FACULTAD DE CIENCIAS Guía

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA
Asignatura: Bioquímica II 5
1 Título práctica de laboratorio:
QUÍMICA SANGUÍNEA II

2 OBJETIVOS
Cuantificar la creatinina, urea y ácido úrico presentes en la sangre y/u orina y analizar los resultados a
nivel bioquímico.
Determinar el estado metabólico del paciente y asociarlo a posibles alteraciones metabólicas.

3 REFERENTES CONCEPTUALES
Grupo de pruebas metabólicas completas: Son un grupo de exámenes de sangre que suministran una imagen
general del metabolismo y el equilibrio químico del cuerpo. Se necesita una muestra de sangre, la cual generalmente
se toma de una vena. El procedimiento se denomina venopunción. La persona no debe comer ni beber nada durante 8
horas antes del examen, normalmente se hace en ayunas. El médico puede ordenar este examen durante una
exploración o chequeo de rutina anual.
Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas sienten un dolor moderado, mientras que otras
sólo sienten un pinchazo o sensación de picadura.
El examen le dará al médico información sobre:
Ÿ Cómo están funcionando los riñones y el hígado.
Ÿ Niveles de azúcar, colesterol y calcio en la sangre.
Ÿ Niveles de sodio, potasio y cloruro (llamados electrolitos).
Ÿ Niveles de proteínas.

Los valores normales o saludables para la glucosa y la creatinina pueden variar con la edad. Los rangos de los valores
normales para todos los exámenes pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios.
Los resultados anormales pueden deberse a una variedad de afecciones diferentes, incluyendo insuficiencia renal,
problemas respiratorios y complicaciones relacionadas con la diabetes.
Riesgos: Extraer una muestra de sangre implica muy poco riesgo. Las venas y las arterias varían en tamaño de un
paciente a otro y de un lado del cuerpo a otro, razón por la cual extraer sangre de algunas personas puede ser más
difícil que de otras. Otros riesgos asociados con la extracción de sangre son leves, pero pueden ser:
Ÿ Sangrado excesivo.
Ÿ Desmayo o sensación de mareo.
Ÿ Hematoma (acumulación de sangre debajo de la piel).
Ÿ Infección (un riesgo leve cada vez que se presenta ruptura de la piel).

4 ACTIVIDADES PREVIAS
El estudiante debe contestar antes de la práctica las siguientes preguntas:
1. Realice un resumen en forma de diagrama sobre: Digestión y metabolismo intermedio de compuestos
nitrogenados en mamíferos.
2. Haga un cuadro con los valores de los principales metabolitos que se determinan en pruebas metabólicas
completas y particularmente en sanguíneas.
3. Consultar para cada reactivo: Nombre y fórmula química, estado, toxicidad, primeros auxilios.
4. Haga el diagrama de flujo del procedimiento de la práctica. Siga la guía de prácticas anteriores.

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5 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS

Materiales y equipos
5. Tubos de ensayo.
1. Gradilla.
1. Espectrofotómetro.
6. Celdas para espectrofotómetro.
1. Pipeta graduada de 1 mL.
1. Pipeta graduada de 5 mL.
Reactivos
2. Pipeteadores. Kit para determinación de urea.
1. Baño serológico. Kit para determinación de creatinina.
1. Centrífuga. Kit para determinación de ácido úrico.
4. Tubos para centrífuga. Etanol antiséptico.
Tubos sanguíneos tapa roja. Algodón.

Materiales que debe traer el estudiante

Ÿ Elementos de bioseguridad (Bata, guantes de nitrilo, monogafas). Toallas absorbentes, Sharpie.
Ÿ 2 Jeringas, equipo para toma de muestra de sangre debe ser traído por el grupo.

6 PROCEDIMIENTO
Para la realización de la prueba el paciente debe estar en ayunas de por lo menos 8 horas, se tomará una muestra 5
mL de sangre venosa, y con ayuda de la centrifuga se obtendrá el suero que será utilizado para la determinación de
creatinina, urea y ácido úrico. Las reacciones para la determinación de estas moléculas serán realizadas de acuerdo
al protocolo indicado por el fabricante del Kit.
1. Medición de ácido úrico:
Ÿ Se emplea suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina 1/10 con agua
destilada antes del ensayo.
Ÿ El ácido úrico en suero o plasma es estable 7 días a 2-8ºC. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o
fluoruro no interfieren.
Ÿ El ácido úrico en orina es estable 4 días a temperatura ambiente si se ajusta el pH a > 8 con NaOH. No refrigerar.
Ÿ Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente. Pipetear en Tubo | Reactivo Blanco Patrón Muestra
tubos de ensayo los reactivos como se indica en la tabla de la
Agua destilada 25 µL -- --
derecha.
Patrón de ácido
Ÿ Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a -- 25 µL --
úrico(S)
temperatura ambiente (16-25ºC) o durante 5 minutos a 37ºC.
Muestra -- -- 25 µL
Ÿ Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra a 520 nm
frente al Blanco. El color es estable durante al menos 30 min. Reactivo A 1 mL 1 mL 1 mL

Cálculos.
La concentración de ácido úrico en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general: Si se utiliza para
calibrar el patrón de ácido úrico suministrado:
A muestra
x [ patrón mg/dL ] x Factor de dilución = [ Muestra ]
A patrón
A muestra
x 6 = mg/dL ácido úrico en suero o plasma x 60 = mg/dL ácido úrico en orina
A patrón
A muestra
x 357 = µmol/L ácido úrico en suero o plasma x 3570 = µmol/L ácido úrico en orina
A patrón

