. RECURSOS 4
6. GENERALIDADES 4
7. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO 4
7.1 INMUNOLOGIA 5
72 HEMATOLOGIA 8
7.3QUIMICA 22
7.4UROANALISIS 23
7.5MICROBIOLOGIA 25
7.6 PRUEBAS ESPECIALES 39
7.7COPROANALISIS 47
8. REGISTROS DE CALIDAD 50
9. PUNTOS DÉ CONTROL 50
10. CONTROL DE CAMBIOS 50
11. BIBLIOGRAFIA 51
Elaborado Revisado Aprobado
Zenidia San:bria Vega

Subger- e - a 'fico
Ls Ferna da Clavija B. Lo - a Valencia Zuleta

Profesional Universitario Je - Oficina de Plane- ión y Ju- Jos: Mu oz R,, ayo
Bacterióloga -.¡¡dad erente
Fecha: 04/06/2019 echa: 05/06/2019 / /Fecha Vigencia: 05/06)2019

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1. OBJETIVO
Establecer los lineamientos técnicos y científicos para el procesamiento de las muestras

de manera estandarizada en el laboratorio clínico de la Empresa Social del Estado del
Municipio de Villavicencio.
2. ALCANCE Y RESPONSABLES
Este Manual inicia con la descripción del procesamiento de las muestras en las diferentes
secciones del Laboratorio clínico y termina con la validación de los resultados.
Cada dueño de proceso es responsable de verificar el cumplimiento de las acciones

descritas en este documento.
La Subdirección Administrativa es responsable de suministro de insumos, adecuación de

instalaciones y recurso humano para la realización de las actividades descritas.
3. DEFINICIONES Y TERMINOLOGIA APLICABLE
Analito: Sustancia o constituyente para la cual el laboratorio hace la prueba.

Antibiograma: Es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la sensibilidad
de una colonia bacteriana a un antibiótico o grupo de antibióticos.
Asepsia: Es la condición libre de microorganismos que producen enfermedades o
infecciones.
Antisepsia: Antisepsia es la acción de destruir o inhibir microorganismos (agentes
infecciosos o patógenos) que existen en un tejido vivo.
Código de barras: Es el sistema para la identificación de las muestras, el cual se imprime
una vez se hayan ingresado los datos de la orden médica al sistema Athenea.
Condiciones especiales: Se refiere a alguna condición dada, como requisito para la
toma demuestra
Muestra: Porción de un producto o tejido que se emplea para estudiar su naturaleza,
composición y estructura
Examen de laboratorio clínico: Es aquélla prueba realizada en un laboratorio clínico,
que requiere de recurso humano y tecnológico idóneo para su procesamiento
Examen urgente de laboratorio clínico: es el examen de laboratorio clínico que por
concepto clínico-científico, dada la gravedad o pronóstico del cuadro clínico del paciente,
debe ser realizado preferencia¡ mente, para que su resultado permita adoptar conductas
terapéuticas y/o quirúrgicas oportunas. La comunicación del resultado deberá ser
oportuna
Laboratorio clínico: es el establecimiento público o privado donde los técnicos y
profesionales en análisis clínicos, analizan muestras biológicas, como apoyo a las
actividades de diagnóstico, prevención, tratamiento, seguimiento, control y vigilancia de
las enfermedades; de acuerdo con los principios básicos de calidad, oportunidad y
racionalidad.
Medio de cultivo: Es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el desarrollo
de microorganismos. Para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo
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elegido las muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar
colonias.
Micción espontanea: Es un proceso por el que la veiicia urinaria se vacía de orina cuando
está llena, realizando previo aseo genital. Para el análisis en el laboratorio clínico debe
cumplir con retención urinaria mínimo 4 horas, con el fin de obtener calidad de la muestra
en la concentración de elementos diagnósticos.
Seguridad del paciente: conjunto de elementos estructurales, procesos, instrumentos y
metodologías basadas en evidencias científicamente probadas que propenden por
minimizar el riesgo de sufrir un evento adverso en el proceso de atención de salud o de
mitigar sus consecuencias
Sensidiscos: Son discos de papel filtro en los cuales se ubican antibióticos,
antibacterianos o bacteriostáticos, a concentraciones similares a las que estos alcanzan
en los tejidos a las dosis convencionales., cada compuesto está plenamente identificado
en este dispositivo, por lo que, es fácil identificar en un cultivo en agar, en una caja de
Petri, los halós de sensibilidad o la resistencia del microorganismo, a cada uno de ellos.
Servicio de toma de muestras: Es aquél servicio que cuenta con los recursos técnicos y
humanos apropiados destinados exclusivamente a la toma de muestras y/o productos
biológicos que serán remitidos a los laboratorios clínicos de diferentes grados de
complejidad, de los cuales dependan legal, técnica, científica y administrativamente con
el fin de aumentar la accesibilidad y oportunidad en el servicio de los usuarios que
requieren exámenes clínicos, cumpliendo de manera profesional y ética con las normas y
procedimientos que para este propósito de remisión de muestras y/o pacientes establece
'el presenta manual. Estos servicios de toma de muestra deben estar claramente
identificados con el nombre del laboratorio del cual dependen.
Sonda Vesical: Es una sonda que se coloca en el cuerpo para drenar y recolectar orina
de la vejiga. Procedimiento realizado por enfermería donde la muestra es obtenida previo
aseo (asepsia y antisepsia) y depositar muestra en frasco de orina debidamente rotulado.
Temperatura ambiente: Se refiere a la temperatura entre 22 y 25 grados centígrados
Hematología: Rama de la medicina que estudia el tejido hernatopoyético normal y
patológico.
Tiempo de entrega de muestras por el paciente: Es el tiempo máximo que el paciente
puede disponer para entregar en el laboratorio clínico las' muestras recolectadas en casa
con el fin que no afecte la calidad en los resultados de las mismas. Para la orina debe ser
máximo 1 hora. Y en las tomas de muestras se garantiza su conservación en red de frio (2
a8°C)
Urocultivo: Es el análisis que se le realiza a la orina para detectar con exactitud y
precisión cuál es el agente microbiano que está causando una infección en un organismo.
Validar: Significa mostrar la conformidad con un hecho en concreto.
4. MARCO NORMATIVO,
Constitución política de Colombia

La cual establece la seguridad social como un derecho irrenunciable de los habitantes del
territorio nacional, y como un servicio público obligatorio.
Decreto No 77 de 1997: Normas jurídicas sobre el laboratorio clínico
Ley 91de 1979: Código sanitario nacional: Título VII: Vigilancia y control epidemiológico
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MPit.SS',o' 1'O. DELE$tWO
Resolución 2003 del 2014: Sistema Único de Habilitación.
5. RECURSOS
5.1 Talento Humano.

• Bacteriólogos
• Auxiliares de laboratorio clínico y/o y Auxiliar de Enfermería con énfasis en
laboratorio Clínico.
5.2 Maquinaria y Tecnología.
• Equipos biomédicos
• Vehículo transportador
5.3 Materiales o Logísticos.

• Elementos de bioseguridad
• Insumos y dispositivos médicos
5.4 Metodológicos. Manual actual
5.5. Logísticos.
• Laboratorios clínicos de la ESE Municipal de Villavicencio, con
instalaciones seguras, áreas identificadas y señalizadas.
6. GENERALIDADES
Las muestras para análisis en las diferentes secciones del el Laboratorio Clínico son
procesadas según orden médica y facturación correspondientes al primer nivel de
atención en salud. Las disposiciones establecidas aplican para todos los turnos.
7. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

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7.1. SECCION DE INMUNOLOGIA
1. Realizar rutina diaria de equipos biomédicos
2. Realizar control de calidad interno semanal y registro en formato respectivo
3. Verificar y validar la calidad de las muestras
4. Organizar las muestras priorizando el procesamiento de las urgencias y hospitalización, posteriormente las de
consulta externa según sistema de información athenea; consultando el histórico de los pacientes y sus
antecedentes.
5. Imprimir la lista de trabajo de la sección de inmunología teniendo en cuenta el orden en la numeración.
6. Procesar las muestras del centro de salud correspondiente según las instrucciones del inserto realizando
bloques de la misma numeración y que no superen los diez pruebas
7. Controlar el tiempo de reacción según inserto de cada prueba y su lectura estricta dentro del mismo
8. Verificar el resultado, transcribir a la hoja de trabajo y al sistema información en orden de numeración
9. Correlacionar con el histórico del paciente, registrando sugerencias en comentarios
10. Validación de los resultados: Verifique por preliminar que todos los resultados quedaron validados y aparezca
la firma de la bacterióloga que los valido
11 Conservación y descarte de las muestras:
a. Refrigerar las muestras debidamente marcadas y selladas hasta 24 horas después de su procesamiento.
b. Descartar las muestras siguiendo las normas de bioseguridad.
En el caso de las pruebas de embarazo positivas estas se descartan pasados 30 días de la realización del
examen.
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In
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i
MPUk$.MUt:LL DaI
hCG RPR TP PCR FR

Anticuerpos
Anticuerpos
Gonadotropina (lgG, lgM, Proteína C reactiva Factor reumatoide
reaginicos
corionica humana gA)
Aglutinación Flujo lateral
en porta para para la Técnica de Método para detectar el factor reumatoide
la detección detección aglutinación para la usando una suspensión de gránulos de
cualitativa y cualitativa detección cualitativa plástico fino cubiertos con gamaglobulinas
semicuantitati de los y semicuantitativa de humanas las cuales aglutinaron en
va de anticuerpo s PCR presencia del factor reumatoide. El
reaginas incluyendo reactivo es una preparación sensible y
plasmáticas lgG lgM e estandarizada de este tipo, hecho con
Flujo lateral del
en suero IgA contra fracción humana lgG purificada y látex
conjugado de
humano. Las
FUNDAMENTO
el poliestireno.
anticuerpo
partículas de treponema
monoclonal anti
carbón pallidum
hCG con oro
sensibilizadas
coloidal con una tira
con una
de nitrocelulosa T '
mezcla de
lípidos son
aglutinadas
en presencia
de reaginas
presentes en
la muestra del
paciente
afectado por
sífilis
SUERO
SUERO/PLAS
SUERO /PLASMAY SUERO SUERO
MUESTRA MA
SANGRE
1 n mu n ocro m
TECNICA inmunocromtografia Aglutinación atografia Aglutinación Aglutinación
treponemica
Positivo No reactiva Positivo valor estimado según

RESULTADOS valor estimado según el inserto
Negativo Reactiva (dils) Negativo el inserto
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IEIE Manual de Procedimientos técnicos de Documento Controlado
1 Enfermedad 1. No es El resultado 1.No usar sueros Mononucleosis infecciosa, sarcoidosis,
trofoblastica específica negativo altamente lupus eritematoso sistémico, síndrome
Corino carcinoma para el puede hemolizados o Sjógren, lepra, hepatitis, pacientes
ovárico y testicular diagnostico de ocurrir si la lipemicos mayores de 60 años, sífilis
2.Niveles altos sífilis se cantidad de 2. Falso (+) Sueros
hormona hCG recomienda el anticuerpos con alta
mayor o igual a ensayo de antiTP concentración de
600.000 mul/mI todas las presentes factor rematoideo.
3.No usar sueros muestras en la elevada PCR
hemolizados o reactivas con muestra es
lipemicos métodos menor a los
4.Embarazo treponemicos limites de
ectópico TPHA, FTA detección
5.Niveles positivos Abs para la de la prueba
de hCG pueden ser confirmación o los
detectables después de resultados. anticuerpos
de parto o aborto 2.Reacción que son
LIMITACIONES
cruzadas: detectados
Toxoplasmosi no están
s, embarazo, presentes
neumonía en la etapa
viral de la
enfermedades enfermedad
autoinmunes que es
mononucleosi recolectada
s infecciosa, la muestra
malaria, Algunas
neumonía muestras
vira¡ que
3.Interferencia contienen
5 con alto titulo
bilirrubinas, inusual de
hemoglobina anticuerpos
y lípidos, heterofilias
factores o de factor
reu m atoides reumatoide
o pueden
afectar los
resultados
Valores de Negativo No reactiva Negativa Menor del valor Menor del valor estimado según el inserto
referencia estimado según el
inserto
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Mk'IP* o1l:flL UtLES "Jo
Resultado e interpretación de las pruebas serológicas

