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creatinina en suero metodo colorimetrico

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CREATININA

MÉTODO COLORIMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO CON DESPROTEINIZACIÓN Y EN ORINA

SIGNIFICACIÓN CLÍNICA:

La determinación de niveles séricos de creatinina, producto de degradación de la creatina, se utiliza como índice de funcionalismo renal, dado que su eliminación se efectúa a través del riñón y casi exclusivamente por filtración.
FUNDAMENTOS DEL METODO:

material Jaffé reactivo de los eritrocitos, la muestra de suero puede conservarse hasta 24 horas a 4 ºC. * ORINA: obtener en recipiente limpio orina de 24 horas, guardandola en la heladera durante la recolección. Medir la diuresis, tomar una alícuota y efectuar una dilución 1/50 de la misma (1+ 49). Si se trabaja con una diuresis de 2 horas multiplicar el volumen de diuresis por 12 para calcular la cantidad de creatinina eliminada durante 24 horas.
TÉCNICA OPERATORIA:

El método se basa en la reacción de Jaffé, aprovechándose también al ácido pícrico como desproteinizante. Se mide fotocolorimétricamente a 510 nm la absorbancia del cromógeno formado por la reacción entre la creatinina y el picrato alcalino previa desproteinización con ácido pícrico.
REACTIVOS PROVISTOS:

1-Desproteinización: (para suero) En un tubo de centrífuga colocar 0.75 ml de suero y 3.75 ml de Acido pícrico. Mezclar por inversión, dejar reposar durante 10 minutos y centrifugar como mínimo 5 minutos a 3000 rpm. 2- Reaccion de color:
Desprot Orina . (dil.) Standard Suero Desprot. ----3.0 ml --Standard --0.50 ml ----H2O dest. 1.25 ml 0.75 ml --0.75 ml Orina dil. ------0.50 ml Ac.Pícrico 1.75 ml 1.75 ml --1.75 ml Sol.NaOH 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml 0.50 ml Mezclar por inversión y dejar los tubos a 25 ºC durante 20 minutos. Leer en espectrofotómetro en las siguientes condiciones: - Long. de onda: 510 nm o filtro verde (500-540). - Cero de absorbancia: agua destilada. Blanco Microtécnica: puede trabajarse si se desea con menor cantidad de muestra, desproteinizando 0.4 ml de suero con 2 ml de sol. de ácido pícrico. Del sobrenadante se toman 1.5 ml y se le adicionan 0.25 ml de sol. de hidróxido de sodio. El blanco y el standard se procesan en forma habitual. CALCULO DE RESULTADOS : *En suero: creatinina mg/l =

Estos reactivos son para USO IN VITRO y estan listos para usar. ♦ Acido Picrico: solución de ácido pícrico 0.040 mol/l. ♦ Hiróxido de sodio: solución de hidróxido de sodio 1 mol/l. ♦ Standard: solución acuosa de creatinina de 20 mg/l.
PRESENTACION:

Este equipo se presenta para 120-200 Determinaciones, conteniendo: # 440 ml de Acido Pícrico. # 100 ml de Hidróxido de sodio. # 10 ml de Standard.
ESTABILIDAD:

Estos reactivos son estables a temperatura ambiente (< 25 ºC), y al abrigo de la luz , hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Se recomienda no exponer los mismos a temperaturas elevadas (> a 35 ºC) durante tiempos prolongados.
MUESTRA:

20 mg/l .

Amuestra Astandard Amuestra Astandard

* SUERO: la determinación debe efectuarse sobre suero fresco, nunca sobre sangre total, debido al

creatinina umol/l =

177 umol/l .

SOCIEDAD DE BIOQUÍMICOS DE SANTA FE. AVENIDA URQUIZA 2657-3000 SANTA FE.TE/FAX (0342) 455-2708. e-mail: sbstafe@ceride.gov.ar

*En orina: creatinina en orina g/24 horas

BIBLIOGRAFÍA : = 0.020 g/l . 50 . V . Amuestra Astandard

• Henry, R.J. Química Clínica. Bases y Técnicas. 1980.• Biggs, H.G., Cooper, J. Clin. Chem. 7:6
(1961). • Antoñanzas, J., Laboratorio, 33:66.(1978).

Donde : - 50 es el factor de dilución. - V es la diuresis expresada en litros/24 horas. creatinina en orina mg/l

= 20 mg/l . 50 .

A muestra A standard

*Aclaramiento de creatinina o depuración de creatinina endógena: D.C.E. ml/min = creat. en orina (mg/l) . Diuresis 24 hs (ml) creat. en suero (mg/l) . 1440 min VALORES DE REFERENCIA :

En personas adultas: * suero: 7-14 mg/L ó 62 a 124 umol/l. * orina: 0.9- 1.5 g/24 horas ó 8 a 13 mmol/24 hs. * D.C.E: 80-140 ml/min ó 1.33 a 2.33 ml/s. RENDIMIENTO ANALITICO: * Linealidad: se verifica hasta 40 mg/l, cuando se supere este valor, diluir la solución coloreada final 1:2 con el blanco de reactivos. * Reproducibilidad: se observan para replicados de una misma muestra coeficientes de variación del orden de 1.8%. * Especificidad: no interfiere la hemólisis ligera o moderada. De haber aceto -acetato en la muestra, debe procederse a su eliminación calentando a ebullición durante 5 minutos, una vez agregado el ácido pícrico (antes de centrifugar).
OBSERVACIONES :

* La reacción es muy sensible a al temperatura, razón por la cual debe mantenerse la misma lo más cercana posible a los 25 ºC. * Si después de realizar la desproteinización con el ácido pícrico se observan escasas partículas en el sobrenadante, las mismas no interfieren en la determinación.

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