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EVALUACION DE LA SENSIBILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS A

DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS.
Jiménez Luis
Universidad de Sucre
Facultad de educación y ciencia
Laboratorio de microbiología general

Resumen
En la actualidad se han utilizado una serie de mecanismos para llevar acabo el control de
microrganismos. Las sustancias comúnmente utilizadas son el uso de antisépticos, de
desinfectantes y de antibióticos. En la siguiente práctica se evaluó la sensibilidad de los
microorganismos a partir de dos técnicas muy eficaces como lo son Antibiograma y
técnica de discos impregnados con antisépticos y desinfectantes sobre placa con siembra
masiva de un microorganismo obteniendo como resultados que los microrganismos mostraron
resistencia a el antibiótico ceftazidime y a los anticepticos agua de grifo y alcohol al 70%,
mostrando sensibilidad a los demás criterios escogidos.
Palabras claves: Sensibilidad, microrganismos, antisépticos, desinfectantes, antibióticos

Abstract
At present a series of mechanisms have been in use for going I end the control of
microrganismos. The substances commonly used are the use of antiseptic, of disinfectants and of
antibiotics. In the following practice the sensibility of the microorganisms was evaluated from two
very effective technologies like it are Antibiograma and technology of discs impregnated with
antiseptic and disinfectants on plate with massive sowing of a microorganism obtaining as results
that the microrganismos showed resistance to the antibiotic ceftazidime and to the anticepticos it
waters down of faucet and alcohol to 70 %, showing sensibility to other select criteria.

Introducción antibióticos y la respectiva presión selectiva


que ejercen, es el factor más importante que
En el siglo XX el descubrimiento de los contribuye a la aparición de diversas clases
antibióticos se convirtió en la solución a las de resistencia bacteriana. En los últimos
múltiples enfermedades producidas por sesenta años se ha hecho notorio el
agentes infecciosos. Las bacterias como impacto de la respuesta de estos
todos los seres vivos exhiben mecanismos microorganismos a la presión selectiva que
biológicos, que las facultan para adecuarse ejercen los antisépticos y desinfectantes, así
a diversas presiones ambientales. Aunque como los compuestos quimio-terapéuticos
la resistencia a los antibióticos es una más utilizados en los brotes de infecciones
expresión natural de la evolución y genética en los hospitales del mundo.
bacteriana, ciertos factores también
contribuyen al aumento de la expresión y La función de la desinfección es la
diseminación de esta característica eliminación de microorganismos no
inherente. El incremento en el uso de deseados en el ambiente objetivo. Estos
microbios pueden afectar la salud humana y 5. Debe persistir en el medio a una
deben ser eliminados necesariamente concentración suficiente como para
desde cualquier ámbito social, asegurar el efecto residual, es decir, que se
estableciendo la salubridad como necesidad mantenga luego de que los
primaria. También pueden afectar equipos microorganismos hayan sido eliminados,
usualmente utilizados, se encuentran actuando como barrera contra el ingreso de
frecuentemente bacterias, virus, hongos y nuevos microorganismos.
algas. Se considera un desinfectante ideal
Los antisépticos son biocidas o sustancias
aquel agente químico o físico que asegure
químicas que se aplican sobre los tejidos
una completa destrucción de
vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el
microorganismos que son propuestos a
crecimiento de microorganismos patógenos.
eliminar, afectando mínimamente al
No tienen actividad selectiva ya que
ambiente utilizable donde estos se
eliminan todo tipo de gérmenes. A altas
encuentren, seres vivos que deben ser
concentraciones pueden ser tóxicos para los
preservados y equipos, obteniendo una
tejidos vivos.
relación rendimiento/costo razonable. Entre
otras consideraciones tenemos: El espectro de acción, tiempo de inicio de
activación, tiempo de actividad, efecto
1. Debe destruir toda clase y cantidad
residual, toxicidad, capacidad de
de microorganismos que puedan
penetración y posibles materiales que
introducirse al ambiente que se trata en un
inactivan a los antisépticos pueden variar de
lapso de tiempo corto y en un rango
un producto a otro.
dinámico de temperaturas, no viéndose
afectado por posibles cambios en la En general, el mecanismo de acción de los
composición y concentración. antisépticos y desinfectantes depende de
tres mecanismos básicos: (1) Capacidad de
2. Las concentraciones utilizadas no
coagular y precipitar proteínas, (2) Alterar
deben ser tóxicas para el ser humano y
las características de permeabilidad celular
otros seres vivos ajenos a los
y (3) toxicidad o envenenamiento de los
microorganismos que quieren destruirse.
sistemas enzimáticos de las bacterias, que
Además, debe ser insípido.
a su vez dependen del grupo químico. Éstos
3. Aplicable y usado a costo pueden producir la muerte o inhibición
razonable, seguro, fácil de almacenar, celular de las bacterias por oxidación,
manipular, transportar y aplicar. hidrólisis o inactivación de enzimas, con
pérdida de los constituyentes celulares. Son
4. Concentración en el medio donde
más selectivos. Esta práctica tuvo como
se aplica debe ser conocida (dependiente
finalidad determinar la sensibilidad de
del tipo de medio y la concentración que
bacterias a diferentes antibióticos y
requiere), y fácilmente medible. Ensayos
anticepticos aplicado mediante la técnica de
que se realcen deben ser exactos, precisos
sensidiscos
y reproducibles.

