Universidad Autónoma de Nuevo León

Facultad de ciencias biológicas

QBP

Microbiología

Grupo 253

ACCIÓN DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

SOBRE LAS BACTERIAS

Equipo 8

Rubi Magdalena Olivares Maldonado

1909819
 1. ACCIÓN DE AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS SOBRE LAS
BACTERIAS

Etapa 2: Crecimiento celular, factores que afectan el crecimiento.

1. Elemento de competencia: Aplicar metodologías y técnicas de medición y
control del crecimiento microbiano en condiciones estériles para determinar la
presencia y cultivar a los microorganismos en el laboratorio.
1. Propósito de la práctica
• Determinar el efecto inhibitorio que ejercen agentes químicos como los
antibióticos, sobre el crecimiento microbiano.
• Determinar el efecto de la radiación UV de 260nm sobre el crecimiento
microbiano.
• Que el estudiante:
• Realice un antibiograma a una bacteria gram (+) o gram (-), y lo interprete
adecuadamente.
• Aplique la radiación UV y observe el efecto en el crecimiento de las bacterias
y determine el fenómeno de la fotorreactivación.

1. Introducción
Las enfermedades infecciosas microbianas son responsables de casi 20 millones de
muertes al año en el mundo, por esto es muy importante la aplicación de medidas de
control microbiológico para evitar la dispersión de dichas enfermedades. También el
control del crecimiento microbiano es necesario para limitar el deterioro de alimentos y
otros sustratos. El control microbiológico se realiza haciendo uso de agentes físicos y
químicos que nos permiten inhibir el crecimiento o bien matar a los microorganismos.
Algunos de los agentes físicos, usados principalmente son el calor, la filtración y la
radiación; el calor es el más utilizado por ser muy efectivo y económico, mientras que la
filtración se usa para esterilizar líquidos sensibles al calor y gases, el uso de radiaciones
electromagnéticas (microondas, radiaciones ultravioletas, rayos X y rayos gamma) es
efectivo para esterilizar o reducir la carga microbiana, por ejemplo la radiación ultravioleta
de 200-300 nm es útil para desinfectar superficies, aire y agua. Por otra parte los agentes
químicos antimicrobianos son productos sintéticos, semisintéticos o bien naturales, que
matan o inhiben el crecimiento de los microorganismos, los agentes antimicrobianos
varían mucho en relación a su toxicidad, algunos son muy tóxicos pero actúan de una
manera no selectiva ocasionado efectos sobre todo tipo de células por lo que solamente
se utilizan para tratar objetos inanimados, tal es el caso de los desinfectantes; los
antisépticos son menos tóxicos por lo que son usados para controlar el crecimiento de
microorganismos en los tejidos externos como piel y mucosas de animales; otros agentes
antimicrobianos son mucho más selectivos y más tóxicos para los microorganismos que
para los tejidos animales y éste es el caso de los agentes quimioterapéuticos que son
utilizados en el tratamiento de enfermedades infecciosas.

EFECTO DE LA RADIACIÓN ULTRAVIOLETA SOBRE LAS BACTERIAS

Las bases nitrogenadas del DNA y RNA absorben intensamente la radiación ultravioleta
de 260 nm, esto provoca varios efectos en el DNA que pueden llegar a ocasionar la
muerte de la célula, uno de los efectos principales es la formación de dímeros de
pirimidina en el DNA. Si este daño no es reparado la célula muere, porque una molécula
de DNA con dímeros de pirimidina no se puede replicar, sin embargo algunos
microorganismos presentan enzimas dependientes de luz visible capaces de reparar
parte del daño ocasionado por la radiación, a este proceso se le denomina
fotorreactivación. La radiación ultravioleta no puede penetrar superficies sólidas opacas
que absorben la luz, por lo cual solamente se emplea para desinfección de superficies
expuestas.
Nota: La luz ultravioleta causa daño a los ojos, no mire directamente la luz, cuando
trabaje con la lámpara (puede ocasionar ceguera por daños en la córnea del ojo).

ACCION DE AGENTES QUÍMICOS SOBRE LAS BACTERIAS

Un procedimiento utilizado comúnmente para estudiar la acción de agentes químicos
antimicrobianos es el método de difusión en agar, el cual consiste en inocular el
microorganismos que interés en un medio con agar donde posteriormente se colocan
discos de papel filtro impregnados con el agente antimicrobiano sobre la superficie del
agar, en este caso el agente químico debe difundirse en el agar provocando zonas de
inhibición del crecimiento del microorganismo después del período de incubación. El
diámetro de la zona de inhibición es proporcional a la efectividad del agente químico,
este método se utiliza rutinariamente para ensayos de sensibilidad de
microorganismos patógenos a los antibióticos (antibiograma) (1,2).

