Trabajo práctico No.

4 Determinación de ácido úrico en sangre y orina 41

TRABAJO PRÁCTICO No. 4

DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO EN SANGRE Y ORINA

DEPURACIÓN DE CREATININA

REQUISITO PARA LA EJECUCIÓN DE PRÁCTICA

En esta práctica haremos simultáneamente ácido úrico en sangre y en orina de 24 horas,

y también depuración de creatinina.

Para la medición de ácido úrico y creatinina en sangre los alumnos deben traer

inyectadoras y extraer 10 cc de sangre al paciente o alumno cuya orina de 24 horas será

analizada.

Utilizaremos la misma muestra de orina de 24 horas en las determinaciones de uricosuria

y depuración.

Orina de 24 horas
La recolección de la orina de 24 horas puede proporcionar valiosa información en lo que

a excreción de sustancias se refiere: glucosa, proteínas, creatinina, esteroides, etc. Como

sustancias preservadoras se han usado: tolueno, ácido acético glacial o ácido clorhídrico.

Instrucciones al paciente para la recolección de la orina de 24 horas.

1. Orinar y desechar la orina a las 8 de la mañana (o en cualquier otro momento que señala el

inicio de la recolección).

2. Recoger toda la orina emitida durante el día y la noche.

3. Mantener el recipiente en el refrigerador durante todo el tiempo de la recolección.

4. Orinar a las 8 de la mañana del día siguiente (o 24 horas después del momento del

comienzo) y guardar esta orina en el recipiente.

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ÁCIDO ÚRICO

En el hombre y en los simios el producto final del catabolismo de las bases púricas es el

ácido úrico. Las bases que lo originan son la adenina y la guanina, que forman parte de los

ácidos nucleicos. Por un proceso de aminación oxidativa, con intervención de una enzima

(adenasa), la adenina se transforma en hipoxantina y la guanasa transforma la guanina en

xantina. Por acción de la xantin oxidasa, la hipoxantina se transforma en xantina y ésta por

último en ácido úrico. La oxidación de los bases púricas a ácido úrico se produce sobre todo en

el hígado que es un órgano rico en xantinoxidasa.

Otra enzima, la uricasa transforma el ácido úrico en alantoina. Dicha enzima, no existe

en los primates por lo que el ácido úrico es el producto final del metabolismo de purinas y ácido

nucleicos en el hombre.

Existen dos fuentes de ácido úrico:

1. La endógena originada por destrucción de tejidos del propio organismo.

2. La exógena, proveniente de la alimentación (hígado, carne, legumbres, espinacas).

El ácido úrico tiene propiedades reductoras, lo que se ha utilizado para cuantificarlo en el

laboratorio.

VALORES DE REFERENCIA.

Mujer Plasma o suero 2,5 a 5,0 mg/dL

Varón Plasma o suero 2,5 a 7,0 mg/dL

Niño Plasma o suero 2,0 a 5,5 mg/dL

Orina de 24 h orina 250 a 750 mg/24 h

El aumento de la concentración de ácido úrico es mucho más frecuente y clínicamente

más significativo que su disminución.

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CORRELACIÓN CLÍNICO - PATOLÓGICA.

HIPERURICEMIAS:

a) Por aumento en la producción de ácido úrico: gota primaria, leucemias, policitemias,

síndrome de Lesch - Nyham (deficiencia de HGPRT).

b) Disminución de la eliminación renal: insuficiencia renal, toxemia gravídica, saturnismo,

hiperparatiroidismo.

HIPOURICEMIA:

a) Por eliminación urinaria excesiva: síndrome de Fanconi, enfermedad de Hodgkin, en el

tratamiento de la gota con inhibidor de la xantinoxidasa (Alopurinol)

b) Deficiencia en la síntesis: xantinuria (enfermedad congénita del recién nacido en la que

existe deficiencia de xantinoxidasa hepática).

METODOLOGÍA ANALÍTICA.

1.- METODO DE HENRY – KIM Y CARAWAY.

Fundamento: Este método se basa en la oxidación del ácido úrico en un filtrado libre de

proteínas , con una reducción posterior de ácido fosfotúngstico a azul de tungsteno según la

reacción:
ácido úrico + ácido fosfotúngstico + O2  alantoína + azul de tungsteno + CO2

En este método el carbonato de sodio provee un pH alcalino necesario para la formación

de color. Este método carece de especificidad y tiene la desventaja que se debe usar para la

reacción un filtrado libre de proteínas obtenido a partir de la muestra.

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2.- ENZIMATICOS (URICASA)

La enzima uricasa se ha empleado ampliamente para aumentar la especificidad del

ensayo. En la reacción el ácido úrico se oxida a alantoína, H2O2 y CO2 según la reacción:

ÁCIDO ÚRICO + O2 + 2H2O Uricasa ALATOINA + CO2 + H2O2

Existen dos modalidades:

a) Absorción Diferencial.

La alantoína, a diferencia del ácido úrico, no posee un pico de absorción en la región de 290 a

293, del espectro ultravioleta. La medición de la absorción antes y después de la incubación de

ácido úrico con uricasa permite obtener un valor de absorción que disminuye progresivamente y

es proporcional a la cantidad de ácido úrico presente.

b) Colorimétrico.