Resultado Interpretación
Se puede excluir la infección. Una infección sería la infección reciente,
No Treponémicas (-)
por lo que si hay sospecha se deben repetir las pruebas después de 15-
Treponémicas (-)
21 días
Es una Infección sifilítica: La entrevista ayudara a establecer si es
reciente o antigua, conocida o desconocida. Si se confirma que había
No treponémicas (+)
sido diagnosticada y tratada correctamente puede ser una cicatriz
Treponémicas (+)
serológica, sin embargo, se debe hacer un seguimiento cuantitativo
con prueba no treponémicas
Es una reacción treponémicas específica (99,5%-100%). Generalmente
No treponémicas (-)
refleja la persistencia normal de anticuerpos al Treponema y no
Treponémicas (+)
infección activa
7.2. HEMATOLOGIA:
Realización de identificación ABO Y RH:
Se realiza para la determinación de los aglutinógenos A Y B en los

hematíes humanos, como parte de la definición del grupo sanguíneo ABO y
para la detección del antígeno D del sistema Rh en medio salino. No es
necesario añadir ninguna solución potenciadora de aglutinación, ni incubar
o calentar los reactantes. Puede emplearse sangre total o anticoagulada.
Los componentes son anticuerpos monoclonales anti-A. antiB y anti D
respectivamente, soluciones cristaloides, albumina bovina 1% colorantes y
persevantes.
CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS: Color azul para ANTI-A color

amarillo para el ANTI-B y ámbar claro para el ANTI-D. Libres de partículas
visibles.
PROCEDIMIENTO:
Prueba rápida sobre láminas:

• Mezclar sobre una lamina una gota de (aprox. 20 ul) del reactivo con
una gota de sangre
• Disgregar la mezcla sobre un área de 1-2 cm de diámetro.
• Observar la presencia o no de aglutinación dentro de un plazo
máximo de 2 mm, realizando movimientos de báscula.
Pruebas en tubos:
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• Haga una suspensión de hematíes al 5-10% en solución salina

isotónica
• Mezclar dos gotas de reactivo con una gota de la suspensión de
hematíes.
• Para la anti-A y anti-13 incube 10 minutos a temperatura ambiente,
centrifugue y lea cuidadosamente.
• Para el anti D centrifugue de inmediato y lea cuidadosamente. Si el
resultado es débilmente positivo o dudoso se recomienda incubar el
tubo 30 min a temperatura ambiente (aprox 22°c) centrifugar
nuevamente y volver a evaluar la aglutinación.
• No usar suspensiones de hematíes inferiores a 50% para pruebas en
lamina
• El anti A es muy útil para la detección de subgrupos débiles de A
• El anti —D el anticuerpo monoclonal IgM aglutina eritrocitos D
• positivos en medio salino a temperatura ambiente. No es necesario
dispones de fuente de calor para laminas
• Se deben tomar las precauciones que son usuales con reactivos de
origen biológico fig5. Hemoclasificación en placa.
Figura 5. Hemodasificación. Aglutinación de la sangre de acuerdo a los antígenos del sistema ABO presentes en la mem-
brana de los eritrocitos. La aglunación de los eritrocitos es un resultado positivo e indica la presencia del correspondiente
antígeno.
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ESPECIFICACIONES TECNICAS DE HEMATOLOGIA PARA EL USO DE

EQUIPOS Y OTRAS TECNICAS
1. Realizar la rutina diaria de equipos biomédicos siguiendo la lista de chequeo correspondiente

2. Procesar control de calidad interno
3. Procesar control de calidad externo según cronograma
4. Registrar seguimiento al control de calidad
5. Verificar y validar calidad de las muestras (libres de hemolisis, coágulos y cantidad)
6. Organizar las muestras de acuerdo a la lista de trabajo de la sección, priorizando las del
servicio de urgencias y hospitalización, posteriormente procesar la consulta externa verificando
el histórico en el sistema de información y antecedentes clínicos
7. Para la hemoclasificación en recién nacidos realizar lavado de glóbulos rojos con SS 0.9%
8. Verificar y validar los resultados obtenidos:
a. Comprobación resultados alterados y plaquetas menores de 100000/mm3 mediante
FSP
b. Confirmación de la transcripción de resultados
c. Correlación con historia clínica del paciente
d. En el caso de las hemoclasificaciones verificar en observaciones del sistema de
información del paciente el grupo sanguíneo que tenia de su documento de
identificación con el fin de realizar comparación y/o retorna.
e. Validación de los resultados: Verifique por preliminar que todos los resultados
quedaron validados y aparezca la firma de la bacterióloga que los valido
9. Conservar las muestras:
a. Refrigerar las muestras hasta 24 horas después de su procesamiento.
b. Descarte de las muestras siguiendo las normas de bioseguridad
10. VSG: Muestras tomadas en tubo tapa lila EDTA 0.5 ml se puede utilizar capilar sin heparina micro
método. Las muestras de sangre en tubo tapa lila EDTA 4 ml realizar por el método de Wintrobe.
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.2.1 MALARIA
• Materiales
o Elementos de bioseguridad
o Algodón
o Alcohol
o Lanceta
o Laminas portaobjetos
o Lamina cóncava
o Colorantes Field
o Microscopio con objetivo de 100X.
o Aceite de inmersión
• Toma de muestra:
• Punción digital.
• Limpiar con algodón la primera gota de sangre.
• Marcar 2 láminas con el número consecutivo del laboratorio, seguido de las iniciales del paciente.
• Se procede.a tomar la muestra de sangre del dedo índice o dedo medio del paciente.
• Limpiar con alcohol y algodón, después se seca la zona con una torunda de algodón seco.
• Puncionar con una lanceta estéril desechable en el borde lateral del dedo entre la yema y la uña, se limpia l
primera gota de sangre con algodón seco, se presiona el dedo y se coloca la siguiente gota a 1.5 cm. de l
identificación de la lámina. y así obtenemos una muestra estandarizada; la siguiente gota 0.5 de distancia de l
anterior.
• Realizar dos láminas de gota gruesa por paciente y una de extendido de sangre periférica
e Luego se realiza la gota gruesa utilizando el borde de otro portaobjeto (lámina extensora)
e Extender la gota de sangre para formar un cuadradó de aproximadamente 1 cm x 1 cm y un grosor
homogeneidad adecuados y así obtener un mayor número de campos microscópicos ideales.
O
O
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LCI,.$S SÇ.)CLSS VIS &STAXIO
[ODVJLJ LUIUI
1cm 0.5cm 1.5cm
o
• Dejar secar la gota de sangre a la temperatura ambiente mínimo 30 minutos en una superficie plana y libre d
polvo.
• Coloración de FIELD = ROMANOWSKY MODIFICADO
La coloración para gota gruesa consta de dos pasos: pre-coloración y coloración.
Pre coloración
Este proceso ayuda a preservar las células sanguíneas e iniciar el proceso de deshemoglobinizacion sin
alterar la morfología del parasito.
• Verificar que la muestra este completamente seca para que no se desprenda

• Sumergir la lámina en una solución de azul de metileno por dos segundos
• Escurrir la lámina sobre una gasa o papel absorbente para eliminar el exceso de azul de metileno fosfatado
• Enjuagar con Sales fosfatadas, introducir y retirar rápidamente la placa en esta solución.
• Esta solución se cambia cada vez que tenga mucho tinte azul proveniente del azul de metileno
• Deje escurrir las láminas por 10 minutos para continuar la coloración
Coloración
• Después de la deshemoglobinizacion, la coloración permite la diferenciación de las estructuras parasitarias. El

color esperado para la cromatina es el rojo; para el citoplasma es azul y el pigmento malarico varía entre el
amarillo y el café oscuro.
• Por cada lámina que se necesita colorear, se adicionan 3 ml de Sales fosfatadas, una gota de solución A y
una gota de solución B en un tubo.
• Mezclar suavemente por inversión sin presentar espuma
• Colocar las placas invertidas (muestra hacia abajo) en la lámina cóncava, y dejar correr el colorante por
debajo de las muestras evitando la formación de burbujas.
• Colorear durante 10 minutos.
• Levantar y escurrir el colorante sin lavar.
• Secar a temperatura ambiente.
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CONTROL DE CALIDAD INTERNO DE COLORACION:
• Por parte de la bacterióloga y debe observar las plaquetas bien teñidas: que se observe su morfología coposa
o esponjosa porque su color lo permite, violeta rosado
• Control de calidad de la morfología: Se realiza con láminas de referencia enviadas o supervisadas por el
laboratorio de salud pública. Laminario.
PRUEBA RAPIDA: MALARIA AgP.fIP.v.
Prueba rápida en un paso para la determinación de Ag Malaria HRP-11 (P.f) y pLDH(P.v)
Principio de la Prueba en cassette contiene una membrana en forma de tira, la cual está recubierta con 2
Ac monoclonales que se presentan como dos líneas separadas en una misma tira. Los anticuerpos
monoclonales (línea de test para PO son específicos para HRP - II del Pfalciparum y el anticuerpo monoclonal
(línea de test para P.v) son específicos para lactato deshidrogenasa del Pvivax. Este kit está diseñado para la
detección de infección por malaria en muestras de sangre humana, determinando el diagnóstico diferencial
entre PfHRP-ll(proteína rica en Histidina II del Pfalciparum) y la pLDH(Plasmodium-lactato deshidrogenasa)
especifica d& Pvivax. Este kit está indicado únicamente para uso profesional, como un test de tamizaje
inicial, todas las muestras positivas deben ser confirmadas por un ensayo complementario como el examen
microscópico de sangre periférica.
Muestra: Sangre total + heparinao EDTA o Citrato de sodio