1. Material para el desarrollo de la práctica

Material biológico
1. Cultivos en caldo nutritivo de 24 h de incubación de Escherichia coli, Serratia
marcescens, Bacillus subtilis y Staphylococcus aureus.

Reactivos y otros materiales

1. Gradilla para tubos de 13 X 100
2. Alcohol al 70%
3. 5 placas de Petri con Agar nutritivo estéril por equipo.
4. Cerillos, etiquetas, algodón
5. 2 pipetas de 1 mL estéril por equipo
6. Mechero
7. 2 varillas de vidrio dobladas estériles por equipo
8. Papel periódico
9. Incubadora a 37ºC
10. 5 Hisopos estériles.
11. Pinzas estériles
12. Discos con antibióticos para bacterias gram (-) o gram (+).
13. 1 regla, 1 caja grande de cartón.
14. Bata, cofia y cubrebocas.

1. Procedimiento para el desarrollo de la práctica

a) Acción de Agentes Químicos sobre el crecimiento de microorganismos.

1. Inocule con hisopo estéril toda la superficie del medio de agar nutritivo estéril de una
placa, tomando 0.1 mL de un cultivo de 18-24 h de E. coli o S. aureus.
2. Deje en reposo de 3 – 5 min.
3. Utilice unas pinzas estériles para que coloque los multidisco con antibióticos para
bacterias gramnegativos o grampositivos sobre la superficie del agar.
4. Incube su placa a 37 º C por 24 h.
5. Realice observaciones y registre sus resultados midiendo en milímetros el diámetro
de los halos de inhibición obtenidos para cada uno de los antibióticos utilizados.
6. En base al instructivo de los multidiscos utilizados o con los estándares de cada
antibiótico para el microorganismo que se manejó, determine la sensibilidad de la
bacteria a cada uno de los antimicrobianos que se probaron.

b) Acción de la radiación UV sobre el crecimiento de microorganismos.

1. Coloque uno de los microorganismos a probar en cuatro placas con agar nutritivo,
depositando 0.1 mL de un cultivo de 18-24 h
2. Distribuya el inóculo en toda la superficie del agar, utilizando una varilla de vidrio
estéril.
3. Etiquete y pase a irradiar sus placas de la siguiente manera:
No irradiar una placa inoculada con el microorganismo (control no
irradiado). Las tres placas restantes inoculadas con el
microorganismo se van a irradiar de la siguiente manera: a) 2 placa con 2 min de UV
(Utilizando una longitud de onda cercana a 260 nm), b) 1 placa 4 min con UV, c) Exponer
por 20 min a la luz visible, una de las placas irradiadas por 2 min.
4. Envuelva las placas con envoltura de papel e Incube a 37° C por 24 h.
5. Compare y tome nota del crecimiento desarrollado por cada uno de los
microorganismos con respecto al control no irradiado y con respecto al expuesto a la luz
visible (3).

1. Análisis de resultados
a) Acción de Agentes Químicos sobre el crecimiento de microorganismos. Registre
el tamaño del halo de inhibición microbiano en cada uno de los microorganismos y para
cada antibiótico probado de acuerdo a los estándares establecidos en la literatura.
Acción de Agentes Químicos sobre el crecimiento de microorganismos.
1. Antibiótico en E.coli:
Medición: 1.00 cm
Sensible al antibiótico.

2. Antibiótico en S. aureus
Medición: 0.1cm
Resistente al antibiótico
b) Acción de la luz UV sobre el crecimiento de microorganismos.
- Registre (imagen de sus resultados) el efecto de la luz UV sobre cada uno de los
microorganismos, y reporte cuál de ellos resultó ser aparentemente más sensibles y cuál
fue el menos sensible a la luz UV.
-Observe si se presentó el fenómeno de fotorreactivación y describa sus resultados al
respecto (registre con fotografía sus resultados).

