EVALUACION DE LA SENSIBILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS A

DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS.
Jiménez Luis
Universidad de Sucre
Facultad de educación y ciencia
Laboratorio de microbiología general

Resumen
En la actualidad se han utilizado una serie de mecanismos para llevar acabo el control de
microrganismos. Las sustancias comúnmente utilizadas son el uso de antisépticos, de
desinfectantes y de antibióticos. En la siguiente práctica se evaluó la sensibilidad de los
microorganismos a partir de dos técnicas muy eficaces como lo son Antibiograma y
técnica de discos impregnados con antisépticos y desinfectantes sobre placa con siembra
masiva de un microorganismo obteniendo como resultados que los microrganismos mostraron
resistencia a el antibiótico ceftazidime y a los anticepticos agua de grifo y alcohol al 70%,
mostrando sensibilidad a los demás criterios escogidos.
Palabras claves: Sensibilidad, microrganismos, antisépticos, desinfectantes, antibióticos

Abstract
At present a series of mechanisms have been in use for going I end the control of
microrganismos. The substances commonly used are the use of antiseptic, of disinfectants and of
antibiotics. In the following practice the sensibility of the microorganisms was evaluated from two
very effective technologies like it are Antibiograma and technology of discs impregnated with
antiseptic and disinfectants on plate with massive sowing of a microorganism obtaining as results
that the microrganismos showed resistance to the antibiotic ceftazidime and to the anticepticos it
waters down of faucet and alcohol to 70 %, showing sensibility to other select criteria.

Introducción antibióticos y la respectiva presión selectiva

En el siglo XX el descubrimiento de los
antibióticos se convirtió en la solución a las
múltiples enfermedades producidas por
agentes infecciosos. Las bacterias como
todos los seres vivos exhiben mecanismos
biológicos, que las facultan para adecuarse
a diversas presiones ambientales. Aunque
la resistencia a los antibióticos es una
expresión natural de la evolución y genética
bacteriana, ciertos factores también
contribuyen al aumento de la expresión y
diseminación de esta característica
inherente. El incremento en el uso de
que ejercen, es el factor más importante que
contribuye a la aparición de diversas clases
de resistencia bacteriana. En los últimos
sesenta años se ha hecho notorio el
impacto de la respuesta de estos
microorganismos a la presión selectiva que
ejercen los antisépticos y desinfectantes, así
como los compuestos quimio-terapéuticos
más utilizados en los brotes de infecciones
en los hospitales del mundo.
La función de la desinfección es la
eliminación de microorganismos no
deseados en el ambiente objetivo. Estos
microbios pueden afectar la salud humana y
deben ser eliminados necesariamente
desde cualquier ámbito social,
estableciendo la salubridad como necesidad
primaria. También pueden afectar equipos
usualmente utilizados, se encuentran
frecuentemente bacterias, virus, hongos y
algas. Se considera un desinfectante ideal
aquel agente químico o físico que asegure
una completa destrucción de
microorganismos que son propuestos a
eliminar, afectando mínimamente al
ambiente utilizable donde estos se
encuentren, seres vivos que deben ser
preservados y equipos, obteniendo una
relación rendimiento/costo razonable. Entre
otras consideraciones tenemos:
1. Debe destruir toda clase y cantidad
de microorganismos que puedan
introducirse al ambiente que se trata en un
lapso de tiempo corto y en un rango
dinámico de temperaturas, no viéndose
afectado por posibles cambios en la
composición y concentración.
2. Las concentraciones utilizadas no
deben ser tóxicas para el ser humano y
otros seres vivos ajenos a los
microorganismos que quieren destruirse.
Además, debe ser insípido.
3. Aplicable y usado a costo
razonable, seguro, fácil de almacenar,
manipular, transportar y aplicar.
4. Concentración en el medio donde
se aplica debe ser conocida (dependiente
del tipo de medio y la concentración que
requiere), y fácilmente medible. Ensayos
que se realcen deben ser exactos, precisos
y reproducibles.