Sangre capilar
Procedimiento de la prueba:
• Espere a que todos los componentes del equipo estén a temperatura ambiente antes de realizar la prueba
• Quite el dispositivo de prueba del sobre de aluminio y colóquelo en una superficie lisa y seca
• Limpie la punta del dedo y pinchela con una lanceta
• Con una pipeta capilar de 5 microlitros suministrada, extraiga una muestra de sangre total hasta la línea negra
y luego transfiera al pocillo de muestra redondo. O bien con un lazo de muestras desechable de 5 microlitros
suministrado, sumerja el extremo .redondo circular de un lazo en la muestra de sangre y traslade
cuidadosamente el lazo al pocillo de muestra redondo. O bien tome una pipeta invertida (5 microlitros) para
recolección de muestras y sumerja del extremo circular de la pipeta invertida en la muestra de sangre y con
cuidado coloque el extremo circular de pipeta invertida en el pozo redondo de prueba.
• Agregue 4 gotas de diluyente verticalmente para prueba en el pocillo para diluyente de prueba cuadrado
(advertencia: si no se sujeta la botella verticalmente, puede conducir a resultados incorrectos.)
• Espere como mínimo 15 minutos (como máximo 30 minutos) y lea el resultado. Advertencia: Cuando el
resultado inicial es negativo después de 15 minutos, la lectura debe repetirse a los treinta minutos. No lea los
resultados de la prueba pasados los 30 minutos. La lectura tardía puede proporcionar resultados erróneos.
nterpretación de la prueba
esultado negativo: la presencia de una banda de color (línea de control"C") en la ventana de resultados indica un
esultado ne. ativo
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esultado positivo:
falciparum positivo: La presencia de dos bandas de color (línea de pF" y línea de control C) dentro de la ventana
le resultados sin importar cual aparece primero indica un resultado Pfalciparum positivo
vivax positivo: La presencia de dos bandas de color (línea de Pv y línea control O) dentro de la ventana de
esultado sin importar cual aparece primero, indica un resultado P vivax positivo
'nfección mixta: Pf y Pv: la presencia de 3 bandas de color (línea Pf, Pv y línea de control C) dentro de la ventana
le resultados puede indicar una infección mixta de Pf y Pv
?esultado no valido: Si la banda de color (línea de control C) no aparece dentro de la ventana de resultados el
esultado se considera no valido.
Limitaciones de la Prueba:
• El procedimiento de la prueba precauciones e interpretación de resultados para esta debe ser seguido de
acuerdo a las recomendaciones del análisis
• Esta prueba detecta Pf HRP-11 y/o pLDH especifica de Pv en muestras de sangre total y es usada como
procedimiento de tamizaje para el diagnóstico de malaria
• La prueba está limitada a la detección de antígenos de malaria Plasmodium sp. Aunque la prueba es muy
precisa en la detección de HRP-11 específica para Pfalciparum o pLDH específica para Pv, puede ocurrir
resultados falsos en zonas de baja incidencia se requieren otras pruebas disponibles clínicamente si se
obtiene resultados dudosos. Al igual que con todas las pruebas de diagnóstico, un diagnóstico clínico
definitivo no debe basarse en los resultados de una sola prueba, sino debe realizarlo el médico una vez que
se hayan evaluado todos los resultados clínicos y de laboratorio
5ensibilidad de la Prueba: Recuento de parásitos por microlitro de sangre mayor de 5000
_ectura, cuantificación e interpretación de la gota gruesa
• Cuando la muestra se seque completamente se procede a su observación en 100X buscando un campo ideal
(10-20 leucocitos), luego se comienza a examinar la muestra en zig-zag teniendo en cuenta no repetir algún
campo.
• La lectura tiene como objetivos específicos establecer la especie del Plasmodium y cuantificar el número de
parásitos por milímetro cubico (mm3) de sangre.
• Criterios básicos para el tratamiento y control del paciente.
• Determinar el número de parásitos en los campos microscópicos necesarios para contar 200 leucocitos
• Asumiendo una constante nacional de 8.000 leucocitos/ml de sangre en pacientes con malaria, se establece
la proporción de parásitos por 200 leucocitos encontrados así:
• No. de parásitos x 8.000 leucocitos/mm3 de sangre

No. de parásitos = -
200 leucocitos
o Resultado: # parásitos/microlitro o mm3 de sangre

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• Si hay menos dé 10 parásitos en 200 leucocitos, se debe hacer el recuento hasta 500 leucocitos. (circular n°5
de octubre de 2017)
• Se considera positivo para Plasmodium cuando se observan las formas parasitarias características. Para el
informe de resultados es necesario informar la especie de Plasmodium y en el caso específico de P.
falciparum es indispensable anexar el recuento del parasito por microlitro de sangre discriminando por formas
encontradas (es importante resaltar que una muestra que presente solo gametocitos de P. falciparum debe
ser diagnosticada como positiva.
• Ej. Positivo para P. falciparum (formas: asexuados 14 aplicar la formula, sexuados presencia)
Recuento por parasitemia:
• 560 trofozoitos /mm3 de sangre, se observan 14 trofozoitos en 200 leucocitos contados . con presencia de
gametocitos.
• NOTA. Se observan trofozoitos en la muestra analizada
• NOTA se observan 2 esquizontes en la muestra analizada
• En casos de P. vivax se recomienda realizar el recuento sumando las formas parasitarias.
• Ej. Positivo para P vivax: (formas: asexuados 14, sexuados 2) son en total 16 formas
Recuento por parasitemia
• 640 formas parasitarias/mm3 de sangre, se observaron 16 formas parasitarias en 200 leucocitos contados.
Criterios para reportar parasitemias mixtas
• En el caso de una malaria mixta (asociación parasitaria), es necesario realizar recuento parasitario
informando primero la especie que tenga mayor numero y, luego la que se encuentra subordinada, para el
diagnóstico de infección mixta es indispensable tener en cuenta los siguientes criterios:
• Presencia de formas parasitarias de P. vivax y gametocitos de P. falciparum. (Recuento, por separado) --
•• Presencia de trofozoitos de P. falciparum y formas de P. vivax en proporciones similares. El diagnostico se
realiza estableciendo la cantidad de formas parasitarias compatibles con P. falciparum y con P. vivax, en 100
formas parasitarias observadas, o como mínimo el 40% de falciparum
• Se considera negativo cuando no se observan las formas del parasito en por lo menos 200 campos
microscópicos observados.
• En parasitemias muy altas cuando no sea posible realizar el hematocrito del paciente, puede contar el número
de leucocitos contra 500 parásitos, como se presenta en la siguiente fórmula:
500 parásitos x 8000 leucocitos/mm3

Recuento o densidad parasitaria =
o No. leucocitos contados
Informe de resultados
• Se pueden presentar las siguientes respuestas del examen de una gota gruesa de sangre:
o Negativo. No se observan hemoparásitos en la muestra analizada.

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IlE4 " Manual de Procedimientos técnicos de Documento Controlado
o Positivo para Plasmodium falciparum.
• Recuento por parasitemia: 3.192 TROFOZOITOS (Asexuados)/ uL o mm3 de sangre.

• Se observaron 83 trofozoitos en 208 leucocitos.
o Presencia de Gametocitos.
• Nota: Se observaron trofozoitos maduros en la muestra examinada.

• Nota: Se observaron 2 esquizontes en la muestra examinada.
o Positivo para P. vivax

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•í F
EMPItt$SS4CLsL DEL E/crujo
7.2.2 LEISHMANIASIS
Toma de muestras:
LAVADO INICIAL: Se debe realizar un lavado inicial con jabón quirúrgico, solución yodada y soluciói
salina. Realizar el frotis con hoja de bisturí #15. Al finalizar se hace curación: con una sulfodiazina u otr
crema antibiótica gasa ,y micropore.
Examen Directo: Es un método rápido, económico y de fácil realización. La sensibilidad varia con e
tiempo de evolución de la lesión (a menor tiempo de evolución mayor sensibilidad), la toma de 1
muestra, proceso de coloración y capacitación del personal para realizar la lectura de las laminas.
La sensibilidad del examen directo es de 85 a 90% en pacientes cuya evolución no supera

Los cuatro meses.
El examen directo puede realizarse de dos maneras: Haciendo un raspado del borde interno de 1
ulcera o haciendo una incisión y raspando el borde activo de la lección.
Si existen dos o más lesiones debe escogerse para el examen directo la que tenga un menor tiemp
de evolución.
Para la limpieza de la lesión no se debe utilizar solución yodada, ya que puede interferfrir en 1
lectura del examen. Con el fin de evitar la formación de precipitado se debe utilizar una lamin
cóncava que contenga el colorante y realizar la coloración por inmersión; se deben tomar de 1
misma forma para realizar tres laminas por paciente.
Incisión y raspado del Borde Activo de la sección
En cada lámina se debe realizar tres frotis redondos y en el extremo final debe ir la rotulación. Est
método se recomienda para las lesiones cerradas no ulceradas. El material así obtenido s
extiende en forma suave sobre una lámina porta objetos nueva, previamente limpia, desengrasada
debidamente rotulada, Se debe tomar tres muestras de la misma forma para. realizar Tres lamina
por paciente
• Coloración de FIELD
Pre coloración
Este inicia el proceso de deshemoglobinizacion sin alterar la morfología del parasito.
• Verificar que la muestra este completamente seca para que no se desprenda

• Sumergir la lámina en una solución de azul de metileno por dos segundos
• Escurrir la lámina sobre una gasa o papel absorbente para eliminar el exceso de azul de
metileno fosfatado
• Enjuagár con Sales fosfatadas, introducir y retirar rápidamente la placa en esta solución.
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• Esta solución se cambia cada vez que tenga mucho tinte azul proveniente del azul de metileno
• Deje secar las láminas para continuar la coloración
/ Coloración
Después de la deshemoglobinizacion, la coloración permite la diferenciación de las estructuras

parasitarias. El color esperado para el citoplasma es azul claro, núcleo oscuro, kinetoplasto morado
intenso.
• Por cada lámina que se necesita colorear, se adicionan 3 ml de Sales fosfatadas, una gota de
solución A y una gota de solución B en un tubo.
• Mezclar suavemente por inversión
• Colocar las placas invertidas (muestra hacia abajo) en la lámina cóncava, y dejar correr el
colorante por debajo de las muestras evitando la formación de burbujas.
• Colorear durante 10 minutos.
• Levantar y escurrir el colorante sin lavar.
• Secar a temperatura ambiente.
Interpretación
Positivo: Cuando se encuentra 1 o más amastigotes al recorrer toda la lamina

Negativo: Cuando no se encuentre amastigotes a recorrer total la lámina.
Por protocolo se debe realizar otro frotis

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v Envió de Láminas:
Las láminas para diagnóstico de Leishmaniasis deben ser enviadas al laboratorio departamental de la
secretaria de salud, para evaluación externa del desempeño indirecta y confirmación del resultado.
Se remitirá con el diagnóstico presuntivo y la ficha respectiva de la supervisión indirecta para

Leishmaniasis, anotar en la columna de observaciones los datos del paciente como nombre, edad,
identificación, procedencia del 'paciente (si vive en la ciudad anotar si ha viajado a zonas alejadas á
dispersas endémicas para este evento (pueblos, veredas, etc.)
000
METODOS DE DIAGNOSTICO CHAGAS
Diagnostico parasitológico
(Directos e indirectos)
Diagnostico serológico
Métodos Parasitológicos Directos.
Son aquellos en los que se busca detectar la presencia del parásito mediante observación
directa del tripomastigote metacíclico en sangre y están indicados en el diagnóstico de la fase
aguda de la enfermedad, principalmente cuando el paciente esta febril y la parasitemia es
elevada. Incluye los siguientes métodos:
Examen directo de sangre fresca: Se toma una gota de sangre por punción digital, se
coloca entre lámina y laminilla y se observa al microscopio de luz con objetivo de IOX y 40X.
Se buscan tripanosomas moviéndose vigorosamente. Es un método muy sencillo que puede
realizarse en un laboratorio con recursos mínimos.
METODOS PARASITOLOGICOS INDIRECTOS:

• Hemocultivo
• Reacción en cadena de la polimerasa (POR)
• Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (qPCR)
Estos métodos son especializados para laboratorios de referencia pero constituyen una
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herramienta más para establecer su diagnóstico. El desarrollo de métodos serológicos en
busca de anticuerpos anti T. cruz¡ durante esta fase también tiene una utilidad
complementaria, teniendo en cuenta que al final del primer mes hay anticuerpos Ig G
detectables (17-20). En pacientes con infección por VIH, inmunosuprimidos o
inmunodeprimidos por cualquier causa, la reactivación de la enfermedad de Chagas crónica
ha sido descrita en países endémicos y no endémicos, es considerada como una
reagudización de la infección por T. cruz¡ con presencia de parásitos en sangre. o fluidos
infectados, los cuales pueden ser detectados por métodosparasitológicos. La reactivación
ocurre en aproximadamente un 30% de los pacientes co- infectados con T. cruz¡ y VIH (21).
Frotis o Extendido de sangre periférica: Después de obtener una muestra de sangre por
punción capilar, se extiende una gota sobre una lámina coloreada con Romanowsky
modificado, Giemsa o Wright. Se buscan los tripomastigotes metacíclicos fijados, con sus
estructuras características: forma alargada en C o en 5, con núcleo, cinetoplasto, flagelo y
membrana ondulante. Es una prueba que permite identificar la morfología del parásito pero
presenta baja sensibilidad.
Gota Gruesa: Es una técnica que utiliza métodos de coloración como los anteriormente
mencionados para visualizar el parásito pero con la ventaja que permite concentrar varias
capas de sangre, 20 a 30 en relación con el extendido de sangre. Por el proceso al que es
sometida la sangre, la morfología del parásito puede verse un poco modificada. La
sensibilidad de esta prueba es intermedia entre los anteriores métodos y los de concentración
como el microhematocrito y el Strout. Esta prueba presenta ventajas si se utiliza en zonas
donde coexiste transmisión de malaria y de Chagas por la experiencia en su uso. La
realización de la gota gruesa como rutina en estas regiones para el diagnóstico de malaria en
febriles puede detectar casos agudos de enfermedad de Chagas (17).
Microhematocrito o microstrout: Se obtiene una muestra de sangre en un tubo capilar o

microhematocrito heparinizado, centrifugarlo a 8.000-12.000 rpm y observar al microscopio la
inferfase entre el plasma y los glóbulos rojos (la capa leucocitaria) o pegando el capilar con
una cinta a una lamina y dándole giros para observarlo, en ambos casos con objetivo 40X
buscando la presencia de tripomastigotes en movimiento. Otra alternativa cuando el anterior
procedimiento da negativo es romperlo con mucha precaución al nivel de la interface y
observar entre lámina y laminilla o realizar un extendido para tinción con coloración con
Romanosky. Este método también se puede desarrollar en un laboratorio de cualquier nivel.
La técnica es una de las más sensibles, siendo ampliamente utilizada para diagnosticar casos
de Chagas congénito (20).
Técnica de concentración de Strout: Se obtiene una muestra de sangre (5-10 mi) sin
anticoagulante, se deja que se forme el coagulo y se retraiga. El suero obtenido se doble
centrifuga, primero a baja velocidad (1.500 RPM) para eliminar los glóbulos rojos restantes y
luego a mayor velocidad (3.500 a4000 RPM) para concentrar los parásitos en el sedimento
(7). Finalmente se descarta el sobrenadante y a partir del sedimento se realiza un montaje
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directo en fresco entre lámina y laminilla para buscar el parásito o realizar un extendido para
tinción con coloración. De igual forma este método también puede ser desarrollado en un
laboratorio de cualquier nivel. Es una de las técnicas más sensibles porque utiliza el mayor
volumen de sangre y permite concentrar los parásitos.
Los métodos de concentración presentan mayor sensibilidad (> de/ 95% desde que no hayan
transcurrido más de 30 días del inicio de los síntomas) que el examen en fresco (85%) y están
recomendados cuando este ultimo sea negativo (21). En la fase aguda ante la presencia de
síntomas por más de 30 días los métodos de concentración deberán ser los métodos
seleccionadQs (17). Entre los 30 y 60 días del inicio de la fiebre la positividad es menor y
depende del número de veces, del número de tubos y de la realización en picos febriles.
Después de los 60 días no se considera fase aguda, y es prácticamente imposible encontrar
parásitos sea por examen en fresco o por técnicas de concentración (22).
MICROMETODO: Tomar 50 pL de heparina y 500 pL de sangre total venosa en un vial

eppendorf, mezclar por inversión, centrifugar 1 minuto a 3000 r.p.m. Tomar una gota de la
interfase, que corresponde a la capa leucoplaquetaria y depositarla en una lámina portaobjeto,
cubrir con una laminilla cubreobjetos, dejar en reposo durante 5 minutos y observar con
objetivo de lOx y 40x. Se recomienda realizar una observación de la totalidad del diámetro de
la laminilla
LINEAMIENTOS PARA EL DIAGNOSTICO POR LABORATORIO DE FASE AGUDA.

(ALGORITMO)
Un resultado POSITIVO en un método parasitológico directo confirma la infección, pero un

resultado NEGATIVO no asegura que el paciente no tenga la infección, razón por la cual los
métodos parasitológicos directos se deben realizar todos de manera seriada varias veces al
día por al menos durante una semana, simultáneamente se deben realizar los métodos
serológicos y de manera adicional los métodos parasitológicos indirectos. El médico realizará
la correlación de estos resultados con la clínica y el nexo epidemiológico. En la fase aguda
ante la presencia de síntomas por más de 30 días, la probabilidad de hallar el parásito en
sangre va disminuyendo y depende del número de veces que se realicen los métodos de
diagnóstico parasitológico directo, del número de muestras analizadas por día y de la toma de
estas durante los picos febriles. Durante esta fase los métodos parasitológicos de
concentración (micrométodo, microhematocrito y método de Strout) deberán ser los métodos
de elección.
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1
7.3 QUIMICA SANGUINEA

7.3
a. Verificar la calidad de las muestras(libre de hemolisis y fibrina)
b. Realizar rutina diaria del equipo
c. Organizar las muestras de acuerdo a su número ascendente de consecutivo
d. Revisar la lista de trabajo de la sección de química de los diferentes centros de
salud que le remiten las muestras para Química sanguínea de Consulta externa
e. Realizar control de calidad interno de cada analito y externo según cronograma
f. Revisar los resultados realizando correlación clínica, revisión de histórico del
usuario y validar
g. Guardar las muestras 24 h y luego descartarlas siguiendo las normas de
bioseguridad
ESTABILIDAD DE LA MUESTRA DESPUES DE SU OBTENCION EN QUIMICA CLINICA
T AMBIENTE REFRIGERACION CONGELACION

COMPONENTE MUESTRA
20-25°C 4-8°C (-) 20 °C
SUERO 3 DIAS 7 DIAS 6 MESES
ACIDO URICO PLASMA CON
3 DIAS 7 DIAS 6 MESES
EDTA
EN OSCURIDAD
BILIRRUBINAS
SUERO 1 DIA 7 DIAS 6 MESES
COLESTEROL
PLASMA EDTA 7 DIAS 7 DIAS 3 MESES
CREATININA SUERO 7 DIAS 7 DIAS 3 MESES
SUERO 8 HORAS 72 HORAS
GLUCOSA NO APLICA
PLASMA 1 HORA* NO APLICA
HDL SUERO 2 DIAS 7 DIAS 3 MESES
LDL SUERO 1 DIA 7 DIAS 3 MESES
NITROGENO
PLASMA N
UREICO 7 DIAS 7 DIAS 12 MESES
EDTA
TRIGLICERIDOS
PLASMA EDTA •2 DIAS 7 DIAS 12 MESES
CONGELAR SOLO
NA NA NA UNA VEZ
SEPARAR EL SUERO DEL CONTENIDO CELULAR A MAS TARDAR UNA HORA
DESPUES DE LA TOMA DE LA MUESTRA
OBSERVACIONES
EN CASO DE RECEPCIONAR SUEROS PARA RECENTRIFUGAR SEPARAR EL SUERO
OBTENIDO EN TUBO DE VIDRIO Y REALIZARLE CENTRIFUGA ClON, OBTENIENDO EL
SOBRENA DANTE PARA PROCESAR Y EL SEDIMENTO SE DESCARTA
*SEPARAR EL PLASMA INMEDIATAMENTE SE TOMA LA MUESTRA
FUENTE DE INFORMACION INSERTO DIASYS
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7.4 UROANALISIS
a Realizar rutina diaria de equipos y control de calidad interno

b. Recepcionar muestra de orina en frasco con tapa cantidad mínimo 10 ml para su
procesamiento
c. Realizar el examen físico: Color y aspecto registrando en el sistema de información
d. Realizar el examen químico de la muestra de orina: El equipo automatizado reconoce la
identificación de la muestra través del código de barras con el lector o registrar de manera
manual el consecutivo del paciente que está en el cuerpo de los frascos los cuales están
organizados en el mismo orden que se encuentran en la gradilla las muestras servidas en
tubos de ensayo para luego pasar las tiras reactivas
e. Centrifugar a 2500 rpm por cinco minutos
f. Descartar sobrenadante en frasco que contiene hipoclorito de sodio al 2.5 % durante 30
minutos
g. Marcar lamina portaobjetos con el numero consecutivo del paciente
h. Mezclar suavemente el sedimento Servir una gota del sedimento resuspendido entre lamina y
laminilla
i. Realizar lectura en microscopio con objetivo de lOx para observar cilindros y en 40x para
realizar examen citológico
i. Tipo de muestra: especificar micción espontanea o sonda vesical en el sistema de información
k. Registrar el resultado en el sistema buscando por el numero consecutivo del paciente y validar
resultados realizando correlación clínica
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REPORTES DE LABORATORIO PARCIAL DE ORINA
MICCION ESPONTANEA
MUESTRA
SONDA VESICAL
LÍMPIDA, LIGERAMENTE TURBIA
ASPECTO
TURBIA
OCASIONALES
1-3XC
CELULAS EPITELIALES ALTAS
CELULAS EPITELIALES BAJAS
MAYOR DE 12 XC
OCASIONALES
1-3XC
LEUCOCITOS 4-7 X C
HEMATIES 8-11 X C
12-15XC
MAYOR DE I6XC
INCONTABLES
BACTERIAS ESCASAS
CRISTALES (DESPLEGAR LOS QUE ESTAN EN 1+
ATHENEA) 2+
LEVADURAS 3+
MOCO
CILINDROS, ESPERMATOZOIDES (SOLO PARA X PP
HOMBRES) XC
(DESPLEGAR LOS QUE ESTAN EN ATHENEA
TRICHOMONA VAGINALIS PRESENTE O AUSENTE
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7.5.MICROBIOLOGIA
PREPARACION DE MEDIOS DE, CULTIVO
1. Añadir el medio previamente pesado a un volumen determinado de agua destilada yio desionizad
Llevar a ebullición hasta disolver completamente.
2. Agitar y esterilizar en autoclave a 121 grados centígrados durante 15 minutos.
3. Enfriar a 45-50 grados centígrados y añadir componentes ya estériles si es el caso, por ejemplo e
hemocomponente para la preparación del agar sangre.
4. Mezclar suavemente y por rotación.
5. Verter en cajas de Petri
6. Recomendación: la reconstitución y mezcla debe realizarse en un matraz por lo menos 2,5 vece
superior al volumen del medio para asegurar la aireación de los componentes
7. Esperar unos minutos para que el medio enfríe y solidifique.
8. Rotular con el nombre del medio y la fecha, refrigerar de 2 a 8 grados centígrados.
9. De cada lote de medio preparado destinar una caja para prueba de control de calidad, en ¡ncubaciót
por 24 horas a 37 grados centígrados y registrar en el formato respectivo los resultados, en cas
que el cultivo muestre crecimiento se realizara la coloración de gram e identificación respectiva
descartando el lote a estudio para posterior esterilización y eliminación como material sucio. De lc
contrario el lote queda aprobado para su uso.
1. UROCULTIVO
1. Atemperar los medios de cultivo a sembrar durante 30 minutos.

2. Marcar las cajas de Petri con el consecutivo de la muestra al laboratorio, las iniciales del paciente,
3. Sembrar la orina en Agar sangre y posteriormente en Agar MacConkey según la técnica del As
calibrada y/o metalica
4. Inmediatamente incubar el agar sangre y el Agar MacConkey a 37°C +1- 0.5°C ckiie241i.xt
5. Después de incubar ambas cajas durante 18-24 horas, interpretar - resultados de ambas caja
simultáneamente y con buena luz.
6. Recuento mayores de 100,000 UFC/ml de orina, cepa pura: identificar bacteria con BBL Crystal
hacer sensibilidad y reportarlo.
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•
'- .E! Manual de Procedimientos técnicos de Documento Controlado
UFC/ML CRITERIO PARA REPORTAR UROCULTIVO
*10,000-50,000 UFC/ml Urocultivo negativo a las 24 horas de incubación
*50000. menor de 100.000 Muestras tomadas con sonda, mujeres embarazadas, adulto mayor
UFC/ml
100,000 ó más UFC/ml Se informa Urocultivo con> 100.000 UFC.

