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Botella Dorta, M.
EL AGUA EN EL LABORATORIO
CARACTERSTICAS GENERALES DEL AGUA
Cuando hablamos de agua, en realidad nos estamos queriendo referir al agua en estado
lquido (porque tambin son agua el hielo y el vapor de agua). La molcula es la misma pero con distintos estados de agregacin.
El agua lquida, en principio, es incolora, inodora e inspida.
La molcula de agua est compuesta por tres tomos: dos de hidrgeno y uno de oxgeno.
Los tomos estn dispuesto de tal manera que forman un ngulo de 105 o tomando el oxgeno como vrtice del ngulo. Estamos ante una molcula polar porque hay acumulacin
de cargas negativas hacia el vrtice del oxgeno. Esa polaridad favorece la unin entre molculas mediante puentes de hidrgeno (fuerza electrosttica). Estamos ante uniones dbiles (ms dbiles que el enlace inico y covalente).
Las caractersticas del agua hacen que sea un excelente disolvente, pues puede disolver
sustancias polares o con carga inica.
TIPOS DE AGUA
Existen distintas formas de clasificar el agua. Los principales puntos de vista son tres:
1) Dureza
2) Parmetros fisicoqumicos
3) Parmetros biolgicos
DUREZA
En qumica, el agua calcrea o agua dura por contraposicin al agua blanda es aquella que
contiene un alto nivel de minerales, en particular sales de magnesio y calcio. Se da como lmite
para denominar a un agua como dura una dureza superior a 120 mg CaCO 3/L. Puede ocurrir que
propiamente no exista carbonato de calcio pero se calcula a partir de la suma de las concentraciones de calcio y magnesio (iones). Es decir, se expresa como cantidad equivalente de carbonato de calcio.
PARMETROS FISICOQUMICOS (PUREZA)
Tipo I o agua ultrapura. Se utiliza para cultivos celulares, absorcin atmica y HPCL
(high pressure liquid chromatography). Para todo aquello que requiera un mnimo de interferencias qumicas.
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Tipo II o de grado analtico. Se utiliza para los ensayos analticos (cuantitativos) y para
preparar la mayora de los medios de cultivo y reactivos.
Tipo III (osmotizada). Se utiliza para ensayos cualitativos, preparacin de algunos reactivos y medios de cultivo. Agua adecuada para ensayos generales y limpieza de material.
Tipo IV. Agua para mquinas de lavado (lavavajillas) o para autoclave.
Las aguas tipo III y IV se denominan en general de grado de laboratorio. Ver tabla en diapositivas
PARMETROS BIOLGICOS
El agua tambin se clasifica segn su calidad microbiolgica, es decir, segn la cantidad de microorganismos presentes. En este caso se clasifican en tipos A, B y C. La principal idea de esta
clasificacin considera la concentracin de microorganismos mesfilos aerobios
Mesfilo: microorganismos cuyas temperaturas ptimas de crecimiento estn entre 15 y 35 oC.
Gasta mucha energa, lo que hace que sea un procedimiento demasiado caro cuando
se necesitan grandes volmenes de agua.
DESIONIZACIN O DESMINERALIZACIN
Se hace pasar el agua a travs de unas resinas de intercambio inico. Es lo que dice: se
intercambian iones entre el agua y las resinas.
Las resinas toman cationes del agua y aportan al agua otro catin (H+) = intercambio de
cationes
Las resinas toman aniones del agua y aportan al agua otros aniones (OH-) = intercambio de aniones.
Los equipos de intercambio inico (desionizador) tienen dos tipos de resinas:
SMOSIS INVERSA
Se puede decir que ocurre lo contrario que en una smosis. En una smosis se consigue el
equilibrio por el paso de agua desde la disolucin diluida a la concentrada; en la inversa, pasa agua desde la concentrada hacia la diluida.
Se consigue aplicando presin sobre una disolucin concentrada (el agua que queremos purificar) separada mediante una membrana semipermeable de otra solucin menos concentrada.
Las membranas tienen un tamao de poro muy pequeo, de alrededor de 0,,0005 m de dimetro, y evita el paso de sales, sustancias orgnicas, pirgenos, virus y bacterias.