Metodología
1. Antibiograma
2. Técnica de discos impregnados con antisépticos y desinfectantes sobre placa con
siembra masiva de un microorganismo
1. 2.

Caja Petri 1 (Agar nutritivo) Caja Petri 2 (Agar nutritivo)


(

Dividir en forma de cuadrante Dividir en forma de cuadrante


(Marcador Sharpie) (Marcador Sharpie)

Rotular de 1 a 4 Rotular de A hasta D

Siembra masiva de Siembra masiva de


microrganismos microrganismos

Insertar en centro de cuadrante 1 Insertar disco de papel filtro e


sensidisco de penicilina (10 ug) impregnado con Yodo (cuadrante
a)
Repetir paso anterior con kanamicina
(2. 5ug), Ciprofloxacina (3), Repetir pasó anterior con papel
Ceftazidime (4) a la misma filtro en este caso con Hipoclorito
concentración que la del primer de sodio, agua y alcohol en los
cuadrante. cuadrantes b, c y d
respectivamente.

Sellar caja Petri (papel


cristaflex) y llevar a incubadora. Sellar caja Petri (papel cristaflex) y
llevar a incubadora.

RESULTADOS Y DISCUSION
Una vez realizados los procedimientos
explicados anteriormente, se obtuvieron los
siguientes resultados:

Imagen 1. Caja Petri con cultivo de


microrganismos y los diferentes
sensidiscos (1. Penicilina a 10µg, 2. especies de microorganismos (bacterias,
Kanamicina 5µg 3. Ciprofloxacina a 10µg 4. ascomicetos y hongos) o sintetizado
Ceftazidime a 10µg). En sus respectivos químicamente que tiene la capacidad de
cuadrantes. actuar selectivamente e inhibir el
crecimiento o producir la destrucción del
La imagen anterior ilustra los halos de
microorganismo, generalmente a bajas
inhibición en los diferentes cuadrantes
concentraciones. De los antibióticos a los
descritos anteriormente, donde podemos
cuales estas cepas mostraron sensibilidad
inferir que: En los cuadrantes 1,2 y 3 los
encontramos la penicilina (Cuadrante 1), La
microrganismos presentaron sensibilidad a
penicilina es un antibiótico del grupo de
sus respectivos antibióticos, por lo que no
los betalactámicos empleados profusamente
presentaron crecimiento. Sin embargo en el
en el tratamiento de infecciones provocadas
cuadrante 4, los microrganismos
por bacterias sensibles. No se conoce por
presentaron resistencia al antibiótico,
completo el mecanismo de acción de las
observándose un crecimiento de estos. Por
penicilinas, si bien su analogía a la D-alanil-
otra parte para determinar o medir la
D-alanina terminal, situada en la cadena
inhibición de este crecimiento se realizó lo
lateral peptídica de la subunidad del
siguiente:
peptidoglicano, sugiere que su carácter
MEDICION DE LA INHIBICIÓN DEL bactericida deriva de su intervención como
CRECIMIENTO BACTERIANO inhibidor del proceso de transpeptidación
durante la síntesis de aquel. De este modo,
la penicilina actúa debilitando la pared
Antibióticos Halo de inhibición bacteriana y favoreciendo la lisis osmótica
(mm) de la bacteria durante el proceso de
multiplicación.
Penicilina 29mm
Otro antibiótico al cual se observó
Kanamicina 24mm sensibilidad por parte de los microrganismos
fue la Kanamicina (Cuadrante 2), esto se
Ciprofloxacina 18mm pudo deber a que La kanamicina afecta a la
subunidad 30S de los ribosomas,
Ceftazidime 0mm provocando gran cantidad de errores de
traducción, además de que indirectamente
Tabla 1: Efecto inhibitorio y de crecimiento
evita el proceso de translocación cuando se
microbiano con respecto algunos
incorpora un nuevo aminoacil ARNt, esto a
antibióticos, evaluando el diámetro de cada
la larga provoca la terminación temprana de
halo de inhibición.
la síntesis proteica. Al detenerse, en este
Kanamicina: 29mm - 5mm= 24mm caso, la traducción, se forma una proteína
Penicilina G: 34mm - 5mm= 29mm con una configuración errónea o
Ciprofloxacina: 23mm - 5mm= 18mm enteramente diferente. Esto puede producir
Ceftazidime: No presento efecto la destrucción de la bacteria por no poder
hacer uso de la proteína en cuestión.
Una vez utilizada esta técnica
(Antibiograma), nos damos cuenta la Por su parte la Ciprofloxacina (Cuadrante
importancia de los antibióticos en cuanto a 3), Es un antibiótico de amplio espectro,
la evaluación de crecimiento e inhibición activo contra las bacterias Gram-positivo y
microbiana. El antibiótico se define como Gram-negativo. Funciona inhibiendo la ADN
una sustancia química derivada de varias girasa, un tipo IV de topoisomerasa, que es
una enzima necesaria para separar el ADN MEDICION DE LA INHIBICIÓN DEL
replicado, inhibiendo la división celular. CRECIMIENTO BACTERIANO
Por otro lado se observó que estos
microrganismos mostraron resistencia al Antisépticos y Halo de inhibición
antibiótico Ceftazidime (Cuadrante 4), esto desinfectantes (mm)
se puede fundamentar en que estos
microrganismos produjeron gran cantidad Solución de Yodo 9mm
de β-lactamasas, haciéndolas así más
resistentes a estos antibióticos. Teniendo en Hipoclorito de sodio 12mm
cuenta que las β-lactamasas son enzimas
que hidrolizan el anillo β-lactámico de los Agua de grifo 0
antibióticos, de esta manera destruyen el
sitio activo del AB e impiden su actividad.
Alcohol al 70% 0