Microorganismo aislado: X bacteria.
Lo que nos indica una infección urinaria verdadera, hacer
antibiograma y reportar
2. ANTIBIOGRAMA
1. Atemperar el medios de cultivo de mueller hinton durante 30 minutos y la solución salina estéril
2. Realizar una suspensión del microorganismo en un tubo con 3 mL de ss. 0.9%. Método dE
suspensión directa de colonias: A partir de una placa de cultivo de 18 a 24 horas coger varia
colonias con un asa y ajustar el inóculo a una turbidez equivalente al 0.5 de la escala de MacFarlan
0.5 en suero fisiológico. Agitar durante 15-20 segundos.
3. Inoculación de las placas. Antes de que transcurran 15 minutos de haber ajustado el inóculo,
introducir un escobillón dentro de la suspensión y al retirarlo rotar varias veces contra la pared del
tubo por encima del nivel del líquido con la finalidad de eliminar el exceso de inóculo. - Inocular las
placas de Mueller-Hinton completamente, sin dejar ninguna zona libre. Esto se consigue
deslizando el escobillón por la superficie del agar tres veces, rotando la placa unos 601cada vez y
pasándola por último por la periferia del agar para conseguir una siembra uniforme. Dejar secar de
3 a 5 min antes de depositar los sensidiscos.
4. Dispensación de los discos. Colocar los discos con los dispensadores o manualmente con
pinzas estériles. Debe asegurase que contacten perfectamente con la superficie del agar, por lo
que deben presionarse ligeramente sobre la superficie del agar. No deben situarse a menos de 15
mm del borde de la placa, y han de estar distribuidos de forma que no se produzca superposición
de los halos de inhibición. Para placas de 150 mm no se emplearán más de 12 discos y para las de
100 mm no más de 6. - Incubar las placas invertidas (agar en la parte superior), en grupos no
superiores a 5 placas, a 35°C en atmósfera aeróbica antes de que transcurran 15 minutos. Las
placas se incubarán a 24 horas.
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6. Medir en milímetros el diámetro de los halos de inhibición completa con una regla milimetrada o ur
Vernier por detrás de la caja Petri.
7.Transformar las medidas de los diámetros de los halos de inhibición en milímetros, hacer
lecturas de acuerdo a tablas actualizadas.
PRUEBA DE INDOL: Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol en un cultivo bacteriano:
Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el enzima triptofanasa.
Se prepara una suspensión en un medio nutritivo líquido, se deja incubar 24 horas, posterior a la
incubación se adiciona 10 gotas de reactivo de KOVAC, la lectura se realiza a los lOmin. Si no hay
cambio de color se considera negativo.
OXIDASA: Oxidasa. Esta-prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción
de la oxidasa se debe a la presencia de un sistema citocromooxidasa que activa la oxidaciÜn del
citocromo el cual es reducido por el oxígeno molecular produciéndose agua o peróxido de hidrogenó
según la especie bacteriana. El oxígeno actua por tanto como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora de electrones. Por lo general, el sistema citocromooxidasa solo se encuentra en las
bacterias aerobias, algunas anaerobias facultativas y, excepcionalmente, en alguna microaerofila (Vibric
fetus), pero las bacterias anaerobias estrictas carecen de actividad oxidasa. Asimismo, la presencia de
oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que Esta degrada el peróxido de hidrogenó que se
produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es toxica.
La técnica se realiza según inserto del fabricante.
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IDENTIFICACIÓN BACTERIANA
1. Atemperar el panel de identificación bacteriana debidamente rotulado

2. Suspender las colonias en el tubo de fluido de para inoculo y realizar la siembra en el panel
(revisar inserto)
3. Colocar los paneles inoculados en las bandejas de inoculación. El panel debe incubarse mirando
hacia abajo (las ventanas mirando hacia arriba y la etiqueta mirando hacia abajo) El tiempo de
incubación es de 18-24 Horas a 37 0C+I- 0.5.
4. Realizar la lectura del panel de acuerdo a la escala de colores del inserto, en el caso de los
grampositivos utilizar la lámpara de fluorescencia
5. Use el cuadernillo de informes para registrar las reacciones.
6. El número de perfil resultante y los resultados de prueba de línea (indol y oxidasa) deben
introducirse en un programa instalado en un PC en el centro de salud de la Esperanza, en él se
haya instalado el libro de códigos electrónico del panel para obtener la identificación bacteriana.
ANTIBIOTICOS USADOS PARA ANTIBIOGRAMA

NIÑOS ADULTOS MATERNAS
Gram Gram Gram negativos Gram Gram Gram
negativos positivos positivos negativos positivos
Aminopenicilinas: Arninopenicilinas: Aminopenicilinas: ampicilina Aminopenicilinas: Aminopenicili- Aminopenicilinas:
Ampicilina/ ampicilina sulbactam ampicilina nas: ampicilina
amoxacilina/ sulbactam sulbactam Ampicilina/ sulbactam
Penicilinas amoxacilina/
ampicilina Penicilinas Penicilinas
soxazohcas: ampicilina
sulbactam isoxazolicas: oxacilina sulbactam isoxazolicas:
oxacilina Lincosaminas: oxacilina
Lincosaminas: clindamicina Lincósaminas:
clindamicina Glucopeptidos: clindamicina
Glucopeptidos: vancomicina Glucopeptidos:
vancomicina vancomicina
Quinolonas: Quinolonas: Quinolonas: Quinolonas: Quinolonas: --
1 generación 2 generación 2 generación norfiocaxina ó 2 generación 1 generación
ácido nalidixico, norfiocaxina ó ciprofloxacina norfioxacina, ácido
2 generación ciprofloxacina ciprofloxacina nalidixico,
noríloxacina 2 generación
norfioxacina,
ciprofloxacina
(resistencias)
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Nitrofuranos: Nitrofuranos: Nitrofuranos: nitrofurantoina Nitrofuranos: Nitrofuranos: Nitrofuranos:
nitrofurantoina nitrofurantoina nitrofurantoina nitrofurantoina nitrofurantoina
• (resistencias) (resistencias)
Sulfas: Sulfas: Sulfas: trimetropim sulfa Sulfas: Sulfas: Sulfas: trimetropim
trimetropim sulfa trimetropim sulfa trimetropim trimetropim sulfa sulfa (resistencias
• sulfa (resistencias)
Cefalosporinas Cefalosporinas Cefalosporinas de 1 Cefalosporinas Cefalosporinas Cefalosporinas
de 1 generación: de 1 generación: generación: cefalotina, de 1 de 1 de 1 generación:
cefalotina, cefalotina, cefalexina cefalosporinas de generación: generación: cefalotina,
cefalexina cefalexina 3 generación ceftriaxona cefalotina, cefalotina, cefalexina
cefalosporinas de (resistencias) cefalexina cefalexina cefalosporinas
3 generación cefalosporinas cefalosporinas. de 3 generación
ceftriaxona de 3 de 3 ceftriaxona
(resistencias) generación generación (resistencias
ceftriaxona ceftriaxona
(resistencias) (resistencias)
Aminoglucosidos: Aminoglucosidos: Aminoglucosidos:gentamicina Aminogiucosidos: -- --
gentamicinaO
gentamicina gentamicina o o amikacina (resistencias) arnikacina
amikacina (resistencias
(resistencias)
3. FROTIS DE FLUJO VAGINAL
Lectura en fresco
pH Valor Numérico
AMINAS KOH al 40% Positivo Negativo
CELULAS GUlA Ausencia Presencia
Trichomonas Vaginalis No se Observan
BLASTOCONIDIAS Y No se Observan 1+ - 3+
PSEUDOMICELIOS
Lectura en Gram.
POLI MORFONUCLEARES Ausentes, Escasos, Moderados, Abundantes
VAGINOSIS BACTERIANA '• Correlacionar con células Guía.
• Se observan diversos tipos de' bacterias como
CBGV.
VAGINITIS POR ' • Candidasp
• Trichomonas
• Neisseria: extra o intracelulares.
Sugerir cultivo.
• Enterobio vermicular
• Inespecífica
FLORA NORMAL . BGP compatibles con Lactobacillús, ningún otro tipo
de FB.
Cocos Gram-positivos, Bacilos Gram-Negativos se informan en morfología y numero de 'cruces.
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Flujo
Aislamiento de
Clasuficacuon. Vaginal o
Coloración Gram microorganismo Informe
secreción
en cultivo
uretra¡
Flora vaginal Blanco Bacilos gram positivos Lactobacillus spp
normal opalescente Corynebacterium Flora vaginal normal
pH 4.3-4.5 spp
Vaginosis Homogéneo, Gardnerella
bacteriana gris, baja Desequilibrio vaginalis Vaginosis bacteriana
viscosidad polimicroboiano: - cocobailos Bacteroides spp
pH >4.5 gram variables - bacilos Mobilluncus spp
curvos gram negativos
Uretritis Secrecion Neisseria Si se observa diplococos gram
bacteriana abundante Diplococos gramnegativos gonorrhoeae negativos intra y/o extracelulares.
Hombre intra y/o Se debe solicitar cultivo para realizar
extracelulares pruebas de identificación de
Neisseria gonorrhoeae y prueba de
susceptibilidad antimicrobiana
Vaginitis Secreción Diplococos Gram negativos Neisseria Diplococos Gramnegativos intra y/o
bacteriana abundante Intra y/o extracelulares gonorrhoeae extracelulares. Se debe solicitar
mujer pH >4.5 cultivo para realizar pruebas de
identificación de Neisseria
gonorrhoeae y pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana
Vaginitis por Blanco, Blastoconidias y/o Cándida spp Vaginitis por candida spp
Cándida spp Grumoso pH pseudomicelios
<4.5
Vaginitis Reacción PMN moderada o Vaginitis inespecífica
inespecífica abundante No •se observa
causa aparente
Blastoconidias y/o Cándida spp Infección mixtas causada por:
pseudomicelios Indicar la combinación bacteriana o
Cocobacilos gram variables Gardnerella fúngica asociada
vaginalis
Infecciones bacteroides spp
mixtas Bacilos curvos gram negativos Mobilluncus spp
Neisseria
Diplococos gram negativos gonohrroeae
intra y/o extracelulares
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Vaginitis Ninguno Vaginitis inespecífica
química/alérgi No se observa causa aparente
ca vaginitis
por cuerpo
extraño
leucorrea
fisiológica
4. FROTIS DE SECRECION URETRAL

Lectura en Gram.
POLIMORFONUCLEARES Ausentes, Escasos, Moderados,
Abundantes
Se Informa en morfología y en número de cruces:
Cocos Gram-positivos, Coco-Bacilos Gram negativos, Bacilos Gram-Negativos,
Diplococos Gram-Negativos Extra e intracelulares Compatibles con Neisseria
Gonorrhoeae.
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5. BACILOSCOPIA
Realización del extendido

1. Lavarse las manos
2. Colocarse la bata (de manga larga y con botones) y guantes (doble guante)
3. Ubicar en la mesa, bandeja o papel humedecido con hipoclorito de sodio al 1%
4. Dejar sólo lo necesario para realizar el extendido
5. Seleccionar la partícula mas purulenta
6. Extender homogéneamente suficiente cantidad de la partícula útil, sin exceso,en un pequeño
óvalo centrado en el portaobjetos (2x2 o 2xlcm)
Coloración del Extendido

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j Manual de Procedimientos técnicos de Documento Controlado
Ziehi
Pasos Tiempo Descripción
Neelsen
Y. Coloració Fucsina 5 min Cubrir la lamina en
n principal su totalidad con el
- colorante con
mechero flamear
hasta emisión de
vapores evitando
ebullición, adicionar
colorante si es
necesario
Dejar enfriar y NA NA • Hasta eliminación
lavar con agua completa del
colorante. Descartar
el desecho en frasco
de pared dura (no
vidrio) con tapa
2. Decoloraci Alcohol ácido 3 min Si no se completa la
ón decoloración se
adicionar alcohol ZN
por un minuto más.
Descartar el
desecho en frasco
de pared dura (no
vidrio) con tapa
Lavar con agua NA NA NA
3. Coloració Azul de imin NA
n de metileno
contraste
Lavar con agua y NA NA NA
dejar secar para
observar al
microscopio con
objetivo de lOOx
•EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO
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Informe de resultados: Escala semicuantitativa
Resultados del Examen Microscópico Informe