Discusión
Revise 3 citas bibliográficas y discuta sus resultados.
Los antibióticos hoy en día son demasiado importantes ya que gracias a ellos
hemos aumentado considerablemente la esperanza de vida de muchas personas,
sin embargo, el libre uso de estos antibióticos ha presentado serios problemas,
tales como la resistencia microbiana, la cual se está volviendo una constante al
momento de probar la efectividad de algún antibiótico.
Los antibióticos según Medlineplus (2016) “son medicamentos que combaten las
infecciones bacterianas en personas y animales. Funcionan matando las bacterias
o dificultando su crecimiento y multiplicación”. Como se pudo observar en esta
práctica, los aros de inhibición representan la efectividad del antibiótico para
dificultar el crecimiento de la infección bacteriana. Maria T. Vazquez Pertejo (2022)
nos indica que” el halo de inhibición es la zona alrededor de un disco dónde no
hay crecimiento del microorganismo”.
Indagando en la literatura, se pudo encontrar que” S.aureus ha demostrado un
gran poder de adaptación a los agentes antimicrobianos, adquiriendo paso a paso
resistencia a todos los antibióticos disponibles para el tratamiento de las
infecciones que ocasiona”(Gónzales,2010). Como se pudo observar en esta
práctica S. aureus demostró un halo de inhibición demasiado pequeño, mientras
que E.coli se ha encontrado información acerca de su sensibilidad a diferentes
infecciones bacteriológicas.

Conclusión
Una vez realizada la práctica anterior puedo comprender más acerca de los
efectos que son causados por antibiótico hacía las respectivos cultivos
microbianos en los cuales gracias a la práctica realizada se puede apreciar el
cómo en el cultivo usado los antibióticos logran inhibir su crecimiento de igual
manera está práctica me mostró acerca de cómo actúan los antibióticos correctos
en presencia del microorganismo al cual es dirigido dicho antibiótico para esto
también nos muestra la importancia de saber qué tipo de antibiótico funciona en
casa microorganismo, como en este caso que se utilizó gran positiva y gran
negativa de manera correcta, si se logró apreciar el cómo actúa el antibiótico pero
en el caso de ser utilizado de manera errónea puede no haber reacción y del
mismo modo el microorganismo seguiría creciendo.

Cuestionario
1. ¿Qué es un antibiótico?
Sustancia química que impide o mata el crecimiento de ciertos microorganismos
sensibles.

2.- Mencione algunos agentes bacteriolíticos.

Penicilina
Polimixina

1. Instrumento de evaluación
Lista de cotejo para evaluar la práctica

Cumple/No
Aspectos Elemento (puntos) Criterio Puntos
cumple
Manual identificado en la portada
Manual de con nombre y grupo, entregado a
Laboratorio (5) tiempo y contestado a mano con
letra legible.
FORMA
El estudiante participa
activamente durante la
Trabajo en equipo
realización de la práctica. Se
(5)
integra con sus compañeros de
equipo.
Completos, ordenados y
concisos, presentados en
Resultados (25)
párrafos, tablas o gráficos
claramente identificados.
FONDO Discute todos los resultados
obtenidos, comparándolos con lo
Discusiones (25) reportado en literatura, colocando
la referencia entre paréntesis y en
el formato correcto.
 Argumenta de forma adecuada,
Conclusiones (20) de acuerdo al objetivo propuesto
y a los resultados obtenidos.
Contesta correctamente todas las
Cuestionario (10)
preguntas
Referencias Es actual y/o especializada y
(10) además sigue el formato APA.
Salto de página

1. Referencias
a) Citas en el texto
1. Madigan M. T., J. M. Martinko, J. Parfer, T. D. Brock. 2009. Biología de los
Microorganismos. Décima segunda Edición. Prentice Hall Iberia, Madrid
España.
1. Prescott, L.M., Harley, J.P., Klein, D.A. 1999. Microbiología. Cuarta Edición.
McGraw Hill Interamericana. México.
1. Koneman E. W., S. A. Allen, V. R. Dowell, H. M. Sommers. 1985. Diagnóstico
Microbiológico. Editorial Médica Panamericana S. A. México, D. F.

b) Literatura consultada

• González, C. (2010, 25 junio). Mecanismos de resistencia a antibióticos β-

lactámicos en Staphylococcus aureus. Scielo. Recuperado 20 de mayo de
2022, de http://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0075-
52222010000100003#:%7E:text=S.,antibi%C3%B3ticos%20%CE%B2%2Dl
act%C3%A1micos%20en%20S.

• Vazquez Pertejo, M. T. (2022, 4 abril). Pruebas de sensibilidad o

antibiogramas. Manual MSD versión para profesionales. Recuperado 20 de
mayo de 2022, de https://www.msdmanuals.com/es-
mx/professional/enfermedades-infecciosas/diagn%C3%B3stico-de-
laboratorio-de-las-enfermedades-infecciosas/pruebas-de-sensibilidad-o-
antibiogramas
• Medlineplus. (2016, 27 julio). Antibióticos. Biblioteca nacional de medicina.
Recuperado 20 de mayo de 2022, de
https://medlineplus.gov/spanish/antibiotics.html

1. Abreviaturas
nm: nanómetro
UV: Ultravioleta
h: horas
min: minutos
mL: mililitros
° C: grados Centígrados