5. Debe persistir en el medio a una
concentración suficiente como para
asegurar el efecto residual, es decir, que se
mantenga luego de que los
microorganismos hayan sido eliminados,
actuando como barrera contra el ingreso de
nuevos microorganismos.
Los antisépticos son biocidas o sustancias
químicas que se aplican sobre los tejidos
vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el
crecimiento de microorganismos patógenos.
No tienen actividad selectiva ya que
eliminan todo tipo de gérmenes. A altas
concentraciones pueden ser tóxicos para los
tejidos vivos.
El espectro de acción, tiempo de inicio de
activación, tiempo de actividad, efecto
residual, toxicidad, capacidad de
penetración y posibles materiales que
inactivan a los antisépticos pueden variar de
un producto a otro.
En general, el mecanismo de acción de los
antisépticos y desinfectantes depende de
tres mecanismos básicos: (1) Capacidad de
coagular y precipitar proteínas, (2) Alterar
las características de permeabilidad celular
y (3) toxicidad o envenenamiento de los
sistemas enzimáticos de las bacterias, que
a su vez dependen del grupo químico. Éstos
pueden producir la muerte o inhibición
celular de las bacterias por oxidación,
hidrólisis o inactivación de enzimas, con
pérdida de los constituyentes celulares. Son
más selectivos. Esta práctica tuvo como
finalidad determinar la sensibilidad de
bacterias a diferentes antibióticos y
anticepticos aplicado mediante la técnica de
sensidiscos

Metodología
1. Antibiograma
2. Técnica de discos impregnados con antisépticos y desinfectantes sobre placa con
siembra masiva de un microorganismo
 1.
Caja Petri 1 (Agar nutritivo)
(
Dividir en forma de cuadrante
(Marcador Sharpie)
Rotular de 1 a 4
Siembra masiva de
microrganismos
Insertar en centro de cuadrante 1
sensidisco de penicilina (10 ug)
Repetir paso anterior con kanamicina
(2. 5ug), Ciprofloxacina (3),
Ceftazidime (4) a la misma
concentración que la del primer
cuadrante.
Sellar caja Petri (papel
cristaflex) y llevar a incubadora.
RESULTADOS Y DISCUSION
Una vez realizados los procedimientos
explicados anteriormente, se obtuvieron los
siguientes resultados:
2.
Caja Petri 2 (Agar nutritivo)
Dividir en forma de cuadrante
(Marcador Sharpie)
Rotular de A hasta D
Siembra masiva de
microrganismos
Insertar disco de papel filtro e
impregnado con Yodo (cuadrante
a)
Repetir pasó anterior con papel
filtro en este caso con Hipoclorito
de sodio, agua y alcohol en los
cuadrantes b, c y d
respectivamente.
Sellar caja Petri (papel cristaflex) y
llevar a incubadora.
Imagen 1. Caja Petri con cultivo de
microrganismos y los diferentes
sensidiscos (1. Penicilina a 10µg, 2.
Kanamicina 5µg 3. Ciprofloxacina a 10µg 4.
Ceftazidime a 10µg). En sus respectivos
cuadrantes.
La imagen anterior ilustra los halos de
inhibición en los diferentes cuadrantes
descritos anteriormente, donde podemos
inferir que: En los cuadrantes 1,2 y 3 los
microrganismos presentaron sensibilidad a
sus respectivos antibióticos, por lo que no
presentaron crecimiento. Sin embargo en el
cuadrante 4, los microrganismos
presentaron resistencia al antibiótico,
observándose un crecimiento de estos. Por
otra parte para determinar o medir la
inhibición de este crecimiento se realizó lo
siguiente:
MEDICION DE LA INHIBICIÓN DEL
CRECIMIENTO BACTERIANO
Antibióticos Halo de inhibición
(mm)
Penicilina 29mm
Kanamicina 24mm
Ciprofloxacina 18mm
Ceftazidime 0mm
Tabla 1: Efecto inhibitorio y de crecimiento
microbiano con respecto algunos
antibióticos, evaluando el diámetro de cada
halo de inhibición.