No se encuentran BAAR en los 100 campos No se observan bacilos ácido
observados alcohol resistentes
Se observan de 1 a 9 BAAR en 100 campos N° exacto de bacilos en 100
observados campos
Se observa entre 10 y 99 BAAR en 100 campos Positivo (+)
observados
Se observa de 1 a 10 BAAR por campo en 50 Positivo (++) -
campos observados
Se observan más de 10 BAAR por campo en 20 Positivo (+++)
campos observados
Cuando se observa un bacilo en toda la preparación se debe montar nuevamente de la
misma muestra otra lamina en caso de no encontrar bacilos el resultado se deja como
negativo y se sugiere realización de cultivo.
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6.CULTIVO DE MICOBACTERIAS (B.A.A.R)
OPTIMIZACION DE MUESTRAS PARA CULTIVO
Descontaminación de muestras: están muestras se someten a un proceso de descontaminación,

para eliminar la flora acompañante y a la vez permitir la homogenización de la muestra. Esta
descontaminación se realiza con Hidróxido de sodio (NAOH) al 4% y fosfato trisódico (FTS)
(Na3HPO4)al 10% y 20%
Método del escobillón de kudoh (Método directo)

Este procedimiento se realiza por duplicado
1. Impregne en la totalidad el algodón de un escobillón estéril, con la muestra
2. Introduzca el escobillón en un tubo que contenga 3 ml de NaOH al 4% durante 2 minutos como
máximo.
3. Saque, sin escurrir, el escobillón y siembre con movimientos de rotación y presión, utilizando las
partes laterales del escobillón. Use un escobillón para cada uno de los dos tubos del medio OK.
4. Incube los tubos a 37°C en posición horizontal con un mínimo de inclinación, con las tapas sin
ajustar.
5. Procese el sedimento por el método del escobillón de Kudoh.
Método de cultivo con centrifugación con fosfato trisódico al 10%

Se utiliza en la descontaminación de muestras como aspirado gástrico, lavado o cepillado
bronquial.
a. Adicione 2 ml de FTS al 10% porcada 10 ml de júgo gástrico
b. Centrifugar a 3.500 rpm por 30 minutos (centrifuga refrigerada)
c. Descarte el sobrenadante en un recipiente con hipoclorito de sodio al 1.0%
Cultivo con centrifugación con fosfato trisódico al 20%

Se utiliza para la descontaminación de muestras de orina.
a. mezcle la totalidad de la muestra y tome 30 ml.
b. Adicione 10 ml de FTS al 20%.
c. Centrifugar la muestra en un tubo tapa rosca a 3.500 rpm por 30 minutos(usar centrifuga
refrigerada)
d. Descarte el sobrenadante en un recipiente con hipoclorito de sodio al 1.0%.
e. Procese el sedimento por el método del escobillón de Kudoh.
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E'3W11I*L St)CLM. OLLESIAIJO
Manual de Procedimientos técnicos de Documento. Controlado
7.LEPRA (TEST DE HANSEN)
TOMA DE MUESTRAS: El procedimiento para la toma de muestra debe realizarse por el bacteriólogo
en compañía de su auxiliar de laboratorio con el fin de garantizar la seguridad del paciente.
DESCRIPCION DE LA TOMA DE MUESTRAS:
1. Utilizar elementos de bioseguridad: Tapabocas, bata, gorro, guantes
2. Alistar el material para la toma de muestras: Torniquete para pinza Kelly, lanceta, algodón,
capilares heparinizados, lamina portaobjetos nueva desengrasada y debidamente identificada
en el extremo final de la misma y dibujar los círculos para ubicación de las muestras de
acuerdo a la figura
3. Realizar explicación del procedimiento al paciente y posterior diligenciamiento del
consentimiento informaqo
4. Realizar asepsia y antisepsia
5. Tomar un pliegue en la piel sosteniendo firmemente con las pinzas Kelly desinfectadas hasta
lograr isquemia y masajear para estimular la circulación linfática
6. Usar una lanceta desechable estéril, y realizamos 3-4 punciones cercanas entre sí, tomar con
el capilar una buena cantidad de linfa y dispensar en el sitio correspondiente de la lamina
7. Tomar 6 muestras para la clasificación bacteriológica y control del Tratamiento.
8. Obtener muestra de linfa de la rodilla derecha e izquierda (si existen lesiones se puede
reemplazar rodillas y codos) seguidamente linfa de codo derecho e izquierdo y finalice con
linfa de los lóbulos de las orejas derecha e izquierda. Deje un espacio para marcar en el
extremo final de la lamina portaobjetos
9. Dejar secar muestra a temperatura ambiente y fijar al calor
Rodilla izquierda Rodilla derecha o lesión
lesión( Rl ) (RO)
Codo derecho (CD)

Codo izquierdo (Cl ) o
lesión
Lóbulo de la Oreja
derecha (01)
Lóbulo de la Oreja
izquierda (01)
Identificación de
lamina
Coloración del Extendido para Hansen:

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Pasos Ziehi Neelsen Tiempo Descripción
4. Coloración Fucsina 10 min Cubrir la lamina en su

principal totalidad con el colorante
con mechero flamear
hasta emisión de vapores
evitando ebullición,
adicionar colorante si es
necesario
Dejar enfriar y lavar con NA NA Hasta eliminación
agua completa del colorante.
Descartar el' desecho en
frasco de pared dura (no
vidrio) con tapa
5. Decoloración Alcohol ácido 1 min Si no se completa la
decoloración se adicionar
alcohol ZN por un minuto
más. Descartar el
desecho en frasco de
pared dura (no vidrio) con
tapa
Lavar con agua NA NA NA
6. Coloración de Azul de 2 min NA
contraste metileno
Lavar con agua y dejar NA NA NA
secar para observar al
microscopio con
objetivo de 1 OOx
LECTURA
La lectura se realiza según la escala semicuantitativa, y se procede a elaborar el informe del índice
bacilar, que corresponde al cálculo aritmético de las cruces encontradas en cada una de las seis
muestras.
• Registre el numero de bacilos que se encuentran por campo microscópico en una cuadricula
delOxiO
6 Informe de acuerdo a la escala semicuantitativa
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ESCALA SEMICUANTITATIVA
NEGATIVO No se encuentran B.A.A.R en cien campos microscópicos
observados o en 10 minutos de observación.
+ (Una Cruz) Menos de un B.A.A.R por campo, en 100 campos
++ (Dos Cruces) 1 a 10 B.A.A.R por campo, en 50 campos microscópicos
observados.
+++ (Tres Cruces) Más de 10 B.A.A.R por campo, en 20 campos
Ejemplo:
4300000000
0000400200
2030000000
0000400000
0200000000
0000006000
0 O O O O O O O O O
0000000000
o o o o o 0 0 0. 0 0
0000000000
Promedio bacilos/campo = sumatoria de bacilos - 100 campos

100 campos
Promedio bacilos/campo = 30 = 0.3 equivale a (+)
100 campos
Procedimiento para el cálculo del índice bacilar:
Registre el número de cruces de cada muestra, de acuerdo con la escala anterior.

Indice bacilar (IB): es el promedio aritmético de las cruces encontradas en cada una de las muestras
leídas. Totalice el número de cruces de cada muestra y divida por 5.
Ejemplo:
Linfa del lóbulo derecho (++)

Linfa del lóbulo izquierdo (++)
Linfa del codo derecho o lesión. (-)
Linfa del codo izquierdo o lesión (+)
Linfa de rodilla derecha o lesión (-)
Linfa de rodilla izquierda o lesión (+)
IB= 2+2+0+1+0+1 = 1.0
6
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El rango del índice bacilar cuando es positivo oscila entre 0.16 (1/6) hasta 3.0 (15/6), si se
utilizan seis muestras
Informe:
1. Multibacilar (MB): IB mayor de cero

2. Paucibacilar (PB): IB igual a cero
La presencia de globias en cualquiera de las muestras indica una cantidad de bacilos, por
la cual se informara 3 cruces. En el paquete de bacilos el recuento es posible y debe
realizarse; en las globias el recuento es imposible.
Resultados falsos positivos Resultados falsos negativos

Precipitado de colorantes no filtrados Toma de muestra inadecuadas
Fibras y polen Extendidos delgados
Trasferencia de bacilos de un extendido a Errores en la técnica de coloración
otro cuando no se limpia el objetivo de
inmersión entre lámina y lámina.
Error administrativo Conservación inadecuada de los extendidos ya
coloreados
Observación microscópica inadecuada
Error administrativo
8.COLORACION DE GRAM
COLORACION DECOLORACION COLORACION DE CONTRASTE
Recoger muestras. Agregar acetona y Agregar fucsina de gram y
esperar 15 esperar 15 segundos. Este
segundos (parte colorante dejará de color rojizo
critica de la las bacterias gram-negativas.
coloración)
Hacer el extendido en forma rectangular Enjuagar con Enjuagar con agua.
agua.
Dejar secar a temperatura ambiente. Observar al microscopio óptico a
lOOx con aceite de inmersión.
Fijar la muestra al calor (flameado 3
veces aprox.)
Agregar cristal violeta y esperar 1 mm.
Todas las células gram-positivas y gram-
negativas se tiñen de color azul-púrpura.
Enjuagar con agua

Agregar luciol y esperar entre 1 minuto
Enjuagar con agua. .

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SOCLyL DEL
9.MUESTRAS PARA HONGOS CON KOH AL 40%

MATERIALES
UÑAS PIEL CUERO CABELLUDO LESIONES MUCOSAS HERIDAS DE PIEL

• Cajas de • Láminas de vidrio limpias • Láminas de vidrio
Petri estéril • Cajas de Petri • Cajas de Petri estéril • Bisturí limpias,
• Bisturí estéril • Bisturí estéril • Hisopo estéril • Bisturí
estéril • Bisturí estéril • Pinzas. • Asa bacteriológica • Hisopo estéril,
• Pinzas. (descartable) • Asa bacteriológica
(desca rtable)
PROCEDIMIENTO
Se realizará
intenso raspado
de la piel, con
hoja de bisturí en
la zona afectada.
En lesiones
topografiadas en
La toma de piel glabra (cara,
material se cuello, brazos,
Se realizará raspado de la zona
realizará 1
piernas, pies,
afectada con hoja de bisturí, el Si las lesiones presentan
colocando la entre otros); se
material así obtenido se secreciones abundantes,
punta del seleccionará
Para realizar la toma' de colocará sobre la lámina de se puede realizar
bisturí por preferentemente,
material en las tiñas de cuero vidrio y se extenderá aspirado con jeringa
debajo de la las zonas en la
cabelludo, se recolectarán suavemente con movimientos estéril y enviar
lámina que se observen
escamas de la zona alopécica, concéntricos, se repetirá el rápidamente al
ungueal Y bordes
mediante raspad9 intenso procedimiento hasta realizar 2, laboratorio (1-2 hrs). De
raspando sobreelevados,
con hoja de bisturí; luego se éstas se destinarán para lo ¿ontrario se tomarán
firmemente; eritematosos
observarán los pelos que coloraciones; si el material es muestras raspando con
tratando de descamantes, o
estén clínicamente afectados abundante se colocará entre hoja de bisturí
llegar al en la periferia de
y se extraerán los mismos lámina y laminilla para preferentemente en los
límite entre las lesiones y en
utilizando las pinzas, observación en fresco, si es bordes de la lesión para
la zona sana aquellos casos en
escaso se puede agregar una la realización de frotis
y la afectada los que
gota de suero fisiológico para para examen directo.
visualizado presenten
la realización del mismo
clínicamente. ampollas se
seccionará el
techo de la
misma. Las
escamas de piel
recolectadas, se
colocarán en
cajas de Petri
estériles.
o
2 Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio,
LA 2 Si la toma de la muestra no se realiza en el laboratorio, debe
mn debe enviarse dentro de las 2-4 horas siguientes,
enviarse dentro de las 24 horas, manteniéndose a temperatura
< o ambiente
manteniéndose la muestra refrigerada a 42C en este lapso
de tiempo.
Fn
Se observa el fresco con KOH al 10-40% al microscopio con objetivo de 40X en búsqueda de estructuras micóticas (levaduras,
LECTURA
micelios y pseudomicelios).
Al examen directo con KOH, se observan estructuras micóticas.