El equipo de smosis inversa puede tener varias configuraciones, dependiendo de la calidad
de agua de alimentacin, pero todos poseen una o varias membranas semipermeables a travs de las cuales se hace circular el agua. Como las membranas se van colmatando, requiere mantenimiento de limpieza y/o cambio (indicaciones del fabricante).
FILTRACIN
Consiste en el paso de agua a travs de una estructura que acta de tamiz o filtro. La calidad de la
filtracin es inversamente proporcional al tamao del poro del filtro.
ADSORCIN
La adsorcin es un proceso por el cual los tomos en la superficie de un slido, atraen y retienen molculas de otros compuestos. Estas fuerzas de atraccin son conocidas como fuerzas
de Van der Waals. Por lo tanto, al ser un fenmeno que ocurre en la superficie mientras mayor rea superficial disponible tenga un slido, mejor adsorbente podr ser.
Se utilizan como agentes adsorbentes el carbn vegetal activado (activado quiere decir que
se ha tratado para aumentar su superficie), arcillas, silicatos....
Mediante el paso de agua a travs de estas sustancias se logra principalmente la eliminacin
de impurezas orgnicas.
EL AGUA ULTRAPURA
El agua ultrapura no se puede obtener a partir de un solo proceso, se requiere la combinacin dems de uno de ellos para lograr la calidad deseada en lo fisicoqumico como en lo microbiolgico.
Un ejemplo de secuencia posible lo tienes en las diapositivas.
Por otro lado, una vez tengamos el agua ultrapura, hay que tener en cuenta que el agua almacenada pierde sus cualidades, por lo que el reciclado continuo es muy conveniente.
Tambin es un procedimiento mecnico, fsico o qumico que tiene por objeto eliminar
las sustancias externas depositadas o adheridas sobre una superficie.
La formacin de la espora en la bacteria se denomina esporulacin. No todas las especies son capaces de esporular. La bacteria que est esporulando se llama esporangio.
Las esporas son muy resistentes a las altas temperaturas, la desecacin, las radiaciones, los cidos El genoma de la espora es todoterreno
ESTERILIZACIN.- Es la destruccin de toda forma de vida microbiana, incluidas las esporas o formas de resistencia. Por lo tanto es la destruccin de todos los microorganismos,
incluidas las esporas.
Un objeto contaminado es aquel que tiene microorganismos (a los efectos de este tema y hablando de microorganismos)
Un objeto seguro es aquel al que se le han quitado la mayora o todos los microorganismos. La idea de seguridad depende de para qu se vaya a utilizar ese objeto.
Es imprescindible la limpieza previa del material para que la desinfeccin y la esterilizacin sean efectivas.
LIMPIEZA
IMPORTANCIA E IMPLICACIONES
La limpieza en un laboratorio es fundamental y forma parte de un protocolo adecuado de trabajo.
Las contaminaciones por falta de limpieza y cuidado pueden interferir en los resultados de un
experimento. Es necesario ser metdicos, ordenados y limpios para poder garantizar la fiabilidad
de un anlisis.
EJEMPLO 1
concentracin mnima que tiene que mostrar el deportista es de 4 g/mL de orina; es decir,
que por encima de esa cantidad, no podra competir.
Problema. El tcnico acaba el anlisis y da el resultado en el informe: Concentracin de X
en orina, despus de eliminar el error instrumental: 4,025 g/mL. El tcnico puede asegurar que hay un error debido a la falta de limpieza del material por parte del compaero que
lo utiliz en el experimento anterior. El deportista no puede competir por un error en el protocolo de trabajo.
Solucin. No hay solucin para este ensayo. Los anlisis antidopaje solamente se pueden
hacer una vez.
EJEMPLO 2
Situacin. Un paciente acude a urgencias con un dolor agudo. Los mdicos solicitan una
analtica del suero a los tcnicos del laboratorio ante las sospecha de la existencia de un
infarto agudo de miocardio (IAM). Entre otros marcadores piden los niveles de cretinkinasa
(CK). Se sabe que la CK se eleva al comienzo del IAM, da un pico mximo en un tiempo
determinado y luego desciende a niveles normales. Cuando alcanza el pico mximo, el valor de CK es un 5% superior a los valores normales.