Kanamicina: 29mm - 5mm= 24mm
Penicilina G: 34mm - 5mm= 29mm
Ciprofloxacina: 23mm - 5mm= 18mm
Ceftazidime: No presento efecto
Una vez utilizada esta técnica
(Antibiograma), nos damos cuenta la
importancia de los antibióticos en cuanto a
la evaluación de crecimiento e inhibición
microbiana. El antibiótico se define como
una sustancia química derivada de varias
especies de microorganismos (bacterias,
ascomicetos y hongos) o sintetizado
químicamente que tiene la capacidad de
actuar selectivamente e inhibir el
crecimiento o producir la destrucción del
microorganismo, generalmente a bajas
concentraciones. De los antibióticos a los
cuales estas cepas mostraron sensibilidad
encontramos la penicilina (Cuadrante 1), La
penicilina es un antibiótico del grupo de
los betalactámicos empleados profusamente
en el tratamiento de infecciones provocadas
por bacterias sensibles. No se conoce por
completo el mecanismo de acción de las
penicilinas, si bien su analogía a la D-alanil-
D-alanina terminal, situada en la cadena
lateral peptídica de la subunidad del
peptidoglicano, sugiere que su carácter
bactericida deriva de su intervención como
inhibidor del proceso de transpeptidación
durante la síntesis de aquel. De este modo,
la penicilina actúa debilitando la pared
bacteriana y favoreciendo la lisis osmótica
de la bacteria durante el proceso de
multiplicación.
Otro antibiótico al cual se observó
sensibilidad por parte de los microrganismos
fue la Kanamicina (Cuadrante 2), esto se
pudo deber a que La kanamicina afecta a la
subunidad 30S de los ribosomas,
provocando gran cantidad de errores de
traducción, además de que indirectamente
evita el proceso de translocación cuando se
incorpora un nuevo aminoacil ARNt, esto a
la larga provoca la terminación temprana de
la síntesis proteica. Al detenerse, en este
caso, la traducción, se forma una proteína
con una configuración errónea o
enteramente diferente. Esto puede producir
la destrucción de la bacteria por no poder
hacer uso de la proteína en cuestión.
Por su parte la Ciprofloxacina (Cuadrante
3), Es un antibiótico de amplio espectro,
activo contra las bacterias Gram-positivo y
Gram-negativo. Funciona inhibiendo la ADN
girasa, un tipo IV de topoisomerasa, que es
una enzima necesaria para separar el ADN
replicado, inhibiendo la división celular.
Por otro lado se observó que estos
microrganismos mostraron resistencia al
antibiótico Ceftazidime (Cuadrante 4), esto
se puede fundamentar en que estos
microrganismos produjeron gran cantidad
de β-lactamasas, haciéndolas así más
resistentes a estos antibióticos. Teniendo en
cuenta que las β-lactamasas son enzimas
que hidrolizan el anillo β-lactámico de los
antibióticos, de esta manera destruyen el
sitio activo del AB e impiden su actividad.
Imagen 2. Caja Petri con el cultivo de
microrganismos y las diferentes sustancias
(A. Yodo B. Hipoclorito de sodio C. Agua D.
Alcohol). En sus respectivos cuadrantes
La imagen anterior nos muestra los halos de
inhibición en los diferentes cuadrantes
descritos anteriormente, donde podemos
inferir que: los microorganismos presentaron
sensibilidad ante los desinfectantes (A y B)
por lo que estos no presentaron crecimiento,
sin embargo para los cuadrantes (C y D)
estos microrganismos presentaron
resistencia observándose un crecimiento.