Hipoclorito de sodio: 17mm – 5mm= 12mm


Solucion de yodo: 14mm – 5mm= 9mm
Agua de grifo: No presento efecto
Alcohol al 70: no presento efecto
Una vez terminada la técnica de discos
impregnados con antisépticos y
desinfectantes sobre placa con siembra
masiva de un microorganismo, se detallaron
los resultados (Imagen 2), donde se refleja
la sensibilidad que muestran los
microrganismos, a la solucion de yodo y al
Imagen 2. Caja Petri con el cultivo de hipoclorito de sodio, esta sensibilidad se
microrganismos y las diferentes sustancias puede basar a partir de los siguientes
(A. Yodo B. Hipoclorito de sodio C. Agua D. criterios:
Alcohol). En sus respectivos cuadrantes
Con respecto a la solucion de yodo
La imagen anterior nos muestra los halos de (Cuadrante a), es un desinfectante con un
inhibición en los diferentes cuadrantes amplio rango de acción afecta tanto
descritos anteriormente, donde podemos bacterias Gram + como Gram -, se cree que
inferir que: los microorganismos presentaron es porque actúa sobre el enlace NH ligando
sensibilidad ante los desinfectantes (A y B) los aminoácidos y nucleótidos modificando
por lo que estos no presentaron crecimiento, así la estructura de las proteínas de las
sin embargo para los cuadrantes (C y D) bacterias, puede afectar también los grupos
estos microrganismos presentaron SH provocando oxidación. Como se
resistencia observándose un crecimiento. mencionó anteriormente también se mostró
Para determinar o medir la inhibición de sensibilidad al Hipoclorito de sodio
este crecimiento se realizó lo siguiente: (Cuadrante b) esto se debe a la gran
capacidad de oxidación que presenta este
compuesto. En presencia de agua el cloro,
bien sea en forma gaseosa (Cl2) o como
hipoclorito (NaOCl), reacciona para dar (autorreplicación, ADN extracromosómico) o
ácido Hipocloroso (HOCl), la forma con transposones (cromosomal o integrado en
mayor potencial de óxido-reducción y más plásmidos, cassettes de ADN transmisibles)
activa como desinfectante, según las o de forma adquirida a estos anticepticos y
reacciones que se presentan. desinfectantes, por mutación o por la
adquisición de material genético en forma
Por otro lado los microrganismos mostraron
de plásmidos o transposones; estas
resistencia al agua de grifo (cuadrante c) y
configuraciones permiten grandes arreglos
al alcohol al 70% (Cuadrante d), esto se
de genes de resistencia para la mayoría de
debe a que para los microrganismos la
los antibióticos y desinfectantes al ser
resistencia puede ser una propiedad natural
transferidos juntos en un solo evento de
de un organismo (intrínseca) o conseguida
conjugación.
por mutación o adquisición de plásmidos

