Análisis cromosómico Biología molecular Citogenética

Unidad-4.
pdf
Aurum
Biología molecular y citogenética
1º Anatomía Patológica y Citodiagnóstico
INSTITUTO SUPERIOR F.P. CLAUDIO GALENO DE MADRID
Reservados todos los derechos.

No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Unidad 4. Citogenética y
análisis cromosómico
Biología molecular y Citogenética
Profesor: Carmen Miranda
www.fpclaudiogaleno.es
Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
a64b0469ff35958ef4ab887a898bd50bdfbbe91a-5222157
Unidad 4. Citogenética humana y análisis cromosómico
Introducción
El análisis citogenético consiste en la

visualización de los cromosomas. Es decir, en
la obtención del cariotipo de una persona con
el fin de detectar la presencia de alteraciones
en el número o en la estructura de los
cromosomas.
Objetivos
Los objetivos de aprendizaje que se pretenden alcanzar con la visualización de los siguientes
contenidos son:
Cariotipo de especie: formado por el conjunto normal de

1. Cariotipos cromosomas que caracteriza a una especie determinada.
Con esta patrón hay que comparar para detectar
mutaciones.
La Citogenética tiene como principal Cariotipo de individuo o cariotipo constitucional: conjunto

de cromosomas representativos del individuo, es decir, el
herramienta el análisis cromosómico, cuya
que contiene el mayor número de células de su organismo.
función es obtener el cariotipo de un individuo.
Cariotipo de célula: conjunto de cromosomas que contiene
una célula. Puede diferir del individuo, por ejemplo en
células tumorales.
Es el conjunto de cromosomas de una

especia, un individuo o una célula ordenados
de acuerdo con su tamaño y morfología
2. Cultivo de linfocitos
El cariotipo constitucional estándar
se obtiene a partir de una muestra
Existen 4 fases:
de sangre periférica
Cultivo de linfocitos
Obtención de extensiones cromosómica en metafase
Tinción de los cromosomas con técnicas de bandeo
Análisis de los cromosomas teñidos
Muestra: sangre periférica anticoagulada con heparina

Medio de cultivo
Recipiente: frasco roux o tubo para cultivo
2. Cultivo de linfocitos
Procedimiento
1. Siembra Proteína que se une a los linfocitos T y provoca su
2. Adición de fitohemaglutinina desdiferenciación a linfoblastos, los cuales empiezan a
3. Incubación proliferar
4. Detención de la mitosis en metafase: colchicina
Droga antimitótica que detiene las mitosis en

metafase por destrucción de los microtúbulos
del huso acromático
3. Obtención de extensiones cromosómicas en metafase
1. Obtención de las células del cultivo: el cultivo pasa a un tubo

Falcon, se centrifuga y se elimina el sobrenadante, dejando una
pequeña cantidad en la que se resuspende del botón celular o pellet
2. Choque hipotónico e incubación: se añade NaCl y se incuba 5-20
minutos a temperatura ambiente o 37ºC. Las células se hinchan. En
las células en las que se ha detenido la división en metafase, los
cromosomas se destruyen por todo el volumen de la célula
separándose.
3. Obtención de extensiones cromosómicas en metafase
3. Fijación y lavado: se fijan las células y se deja 5 minutos a

temperatura ambiente. Después se centrifuga y se descarta el
sobrenadante, realizando 2-3 lavados adicionales, hasta
obtener un botón celular blanco y limpio. Al chocar la gota con el cristal las células se
4. Obtención de extensiones por goteo: para realizar las rompen y los cromosomas se dispersan sobre el
extensiones, se carga la suspensión celular en una pipeta cristas, lo que permitirá la observación de
Pasteur y se dejan caer una o dos gotas sobre un portaobjetos metafases con cromosomas separados.
limpio y húmedo desde una altura aproximada de 30cm.

5. Los portaobjetos de dejan secar y están listos para su
tinción
4. Tinción de los cromosomas con técnicas de bandeo
Solución de Giemsa al 3% en 1. Digestión con tripsina: inmersión en una solución de

tampón fosfato a 6 7 durante 3- tripsinas durante un tiempo que dependerá de la
4 minutos y posterior lavado. concentración de la enzima, la temperatura de
incubación, y el grado de envejecimiento de la
preparación. Esta digestión se detiene mediante lavados
Los cromosomas se tiñen de manera con solución salina o PBS.
uniforme, lo que permite controlar la
calidad de las metafases antes de proceder 2. Tinción con Giemsa: inmersión
a las técnicas de bandeo
5. Análisis cromosómico
Consiste en el recuento y análisis cromosómico de metafases completas y el ordenamiento y

emparejamiento de una de ellas.
5. 1 RECUENTO Y ANÁLISIS CROMOSÓMICO DE

METAFASES COMPLETAS
Se analizan un mínimo de 20 metafases completas visualizadas con el objetivo 100X del

microscopio óptico.
Las metafases fotografiadas se someten a un análisis completo, comparando cada cromosoma
con su homólogo.
10
5. 2 ORDENAMIENTO Y EMPAREJAMIENTO
Se ordenan los cromosomas por parejas de homólogos, construyendo

un cariotipo.
Esto se realiza según las características morfológicas y el patrón de
bandasG.
11
5.3 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
Los cromosomas se ordenan según:

1. El tamaño: de mayor a menor
2. La posición del centrómero: primero metacéntricos, luego los
submetacéntricos, por último los acrocéntricos.
3. La presencia de constricciones secundarias.
12
5.3 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS
Los cromosomas se ordenan en ocho grupos:
GRUPO A: cromosomas 1, 2 y 3. Son lo más grandes. El 1 y 3 GRUPO E: 16, 17 y 18, submetacéntricos pequeños.
son metacéntricos y el 2 submetacéntrico GRUPO F: 19 y 20, metacéntricos más pequeños
GRUPO B: lo integran los cromosomas 4 y 5, grandes y GRUPO G: 21 Y 22, acrocéntricos más pequeños
metacéntricos Cromosomas sexuales: X e Y. El X es submetacéntrico
GRUPO C: cromosomas 6 al 12 submetacéntricos, medianos. mediano y el Y es acrocéntrico pequeño.
(Debería cromosoma X).
GRUPO D: 13, 14 Y 15, acrocéntricos de mayor tamaño.
13
5. 4 PATRÓN DE BANDAS G
Permiten la identificación inequívoca de todos los cromosomas, lo cual es

especialmente importante en el grupo C, por la gran similitud morfológica de
varios cromosomas.
El patrón estándar es de 350-400 bandas.
14
5. 5 ATOMATIZACIÓN DEL ANÁLISIS CROMOSÓMICO
Se realiza mediante plataformas de imagen, denominadas cariotipadores.
Procedimiento:
1. Captura y analizan imágenes de metafases
2. Clasifican automáticamente los cromosomas según su morfología y
patrón de bandas
3. Realizan el cariotipo
4. Generan un informe con los cromosomas ordenados y las alteraciones
detectadas.
https://www.youtube.com/watch?v=xeskkR0N6VE 15
6. Nomenclatura citogenética y fórmula cromosómica
Los resultados tras el análisis cromosómico se describen por escrito mediante la fórmula cromosómica.
Pautas:
1. Sin anomalías: cuando no existen, se inicia con el número total, una coma, y el cromosomas
2. Anomalías numéricas: se reflejan en la fórmula
Monosomías: con el signo
Trisomías: con el signo +
3. Anomalías estructurales: abreviatura de la alteración seguida del número del cromosoma afectado entre paréntesis y de
la banda o bandas afectadas por la mutación.
4. Mosaicismos: se inicia con y se describen las líneas celulares, empezando por las anormales, que se separan por el
signo /.
16
7. Cariotipo de alta resolución
Se obtiene a partir de cromosomas en profase tardía o

prometafase. Aquí el grado de condensación es menor, por
lo que al aplicarles una técnica de bandeo G se obtiene un
mayor número de bandas. Con esta estrategia se aumenta
la sensibilidad del cariotipo.
17
8. Citogenética y diagnóstico prenatal
Su realización está indicada en las siguientes situaciones::

Resultado alterado de triple cribado o screnning (bioquímico y ecográfico) en el primer trimestre de
gestación
Retraso en el crecimiento intrauterino en el feto
Observación de anomalías ecográficas en el feto
Antecedentes de cromosomopatía balanceada en un progenitor
Cariotipo de líquido amniótico: se basa en la

Cariotipo de vellosidad coriónica: se realiza una
presencia en este de células de descamación de las
biopsia, transcervical o vía transabdominal.
membranas que rodean al feto y al propio feto.
18
9. Citogenética y cáncer
En muchos casos, las anomalías cromosómicas constituyen

auténticos biomarcadores, aportando información sobre el
diagnóstico, pronóstico, evolución y tratamiento en
enfermedades tumorales.
19
Puntos clave
Los puntos clave trabajados tras la visualización de los contenidos presentados podemos
resumirlos en:
Referencias bibliográficas
21
www.fpclaudiogaleno.es
22

Análisis cromosómico Biología molecular Citogenética

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Análisis cromosómico Biología molecular Citogenética

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Unidad-4.

Biología molecular y citogenética

1º Anatomía Patológica y Citodiagnóstico

INSTITUTO SUPERIOR F.P. CLAUDIO GALENO DE MADRID

Reservados todos los derechos.

Profesor: Carmen Miranda

El análisis citogenético consiste en la

Cariotipo de especie: formado por el conjunto normal de

La Citogenética tiene como principal Cariotipo de individuo o cariotipo constitucional: conjunto

Es el conjunto de cromosomas de una

Muestra: sangre periférica anticoagulada con heparina

4. Detención de la mitosis en metafase: colchicina

Droga antimitótica que detiene las mitosis en

3. Obtención de extensiones cromosómicas en metafase

1. Obtención de las células del cultivo: el cultivo pasa a un tubo

3. Obtención de extensiones cromosómicas en metafase

3. Fijación y lavado: se fijan las células y se deja 5 minutos a

limpio y húmedo desde una altura aproximada de 30cm.

4. Tinción de los cromosomas con técnicas de bandeo

Solución de Giemsa al 3% en 1. Digestión con tripsina: inmersión en una solución de

Consiste en el recuento y análisis cromosómico de metafases completas y el ordenamiento y

5. 1 RECUENTO Y ANÁLISIS CROMOSÓMICO DE

Se analizan un mínimo de 20 metafases completas visualizadas con el objetivo 100X del

Se ordenan los cromosomas por parejas de homólogos, construyendo

5.3 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS

Los cromosomas se ordenan según:

5.3 CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS DE LOS CROMOSOMAS HUMANOS

Los cromosomas se ordenan en ocho grupos:

Permiten la identificación inequívoca de todos los cromosomas, lo cual es

5. 5 ATOMATIZACIÓN DEL ANÁLISIS CROMOSÓMICO

Se realiza mediante plataformas de imagen, denominadas cariotipadores.

6. Nomenclatura citogenética y fórmula cromosómica

7. Cariotipo de alta resolución

Se obtiene a partir de cromosomas en profase tardía o

8. Citogenética y diagnóstico prenatal

Su realización está indicada en las siguientes situaciones::

Cariotipo de líquido amniótico: se basa en la

En muchos casos, las anomalías cromosómicas constituyen

También podría gustarte