INTERPRETACION
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flVltE.'t*SO&tS*. 0F3. t2TAOO
10.TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN (ÁCIDO RESISTENTE), MODIFICADA PARA COCCIDIOS
Esta técnica es útil en la identificación dé ooquistes de coccidios como Criptosporidium, Isospora y

Ciclospora, que son difíciles de detectar con coloraciones rutinarias.
Esta tinción de Ziehl Neelsen modificada no requiere el calentamiento de los colorantes. Puede
utilizarse el sedimento concentrado de heces frescas o preservadas en formo¡.
Reactivos de la coloración:
Se efectúan 4 pasos en el proceso con diferentes reactivos
a. Metanol absoluto.
b. Alcohol ácido: 10 ml de ácido sulfúrico mas 90m1 de etanol absoluto, se debe almacenar a
temperatura ambiente.
c. Carbol fucsina
d. Verde de malaquita al 3%:
Disolver 3g de verde de malaquita en lOOmI de agua destilada, se debe almacenar a
temperatura ambiente.
Procedimiento de la tinción:
a. Preparar un frotis con una a dos gotas del espécimen fecal sobre un portaobjetos y dejar
secar (la preparación no debe quedar demasiado gruesa).
b. Fijar con metanol absoluto por 30 segundos.
C. Colorear con carbol fucsina por un minuto.
d. Lavar con agua destilada y escurrir.
e. Dejar secar el portaobjetos por cinco minutos.
f. Montar la preparación con un cubreobjetos usando medio de montaje
g. Examinar 200 a 300 campos usando el objetivo de 40x y/o realizar lectura en lOOx.
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a. PRUEBAS ESPECIALES
7.6.1 TSH NEONATAL
1. Verificar la calidad de las muestras de acuerdo a lo estipulado por el Instituto Nacional de Salud
"Tamizaje neonatal de hipotiroidismo congénito"
2. Revisar los datos demográficos de la muestra a procesar que estén completamente diligenciados
3. Realizar lista de trabajo en athenea con el fin de verificar las muestras pendientes por resultados
con las muestras existentes para procesar
4. Atemperar los reactivos 30 minutos antes de iniciar el procedimiento
5. La cámara húmeda en el horno incubador debe colocarse 24 horas antes del procesamiento
6. Las puntas múltiples a usar deben ser de acuerdo a la marca de la pipeta automática
7. Verificar el normal funcionamiento del lavador y lector de microelisa: revisando fuente de energía
8. Realizar rutina diaria de los equipos a utilizar
9. Realizar el procesamiento de los controles y de las muestras cumpliendo las normas de
bioseguridad
10. Cumplir lo estipulado en el inserto de la casa comercial en la preparación de los reactivos de
trabajo
11. Limpiar el equipo lavador
12. Desconectar los equipos de la fuente de energía
13.Almacenar las muestras procesadas durante 3 meses y enviar mensualmente el 10% de las
normales procesadas y el 100% de las que el resultado sea superior a 15 mUl/L sangre(cordon) o
10 mUI/L sangre (talon) a la secretaria de salud departamental
14.Ingresar los resultados obtenidos a la base de datos del laboratorio y validarlos
15. Realizar el control de calidad externo de acuerdo al cronograma
16. Archivar los resultados en sus respectiva AZ
Lineamientos:
y' Almacenamiento de las pruebas:

• Intercalar las muestras secas, garantizando que no coincidad las muestras de una tarjeta con
las muestras de otra
• Colocar las tarjetas intercaladas dentro de una bolsa metalizada (impermeable y de cierre
hermético) con desecantes
• Guardar en refrigeración (2-8°C) hasta el momento de la medición de TSH neonatal o hasta el
envío al laboratorio que procesa
y' Completo diligenciamiento
/ Oportunidad de la entrega dé resultados para iniciar tratamiento
/ Envío oportuno de la información la notificación mensual por parte del Laboratorio y la
participación en el programa de evaluación indirecta.
7.6.2 VI
Lineamientos:
/• La primera prueba que se realiza en el laboratorio es una prueba presuntiva que en este caso
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será la prueba rápida (inmunocromatografia), pero podría realizarse por otra técnica ELISA,
electro quimioluminiscencia u otra y también será una prueba presuntiva.
/ Se .debe tener en cuenta la generación de la prueba empleada si es de tercera o cuarta
generación e informar en el resultado
/ Los resultados de las pruebas presuntivas deben ser informadas con la aclaración en el
informe que se trata de un prueba presuntiva y para la confirmación se debe tomar otra
muestra de sangre y procesar con técnica diferente de la primera siguiendo las
recomendaciones de la Guía de Práctica Clínica para el manejo del VIH del Ministerio de
Salud y Protección Social
/ Si la prueba presuntiva es Reactiva la misma muestra procesada en el laboratorio debe ser
enviada al Labóratoriode Salud Publica en tubo primerio con el formato del LSP para control
de calidad y al ficha de consentimiento informado
/ El laboratorio clínico no debe esperar los resultados del control de calidad enviado al LSP, el
Laboratorio debe informar cada prueba en el momento de obtener sus propios resultados o en
caso de ser enviada a un laboratorio de referencia una vez le sean remitidos los resultados
debe informar.
/ Las muestras son recibidas en el LSP de lunes a jueves de 8 am a 11 30 am y de 2 pm a 5
pm. El día de proceso de la prueba es el viernes de cada semana
/ El LSP procesa por duplicado la muestra
/ Una vez sean recibidos los resultados del LSP estos son de uso exclusivo del laboratorio y no
se deben entregar a los pacientes o equipo de salud
Se sugiere para no perder la trazabilidad de la información y el cumplimiento del algoritmo para el
diagnóstico de VIH por Laboratorio, que para las pruebas presuntivas de VIH reactivas, el resultado
de la segunda prueba queden registrados en el sistema Ínterno de información. Además es
importante restringir el acceso y la generación de copias controladas de esta prueba.
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laboratorio clínico Páaina 44 de 51
VIH 1/2
Anticuerpos frente VI1-11/2
VALORES
DE
FUNDAMENTO MUESTRA TECNICA RESULTADOS LIMITACIONES REFERENCIA
Resultado falso no reactivo

1,Niveles bajos de Anticuerpo (seroconversión
por debajo del límite de detección de la prueba,
infección con una variante del virus que no se
detecta fácilmente con la configuración del
ensayo
2.Anticuerpo frente a VIH en pacientes que no
reaccionan frente a los antígenos específicos de
lnmunoanalisis la prueba
cualitativo invitro 3.Personas infectadas que tomen medicación
SUERO /
de lectura visual antirretroviral
PLASMA Reactivo! No
para la detección inmunocromatografia Las muestras reactivas deben volverse a ensayar
SANGRE No reactivo reactiva
de anticuerpos con otro método
TOTAL
frente a los virus Resultado falso no reactivo
VIH-1 Y VIH -2 1.Niveles bajos de Anticuerpo (seroconversión
por debajo del límite de detección de la prueba,
infección con una variante del virus que no se
detecta fácilmente con la configuración del
ensayo
2.Anticuerpo frente a VIH en pacientes que no
reaccionan frente a los antígenos específicos de
la prueba
3.Personas infectadas que tomen medicación
antirretroviral
/ Las muestras reactivas deben volverse a ensayar
con otro método
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Manual de Procedimientos técnicos de Documento. Controlado
laboratorio clínico Páaina 45 de 51
7.6.3 HEPATITIS
PRUEBAS DE HEPATITIS
Anticuerpos contra el antigeno de

Antigeno de superficie de la
Hepatitis A: HAV IgG/lgM superficie de la Hepatitis B: Anti-
Hepatitis B: HBsAg
HBs
o
1-
z Prueba Inmunocromatografia Prueba inmunocromatografia
w
Prueba inmunocromatografia cualitativa para la detección cualitativa para la detección de cualitativa para la detección del
< diferencial de anticuerpos lgG e lgM frente al virus de la anticuerpos frente al antigeno de antigeno de superficie de la
Z hepatitis A en suero o plasma humano. superficie del virus de la hepatitis B Hepatitis B en suero o plasma
en suero o plasma humano humano
Suero o plasma plasma o suero plasma o suero -

MUESTRA
inmunocromatografia inmunocromatografia inmunocromatografia

TECNIA
o
o
Negativo o positivo : ejemplo lgM positivo, lgG positivo o lgG
positivo o negativo positivo o negativo
vi e lgM positivo
'u
Limitaciones de la prueba:1. Para el diagnóstico es necesario

realizar pruebas adicionales. 2. un resultado negativo se Limitaciones de la prueba: Un Limitaciones: un resultado negativo
u.'
z puede obtener cuando el nivel de anticuerpos lgGJ lgM frente resultado negativo no excluye la no excluye la posibilidad de una
o al virus de la Hepatitis A esta por debajo del limite de posibilidad de que exista infección infección por el virus de la hepatitis
detección de la prueba o no estan presentes en el estadio de por el virus de la Hepatitis B. Se B. Se requiere de pruebas
la infección al momento de tomar la muestra. 3. El requiere de pruebas adicionales para adicionales para el diagnóstico de la
procedimiento, precauciones e interpretación de la prueba confirmar el diagnóstico hepatitis B
deben ser realizados de manera estricta
El diagnóstico debe ser dado por el

'u LI
médico luego de haberse evaluado
Negativo Negativo.
OZ todos los hallazgos clínicos y de
ce
0w
u.
laboratorio.
>
**Revisar inserto de la prueba antes de iniciar procedimiento
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laboratorio clínico• Páaina 46 de 51
HEPATITIS
PERFIL SEROLOGICO: RESUMEN
AGUDO CRONICO VACUNADO CURADO
HB5Ag + + - -
Core lgM + - - -
CorelgG - + - +
AntiHBs - - + +
HBeAg positivo: Alta replicación, muy infectante
HBeAg negativo: + AntiHBe: seroconvirtio, no replicador,
mutante precore/ promotor precore
7.6.4 DENGUE
Las pruebas rápidas de Dengue no pueden ser utilizadas para este diagnostico, este debe ser
realizado con Aislamiento Vira¡, RT-PCR, Antígeno NS1 Elisa, Dengue IgM por Elisa según los
lineamientos dados por el Instituto Nacional de Salud y el estadio sintomático del paciente como lo
estipula el Protocolo de Dengue.
7.6.5 CHAGAS
Diagnóstico inicial EIA de un principio antigénico:

1. Antígenos extractos totales
2. Antígenos Recombinantes
3. Antígenos de péptidos sintéticos
Segunda prueba: Realizar EtA de un principio Antigénicos diferente a la primera prueba
Tercera Prueba: En caso de no concordancia entre la primera y segunda con Mayor especificidad IFI
o lnmunoblot. La pruebas rápidas no pueden ser utilizadas para este diagnostico sino que se debe
seguir tos lineamientos dados por el Instituto Nacional de Salud.
7.6.6 ZIKA
El diagnostico se hace por nexo epidemiológico excepto en la población de riesgo <1 año, >65 años,
gestantes, paciente con alteraciones SNC y paciente con comorbitidades.
Para el diagnostico de Zika en el neonato con malformación congénita las muestras a envío según protocolo
INS son cordón umbilical, Placenta en solución salina, suero de la Mama y suero del bebe.
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7.7. COPROANALISIS
a. Verificar la identificación de las muestras con el numero consecutivo registrado en el sticker
el cual está contenido en la tapa del frasco recolector
b. Verificar la cantidad de la muestra sea suficiente para su análisis (tamaño de un frijol)
c. Examen físico: Color y consistencia
d. Examen microscópico: En una lámina portaobjeto se colocan dos gotas, una de solución
salina y otra de lugol parasitológico, luego se toma común palillo la muestra de materia fecal,
se debe escoger la parte que tenga elementos anormales como sangre, moco, etc., para que
así quede una muestra representativa, se homogeniza en la lámina primero en la solución
salina y luego en el lugol, se le colocan los cubreobjetos. La suspensión no debe quedar muy
gruesa pero tampoco muy delgada. Las muestras liquidas se colocara una gota entre lamina y
laminilla. Realizar lectura en microscopio con objetivo de lOx para observar huevos de
parásitos, larvas y en 40x para observar demás células, quistes, trofozoitos.
e. Registrar el resultado en el sistema buscando por el numero consecutivo del paciente y
validar resultados realizando correlación clínica
f. Lectura:
COLOR AMARILLA, CAFÉ, NEGRO, VERDE, ROJA
ASPECTO MUCOIDE, SANGUINOLENTA
CONSISTENCIA LIQUIDA, DIARREICA, BLANDA, DURA,
PASTOSA
PARASITOS INTESTI NALES(DESPLEGAR NO SE OBSERVAN PARÁSITOS
LOS QUE ESTAN EN ATHENEA) INTESTINALES EN LA MUESTRA
ANALIZADA
LEVADURAS, ESTRUC. DE LA DIGESTION 1+, 2+, Y 3+.
LEUCOCITOS, HEMATI ES OCASIONALES
1-3XC
4-7XC
8-11XC
12-15XC
MAYOR DE 16XC
INCONTABLES
FLORA BACTERIANA NORMAL O AUMENTADA
SANGRE OCULTA: (MÉTODO GUAYACO): POSITIVA Ó NEGATIVA
HUEVOS, QUISTES, LARVAS, PRESENCIA O POSITIVO
TROFOZOITOS (DESPLEGAR LOS QUE
ESTAN EN ATHIS)
BLASTOCYSTIS HOMINIS OCASIONALES: 1-10XC
POCOS: 10-20XC
MODERADOS: 20-30XC
ABUNDANTES: MAYOR DE 30XC
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• . ,
laboratorio clínico Pagina 48 de 51
FLUJOGRAMA DEL PROCEDIMIENTO DE PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
No. FLUJOGRAMA ACTIVIDAD RESPONSABLE
1
INICIO
Y Añadir agua destilada en la

Auxiliares de Laboratorio clínico
RECONSTITUIR EL proporción indicada
MEDIO DE CULTIVO
2 Calentar hasta disolver

VAR A
LLEVAR
completamente agitando
EBULLICION Auxiliares de Laboratorio clínico
suavemente.
ESTERILIZAR EN Esterilizar a 121 C por 15

AUTOCLAVE minutos, dejar enfriar a 4550
Auxiliares de Laboratorio clínico
C (agregar componentes si
aplica)
4
SERVIR EL MEDIO DE Verter en placas de Petri y dejar
CULTIVO que solidifique y enfríe
completamente. Auxiliares de laboratorio clínico
Rotular con la fecha y el
nombre del medio cada caja
5 ALMACENAR EL
ri1Pflifl np (1 II TRIfl
Almacenar las cajas del medio
de cultivo envolver en papel Auxiliares de laboratorio clínico
vinipel y refrigerar de 2 a 8 °C
6 De cada lote de medio de

REALIZAR CONTROL cultivo tomar una caja e incubar
,- ri inan a 37 C por 24 horas y registrar
_____ en el formato respectivo Bacteriólogo
MAN-280-1 7-V4
Vigencia:
LABORATORIO CLINICO
05/06/2019
FLUJOGRAMA DEL PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA EN LAS SECCIONES DE
LABORATORIO CLINICO
No FLUJOGRAMA ACTIVIDAD RESPONSABLE
Distribuir las muestras en

cada sección verificando
sus criterios de
procesamiento Auxiliar de laboratorio y
Distribución de las Bacteriólogo
muestras
1
Verificar la calidad de las
muestras y cumplimiento a
2 Calidad de las condiciones de toma
la muestra
-. de muestra. En caso de
Bacteriólogo
SI no cumplirse: no se
procesara la muestra y se
NO
diligencia formato de
salida no conforme.
Procesar muestra Procesar la muestra de
acuerdo a la solicitud Bacteriólogo
médica
t
Registrar
rpsuiltrins
Registrar en el sistema los
resultados í validar
Bacteriólogo
realizando correlación
4 clínica
;uI
MAN-280-1 7-V4
Vigencia:
LABORATORIO CLINICO
05/06/2019
8. REGISTROS DE CALIDAD
RESPONSABLE
CODIGO REGISTROS DE CALIDAD TIEMPO DE RETENCION
ALMACENAMIENTO
Control de calidad de medios
FR 280-50 de cultivo Dueño de procesos Según TDR
Control de preparación de
FR-280-47 medios de cultivo Dueño de procesos Según TDR
NA Hojas de trabajo Dueño de procesos Según TDR
9. CONTROL DE CAMBIOS
FECHA VERSIÓN CAMBIOS REALIZADOS RESPONSABLES

Jefe de oficina de calidad.
03/03/2015 1 Documento Inicial Bacterióloga
17/05/2017 2 Malaria Chagas Fase Aguda

Bacterióloga
Hepatitis, Coproanalisis
16/05/2018 3 Se realizó actualización al

procedimiento tecnico de Jefe de oficina de calidad.
Programa de malaria, Bacterióloga
leishmaniasis y Chagas fase
aguda.
04/06/2019 4 Se realizó actualización al
procedimiento técnico, en el -
montaje de antibiogramas, y Bacterióloga de la sección
reporte de coproanálisis Líder de Laboratorio Clínico
Se realiza procedimiento de
Hemoclasificación en lamina y
tubo
10.. PUNTOS DE CONTROL
• Revisión de lista de chequeo de los equipos

• Verificación de la calidad de las muestras cumpliendo las condiciones de toma de
muestras
• Revisión de histórico y transcripción de resultados antes de validar
• EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO
MAN -280-17-V4
LABORATORIO CLI NICO
05/069
11. BIBLIOGRAFIA
• Prácticas de laboratorio microbiología general. Méjico 2012 Universidad autónoma

metropolitana
• Catálogo medios de cultivo oxoid, 2012.
• ENF INF MICROBIOL 209 29(2) 66-69 Determinación VSG micro método
• Manual de protocolos de microbiología general. Cuervo Mulet, Raul Alberto. Universidad de
San Buenaventura, seccional Cali. 2010.
• Manual básico de microbiología cultimed. Panreac química SA.2003
• Diagnóstico Bacteriológico de Tuberculosis por baciloscopia. Direccion de redes en salud
pública. 24 de noviembre de 2014
• Insertos reactivos Diasys
• Procedimientos en Microbiología Clínica. Sociedad Española de enfermedades infeccionsas y
Microbiología Clínica 2010 SIEMC.
• Ficha técnica de hemoclasificadores para sistema ABO Rh Noviembre 12/2006

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EMPRESA SOCIAL DEL ESTADO

Elaborado Revisado Aprobado

Zenidia San:bria Vega

Ls Ferna da Clavija B. Lo - a Valencia Zuleta

Fecha: 04/06/2019 echa: 05/06/2019 / /Fecha Vigencia: 05/06)2019

Establecer los lineamientos técnicos y científicos para el procesamiento de las muestras

Cada dueño de proceso es responsable de verificar el cumplimiento de las acciones

La Subdirección Administrativa es responsable de suministro de insumos, adecuación de

3. DEFINICIONES Y TERMINOLOGIA APLICABLE

Analito: Sustancia o constituyente para la cual el laboratorio hace la prueba.

Constitución política de Colombia

Resolución 2003 del 2014: Sistema Único de Habilitación.

5.1 Talento Humano.

5.2 Maquinaria y Tecnología.

5.3 Materiales o Logísticos.

5.4 Metodológicos. Manual actual

7. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO:

hCG RPR TP PCR FR

Positivo No reactiva Positivo valor estimado según

Resultado e interpretación de las pruebas serológicas

Se realiza para la determinación de los aglutinógenos A Y B en los

CARACTERISTICAS MACROSCOPICAS: Color azul para ANTI-A color

Prueba rápida sobre láminas:

• Haga una suspensión de hematíes al 5-10% en solución salina

ESPECIFICACIONES TECNICAS DE HEMATOLOGIA PARA EL USO DE

1. Realizar la rutina diaria de equipos biomédicos siguiendo la lista de chequeo correspondiente

• Coloración de FIELD = ROMANOWSKY MODIFICADO

La coloración para gota gruesa consta de dos pasos: pre-coloración y coloración.

• Verificar que la muestra este completamente seca para que no se desprenda

• Después de la deshemoglobinizacion, la coloración permite la diferenciación de las estructuras parasitarias. El

CONTROL DE CALIDAD INTERNO DE COLORACION:

PRUEBA RAPIDA: MALARIA AgP.fIP.v.

Prueba rápida en un paso para la determinación de Ag Malaria HRP-11 (P.f) y pLDH(P.v)

Muestra: Sangre total + heparinao EDTA o Citrato de sodio

5ensibilidad de la Prueba: Recuento de parásitos por microlitro de sangre mayor de 5000

_ectura, cuantificación e interpretación de la gota gruesa

• No. de parásitos x 8.000 leucocitos/mm3 de sangre

o Resultado: # parásitos/microlitro o mm3 de sangre

Recuento por parasitemia

Criterios para reportar parasitemias mixtas

500 parásitos x 8000 leucocitos/mm3

o Negativo. No se observan hemoparásitos en la muestra analizada.

• Recuento por parasitemia: 3.192 TROFOZOITOS (Asexuados)/ uL o mm3 de sangre.

• Nota: Se observaron trofozoitos maduros en la muestra examinada.

o Positivo para P. vivax

La sensibilidad del examen directo es de 85 a 90% en pacientes cuya evolución no supera

Incisión y raspado del Borde Activo de la sección

Este inicia el proceso de deshemoglobinizacion sin alterar la morfología del parasito.

• Verificar que la muestra este completamente seca para que no se desprenda

Después de la deshemoglobinizacion, la coloración permite la diferenciación de las estructuras

Positivo: Cuando se encuentra 1 o más amastigotes al recorrer toda la lamina

Por protocolo se debe realizar otro frotis

Se remitirá con el diagnóstico presuntivo y la ficha respectiva de la supervisión indirecta para

Métodos Parasitológicos Directos.

METODOS PARASITOLOGICOS INDIRECTOS:

Microhematocrito o microstrout: Se obtiene una muestra de sangre en un tubo capilar o

MICROMETODO: Tomar 50 pL de heparina y 500 pL de sangre total venosa en un vial

LINEAMIENTOS PARA EL DIAGNOSTICO POR LABORATORIO DE FASE AGUDA.

Un resultado POSITIVO en un método parasitológico directo confirma la infección, pero un

7.3 QUIMICA SANGUINEA

T AMBIENTE REFRIGERACION CONGELACION

a Realizar rutina diaria de equipos y control de calidad interno

REPORTES DE LABORATORIO PARCIAL DE ORINA

PREPARACION DE MEDIOS DE, CULTIVO