Conclusión Biocida: Los biocidas son sustancias activas


o preparados que contienen una o más
Se determinó la sensibilidad de bacterias a sustancias activas, presentados en la forma
diferentes antibióticos y anticepticos en que son suministrados al usuario,
aplicado mediante la técnica de sensidiscos, destinados a destruir, contrarrestar,
destacando la importancia de estos para la neutralizar, impedir la acción o ejercer el
evaluación de crecimiento e inhibición control de otro tipo sobre cualquier
microbiana, teniendo en cuenta las organismo nocivo. Ej. Gas de óxido de
propiedades y características de cada una etileno.
de estos y a su vez los diferentes
mecanismos que utilizan para combatir la Bioestatico: Es un producto que detiene el
resistencia que oponen estos crecimiento y desarrollo de organismos
microrganismos. vivos, se aplica casi siempre a productos
dedicados a combatir los microorganismos.
Cuestionario Ej. Hexetidina.
1. Defina los siguientes términos y Desinfectante: Los desinfectantes son
de ejemplos de cada uno de ellos agentes antimicrobianos que se emplean
antibiótico, biocida, bioestatico, solamente sobre objetos inanimados o
desinfectante, antiséptico, y agente medios inertes. Algunos son tóxico celulares
quimioterapéutico. protoplasmáticos con capacidad de destruir
tejidos vivos. Ej. Glutaraldehido .
Antibiótico: Los antibióticos constituyen un
grupo heterogéneo de sustancias producida Antiséptico: Sustancia química de aplicación
por un ser vivo o derivado sintético con tópica sobre tejidos que destruye o inhibe
diferente comportamiento farmacocinético y los microorganismos sin afectar a los tejidos
farmacodinámico, que ejercen una acción sobre los que se aplica. Ej. Clorhexidina .
específica sobre alguna estructura o función
de un microorganismo matándolo o Agente quimioterapéutico: Son agentes
inhibiendo su crecimiento, tienen elevada químicos de acción selectiva que pueden
potencia biológica actuando a bajas inhibir o destruir microorganismos y que se
concentraciones y la toxicidad es selectiva, utilizan en seres vivos en forma sistémica o
con una mínima toxicidad para las células local. Ej. Sulfatiazol .
de nuestro organismo. Ej. Kanamicina.
2. ¿De acuerdo con su mecanismo 4. ¿Qué es la concentración mínima
de acción, como se clasifican los inhibitoria?
antibióticos?
La concentración inhibitoria mínima (CIM)
Antibióticos que actúan sobre la pared se define como la menor concentración de
bacteriana antimicrobiano capaz de inhibir el
crecimiento bacteriano. La CIM indica la
B-lactamicos, cicloserina, vancomicina,
concentración de antimicrobiano que se
bacitracina, y fosfomicina
necesita para matar o inhibir el crecimiento
Antibióticos que actúan sobre la membrana del microorganismo analizado y permite
bacteriana valorar comparativamente la potencia de los
antimicrobianos. La reproducibilidad de
Polipeptidicos, polienicos, y agentes estas pruebas es de ± 1 dilución y para
antifungicos como la nistatina y anfotericina evitar una gran variabilidad éstas deben ser
B estandarizadas y controladas muy
Antibióticos que actúan sobre la síntesis de cuidadosamente.
proteína 5. ¿Qué es un antibiograma y cuál
Cloranfenicol, macrolidos, tetraciclinas y es su aplicación?
aminoglucósidos El antibiograma es la prueba microbiológica
Antibióticos que actúan sobre los ácidos que se realiza para medir la sensibilidad de
nucleicos una bacteria frente a diferentes
antimicrobianos in vitro y a partir de estos
Rifampicina y fluorquinolonas resultados predice la eficacia in vivo. Con un
Antimetabolitos antibiograma se pueden obtener resultados
cualitativos que indican si la bacteria es
Que bloquean pasos metabólicos sensible o resistente a un antibiótico, o
específicos y esenciales para el cuantitativos que determinan la
microorganismo concentración mínima (CMI) de
Antibióticos antimicobacterias antimicrobiano que inhibe el crecimiento
bacteriano (en µg/ ml o en mg/l) . El estudio
Para el tratamiento de la tuberculosis: de la sensibilidad a antimicrobianos de las
isoniacida, rifampicina, etambutol, diferentes bacterias aisladas en muestras
pirazinamida, capreomicina y ciclocerina biológicas presenta interés individual y
3. Investigue tres organismos epidemiológico, por tal razón tiene
productores de antibióticos y mencione aplicación en prácticas clínicas. La
el antibiótico producido. realización rutinaria del antibiograma
proporciona los patrones de resistencias
Organismo Antibiótico locales y regionales que deben actualizarse
periódicamente, ya que éstos pueden
Penicillum chrysogenum.
cambiar sustancialmente en cortos
Penicilina
períodos. Por otra parte, el antibiograma
Cephalosporium acremonium también puede ayudar a diferenciar entre
cefalosporina microorganismos verdaderamente
patógenos o contaminantes (aislamientos
Saccharopolyspora erythraea Eritromicina
sucesivos de estafilococo coagulasa
negativo en hemocultivos con diferente
sensibilidad indicaría contaminación  Saavedra J. Infecciones en
cutánea) y en la evaluación inicial ante la pediatría. Guía rápida para la
sospecha de un brote nosocomial selección del tratamiento
(aislamiento en distintos pacientes de antimicrobiano empírico: bases
Klebsiella pneumoniae productora de β- para la elección racional de un
lactamasa de espectro extendido BLEE). tratamiento antimicrobiano. 2009.
Madrid, 2008. Disponible en:
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http://appswl.elsevier.es/watermark
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