Problema. El tcnico se da cuenta de que la vez anterior que us el material para la determinacin de CK no lo lav bien por falta de tiempo. El anlisis de un error. El tcnico solicita ms muestra de suero del paciente para repetir el anlisis.
Solucin. No hay solucin para este ensayo. La CK ha llegado a sus valores normales.
No se pudo diagnosticar adecuadamente el IAM.
PRINCIPIOS BSICOS
Agua.- En general las aguas en la naturaleza no son neutras, como lo seran si fueran totalmente puras, sino que son cidas o alcalinas dependiendo de las impurezas
que contengan. La acidez de las aguas se encuentra en menor proporcin en la naturaleza que la alcalinidad. Aparece en aguas superficiales con alto contenido de CO 2
disuelto, o en agua proveniente de minas. El agua cida es daina para las calderas y
para los esterilizadores debido a que produce corrosin de los metales. La dureza del
agua est dada por las cantidades de calcio y magnesio en solucin. El agua de preferencia para el lavado es el agua blanda (poco mineralizada).
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Detergente.- Compuesto que permite variar la tensin superficial del agua y producir
humectacin, penetracin, emulsin y suspensin de la suciedad. Su estructura est
compuesta por dos partes: una hidrfila (afinidad con el agua) y otra lipoflica (afinidad
con aceites), lo que permite formar puentes de agua y aceite, ayudando a remover la
suciedad. Segn su formulacin y uso, los detergentes adems pueden contener
compuestos cido base (cidos, neutros o alcalinos), estabilizantes, quelantes, enzimas, blanqueadores, colorantes, perfumes, solventes, secuestrantes, desinfectantes
(en este caso limpia y desinfecta a la vez) o espesantes. Son propiedades de un buen
detergente:
Alto poder dispersante. Capacidad de fraccionar (no matar) la suciedad compacta y reducirla a partculas muy pequeas.
PROCEDIMIENTOS DE LIMPIEZA
Es imprescindible una buena limpieza antes de desinfectar o esterilizar un material. Puede realizarse: de forma manual o bien utilizando mquinas (lavadoras automticas de material, cubetas
de ultrasonidos, lavapipetas).
LIMPIEZA MANUAL
Por frotacin.- Se lleva a cabo por arrastre mecnico de la suciedad con un cepillo, escobillones, estropajo empapados en una solucin jabonosa u otro detergente. De esta forma
lavamos tubos, probetas, matraces Erlenmeyer...
Aclarar el material a lavar con agua fra. Sumergir el material en disoluciones jabonosas adecuadas, eliminando la suciedad mediante la accin mecnica de cepillo, escobillones o estropajos, primero con agua fra. En este momento no debemos usar agua
caliente porque coagula las protenas de la materia orgnica y hace que se adhieran
ms.
Una vez retirada la suciedad ms gruesa, frotamos el material con agua caliente y detergente.
Las manchas de colorante que no se limpien con el proceso anterior pueden eliminarse con alcohol, o preparaciones de cido clorhdrico o ntrico al 60%. (Lo veremos
ms adelante pero para que vayas hacindote a la idea: 60g de soluto en 100 g de
disolucin)
Por inmersin.- De esta forma lavamos, aquello materiales delicados que no se pueden
frotar (por ejemplo los portaobjetos).
Para desengrasar los portaobjetos, antes de su utilizacin, se introducen tras el aclarado en una mezcla de alcoholter, o alcohol-acetona al 50%.
LIMPIEZA MECNICA
Son lavadoras con programas automatizados, que incluyen la desinfeccin trmica (la
temperatura del agua de aclarado suele ser elevada, hasta 90 C) y/o qumica (accin
conjunta del detergente y un desinfectante compatible), as como el secado y acondicionamiento de los objetos metlicos.
Estos programas suelen comenzar con una temperatura del agua inferior a 50C.
Siguiendo con el ejemplo del lavavajillas: quitar la suciedad ms gruesa antes de introducirlo (no con agua caliente) y colocar el material no muy apilado (para que el agua
con el detergente pueda entrar en contacto con todas las superficies).