Valores de referencia.
Suero y plasma: Orina:
Hombres: 3,5-7,2 mg/dL = 210-420 µmol/L. 250-750 mg/24 horas = 1,5-4,5 mmol/24 horas
Mujeres: 2,6-6,0 mg/dL = 150-350 µmol/L.
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2. Medición de urea:
Ÿ Se emplea suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina 1/50 con agua
destilada antes del ensayo. La urea en suero o plasma es estable 7 días a 2-8ºC. Se recomienda la heparina como
anticoagulante.
Ÿ La urea en orina es estable 3 días a temperatura ambiente si no se produce crecimiento bacteriano.
Ÿ Precalentar el reactivo de trabajo y el fotómetro a 37ºC. Pipetear en Reactivo de trabajo 1,5 mL
tubos de ensayo los reactivos como se indica en la tabla de la derecha: Muestra o patrón 10 µL

Ÿ Mezclar e insertar la cubeta en el fotómetro. Poner el cronómetro en marcha.

Ÿ Anotar la absorbancia a 340 nm a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2).
Cálculos.
La concentración de urea en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
(A1-A2) Muestra
x [ patrón ] x Factor de dilución = [ muestra ]
(A1-A2) Patrón

Si se utiliza para calibrar el patrón de urea suministrado:

Suero y plasma Orina
x 50 = mg/dL urea. x 2500 = mg/dL urea.
x 23,3 = mg/dL BUN. x 1165 = mg/dL BUN.
x 8,3 = mmol/L urea. x 415 = mmol/L urea.
Valores de referencia.
Suero y plasma: 15 - 39 mg/dL urea = 7 - 18 mg/dL BUN = 2,5 - 6,5 mmol/L urea. En el periodo neonatal las
concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 años se encuentran valores superiores a los
adultos. Las concentraciones también tienden a ser ligeramente superiores en hombres que en mujeres.
Orina: 26 - 43 g/24-h urea = 12 - 20 g/24 h BUN = 428 - 714 mmol/24-h urea.
Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos de referencia.

3. Medición de creatinina:
Ÿ Se emplea suero, plasma y orina, recogidos mediante procedimientos estándar. Diluir la orina fresca 1/50 con
agua destilada antes de medir. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro, no interfieren.
Ÿ La creatinina en las muestras es estable 24 horas a 2-8ºC.

Ÿ Precalentar el reactivo de trabajo y el fotómetro a 37ºC. Pipetear en Reactivo de trabajo 1,5 mL

tubos de ensayo los reactivos como se indica en la tabla de la derecha: Muestra o patrón 10 µL

Ÿ Mezclar e insertar la cubeta en el fotómetro. Poner el cronómetro en marcha.

Ÿ Anotar la absorbancia a 500 nm a los 30 segundos (A1) y a los 90 segundos (A2).
Cálculos.
La concentración de creatinina en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
(A1-A2) Muestra
x [ patrón ] x Factor de dilución - Factor correctivo = [ muestra ]
(A1-A2) Patrón

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Si se utiliza para calibrar el Patrón de Urea suministrado:

Suero y plasma
[(A1-A2) Muestra/(A1-A2) Patrón x 2] = mg/dL
[(A1-A2) Muestra/(A1-A2) 2] - 0,37 = mg/d x 100] = mg/dL
[(A1-A2) Muestra/(A1-A2) Patrón] x 177] = µmol/L
[(A1-A2) Muestra/(A1-A2) Patrón x 177] - 33 = µmol/L
[(A1-A2) Muestra/(A1-A2) Patrón x 8840] = µmol/L

Valores de referencia.
Suero y plasma: 15 - 39 mg/dL urea = 7 - 18 mg/dL BUN = 2,5 - 6,5 mmol/L urea. En el periodo neonatal las
concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 años se encuentran valores superiores a los
adultos. Las concentraciones también tienden a ser ligeramente superiores en hombres que en mujeres.

Orina: 26 - 43 g/24-h urea = 12 - 20 g/24 h BUN = 428 - 714 mmol/24-h urea.

Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios
intervalos de referencia.

7 BIBLIOGRAFÍA
1. Alemany m, Font s. Prácticas de Bioquímica. Madrid: Editorial Alambra. 1985
2. Mathews CK y van Holde Ke. Bioquímica. Tercera edición. Pearson adisson wesley. 2002.
3. Plumber D. Bioquímica Práctica. Bogotá: Editorial Mc Graw Hill. 1981.
4. Berk P, Korenblat K. Approach to the patient with jaundice or abnormal liver tests. in: Goldman l, Schafer ai,
eds.cecil medicine.
5. Landry DW, Bazari H. Approach to the Patient with Renal Disease. in: Goldman l, Schafer ai, eds. cecil medicine.

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INFORME DE LABORATORIO
8 RESULTADOS
1. Hacer un cuadro donde consigne las observaciones realizadas y cálculos efectuados. Comparar resultados y
discutirlos.

9 CUESTIONARIO COMPLEMENTARIO
1. ¿Cómo es el mecanismo de entrada de aminoácidos a una célula?
2. ¿Cuál es la importancia metabólica del ciclo de la urea?
3. Describa la circulación de sustancias de desecho de nitrógeno.
4. ¿Cuál es la importancia de la medición del metabolismo de nitrogenados?
5. ¿Qué es y para qué se mide la bilirrubina?

10 CONCLUSIONES
Escriba sus conclusiones sobre la práctica realizada.

11 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Escriba las referencias bibliográficas que utilizó durante el desarrollo de está guía.

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