Para determinar o medir la inhibición de
este crecimiento se realizó lo siguiente:
MEDICION DE LA INHIBICIÓN DEL
CRECIMIENTO BACTERIANO
Antisépticos y Halo de inhibición
desinfectantes (mm)
Solución de Yodo 9mm
Hipoclorito de sodio 12mm
Agua de grifo 0
Alcohol al 70% 0
Hipoclorito de sodio: 17mm – 5mm= 12mm
Solucion de yodo: 14mm – 5mm= 9mm
Agua de grifo: No presento efecto
Alcohol al 70: no presento efecto
Una vez terminada la técnica de discos
impregnados con antisépticos y
desinfectantes sobre placa con siembra
masiva de un microorganismo, se detallaron
los resultados (Imagen 2), donde se refleja
la sensibilidad que muestran los
microrganismos, a la solucion de yodo y al
hipoclorito de sodio, esta sensibilidad se
puede basar a partir de los siguientes
criterios:
Con respecto a la solucion de yodo
(Cuadrante a), es un desinfectante con un
amplio rango de acción afecta tanto
bacterias Gram + como Gram -, se cree que
es porque actúa sobre el enlace NH ligando
los aminoácidos y nucleótidos modificando
así la estructura de las proteínas de las
bacterias, puede afectar también los grupos
SH provocando oxidación. Como se
mencionó anteriormente también se mostró
sensibilidad al Hipoclorito de sodio
(Cuadrante b) esto se debe a la gran
capacidad de oxidación que presenta este
compuesto. En presencia de agua el cloro,
bien sea en forma gaseosa (Cl2) o como
hipoclorito (NaOCl), reacciona para dar
ácido Hipocloroso (HOCl), la forma con
mayor potencial de óxido-reducción y más
activa como desinfectante, según las
reacciones que se presentan.
Por otro lado los microrganismos mostraron
resistencia al agua de grifo (cuadrante c) y
al alcohol al 70% (Cuadrante d), esto se
debe a que para los microrganismos la
resistencia puede ser una propiedad natural
de un organismo (intrínseca) o conseguida
por mutación o adquisición de plásmidos
Conclusión
Se determinó la sensibilidad de bacterias a
diferentes antibióticos y anticepticos
aplicado mediante la técnica de sensidiscos,
destacando la importancia de estos para la
evaluación de crecimiento e inhibición
microbiana, teniendo en cuenta las
propiedades y características de cada una
de estos y a su vez los diferentes
mecanismos que utilizan para combatir la
resistencia que oponen estos
microrganismos.
Cuestionario
1. Defina los siguientes términos y
de ejemplos de cada uno de ellos
antibiótico, biocida, bioestatico,
desinfectante, antiséptico, y agente
quimioterapéutico.
Antibiótico: Los antibióticos constituyen un
grupo heterogéneo de sustancias producida
por un ser vivo o derivado sintético con
diferente comportamiento farmacocinético y
farmacodinámico, que ejercen una acción
específica sobre alguna estructura o función
de un microorganismo matándolo o
inhibiendo su crecimiento, tienen elevada
potencia biológica actuando a bajas
concentraciones y la toxicidad es selectiva,
con una mínima toxicidad para las células
de nuestro organismo. Ej. Kanamicina.
(autorreplicación, ADN extracromosómico) o
transposones (cromosomal o integrado en
plásmidos, cassettes de ADN transmisibles)
o de forma adquirida a estos anticepticos y
desinfectantes, por mutación o por la
adquisición de material genético en forma
de plásmidos o transposones; estas
configuraciones permiten grandes arreglos
de genes de resistencia para la mayoría de
los antibióticos y desinfectantes al ser
transferidos juntos en un solo evento de
conjugación.
Biocida: Los biocidas son sustancias activas
o preparados que contienen una o más
sustancias activas, presentados en la forma
en que son suministrados al usuario,
destinados a destruir, contrarrestar,
neutralizar, impedir la acción o ejercer el
control de otro tipo sobre cualquier
organismo nocivo. Ej. Gas de óxido de
etileno.
Bioestatico: Es un producto que detiene el
crecimiento y desarrollo de organismos
vivos, se aplica casi siempre a productos
dedicados a combatir los microorganismos.
Ej. Hexetidina.
Desinfectante: Los desinfectantes son
agentes antimicrobianos que se emplean
solamente sobre objetos inanimados o
medios inertes. Algunos son tóxico celulares
protoplasmáticos con capacidad de destruir
tejidos vivos. Ej. Glutaraldehido .
Antiséptico: Sustancia química de aplicación
tópica sobre tejidos que destruye o inhibe
los microorganismos sin afectar a los tejidos
sobre los que se aplica. Ej. Clorhexidina .