El H2O2 producido cuando el ácido úrico se oxida en la reacción catalizada por la uricasa, ha
sido cuantificado mediante la respuesta cromogénica cuando un sustrato incoloro oxidado por

el H2O2, convirtiéndose en sustrato coloreado.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Objetivo: Determinar la concentración de ácido úrico en una muestra de sangre y en orina de 24

horas.

Kit Comercial “Wiener”

Fundamento: El H2O2 formado por la acción de la uricasa reacciona con el ácido 3,5 – di cloro – 2
hidroxibenceno sulfónico y 4 – aminofenozona bajo la acción de una peroxidasa originando

quinonimina de color rojo violeta.

Muestra: Extraer unos 10 cc de sangre x pareja y traer dos muestras de orina de 24 horas. Medir

el volumen de orina, anote el valor. Diluya la muestra de orina 1:10 con agua destilada.
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Técnica:

BLANCO PATRON MUESTRA ORINA

Suero -- -- 20 μl --

Orina 1:10 -- -- -- 20 μl

Patrón -- 20 μl -- --

Reactivo de trabajo 1 cc 1 cc 1 cc 1 cc

Mezclar suavemente e incubar 5′ a 37 ºC. Enfriar y leer a 505 nm.

Cálculos:

Factor de calibración = Concentración del patrón (10 mgr%)

Lect. del Patrón – Lect. del blanco

Concentración = Fc x (Lect. del paciente – Lect. del blanco)

Concentración en orina: Fc ( Lec. Orina – Lec. Blanco) x 10

Haga los cálculos necesarios para transformar la concentración en orina de mg/dL a mg / 24

horas.

Valor de referencia en sangre:

Hombre = 2,5 - 7 mgr%

Mujeres = 2,5 - 5 mgr%

Nota: Responda lo siguiente:

a) ¿Por qué se diluye la muestra de orina?.

b) ¿Por qué se utiliza orina de 24 horas?.

ÁCIDO ÚRICO EN ORINA

Se prefiere la muestra de orina en 24 horas. Para evitar la precipitación de los uratos, se

recomienda agregar 100 ml de NaOH (500 g/l) al recipiente de recolección antes de la recolección
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de la muestra. El ácido úrico es estable en orina durante unos tres días a temperatura ambiente

siempre que no exista desarrollo bacteriano que lo degrade.

El valor de referencia es 250 - 750 mg /24 horas. La cantidad eliminada depende de la

ingestión de purinas, el catabolismo endógeno, el funcionalismo renal y del uso de diuréticos.

Al aumentar la ingestión exógena de alimentos vegetales o animales, ricos en núcleos: riñón,

hígado, carnes; así como también en los procesos de notable destrucción celular (neoplasia,

leucemia) puede observarse un aumento en la excreción de ácido úrico.

DEPURACIÓN DE CREATININA

REQUISITO PARA LA EJECUCIÓN PRÁCTICA.

En esta práctica haremos simultáneamente creatinina en sangre y orina. Es

recomendable traer dos muestras de orina por salón. A estos dos pacientes se les debe tomar

una muestra de sangre y se les debe pesar y tallar. Tome muy en cuenta esta observación porque

si el paciente está en casa, Ud. debe traer la muestra de sangre, orina y los datos de peso y talla,

y en caso de ser un alumno de la práctica debe saber su peso y talla ya que este laboratorio no
cuenta con instrumento para hacerlo.

La calidad de la recolección en el período deseado debe ser estimada calculando la

cantidad de creatinina en la muestra de orina y comparándola con la excreción de creatinina

esperada.
Los hombres normalmente excretan 20-25 mg/kg/día, mientras que las mujeres excretan

15-20 mg/kg/día. Las determinaciones de la depuración de creatinina son válidas solamente si

toda la orina es recolectada durante un período de tiempo ya establecido, si la creatinina sérica

se mantiene estable durante el período de recolección y en ausencia de sustancias interferentes

en sangre o en orina.

Un ejemplo práctico para demostrar que la muestra de orina de 24 horas fue recogida

siguiendo las indicaciones, es la siguiente:

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Paciente Femenino

Talla: 1,43 m

Peso: 72 Kg

Vol. Orina: 1340 ml/24 horas

Creatinina orina: 96 mg/dl

Creatinina orina de 24 horas: 1340 x 96 = 1286 mg/24 horas

100

Creatinina/Kg = 1286 = 17.8 mg/Kg peso/24 horas

72 Kg

Se observa que está dentro del rango (15 – 20), por lo tanto la orina está bien recolectada. Se

procede de igual forma en caso de un paciente masculino tomando en consideración que existe

otro rango para este sexo.

El concepto de aclaramiento plasmático o depuración plasmática ha sido utilizado

durante años para el estudio de la función renal. La depuración plasmática se define como el

volumen de plasma del cual puede eliminarse una sustancia por unidad de tiempo. Por ejemplo:

la depuración de una sustancia A es de 150 mL/min, quiere decir que se depuran 150 mL (de

plasma) de la sustancia A por minuto. Para que una sustancia pueda ser utilizada en pruebas de

depuración debe cumplir las siguientes condiciones:

 Se debe filtrar con libertad y sin alteraciones.

