Escuela de Microbiología Fecha de elaboración:

febrero 12 de 2020
Curso Microbiología veterinaria
Docentes:
LAB. 3 – Guía Hemoparásitos Richard Zapata-Coord
Edison Cardona

Introducción:
Los hemoparásitos están constituidos por protozoos flegelados como Trypanosoma sp. y
Leishmania sp.; apicomplexos como Babesia sp., Hepatozoon canis, Cytauxzoon felis y
Plasmodium sp.; bacterias del orden Rickettsiales como Anaplasma sp., Ehrlichia canis,
Eperythrozoon sp. (ahora Mycoplasma sp.) y Haemobartonella sp. (ahora Mycoplasma sp.)
y filarias como Dirofilaria immitis.

Objetivo:

Identificar hemoparásitos en muestras sanguíneas de bovinos, equinos, ovinos, caprinos,

caninos, felinos y aves.

Metodología:

Después de la introducción de los profesores, los estudiantes realizarán una descripción de

la calidad de la muestra de sangre. Se analizará la cantidad de muestra que se debe tomar
de acuerdo a las pruebas diagnósticas a realizar. Para cada tipo de hemoparásito reconocido
en la muestra se describirán las estructuras celulares que permiten su diagnóstico. La
identificación de hemoparásitos en muestras sanguíneas en tubo tapa morada (EDTA) se
realizará con la técnica extendido de sangre periférica, la coloración Hemacolor y el cálculo
de parasitemia y % de parasitemia. La identificación de microfilarias de Dirofilria immitis se
realizará con las pruebas: directo de sangre y técnica de Knott.

Técnica Extendido de sangre periférica

Esta técnica puede realizarse de forma cualitativa con el fin de expresar resultados en
termino de presencia o ausencia de la infección, o de forma cuantitativa, expresando
parasitemia para el caso de hemoparásitos extracelulares (Trypanosoma sp.) y % de
parasitemia (Babesia sp. y Anaplasma sp.).

1. sacar las muestras de sangre con EDTA de refrigeración para que alcance temperatura
ambiente.
2. Homogenizar y con pipeta pasteur o hisopo tomar una gota pequeña de sangre,
colocarla en un extremo de un portaobjetos

3. Apoyar otro portaobjeto a 45° y por delante de la gota, dejar que la sangre se extienda
homogéneamente hasta formar una linea roja entre las placas.

4. Deslizar el portaobjeto de la parte superior hacia adelante con un movimiento suave y

firme, esto arrastrará la sangre en una capa fina.

5. Secar a temperatura ambiente.

6. Colorear la placa con Hemacolor.

4. observar en microscopio óptico con objetivos de 10x y 100x (con aceite de inmersión).

Coloración Hemacolor

Esta coloración tiene cuatro fases: 1. Fijación, 2. Coloración de estructuras básicas, 3.

Coloración de estructuras ácidas y 4. Lavado de restos de colorante.

1. Fijado: en el frasco 1 que contiene metanol se inserta la placa con el frotis delgado por 1
segundo (1 dip). Se elimina el exceso de liquido golpeando suavemente la placa (en forma
vertical) sobre una servilleta.

2. coloración de estructuras básicas: se inserta la placa con la muestra en el frasco 2 que

contiene el colorante rojo (eosina) por 6 segundos. Se elimina el exceso de colorante
golpeando suavemente la placa (en forma vertical) sobre una servilleta.
3. coloración de estructuras ácidas: se inserta la placa con la muestra en el frasco 3 que
contiene el colorante azul (azur) por 4 segundos. Se elimina el exceso de colorante
golpeando suavemente la placa (en forma vertical) sobre una servilleta.

4. lavado de restos de colorante: se inserta la placa con la muestra en el frasco 4 que

contiene una solución de lavado (pH 7.0) por 40 segundos. Se elimina el exceso de colorante
golpeando suavemente la placa (en forma vertical) sobre una servilleta.

5. Se limpia el colorante adherido a la placa por debajo y se deja secar la muestra coloreada
por 10 minutos.

Cálculo de parasitemia y % de parasitemia

Parasitemia= RTGB/ μl x Tripanosomas en 100 GB

100 GB

%parasitemia= parásitos en 200 campos x 100

GR en 200 campos

Directo de sangre para identificación de larva 1 de Dirofilaria immitis

Esta técnica se utiliza para observar las microfilarias vivas de Dirofilaria immitis en sangre
fresca de caninos.

1. colocar una gota de sangre entera sobre un portaobjetos.

2. hay dos posibilidades: 1. Colocar directamente un cubreobjetos sobre la gota de sangre,

ó 2. Agregar una gota de solución salina a la gota de sangre para diluirla un poco. Esta
segunda opción permite obtener campos visuales más despejados para observar las larvas
en detalle.

3. observar en microscopio con objetivo de 10x y 40 x.

Técnica de Knott

Es una técnica de concentración de microfilarias de Dirofilaria immitis.

1. Mezclar 1 ml de sangre con 9 ml de formaldehido y homogenizar.

2. centrifugar a 3000 rpm por 5 minutos.

3. descartar el sobrenadante y colorear el sedimento con 2 ó 3 gotas de azul de metileno.

4. colocar una gota de sedimento entre portaobjetos y cubreobjetos.

5. observar en microscopio con objetivo de 10x y 40 x.

6. otra alternativa es colocar una gota de sedimento, hacer un extendido delgado y colorear
con hemacolor. En este caso como preparamos una muestra fijada, se observa en 10x y
100x con aceite de inmersión.
Morfología de hemoparásitos

Anaplasma marginale

Mycoplasma haemocanis
Ehrlichia canis

Babesia canis
Babesia gibsoni

Cytauxzoon feliz
Babesia bovis y Babesia bigemina

Trypanosoma vivax
Trypanosoma vivax en técnica de Woo o técnica del microhematocrito modificada

Trypanosoma theileri
Haemoproteus en aves

Plasmodium sp. en aves y reptiles

Hepatozoon canis