Agente quimioterapéutico: Son agentes
químicos de acción selectiva que pueden
inhibir o destruir microorganismos y que se
utilizan en seres vivos en forma sistémica o
local. Ej. Sulfatiazol .
2. ¿De acuerdo con su mecanismo
de acción, como se clasifican los
antibióticos?
Antibióticos que actúan sobre la pared
bacteriana
B-lactamicos, cicloserina, vancomicina,
bacitracina, y fosfomicina
Antibióticos que actúan sobre la membrana
bacteriana
Polipeptidicos, polienicos, y agentes
antifungicos como la nistatina y anfotericina
B estandarizadas y controladas muy
Antibióticos que actúan sobre la síntesis de
proteína
Cloranfenicol, macrolidos, tetraciclinas y
aminoglucósidos
Antibióticos que actúan sobre los ácidos
nucleicos
Rifampicina y fluorquinolonas
Antimetabolitos
Que bloquean pasos metabólicos
específicos y esenciales para el
microorganismo
Antibióticos antimicobacterias
Para el tratamiento de la tuberculosis:
isoniacida, rifampicina, etambutol,
pirazinamida, capreomicina y ciclocerina
3. Investigue tres organismos
productores de antibióticos y mencione
el antibiótico producido.
Organismo Antibiótico
Penicillum chrysogenum.
Penicilina
Cephalosporium acremonium
cefalosporina
Saccharopolyspora erythraea Eritromicina
4. ¿Qué es la concentración mínima
inhibitoria?
La concentración inhibitoria mínima (CIM)
se define como la menor concentración de
antimicrobiano capaz de inhibir el
crecimiento bacteriano. La CIM indica la
concentración de antimicrobiano que se
necesita para matar o inhibir el crecimiento
del microorganismo analizado y permite
valorar comparativamente la potencia de los
antimicrobianos. La reproducibilidad de
estas pruebas es de ± 1 dilución y para
evitar una gran variabilidad éstas deben ser
cuidadosamente.
5. ¿Qué es un antibiograma y cuál
es su aplicación?
El antibiograma es la prueba microbiológica
que se realiza para medir la sensibilidad de
una bacteria frente a diferentes
antimicrobianos in vitro y a partir de estos
resultados predice la eficacia in vivo. Con un
antibiograma se pueden obtener resultados
cualitativos que indican si la bacteria es
sensible o resistente a un antibiótico, o
cuantitativos que determinan la
concentración mínima (CMI) de
antimicrobiano que inhibe el crecimiento
bacteriano (en µg/ ml o en mg/l) . El estudio
de la sensibilidad a antimicrobianos de las
diferentes bacterias aisladas en muestras
biológicas presenta interés individual y
epidemiológico, por tal razón tiene
aplicación en prácticas clínicas. La
realización rutinaria del antibiograma
proporciona los patrones de resistencias
locales y regionales que deben actualizarse
periódicamente, ya que éstos pueden
cambiar sustancialmente en cortos
períodos. Por otra parte, el antibiograma
también puede ayudar a diferenciar entre
microorganismos verdaderamente
patógenos o contaminantes (aislamientos
sucesivos de estafilococo coagulasa
negativo en hemocultivos con diferente
sensibilidad indicaría contaminación  Saavedra J. Infecciones en
cutánea) y en la evaluación inicial ante la pediatría. Guía rápida para la
sospecha de un brote nosocomial selección del tratamiento
(aislamiento en distintos pacientes de antimicrobiano empírico: bases
Klebsiella pneumoniae productora de β- para la elección racional de un
lactamasa de espectro extendido BLEE). tratamiento antimicrobiano. 2009.
Madrid, 2008. Disponible en:
Bibliografía http://infodoctor.org/gipi/ guia_abe/.
 Ang JY, Ezike E, Asmar BI.  Hernández Rodríguez A. 2006.
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http://appswl.elsevier.es/watermark
/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=
80000504&pident_usuario=0&pcon
tactid=&pident_revista=51&ty=35&
accion=L&origen=apccontinuada&
web=www.apcontinuada.com&lan=
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