Tneles de lavado. Puede ser que combinen limpieza y desinfeccin.
En estos sistemas la carga se coloca en una cinta transportadora que se mueve por
distinto compartimentos con puertas cerradas, en los cuales se van desarrollando los
pasos consecutivos que tienen lugar en un proceso de lavado.
Los objetos se introducen, en un cestillo, dentro de la cubeta llena con la solucin detergente. El instrumental articulado debe ser abierto en su totalidad.
son tan pequeas que penetran en las bisagras, ranuras y cremalleras de los instrumentos. Para la limpieza resultan eficaces periodo de exposicin de tres minutos con
frecuencias mnimas de 35 Khz.
Despus del tratamiento con ultrasonidos, todo el instrumental debe ser enjuagado
con agua y secado.
No suele utilizarse para plstico ni gomas porque las burbujas rebotan y no se produce la cavitacin.
Lavapipetas.- para el lavado de las pipetas.
Efecto sifn.- El ms elemental est formado por un tubo, en forma de "U" invertida, de ramas desiguales, con
uno de sus extremos sumergido en el lquido, que asciende por el tubo a mayor altura que su superficie, desaguando por el otro extremo. Para que funcione, el orificio de salida debe estar por debajo de la superficie libre
(el sifn, en la figura, funcionar mientras h2 sea mayor que h1) pues funciona por diferencia de presiones, entre
la superficie del lquido en la cubeta o recipiente y el punto de salida del ramal exterior, y debe estar lleno de lquido (cebado) ya que esa continuidad permite que la presin del lquido en el ramal de entrada cree la diferencia de presiones que eleva el fluido hacia el otro ramal.
El flujo no se interrumpe cuando el extremo sumergido quede fuera del agua; de hecho no es necesario que
exista un recipiente inferior. El sifn funcionar mientras el orificio de salida est ms bajo que el nivel del lquido
en el recipiente superior.
DESINFECCIN
Ya hemos dicho que la desinfeccin es la destruccin de las formas vegetativas de los microorganismos Podemos matizar un poco ms esa definicin y decir que la desinfeccin es un procedimiento que destruye la mayora de los microorganismos de un objeto, material o superficie,
con la esperanza de destruir todos los microorganismos patgenos. Esta nueva definicin
hace hincapi en la capacidad de provocar, o no, enfermedades de los microorganismos. No todos los microorganismos son capaces de provocar enfermedades en los seres humanos. De todo lo antedicho se derivan dos puntos de vista: el del laboratorio y el del paciente.
Dependiendo de lo que estemos haciendo en el laboratorio se requerir un nivel u otro de desinfeccin. Vendr indicado en los correspondientes protocolos.
Otro aspecto a tener en cuenta es del paciente (no un matraz ni un ensayo, sino una persona).
Por eso existe una clasificacin de los materiales hospitalarios que van a tener contacto con el
paciente. Es la clasificacin de Spaulding de los dispositivos o artculos mdicos:
Artculos no crticos. Entran en contacto con la piel sana y necesitan, al menos, desinfeccin de baja intensidad. (se sobreentiende que tambin estn limpios porque no hay desinfeccin que valga sin limpieza previa).
Artculos semicrticos. Entran en contacto con piel lesionada o con mucosas. Requieren,
al menos, una desinfeccin de alto nivel.
Artculos crticos. Entran en contacto con cavidades y zonas estriles. Requieren esterilizacin (se sobreentiende que estn limpios porque tampoco hay esterilizacin que valga
sin desinfeccin previa) . Aqu surge una pregunta: en condiciones normales... qu partes
de nuestro organismo son estriles?
La desinfeccin puede conseguirse mediante distintos mtodos: fsicos y qumicos. Sea cual fuere el mtodo escogido, previamente debemos lavar el instrumento.
RADIACIN ULTRAVIOLETA
Lmparas que emiten radiacin UV. Actan sobre el material gentico, en concreto sobre unidades de timina juntas, lo que impide la duplicacin del DNA. Su accin es microbiosttica (no destruye al microorganismos pero inhibe o dificulta su crecimiento). Se utiliza, sobre todo, en la
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