 No se altera químicamente en su paso por la nefrona.

 No experimentar secreción, resorción síntesis o degradación tubular.

 La cantidad filtrada es igual a la cantidad excretada.

En términos prácticos, el laboratorio clínico puede evaluar la filtración glomerular a

través de la Depuración de Creatinina, una sustancia que proviene de la degradación de creatina

y no se afecta en gran medida por la dieta. La creatinina es el producto final del metabolismo
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muscular y se excreta sólo por el riñón. El índice de producción de creatinina es directamente

proporcional a la masa muscular del paciente y en consecuencia se mantiene relativamente

estable en el curso del tiempo.

La excreción de creatinina está determinada sobre todo por el índice de filtración

glomerular, dado que la creatinina es filtrada libremente a nivel glomerular. La utilidad de la

determinación de la creatinina sanguínea como un indicador de la filtración glomerular, se

apoya en el hecho de que cualquier reducción en esta última representa una limitación en la

excreción de creatinina, la que continúa produciéndose en el tejido muscular originándose una

acumulación de la misma en la sangre.

La difusión de la Depuración de Creatinina se debe a su sencillez en comparación con

métodos exógenos, y a su mayor precisión comparada por ejemplo con la depuración de urea.

A continuación se muestra el valor clínico de la Depuración de Creatinina:

 Estima el filtrado glomerular y así puede evaluarse la función renal.

 Valora la progresión funcional de las enfermedades renales.

 Valora la respuesta a las terapias de las enfermedades renales.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Objetivo: Determinar la depuración de creatinina en un paciente

Técnica:
a) Muestra:

Sangre: Extraer unos 10 cc de sangre. No usar anticoagulante.

Orina de 24 horas: Mezcle la totalidad de la muestra de orina de 24 horas y mida el volumen.

Coloque una alícuota de ella en un tubo de vidrio para su posterior utilización.

b) Peso y talla del paciente: debe pesar y medir Ud. misma (o) al paciente, ya que el paciente

puede aportar datos aproximados y se requiere de exactitud.

c) Aplique la técnica para la cuantificación de creatinina. Tenga en consideración que como los

valores de creatinina en orina son mas elevados que en sangre, se debe diluir la muestra de

orina 1:10. Los resultados se multiplican por 10. Observaciones: En algunos casos, y de acuerdo

con la casa comercial, la dilución puede variar.

Trabajo práctico No. 4 Determinación de ácido úrico en sangre y orina 49

d) Calcule la superficie corporal del paciente utilizando para ello la tabla de corrección.

e) Determine el volumen minutado tomando en consideración que la muestra fue recogida

durante un período de 24 horas.

f) Aplique la fórmula:

Depuración de creatinina (ml/min/superficie corporal) = UxV x 1,73

P A

Donde U = creatinina en orina en mg/dl;

V = volumen minutado (Vol. Minutado = Vol. Orina 24 horas/1440 min);

P = creatinina en plasma en mg/dl;

1,73 es la superficie corporal estándar;

A = superficie corporal del paciente en función de su peso y talla.

Creatinina (Reacción de Jaffe)

Kit Comercial “Biogamma”

Fundamento:
La creatinina y otros compuestos de la muestra reaccionan con ácido pícrico en medio

alcalino formando un tautomero de picrato de creatinina, complejo coloreado anaranjado que se

mide a 510 nm. Las sustancias interferentes son minimizadas por acción del reactivo alcalino.

Metodología

Después de medir el volumen de orina, haga una dilución 1:10 con agua destilada.

NOTA: Calcule el volumen minutado en una muestra de orina cuyo volumen es de 750 ml en

10 horas.
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Rotule 4 tubos de la siguiente manera.

B S X Orina

Agua destilada 0,2 ml -- -- --

Estándar -- 0,2 ml -- --

Suero -- -- 0,2 ml --

Orina 1:10 -- -- -- 0,2 ml

Reactivo de trabajo N°1 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml

Reactivo de trabajo N°2 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml 1,5 ml

Mezclar, incubar a 37° C x 15'. Retirar del baño y enfriar.

Leer a 510 nm los tubos, llevando a cero el instrumento con agua. Restar luego la absorbancia
del blanco a los tubos respectivos.

Valores de Referencia:

Hombres: 0,4 – 1,4 mg/dL

Mujeres: 0,3 – 1,2 mg/dL

Niños: 0,3- 1,0 mg/dL

CÁLCULOS

Fc = Conc. del Estándar _

Lect. Estándar – Lect. Blanco

Concentración sangre = Fc x (Lect Muestra - Lect Blanco)

Concentración orina = Fc x (Lec Orina - Lect Blanco) x 10

Calcule el volumen minuto y aplique la fórmula :

Valores de Referencia:
Depuración = U x V x 1.73 Hombres: 97 - 137 ml/min/m2
P A
Mujeres: 88 - 128 ml/min/m2
Niños: mayor de 60 ml/min/m2
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Nomograma para la determinación el ASC de adultos